Серологическая диагностика

ревматоидного артрита

Антитела к циклическому цитруллиновому пептиду:

высокоспецифичный маркер заболевания

«Окно возможностей»

2

Начало терапии

Первый визит к ревматологу

Первые симптомы

Начало деструкции сустава

Идеальный курс

Без лечения

Позднее начало

Раннее начало лечения

Время

Через 2 года: Эрозивное поражение суставов у 90% больных

Через 5 лет: Инвалидность у 40% больных

Терапия ревматоидного артрита

Ревматоидный артрит:специфические аутоантигены

3

Антитела к цитруллинированным пептидам или

белкам:

Анти-перинуклеарный фактор (АПФ)

Кератин

Филаггрин

ЦЦП (циклические цитруллиновые пептиды)

Sa-антиген, MCV (цитруллинированный виментин)

Фибриноген, фибрин

-Енолаза

CEP-1 (цитруллиновый пептид 1 альфа-енолазы)

Классификация РАКритерии ACR/EULAR, 2010 год

4

A Поражение суставов• 1 большой сустав• 2-10 больших суставов• 1-3 малых суставов (в т.ч. без поражения больших суставов)• 4-10 малых суставов (в т.ч. без поражения больших суставов)• > 10 суставов (с поражением по крайней мере 1 малого сустава)

0

1

2

3

5

B Серология (как минимум одно из перечисленного)• РФ отрицательный и анти-ЦЦП отрицательный • РФ или анти-ЦЦП слабо положительный • РФ или анти-ЦЦП высоко положительный

0

2

3

C Маркеры острой фазы (как минимум одно из перечисленного)• СРБ и СОЭ в норме • СРБ за пределами нормы

0

1

D Продолжительность симптомов синовита• < 6 недель• ≥ 6 недель

0

1

Aletaha et al, Ann Rheum Dis, 2010

Специфические аутоантитела:анти-филаггрин

5

Клетки эпителия щекиЭпителий слизистой щек

Анти-перинуклеарный фактор (1964 г.)

Антитела к кератину, 1979 г.

Аутоантитела к

филаггринуЧувствительность:

35-80%Специфичность:

70-99%

ЭПИТОПЫ?

Цитруллин

6

Дезиминирование остатков аргинина

Аргинин ЦитруллинАНТИГЕННЫ

Й ЭПИТОП

Антигенный эпитоп: цитруллин

7

Walther J. van Venrooij

Department of Autoimmune Biochemistry

University of Nijmegen, Nijmegen, The Netherlands

Цитруллин – важная составляющая часть эпитопов аутоантител, выявляемых при ревматоидном артрите

Цитруллинированные пептиды:история ИФА тест-системы

8

Выявляемые при ревматоидном артрите антитела распознают цитруллин-содержащие пептиды (ЦП)

Выявление аутоантител к линейному ЦП

Специфичность > 98%, но чувствительность 35-49%

Выявление аутоантител к циклическому ЦП

Специфичность > 98%, чувствительность > 70%

Поиск оптимальных пептидов – тест-система 2 поколения – Anti-CCP2

Цитруллинированный пептид

Чувствительность для РА:

49%

CCP = Cyclic Citrullinated Peptide

68%

= Цитруллин

Линейный пептид (из молекулы

филаггрина:)

Schellekens et al., Arthritis Rheum, 2000

Циклический пептид:

Table 1 Specificity and sensitivity of the CCP2 test for RA

van Venrooij, W. J. et al. (2011) Anti-CCP antibodies: the past, the present and the futureNat. Rev. Rheumatol. doi:10.1038/nrrheum.2011.76

Антитела к ЦЦП: выявляются задолго до появления симптомов РА

11Rantapäa-Dahlqvist et al., Arthritis Rheum, 2003

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

0246810

Jahre vor ersten Symptomen

anti

-CC

P2-

po

siti

v

Время до появления симптомов, годы

Ан

ти-C

CP

2 п

ол

ож

ит.83 больных РА,

все бывшие доноры крови

Образцы сыворотки получены из банка крови – вплоть до 10 лет до появления первых симптомов

Анти-ЦЦП, тест 2 поколения:чувствительность и специфичность

12

ПанельAnti-CCP2 ELISA

n Положит.

