Чанышева Р.Ф.Чанышева Р.Ф.аспирант,

ассистент кафедры эпидемиологии

27 марта 2014 г.Н. Новгород

О стафилококковых бактериофагахв лечении и профилактике

инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи (ИСМП)

Проблема ИСМП, Проблема ИСМП, вызванных вызванных Staphylococcus spp.Staphylococcus spp.

Широкая распространенность стафилококков в человеческой популяции

Значительное видовое разнообразие Staphylococcus spp.

Доминирование в структуре возбудителей ИСМП

ГСИ новорожденных и родильниц ИОХВ пациентов хирургических стационаров; инфекции, связанные c имплантацией медицинских устройств инфекции кожи и мягких тканей первичных хирургических

пациентов АПО

Высокая распространенность устойчивости к антимикробным препаратам (АМП)

Широкая распространенность стафилококков в человеческой популяции

Значительное видовое разнообразие Staphylococcus spp.

Доминирование в структуре возбудителей ИСМП

ГСИ новорожденных и родильниц ИОХВ пациентов хирургических стационаров; инфекции, связанные c имплантацией медицинских устройств инфекции кожи и мягких тканей первичных хирургических

пациентов АПО

Высокая распространенность устойчивости к антимикробным препаратам (АМП)

безвредностьвысокая эффективностьстрогая специфичность действиявозможность сочетания с другими лекарственными препаратами (в том числе с антимикробными)эффективность в отношении штаммов, обладающих устойчивостью к антимикробным препаратам (антибиотики, дезинфектанты, кожные антисептики)

безвредностьвысокая эффективностьстрогая специфичность действиявозможность сочетания с другими лекарственными препаратами (в том числе с антимикробными)эффективность в отношении штаммов, обладающих устойчивостью к антимикробным препаратам (антибиотики, дезинфектанты, кожные антисептики)

обеспечивают горизонтальный и вертикальный перенос генов

фактор возникновения штаммов, обладающих патогенным потенциалом

обеспечивают горизонтальный и вертикальный перенос генов

фактор возникновения штаммов, обладающих патогенным потенциалом

Фаги, гомологичныеФаги, гомологичныеS.aureusS.aureus¹¹

№ (Pro)phage

Genome size (pb)

Morphological (genus)

Cluster(Class)

Siphoviridae (52)

1 phi187 39,620 Sfi11-likeᵃ 1(II)

2 phi69 42,732 Sfi11-likeᵃ 1(II)

3 phiIPLA35 45,344 Sfi11-likeᵇ 4(II)

4 phi108-PVL 44,107 Sfi21-like (gr1)ᵇ̓ᶜ 5(II)

5 SA11 136,326 ND ND

Podoviridae (4)

Myoviridae (20)

Фаги, гомологичные Фаги, гомологичные CoNSCoNS¹¹

№ (Pro)phage

Genome size (pb)

Morphological (genus)

Cluster(Class)

Siphoviridae (9)

1 CNPH82 43,420 Sfi11-likeᵃ 3(II)

2 vB_SepiS-phiIPLA7

42,123 Sfi11-likeᵃ ND

3 phiTM300 45,700 Sfi21-likeᵇ ND

4 StB12 44,714 Sfi11-likeᵃ 1(II)

5 StB20 40,917 Sfi21-likeᵃ 9(II)

¹ - Deghorain M., Van Melderen L., The Staphylococci Phages Family: An Overview. Viruses. 2012.

December. 4(12). P. 3316–3335.

Фаготерапия пациентов с ГСИ в поликлинических условиях (контролируемый эпидемиологический эксперимент)

Доминирование Staphylococcus spp. в этиологии ГСИ - «Бактериофаг стафилококковый жидкий» («Имбио») без предварительной этиологической расшифровки

Оценивались: обсемененность ран, антибиотикотерапия

Фаготерапия пациентов с ГСИ в поликлинических условиях (контролируемый эпидемиологический эксперимент)

Доминирование Staphylococcus spp. в этиологии ГСИ - «Бактериофаг стафилококковый жидкий» («Имбио») без предварительной этиологической расшифровки

Оценивались: обсемененность ран, антибиотикотерапия

антибиотикотерапия (АБТ)

51

0

28

11

0102030

405060

нет

%

снижение обсемененности ран

0

12 8,5 8,50 0

24

60

16

71*

0

20

40

60

80

1 2 3 4 5 перевязки

%

опыт

контроль

продление курсапродление курса

длительность АБТ и лечения

4,4

11

6,9

11,2

0

5

10

15

АБТ лечение

дн

и

Характеристика эпидемической ситуацииХарактеристика эпидемической ситуации

289289 штаммовштаммов StaphyStaphyllocoсcus sppocoсcus spp.: 239239 штаммовштаммов – SS..aureusaureus

50 штаммов 50 штаммов – CoNSCoNS6 ЛПО г. Н.Новгорода и Нижегородской обл. :6 ЛПО г. Н.Новгорода и Нижегородской обл. :

2 ЦРБ, родильный дом, 2 ЦРБ, родильный дом, 2 медицинских центра, 2 медицинских центра,

