第一节 噬菌体的繁殖和突变型第一节 噬菌体的繁殖和突变型概述 病毒分类 p119一 噬菌体的繁殖 （一）烈性噬菌体的感染周期 （二）温和性噬菌体的感染周期 1 溶源周期： 原噬菌体 : 溶源性细菌 : 溶源性细菌的特点 : 2 裂解周期： 溶源性细菌自发或经诱发裂解细菌释放子噬菌体

二 噬菌体的突变型二 噬菌体的突变型

( 一 )快速溶菌突变型（ r） ( 二 )宿主范围突变型（ h） ( 三 ) 条件致死突变型 1 温度敏感突变型 2 抑制因子敏感突变（ sus ） 噬菌体 细菌 正常基因 sus+ su- ( 不具备 ) 突变基因 sus- su+ ( 具备 )

（ 1）抑制因子敏感突变的概念：如：噬菌体蛋白基因 细菌 tRNA 基因反密码子 正常 突变 突变 正常基因： 5`TAC 3`5`TAG 3` 3`ATC 5`3`ATG 5` mRNA 5`UAC 3` 5`UAG 3` 3`AUC 5` 3`AUG 5` 表型：酪氨酸 终止 5`UAG 3`

酪氨酸 酪氨酸

3`AUC 5` 酪氨酸

表表 5-25-2 携带不同专一性抑制基因宿主中携带不同专一性抑制基因宿主中 sussus 突变噬菌体的表突变噬菌体的表现现

噬菌体基因型 宿主菌基因型

su- su+amb su+och su+op

野生型sus ambersus ochersus opal

+ + + + - + + !!! - - - + - - - - +

（ 2）噬菌体的抑制因子敏感突变型类型及表现 琥珀型（ amber ） UAG 赭石型（ ocher ） UAA 乳白型（ opal ） UGA

（二）无义突变与无义抑制突变（二）无义突变与无义抑制突变

无义突变sus-：为氨基酸编码的密码变为终止密码的突变。 无义抑制突变su+：能抑制无义突变表现的突变。

表 5-3 5 种琥珀抑制基因的性质琥珀型抑 插入的 合成的蛋白质 赭石型抑 制基因 氨基酸 占野生型 % 制基因 su1+ 丝氨酸 28 - su2+ 谷氨酰胺 14 - su3+ 酪氨酸 55 - su4+ 酪氨酸 16 + su5+ 赖氨酸 5 +

第二节 噬菌体突变型的互补试验第二节 噬菌体突变型的互补试验

(一 ) X174 DNA 结构复制 图 5-1

( 二 ) X174 的突变型与互补测验1、顺反测验原理　 利用互补测验确定顺式排列或反式时能否发生

功能互补 , 顺式排列能发生功能互补且反式排列也能互补，属两个顺反子（两个基因）。顺式排列能发生功能互补且反式排列不能互补，是属一个顺反子（一个基因）

A 群 B群互补测验图解1) 群内为什么不能互补

（产生噬菌体）？2) 互补测验的概念：3) 简单的感染验证突变体

互补功能（互补测验的方法）：斑点测试法

2 2 顺反顺反测验及结果测验及结果 P124 表 5-4 X174 突变的互补测验结果 顺反子 突 变 型 A am8,am18,am30,am33,am35,am50,am86,tsl28, B am14,am16,och5,ts9,tsl16,och1,och8,och11, C och6 D am10,amH81, E am3,am6,am27, F am87,am88,am89, amH57,op6, op9,tsh6,ts41D G am9,am32,ts,ts79 H amN1,am23,am80,am90,ts4

二、 二、 T4T4 突变型的体外互补试验突变型的体外互补试验 P12P1255

不但要明白体外可以互补，还要明白这同体内互补测验一样，同样表明 27和 23 属于不同的顺反子即两个基因

第三节 噬菌体突变的重组试验第三节 噬菌体突变的重组试验

一、 T2突变型及特性 　　　　　　　　　　　　 细 菌 1 2 1+2

快速溶菌突变型：　　 r 大噬菌斑 .. ..野生型：　　　　　　 r+ 小噬菌斑 .. ..T2宿主范围野生型 : 　 h　 + 　　 - 半透明T2宿主范围突变型 : 　 h- + 　　 +　 透明

