12-Biotechnologia w kryminalistyce

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 1/27

BIOTECHNOLOGIA W

KRYMINALISTYCE



Wprowadzenie

Największe zmiany, jakie zaszły w ostatnich

latach w biologii kryminalistycznej, związane są

z wprowadzeniem do badań technik genetykimolekularnej. Dzięki pracowania reakcji PCR

możliwa stała się indywidualizacja tak małych

śladów, jak np. pojedyncza cebulka włosowa,

czy też mikrośladowe zaplamienia krwią lubwydzielinami ciała ludzkiego, wobec których

klasyczne metody serologiczne były bezradne.



Metody biotechnologiczne

• Ekstrakcja DNA z biologicznych próbek

• Metody typowania DNA w locus DQα

• 5 loci PolyMarkera• Locus D1S80, TH01, VWA, FGA, CD4

• Fragmenty genu amelogeniny

umożliwiające określenie płci



Locus DQα i pięć loci PolyMarkera

• DQα (Human Leukocyte Antigen )

• LDLR (Low Density Lipoprotein Receptor)

• GYPA (Glycophorin A)

• HBGG (Hemoglobin G Gammaglobin)• D7S8

• GC (Group Specific Component)



Locus D1S80

• Region VNTR

• 16 par zasad powtarzających się

wielokrotnie

• Definiowane cyframi od 14 do 41

• Wysoki współczynnik dyskryminacji



Fragment genu amelogeniny

• Gene Print™ Sex Determination System

• XX: 212pz

• XY: 212 i 218pz• Wysoce konserwatywna budowa



Fragment genu amelogeniny



STR w locus TH01, VWA, FGA,CD4

• Shost Tandem Repeats liczące 2-7 pz

• Wysoki polimorfizm

• TH01 na chromosomie 11• VWA na chromosomie 12

• FGA ma chromosomie 6

• CD4 na chromosomie 12



Ekstrakcja DNA

• Oddzielne pomieszczenie

• Niezbędne wyposażenie

• Ekstrakcja organiczna - bardzo skutecznametoda

• Procedura



Ekstrakcja DNA

• Krew płynna, fragmenty zamrożonychtkanek miękkich

• Plamy krwi, śliny, nasienia

• Wymazy z ust

• Drobiny krwi, zeskrobiny spod paznokci

• Plamy będące mieszaninami

• Wymazy z pochwy

• Włosy



Etapy badań:

• Ekstrakcja DNA

• Ocena ilości wyizolowanego DNA

• Typowanie DNA w układzie PolyMarkera iHLA DQα: nastawienie reakcji PCR,ocena produktów PCR na żelu

agarozowym, hybrydyzacja i barwienieproduktów PCR

• Interpretacja wyników





Interpretacja wyników PM

• Na podstawie zabarwionych na niebieskokropek

• Odczyt pasków w stanie mokrym

• Intensywność zabarwienia świadczy o

pozytywnej próbie

• Różnica intensywności wskazuje namieszany charakter próbki

• Kontrola ujemna





Interpretacja wyników w locus DQα

• Porównanie uzyskanego wzoru na paskutestowym z sondami komplementarnymi

• Początek odczytu od C

• Kontrola ujemna

• Kontrola dodatnia

• Wybarwienie na kolor niebieski





Definiowanie alleli

• Na zasadzie porównania

• Na wynik duży wpływ ma ilość DNA

• Zjawisko wypadania alleli (allele dropout) • Przykłady







Archiwizacja żeli



Definiowanie alleliTH01,VWA,FGA,CD4

• Sprawdzenie pochodzenia prób

• Typowanie na zasadzie porównania

• Odczyt na mokrych żelach • Przykłady











Literatura:

• „Badanie polimorfizmu DNA przy użyciu techniki

PCR” - Wydawnictwo Centralnego LaboratoriumKryminalistycznego KGP Warszawa 2000

• http://clk.policja.pl/portal/clk/503/11021/Zespol_ Bazy_Danych_DNA.html

• http://clk.policja.pl/portal/clk/503/11026/Zespol_ Badan_Biologicznych.html

• http://www.biote21.com/html/pl/sek-home-01.html



Pytania:

Documents

12-Biotechnologia w kryminalistyce