детский стационардетский стационарПрепараты БФ:Препараты БФ:

«Бактериофаг стафилококковый жидкий» (Стаф-БФ)

«Интести-бактериофаг» (Интести-БФ)«Пиобактериофаг комбинированный» (Пио-БФ)

Рис.1 Фагочувствительность Рис.1 Фагочувствительность Staphylococcus spp.Staphylococcus spp. к препаратам БФ, %к препаратам БФ, %

Рис.2 Доля устойчивых штаммов Рис.2 Доля устойчивых штаммов Staphylococcus spp.Staphylococcus spp. кк препаратам БФпрепаратам БФ

Таблица. Чувствительность к препаратам БФ клинических штаммов Таблица. Чувствительность к препаратам БФ клинических штаммов StaphylocoStaphylocoссcus sppcus spp. . ЛПО г. Н.Новгорода и Нижегородской области.ЛПО г. Н.Новгорода и Нижегородской области.

Препарат БФ

Доля клинических штаммов Staphylocoсcus spp., % (95% ДИ)

S. aureusS. aureus CoNSCoNS

чувстви-тельные

сл/чувстви-тельные

нечувстви-тельные

чувстви-тельные

сл/чувстви-тельные

нечувстви-тельные

Стафилокок-ковый БФ

36,4* (30,2-42,6)

28,9(23,1-34,7)

34,7*(28,5-40,9)

10,0(1,6-18,4)

16,0(5,6-26,4)

74,0˟(61,6-86,4)

Интести-БФ 29,4*(23,4-35,4)

28,5(22,5-34,5)

42,1*(35,5-48,7)

8,9(0,5-17,3)

8,9(0,5-17,3)

82,2˟(70,8-93,6)

Пио-БФ 32,0*(25,8-38,2)

29,4(23,4-35,4)

38,6*(32,2-45,0)

8,9(0,5-17,3)

11,1(1,7-20,5)

80,0˟(60,0-92,0)

*- показатели S. aureus vs CoNS статистически достоверны (р=0,01)˟ - ˟ - показатели достоверно превышают долю чувствительных штаммов CoNS (р=0,01) CoNS (р=0,01)

Перекрестная устойчивость Перекрестная устойчивость Staphylococcus spp.Staphylococcus spp. к к коммерческим препаратам БФкоммерческим препаратам БФ

Перекрестная устойчивость Перекрестная устойчивость Staphylococcus spp.Staphylococcus spp. к к коммерческим препаратам БФкоммерческим препаратам БФ

75,275,2

%%

Доля штаммов Доля штаммов Staphylococcus spp.Staphylococcus spp.,,устойчивых к действию одного иустойчивых к действию одного иболее препарата БФболее препарата БФ

Создание рабочей коллекции штаммов CoNS Лечебно-профилактическая эффективность БФ

зависит от того, в какой мере его структура соответствует этиологической структуре

заболеваний конкретной территории, на которой он применяется.

Критерии отбораШтаммы CoNS – возбудители ИСМП;Характеристика штамма: устойчивость к антимикробным препаратам, наличие гена mecA;Специфика лечебно-диагностического процесса

Выделение и накопление фаговых частиц.

Изучение морфологии выделенного бактериофага.

ШтаммШтаммы ы CoNSCoNS

Обнаружение БФ Обнаружение БФ (метод Грациа) (метод Грациа)

Негативные Негативные колонии (НК)колонии (НК)

с с признаками признаками вторичного вторичного

ростростаа

НК без НК без признаков признаков вторичного вторичного

ростароста

Пересев на МХА Пересев на МХА (метод Грациа)(метод Грациа) Пересев на МПБ Пересев на МПБ

Пересев на МХА Пересев на МХА (метод Грациа)(метод Грациа)

Изучение Изучение морфологии морфологии

НКНК

Изучение Изучение ультраструктурультраструктур

ы фаговых ы фаговых частицчастиц

НК без НК без признаков признаков вторичногвторичног

о ростао роста

«чистая» линия «чистая» линия БФБФ

Набор изучаемых свойств БФНабор изучаемых свойств БФНабор изучаемых свойств БФНабор изучаемых свойств БФ

Продуцент фага: штамм S.epidermidis (№166),MSSE, клинический материал – раневое отделяемое.Пациент кардиохирургического стационара, 66 лет

IV морфологическая группа – «Фаги с длинным несокращающимся отростком» (А.С.Тихоненко):

Многогранная удлиненная головка гексагональной формы,

55х30 нм

Длинный несокращающийся

отросток,70±5 нм

Рис. Морфология фаговых частиц, ×120 000

высокая этиологическая значимость высокая этиологическая значимость Staphylococcus Staphylococcus spp.spp.распространенность устойчивости к АМПраспространенность устойчивости к АМП

Стафилококковые бактериофаги являются Стафилококковые бактериофаги являются эффективным и востребованным эффективным и востребованным средством борьбы и профилактики средством борьбы и профилактики

с инфекциями стафилококковой этиологиис инфекциями стафилококковой этиологии