Чувствительность для РА 419 329 (78.5%)

Доноры крови 400 2 (0.5%)

Псориатрический артрит 28 0

Другие формы артрита 35 3 (8.6%)

Системная красная волчанка 108 3 (2.8%)

Синдром Шегрена 106 2 (1.9%)

Системная склеродермия 98 3 (3.1%)

Аутоиммунный тиреоидит 159 4 (2.5%)

Грануломатоз Вегенера 25 1 (4.0%)

Положительные на антитела к парвовирусу B19

126 3 (2.4%)

Вирусные гепатиты 54 0

ВИЧ-положительные 5 0

Специфичность для РА 1144 21 (98.2%)

EUROIMMUN

Калибратор 1 - верхняя граница измеряемого

диапазона

Калибратор 2 - верхняя граница нормальных

значений

Калибратор 5 - граница чувствительности теста

ИФА тест-система фирмы ИФА тест-система фирмы EUROIMMUNEUROIMMUN

КАЛИБРОВКА : НАДЕЖНО И ЭКОНОМИЧНО

ОО

EUROIMMUN

ИФА тест-система фирмы ИФА тест-система фирмы EUROIMMUNEUROIMMUN

- калибратор 1 - положительный контроль

- калибратор 2 - отрицательный контроль

- калибратор 3

- калибратор 4

- калибратор 5

МЕТОДИКА : УДОБНО И БЫСТРО

Инкубация: 60 30 15 мин.(комн. темп.)

Серологическая диагностика РА

15

Схема, принятая в Германии

При подозрении на РА: определение антител к ЦЦП (Anti-ССP-2)

Рекомендуется: дополнительно – определение ревматоидного фактора, особенно класса IgM

Определение анти-ЦЦП полезно:

для прогнозирования эрозивного течения РА

Определение анти-ЦЦП не слишком пригодно:

- для мониторинга прогрессирования РА

- для мониторинга ответа на терапию

Может быть, более полезны: Anti-MCV? Anti-Sa?

Серологическая диагностика РА

16

Anti-MCV: чувствительность несколько выше, специфичность ниже

Исследование N Anti-MCV Anti-CCP

РА Контрол. группа

Чувств. Специф. Чувств. Специф.

H.BangArthritis Rheum 2007

1151232 дон.257 CTD

82 %98 %79 %

72%96%

-

C. Dejaco

Arthritis Res Therapy 2006

164 303 70 % 91 % 70 % 99 %

D. CoenenClin Chem 2007 102 196 75 % 90 % 73 % 97 %

L. SoosJ Rheumatol 2007 119 118 76 % 92 % 66 % 98 %

L. MathssonArthritis Rheum 2008

273 100 дон. 71 % 95 % 58 % 96 %

R. Sghiri

Rheumatol Int 2008

170 309 74 % 79 % 72 % 96 %

Серологическая диагностика РА

17

Тест-система АнтигенЧувств.[%]

(n=100 больных РА)

Специф. [%] (n=202)

AUCЧувств. [%] при

98% специфичности

EUROIMMUN CCP 72 98.5 0.919 73

Phadia CCP 73 98.5 0.896 74

Axis Shield CCP 70 97 0.862 70

Eurodiagnostica CCP 75 97 0.912 73

Inova 2. Generation

CCP 65 97 0.865 64

Inova 3. Generation

CCP 73 96 0.891 67

Inova 3.1. Generation

CCP 89 64.9 0.889 67

GenesisЦитруллин.филаггрин

61 94.6 0.787 41

Orgentec MCV 72 93.1 0.822 62

AstraЦитруллин.пепт

ид ВЭБ61 92.6 0.839 47

RF-Test IgG 54 86.1 0.631 17

Aesku Цитруллин. IgG 82 53 0.805 44

(Bizzarro et al., Clinical Chemistry, 2007)

Серологическая диагностика РА

18

Что дает определение антител к ЦЦП?

