Upload
others
View
12
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
AKTUÁLNE INOVATÍVNE MARKERYV LABORATÓRNEJ DIAGNOSTIKE
Mgr. Michaela BílaOddelenie klinickej biochémie a hematológie,
Ústavný seminár - 4.júna 2014
� Kalprotektín
� SDS - proteinúria
� Cystatín C
� Homocysteín, ApoB
NOVÉ VYŠETRENIA NÁŠHO LABORATÓRIA
KALPROTEKTÍN
� leukocytárny cytosolový proteín (36 kDa),nachádza sa – v neutrofilnýchgranulocytoch , v monocytoch, makrofágoch
� uvoľňuje sa pri zápalových procesoch - pôsobí ako regulátor
�antimikrobiálna, antifungálna, antiproliferačná aktivita(vplyv na angiogenézu, stimuláciu migrácie neutrofilov do oblasti zápalu a zvýšenie fagocytárnej aktivity)
Ukazovateľ zápalu v plazme, moči , pote, v črevnej tekutine a v stolici
KALPROTEKTÍN V STOLICI
� stanovenie v stolici odráža influx neutrofilov do črevného lumenu� koncentrácia kalprotektínu koreluje s intenzitou zápal. procesu v čreve� koreluje s histologickými a endoskopickými nálezmi ochorenia
Rýchly , neinvazívny a citlivý markerčrevného zápalu.
Odber: stolica do jednorázovej odberovej nádobky, Možnosti skladovania: laboratórna teplota – okamžite spracovať
2-8°C – 3 dni, prípadne zmraziť
Možnosti stanovenia -kvantitatívny test /nákladný, časovo náročný/-semikvantitatívny test -CARTEST-Biotec, imunochromatografia, >50µg/g, 50-200 µg/g, >200µg/g-kvalitatívny test
KALPROTEKTÍN V STOLICI
Referenčné hodnoty u dospelých < 50 µg/g stolice
Indikácie a klinický význam:
� skríningové vyšetrenie pri podozrenína zápalové ochorenia čreva pre vhodné internistické odbory , pri pozitívnom výsledku je pacient indikovaný na špeciálne gastroenterologické vyšetrenie)� monitorovanie priebehu a liečby IBD - Inflammatory bowel disease(gastroenterológ)
� diferenciálna diagnostika na odlíšenie IBD ( chronických zápalov čreva –Crohnova choroba, ulcerózna kolitída ) a ISB (syndróm dráždivého čreva)
� zvýšená koncentrácia kalprotektínu v stolici aj pri:-bakteriálnej infekcii GIT-tumoroch: karcinóme hr. čreva, žalúdka, intestinálnom lymfóme, kolorektálnom adenóme-pri užívaní liekov: nesteroidné protizápalové lieky, inhibítory protónovej pumpy-neliečených potravinových alergiách, neliečenej celiakii, autoimúnnej enteropatii,
divertikulózečreva
ELEKTROFORÉZA BIELKOVÍN V MO ČI SDS ELFO
� elektroforetické rozdelenie močových bielkovín (podľa molekulovej hmotnosti),
získame kvalitatívny profil bielkovín v moči
� metóda typizácie proteinúrie (glomerulárna a tubulárna)
Bielkoviny sa v moči za normálnych okolností nachádzajú len nepatrnom množstve - Normálna proteinúria : 50 - 150 mg / 24 hod
Pri zvýšenej koncentrácii bielkovín v moči-Patologická proteinúria : >150 mg / 24 hod
Glomerulárna proteinúria - proteíny > 60 kDa - 2 typy podľa veľkosti proteínových molekúl prechádzajúcich glomerulárnou membránou:
• Selektívna:- Albumín 67 kDa- Transferín 80 KDa
• Neselektívna:- Albumín 67 kDa- Transferín 80 kDa- Imunoglobulíny 160 kDa
Tubulárna proteinúria - proteíny <60 kDa– ochorenie tubulov, do moču prechádzajú –β2-mikroglobulín, lyzozým, RBP, A1-mikroglobulín, ľahké reťazce monomér a dimér-BJB, zvyčajne KVP do 1g/24hod
Zmiešaná proteinúria - 60 kDa< proteíny < 60 kDa, ochorenie glomerulov a tubulov
Klasifikácia patologickej proteinúrie
ELEKTROFORÉZA BIELKOVÍN V MO ČI SDS ELFO GEL
Anode
12 Kdal
15 Kdal
23 Kdal33 Kdal45 Kdal67 Kdal77 Kdal0
150 Kdal
800 KdalApplication
Cathode
Tubu
lárn
a
Zm
ieša
ná
Nor
mál
na
Zm
ieša
ná
Glo
mer
ulár
naN
Zm
ieša
ná
Glo
mer
ulár
naS
� elfo profil bielkovín v moči hodnotíme prítomnosť bielkovín > 60 kDa,< 60 kDa
Nález bielkovín hodnotíme vzhľadom na kvantitatívne výsledky:
�kvantitatívnu proteinúriu KVP (presnejšie pomer ku kreatinínu)
� kvantitatívnu mikroalbuminúria
Kvalita – elfo profil bielkovín v moči – typ proteinúrie
Kvantita – kvantitatívne stanovenie KVP, µALB – intenzita poškodenia obličiek