二 二 TT22 突变型的两点试突变型的两点试验验

( 一 ) 噬菌体杂交 h-r+ h+r-

E ． coli 1

表现型 基因型透明,小 h-r+ 亲组合半透明,大 h+r- 亲组合 透明 ,大 h-r- 重组合半透明,小 h+r+ 重组合

( 二 ) 噬菌体重组值的计算

重组噬菌斑数重组值 = 总噬菌斑数

E． coli ： 1+2 100%

三 三 T4T4 突变型的三点试突变型的三点试验验

表 5-5 T4 的 m r tu + + + 三点试验结果 类 型 噬菌斑数 % 重组频率 % m-r r-tu m-tu亲本类型 m r tu 3467 + + + 3279单交换型 m + + 520 + r tu 474单交换型 m r + 853 + + tu 965双交换型 m + tu 162 + r + 172 合 计 10342

69.6%

9.6% ∨ ∨

17.5% ∨ ∨

3.3% ∨ ∨

作图： m 12.9 r 20.8 tu

27.112.9 20.8

三、 三、 X174X174 突变型的两点和三点测交 突变型的两点和三点测交 P127P127

( 一 ) X174 的两点测交 ——两个琥珀突变型间杂交 amA amB su+(amber)

su+( amber) su-

基因型： amA- amB+ amA+ amB- amA+ amB+ amA+ amB+ amA- amB- A+B+ 2[su- 2] amA-amB 间重组值＝ 　　　　　　　　　 100% su+:amA 、 amB 总数

(( 二二 )) 　　 X174X174 的三点测的三点测交交

1 、确定三个基因的顺序的前提条件 只有两种可能顺序的条件下进行； 例如：要确定 amA、 amB、 tsC三基因的顺序 已知： amA与 amB较近， amA和 amB离 tsC都较远； 三个基因顺序有： amA amB tsC 或 tsC amA amB 不存在： amA tsC amB

2 、确定三个基因的顺序原理 : 杂交： amA + tsC + amB + (su+AB,37 度 ) su- 宿主选择培养（ 37度） 存活噬菌斑基因型： + + _ P127 图 5-4 su- 宿主 37度、 42度 + + _ + + +

amA + tsC + amB +

存活噬菌斑基因型： + + _实验结果是 : + + tsC 为大类， + + + 为小类基因顺序是 : amA amB tsC

实验结果应是 : + + + 为大类， tsC + + 为小类基因顺序是 : tsC amA amB

第四节 第四节 噬菌体基因组与原噬菌体噬菌体基因组与原噬菌体一 噬菌体的基因组：由 49000bp 构成1、 基因分类 　　　　　　　　头部基因： 7 个（必需基因：相邻） 尾部基因： 11 个（必需基因：相邻） 噬菌斑形成必需的基因 复制所需基因： O、 P 裂解、释放所需基因： S、 R基因 正调控基因： N、 Q 附着区： att ； 专一性重组所必需： int 、 xis 噬菌斑形成非必需基因 溶源化所需： CI、 CII、 CIII 重组所必需： exo 、 red

二、 原噬菌体与合子诱导 1 、原噬菌体： 2 、合子诱导： Hfr(λ) F-→受体菌裂解 (λ进入 F-) Hfr(λ)[F 因子整合、 λ原噬菌体 ]， F-[ 无 F]

b+原点

λd+ c+

a+

3 、 λ整合部位的确定

三 、原噬菌体的插入与切除三 、原噬菌体的插入与切除

1 、噬菌体的插入与原噬菌体正常切除 P135图 5-7

2 、原噬菌体的异常切除 P135 图 5-8　（ 1）转导噬菌体：带有细菌基因的噬菌体

　（ 2） d 转导噬菌体的特点——局限性转导

3 、 dgal( 左臂缺失 )

整合态

某些 dgal （左臂缺失）品系与图谱左臂顺反子中典型 sus突变之间重组 dgal1 dgal2 dgal3 dgal4 dgal5 susA - + + + + susB - - + + + susE - - - + + susG - - - - + susH - - - - - susM - - - - -

attPdgal1dgal2 dgal3 dgal4 dgal5

A B E G H M

第五节 环状排列与末端重复第五节 环状排列与末端重复

一、线状 DNA 具有环状遗传图 1 、 T2 噬菌体 DNA 结构特点：具末端重复（末端冗余）

末端冗余 : DNA 分子两端核苷酸顺序相同现象 . 交换导致环状遗传图环：基因在遗传图上呈环状排列。图 5-1０

2 、末端重复的实验证据 图 5-11 3 、遗传图呈环状排列的实验证据 P138 图 5-12二、环状排列与末端重复的形成 1 、遗传图的环状排列 图 5-13 （ A） 2 、末端重复杂合子的形成 图 5-13 （ B）

exoIII:从双链DNA3’-羟基端逐一去除单核苷酸，产物为双链 DNA 产生长的单链区