Диагностика РА: высокая специфичность и чувствительность

Прогнозирование появления симптомов (у асимптоматических доноров крови, при недифференцированных артритах и т.д.)

Прогнозирование эрозивных форм

Но:

Низкая степень корреляции с активностью процесса

Sa-антиген?

Sa-антиген

19Kindly provided by H. Ménard

Стрипы 3-4 – анти-Sa-антиген

Анти-SA:тест-система EUROIMMUN

20

Сходимость: 98.5%

Lora et al., 9th Dresden

Symposium on Autoantibodies,

Germany, 2.-5. September 2009

Анти-Sa и анти-CCP:чувствительность и специфичность

21Исследование: проф. Й. Венковски, Пражский университет / EUROIMMUN

Выборка n Anti-Sa Anti-CCP2

РА 237 114 (48.1%) 157 (66.2%)

Ранний РА 74 28 (37.8%) 44 (59.5%)

ЮИA 56 1 (1.8%) 2 (3.6%)

Чувствительность для РА

237 48.1% 66.2%

СКВ 190 2 (1.1%) 8 (4.2%)

Псориатический артрит

181 0 3 (1.7%)

Специфичность 371 99.5% 97.0%

Доноры 408 3 (0.7%) 2 (0.5%)

Анти-Sa: прогностический маркер при раннем РА

22Langer et al., 7th International Congress on Autoimmunity, Ljubljana, May 5-9, 2010

ВыборкаAnti-Sa positive

(n=10)

Anti-CCP positive

(n=20)

Anti-MCV positive

(n=39)

RG 1 0 (0%) 1 (5%) 7 (18%)

RG 2 0 (0%) 1 (5%) 8 (21%)

RG 3 1 (10%) 2 (10%) 5 (13%)

RG 4 9 (90%) 16 (80%) 19 (49%)

Группы риска (модифицированный счет Виссера):

RG 1: благоприятный прогноз (вероятность эрозивного РА <25%)

RG 2: умеренный прогноз(25% to <50%)

RG 3: неблагоприятный прогноз (50% to <75%)

RG 4: плохой прогноз (75% to 100%)

Анти-Sa: прогностический маркер при раннем РА

23Langer et al., 7th International Congress on Autoimmunity, Ljubljana, May 5-9, 2010

Положительное прогностическое

значение (PPV) для плохого

прогноза:

анти-Sa 90%

анти-CCP 80%

анти-MCV 49%

Анти-Sa: прогностический маркер при раннем РА

РЕЗЮМЕ

• Анти-Sa обнаружены только у больных с неблагоприятным и плохим прогнозом (10% в группе риска 3, 90% в группе риска 4)

• PPV для плохого прогноза (группа риска 4): 90% анти-Sa, 80% анти-CCP, 49% анти-MCV

• 20% положительных на анти-Sa образцов были отрицательны как на анти-CCP, так и на анти-MCV.

1) Анти-Sa: преимущество в прогнозировании тяжелого течения РА 2) Анти-Sa позволяет выявить ряд больных, отрицательных на анти-CCP и анти-MCV

Langer et al., 7th International Congress on Autoimmunity, Ljubljana, May 5-9, 2010

Анти-CCP и анти-Sa

25

Выводы

Чувствительность: анти-ЦЦП>> анти-SaСпецифичность: анти-Sa > анти-ЦЦППрогноз тяжелого течения: анти-Sa > анти-ЦЦП

Анти-ЦЦП– основной диагностический маркерАнти-Sa – дополнительный показатель

ИФА наборы EUROIMMUN для выявления IgG к ЦЦП и Sa-антигену

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!

Зайко Сергей ДмитриевичЗайко Сергей Дмитриевич

Сентябрь Сентябрь 202011 г.11 г.