LOGOLOGO

1

非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体第 19 、 21 号外显子突变

研究

浙江省肿瘤医院叶雪梅 毛伟敏 刘杏娥

LOGOLOGO

2

浙江省浙江省 20092009 年癌症发病率排名年癌症发病率排名

list male (ASR*) list Female (ASR*)

1 Lung 1 Breast

2 Liver 2 Lung

3 Stomach 3 Esophageal 4 Esophagus 4 Stomach

5 Colon/rectum 5 Live

在癌症发病人群中，男性肺癌占第一位，在癌症发病人群中，男性肺癌占第一位，女性为第二位。女性为第二位。

我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我

LOGOLOGO

3

靶向治疗的重要性靶向治疗的重要性• 初次确诊 3/4患者局部晚期及晚期 , 失去手术机

会 , 以化疗主为的综合治疗手段

• 铂类两药联合方案是目前标准的 化疗方• 1. 仍不能明显延长晚期肺癌的生存期• 2. 相互比较无特别优秀方案• 3. 达到了一个平台 , 传统方案 1 年生存率 20%-25% 第 3 代方案 1 年生存率 33%,2 年 生存率 11%

• 分子靶向药物毒性较小，耐受性 较好

靶向治疗的目的 : 改善患者生活质量，延长生存期

LOGOLOGO

4

EGFR Iinhibition Via Tyrosine Kinase InhibitorsEGFR Iinhibition Via Tyrosine Kinase Inhibitors

LOGOLOGO有效预测因子

我我

我我我

我我

EGFR 突变

我我

LOGOLOGO课题思路

随访TKI 治疗测序

step1 step2 step3

LOGOLOGO目的

检测 90 例 NSCLC 患者肺癌组织中的 EGFR 基因第19 和 21 号外显子的突变率

观察 Exon19 和 Exon21 的突变类型

我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我

观察 TKI 疗效与 EGFR 突变的关系

LOGOLOGO方法

收集标本（ 90 例）

提取 DNA（酚氯法）

DNA 测序（正反双向）

LOGOLOGO

9

PCRPCR 产物电泳图片产物电泳图片

A B

A:Exon19 扩增片段电泳图（ 371bp）B:Exon21扩增片段电泳图（ 371bp）

( 注： 1 为 marker， 2 ～ 10分别为 9 个不同标本 )

Exon19Exon19 、、 exon21exon21 目的片段目的片段

LOGOLOGO

10

1. 1. 突变分布突变分布

例数 百分比 (%)

Exon19 16 17.8

Exon21 13 14.4

同义突变 47 52.2

delE746-A750delL747-P753insS S749S 2244(A→G)

突变类型

exon19

L858RL858R （（ T→GT→G ））L861Q(T→A)L861Q(T→A)

exon21

LOGOLOGO

11

2.Mutation types of EGFR in 2.Mutation types of EGFR in Exon 19 and Exon21Exon 19 and Exon21

Mutation types Nucleotides Amino acids

Wide type Exon19 AAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCC KELREATSPKA

delL747- P753insS AAGGAAT CGAAAGCC

KE SKA

delE746-A750 AAG AACATCTCCGAAAGCC K TSPKA

Wide type Exon21 TTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAA FGLAKLLGAE

L858R TTTGGGCGGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAA FGRAKLLGAE

L861Q TTTGGGCTGGCCAAACAGCTGGGTGCGGAA FGLAKQLGAE

Wide type Exon19 AGACCCTGCTCATCTCCACATCCT RPCSSPHP

S749S 2244(A→G) AGACCCTGCTCGTCTCCACATCCT RPCSSPHP

LOGOLOGO

12

1.delL747- P753insS1.delL747- P753insS

CCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCT

CCCGTCGCTATCAAGGAATCGAAAGCCAAACAAGGAAATCCTTCGATGTGAGTTTCTGC

LOGOLOGO

13

2.delE746-A750 2.delE746-A750

CCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATC

CCCGTCGCTATCAAGACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCTTCGATGTGAGTTT

LOGOLOGO

14

3. L858R3. L858R （（ T→GT→G ））

GATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAA

GATTTTGGGCGGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAA

LOGOLOGO

15

4.L861Q(T→A)4.L861Q(T→A)

GATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAA

GATTTTGGGCTGGCCAAACAGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAA

LOGOLOGO

16

5.S749S 2244(A→G)5.S749S 2244(A→G) 杂合子突变杂合子突变

TGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCATCTCCACATCCT

TGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCGTCTCCACATCCT

LOGOLOGO

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6.S749S 2244(A→G)6.S749S 2244(A→G) 纯合子突变纯合子突变

TGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCATCTCCACATCCT

TGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCGTCTCCACATCCT

LOGOLOGO

18

Table3. Relationship between EGFR mutation and the Table3. Relationship between EGFR mutation and the

clinical characters of NSCLC patientsclinical characters of NSCLC patients Item mutation(case ， %) wild type(case ，

