Upload
lejlabiohemija
View
80
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Mehanizmi genotipske promenljivosti Mutacije promene u broju i redosledu nukleotida u molekulu DNK Horizontalni prenos gena (transformacija, konjugacija, transdukcija) Transpozicije premetanje jednog ili vie gena sa jednog mesta na drugo ili sa jednog replikona na drugi
Mehanizmi razmene gena kod prokariota
Mehanizmi razmene gena kod prokariota
Homologa rekombinacijaFundamentalni bioloki proces, ukljuuje RecA zavisnu razmenu homologih sekvenci DNK razliitog porekla. Kod E. coli postoje dva glavna puta (RecBCD, RecF) sa najmanje 25 gena RecA protein se polimerizuje na ssDNK (5'3' smer) i formira filament koji ima afinitet za homologi segment dsDNK (invazija lanca) Prekid se formira u homologom segmentu na lancu iste polarnosti i lanci se unakrsno povezuju (Holidejeva struktura) Holidejeva struktura migrira i formiraju se heterodupleksi Holidejeva struktura se razdvaja na dva mogua naina
Konjugacija
Transfer plazmida
Konjugacija, transfer hromozoma Integracija F plazmida u hromozom moe se desiti na veem broju mesta Kada se F plazmid integrie u hromozom formira se Hfr soj Konjugacijom sa Hfr sojem dolazi do prelaska hromozoma u recipijenta Transfer kompletnog hromozoma domaina (veoma redak) traje 100 min. Proces se moe koristiti u mapiranju gena na hromozomu
KONJUGACIJA SA Hfr DONOROM
TransdukcijaTransfer gena iz donora u recipijenta pomou virusa Generalizovana transdukcija prenos bilo kojeg fragmenta DNK donora u recipijenta. Efikasnost niska. Specijalizovana transdukcija prenos odreenog dela DNK donora u recipijenta. Efikasnost moe biti veoma visoka.
Generalizovana transdukcijaU virusnu esticu se upakuje bilo koji fragment domainove DNK umesto virusne (virus postaje defektan)
Specijalizovana transdukcijaDNK umerenog virusa (profag) se pogreno iseca iz hromozoma domaina nosei deo svoje DNK i susedne gene domaina
Otkrie transformacije, Grifit 1928Streptococcus pneumoniae
S elije sa kapsulom, R elije mutanti bez kapsule
Transformacija Indukcija kompetencije (prirodna, quorum sensing fenomen, i vetaka) Com proteini (reguliu quorum sensing odgovor, uestvuju u vezivanju DNK i formiranju pore za njen prolazak) Uzimanje slobodne DNK esto uz degradaciju jednog lanca Integracija u hromozom recipijenta homologom rekombinacijom Kod E. coli transformacija efikasna za krune molekule DNK - plazmide
Tehnologija rekombinantne DNK i genetiko inenjerstvo Skup in vitro tehnika kojima je omogueno stvaranje himernih molekula DNK Izolovanje gena iz organizma Prebacivanje u vektore za kloniranje Ubacivanje u eliju domaina Amplifikacija gena u domainu ili ekspresija stranog proteina u domainu
Restrikcione endonukleaze Bakterijski enzimi za odbranu od stranih DNK molekula, komponente specifinog restrikcionomodifikacionog sistema Seku dvolananu DNK asimetrino na plindromskim sekvencama koje nisu modifikovane Dobijaju ime prema bakteriji iz koje su izolovane (EcoRI, HindIII, BsuRI, itd)
..GAATTC.. .G AATTC.. ..C TTAAG.. .CTTAA G..
GAATTC CTTAAG
Dobijanje himernih DNK molekula Tretiranje izolovane DNK restrikcionom endonukleazom Tretiranje izolovane DNK vektora istim enzimom Povezivanje molekula pomou DNK ligaze Ubacivanje u eliju domaina transformacijom
elije domaini za kloniranje
Osobine vektora za kloniranje Mali dobro okarakterisani DNK molekuli (do 10 kbp) Autonomno se repliciraju u domainu i prenose u erke elije Imaju selektabilne genetike markere Imaju jedno restrikciono mesto
Vektori za kloniranje Plazmidi, derivativi prirodnih Virusi, uglavnom bakteriofagi Ekpresioni vektori Sekrecioni vektori atl vektori Vetaki hromozomi
Kloniranje u plazmid pBR322
Identifikacija klona
Konstrukcija probe na osnovu mRNK
Konstrukcija probe na osnovu poznate sekvence aminokiselina