Interpretácia výsledkov SDS elfo bielkovín moču :
CYSTATÍN C
�neglykolyzovaný jednoreťazcový proteín
�inhibítor cysteínových proteáz
�syntetizovaný vo všetkých jadrových bunkách konštantnou rýchlosťou –stála koncentrácia v sére (0,8-1,2 mg/l)
�voľne filtrovaný v glomeruloch
�kompletne reabsorbovaný a následne degradovaný v tubuloch
�v moči sa za normálnych okolností nenachádza (okrem stavu tubulárnehopoškodenia obličiek)
� koncentrácia CYS C neovplyvňujú infekcie, zápalové procesy, svalová hmota, telesná hmotnosť, vek, telesná výška- deti
CYSTATÍN C
Pre svoje vlastnosti:
� marker akútneho renálneho zlyhania (reaguje o 24 h skôr ako kreatinín)
� marker chronického renálneho zlyhávania - dg. a klasifikácia CHRI (podľa GF)
� alternatívny a citlivejší marker pre stanovenie GF v porovnaní s GF stanoveného pomocou kreatinínu
CYSTATÍN C
Vhodné skupiny pacientov – pre skorý záchyt, problémy so svalovou hmotou:� deti a seniory� diabetici a hypertonici� onkologickí pacienti� kriticky chorí pacienti� monitorovanie obličkových funkcií u transplantovaných pacientov
Kontraindikácie:�pri podávaní glukokortikoidov (↑ koncentrácia Cys C)�pri nekompenzovanej hypertyreóze (↑ koncentrácia Cys C)�pri nekompenzovanej hypotyreóze ( ↓koncentrácia Cys C)�pri progresívnom melanóme, pri lymfoprolyferatívnych procesoch,
kolorektálnom karcinóme (↑ koncentrácia Cys C)
HOMOCYSTEÍN
� aminokyselina, ktorá vzniká demetyláciou esen. AMK metionínu� k metabolizmu sú potrebné kofaktory – kys. listová, vitamínyB6, B12
poruchy metabolizmu AMK – zvýšenie koncentrácii HCY v krvi toxický – poškodzuje cievny endotel
HOMOCYSTEÍN
Referenčné hodnoty : 5-15 µmol/l
Podľa závažnosti poznáme hyperhomocysteinémiu:Mierne zvýšenú 15-30 µmol/lStredne zvýšenú 30-100 µmol/lŤažkú >100 µmol/l
Pre správny výsledok je dôležité – rýchly transport na ľade a rýchle spracovanie
(za každú hodinu skladovania pri izbovej teplote stúpa konc. o 10%)
HOMOCYSTEÍN
Príčiny zvýšenia koncentrácie HCY:
� vrodené defekty enzýmuMTHFR /transformuje HCY na metionín/
neprítomnosť cystatión beta-syntetáty /konvertuje HCY na cysteín/
� deficit kofaktorov – kys. listová, vitamínov B6, B12faktory životného štýlu – vegetariánstvo, fajčenie, alkoholmalnutričné stavy
� lieky
Nezávislý rizikový faktor srdcovo-cievnych ochorenítoxicita HCY naruší trombogénu rovnováhu, oxidačno-
redukčnú rovnováhu, tvorbu koagulačných faktorov, aterogénne zmeny
Indikácie - riziko vzniku alebo prítomnosť:
• kardiovaskulárnych ochorení• trombofilných stavov• diabetické komplikácie
• neuropsychiatrické poruchy/ HCY a jeho metabolické produkty sú neurotoxické, rizikový faktor vo vývoji a funkciách CNS /
• komplikácie v tehotenstve • vrodené vývojové vady plodu
HOMOCYSTEÍN
� hlavná bielkovinová zložka lipoproteínových častíc LDL( bohaté na CHOL)� zabezpečuje transport cholesterolu k bunkám� potrebný pre tvorbu lipoproteínov bohatých na TG (VLDL) a zároveň ligand LDL receptora (faktor pre tvorbu častíc rodiny LDL)
Apolipoproteín ApoB
ApoB
Referenčné hodnoty : ženy 0,75 – 1,5 g/lmuži 0,8 – 1,55 g/l
�odráža koncentráciu LDL-Cholesterolu ( LDL-Chol stanovujeme výpočtovo – menej spoľahlivé a presné)
� koncentrácia Apo B sa meria (turbidimetria)� zároveň dáva obraz o počte lipoproteínových častíc
ApoB
Doporučuje sa vyšetrovať:
� nie ako skríningové vyšetrenie lipidového metabolizmu� pri zvýšených hladinách LDL-Chol� pri hyperlipidémii� u pacientov so zvýš. kardiovaskulárnym rizikom a pozitívnou rodinnou anamnézou� sledovanie účinnosti liečby lipidového metabolizmu(LDL-Chol v norme, ↑ApoB)� vzácne diagnostika porúch tvorby ApoB
Zvýšená koncentrácia ApoB – rizikový marker kardiovaskulárneho ochorenia
�Kalprotektín – diagnostika zápalových procesov čreva
�SDS – proteinúria -diagnostika renálneho poškodenia
�Cystatín C -diagnostika funkčnosti obličiek
�ApoB, Homocysteín –rizikové faktory aterosklerózy