%)P value

Exon19 exon21 total

Gender Femal 8/25(32.0%) 7/25(28.0%) 15/25(60.0%) 10/25(40.0%)0.000

Male 8/65(12.3%) 6/65(9.2%) 14/65(21.5%) 51/65(78.5%)

Pathology ADC 7/34(20.6%) 6/34(17.6%) 13/34(38.2%) 21/34(61.8%)

0.000BAC 7/10(70.0%) 2/10(20.0%) 9/10(90.0%) 1/10(10.0%)

SCC 2/46(4.3%) 5/46(10.9%) 7/46(15.2%) 39/46(84.8%)

Smoking YES 5/54(9.3%) 6/54(11.1%) 11/54(20.4%) 43/54(79.6%)0.003

NO 11/36(30.6%) 7/36(19.4%) 18/36(50.0%) 18/36(50.0%)

Stage Ⅰ 2/31(6.5%) 5/31(16.1%) 7/31(22.6%) 24/31(77.4%)

0.106

Ⅱ 8/40(20.0%)

4/40(10.0%) 12/40(30.0%) 28/40(70.0%)

Ⅲ 6/18(33.3%) 3/18(16.7%) 9/18(50.0%) 9/18(50.0%)

Ⅳ 0/1(0%) 1/1(100%) 1/1(100%) 0/1(0%)

age <70yr 11/61(18.0%)

9/61(14.8%) 20/61(32.8%) 41/62(67.2%)

0.868

>=70yr 5/28(17.2%) 4/29(13.8%) 9/29(31.1%) 20/29(69.0%)

LOGOLOGO

19

Table 4. Correlation between EGFR exon19 samesense Table 4. Correlation between EGFR exon19 samesense

mutation and the clinical character of NSCLCmutation and the clinical character of NSCLC

Item Total No Mutation No.Positive rate(%)

P value

Gender Male 25 11 44.0 0.333　Female 65 36 55.4

Smoking YES 54 28 51.9 0.931　NO 36 19 52.8

Pathology ADC 34 15 44.1 0.017　BAC 10 2 20.0

SCC 46 30 65.2

Stage Ⅰ 31 17 54.8 0.193　Ⅱ 40 24 60.0

Ⅲ 18 6 33.3

Ⅳ 1 0 0

age <70yr 61 34 55.7 0.333

>=70yr 29 13 44.8

LOGOLOGO

20

分析分析从统计表中看 , 结果表明四种经典突变的突变率与患者

的性别、病理类型、吸烟状态相关，而与年龄、 TNM分期无关。

本研究中，我们发现 47 例患者发生了 Exon19 上的同义突变 S749S 2244(A→G) , 总突变率为 52.2% ，此为全球首次报道。统计分析显示该突变与病理类型相关 , 多发生于鳞状细胞癌中，与其他因素没发现统计学意义。

有关同义突变的生物遗传学效应有待进一步深入研究。

LOGOLOGO讨论

1

23

4

5

EGFR-TK突变类型

EGFR 突变与 EGFR-TKI 疗效的关系

EGFR 突变与患者临床特征的关系

各种突变类型与EGFR 靶向药物疗效的关系我我我我我我我我我我我我我我我

1 2

我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我 日前在《科学》杂志上报告说，这种沉默突变并不“沉默”，在某种情况下可以决定蛋白质的最终表现 * 。

3

同义突变可能是使偏爱密码子变成非偏爱密码子，从而导致相应的 tRNA 由多数型转为少数型，结果使该密码子的表达大大减低，影响蛋白质的合成＃。

LOGOLOGO主要突变类型

delE746-A750 delS752-I759 delL747-T751insS delL747-P753insS delL747-A750

S768 、 V769 、R776 、 T790

S768I 、 G719S, 、S768I/G719S 、 D761-E762insEAFQ

L858R L861Q L833V H835L Q852

Exon19

exon21

exon20

LOGOLOGO

23

结论结论 1 、 90 例 NSCLC 患者检测到 29 例突变，突变率达 32.2% 。其中

Exon19 和 Exon21 各占总突变的 55.2% 和 44.8% 。 2 、 EGFR 基因 Exon19 及 Exon21 的突变主要见于腺癌，尤其是

细支气管肺泡癌、女性、非吸烟患者；突变与患者年龄及 TNM 分期无相关性。

3 、检测到了两种经典的 Exon19 缺失突变和两种 Exon21 的替代点突变，它们是： delL747-P753insS （ 9 例）和 delE746-A750（ 7 例）， L858R （ 9 例）和 L861Q （ 4 例）。

4 、检测到 47 例的同义点突变 S749S 2244(A→G) ，突变率高达52.2% ，多见于鳞癌，与患者性别、年龄、分期及吸烟于否无关。

5 、同义突变可能与 EGFR-TKI 耐药相关，还需进一步深入研究其遗传生物学效应及其对于 EGFR-TKI 抗肿瘤活性的影响和作用机制。

LOGOLOGO

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