1.アルカリ-SDS2.フェノールによるタンパク質除去3.エタノール沈殿

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3 4 5

フェノール抽出 遠心管に細胞抽出液を入れる

TEバッファーで中性、水飽和にしたフェノー

ル溶液を加える

良く撹拌する 遠心分離する 上層（水相）をピペットで吸い取る

タンパクは水溶液中で疎水性のアミノ酸を内側に、親水性のアミノ酸を水に接する外側に向けて安定化している。そこに強力なタンパク質変性作用を持ったフェノールを作用させるとこの立体構造が壊れて、疎水性アミノ酸が外側に出てくる。

フェノールは比重が水より大きいため、下層になる。

この時ミルク状になるとたんぱく質が良く変性する。染色体が切れないように穏やかに攪拌する事

フェノール相や界面の不溶物（主にタンパク質）を混入させないように注意する

疎水基が有機層にトラップされ、遠心分離すると水層と有機層の界面に中間層として分離される。

遠心後のチューブ

水層：DNA含む

フェノール層

変性した蛋白の層

エタノール沈殿（エタ沈）

　核酸の脱塩，濃縮のための行程　フェノール抽出過程で残っているクロロホルムの除去

1. サンプルの1/10量の3M酢酸ナトリウムを加え転倒混和2. サンプルの2倍量の100%エタノール（4℃）3. チューブを-20℃で20分静置4. 遠心　15000rpm 4℃ 10min.　上清除去5. 70%エタノール 1mlを加える．チューブの壁などを洗う 上下反転7. 遠心　15000rpm 4℃ 5min.　上清除去8. 乾燥9. TEを加える