ואימונולוגיה. :מיקרוביולוגיה משולבת סיכום- מעבדהוצביעות: חיידקים של מורפולוגיה.1

מ"מ1מ- הקטנים חיים מיקרואורגניזמים-יצורים .חיידקים- של מורפולוגיה

השכיחות: התא צורות-.coccus .כדורית-1.bacillus.מתג-2.spirillum.סלילונית- 34 .vibrio.בצברים: התא ארגון-יחיד .תא1.diplococcus,diplobacillus.זוגות- 2.streptococcus,streptobacillus.בשרשרת-3.staphylococcus,staphylobacillus.בצברים-4מוצק מצע על המושבות הופעת-העיקריות: החיידקים קבוצות-

בדופן פפטידוגליקן של שליליים:% קטן גרםבדופן. פפטידוגליקן של חיוביים:%גבוה גרם

גרם: וצביעת פשוטה צביעות-צביעה.2 אור. רוב ובולעים התא לתוך וחודרים החיידק לדופן הנקשרים אורגניים חומרים על מבוססת -הצביעהבתא. שליליים לאלמנטים ונקשרים חיובי מטען בעלי הם הצבעים

החיידק. של התא בצורת רק להבחין אחד. ניתן בצבע נצבעים החיידקים - כלפשוטה צביעהא. לקבוצות המשתייכים חיידקים בין להבדיל וכן התא צורת את לראות מבדלת. ניתן צביעהגרם- צביעתב.

הדופן. מבנה לפי שונותהצביעה: מהלך

)כחול( ויולט גנציאן– ראשוני בצבע (צביעה1הצבע. עם קומפלקס יוד-שיוצר עם (קיבוע2 וגורם שומנים ממיס יוד-צבע. האלכוהול הקומפלקס נשטף שליליים בגרם–אלכוהול. עם (שטיפה3

החוצה. צבע-יוד הקומפלקס ליציאתספרנין. או בסיסי פוקסיןאחר- בסיסי בצבע (צביעה4

לוגול טיפת ושמים מים עם ויולט,שוטפים בגנציאן שצובעים , לאחר גרם - בצביעתלוגול תמיסת באלכוהול. שוטפים מכן ולאחר

במיקרוסקופ. יותר טובה אימרסיה- התבוננות שמןורוד(- אי.קולי )צבע חיוביים גרםוסטאפילוקוקוס. סגול(- באצילוס )צבע שליליים גרם

:וחיטוי .עיקור3של לתיקון ניתן ובלתי הפיך בלתי נזק גרימת נבגים( ע"י )לרבות החיים צורות כל - סילוקעיקור

הדרוש חלבון כל .סילוק הממברנה של הליפידים של המסה ע"י התא למעטפת הגנום, נזקחלבונים. לסינתזת

החיים. כל לסילוק דרישה פתוגניים. אין הדבקה פוטנציאל בעלי מיקרואורגניזמים - השמדתחיטוי מפוסטר. חלב

Sanitizingמכלים. החיידקים כמות . הורדת כלים של - חיטוי-בכימיקלים הגוף. שימוש של הפנים שטח חיטויאנטיפסטי .

עיקור: שיטותפיזיקליים- .אמצעים1

לחץ. =סיראוטוקלברטוב- שעתיים(. חום למשך מעלות180) בתנור חימוםבאש, יבש-שריפה :חום -חום אדים מתקבלים מתוכו האוויר של יציאה מים, תוך אדי מתמלא החלל מים, כל המכיל האוטוקלב חימום

הטמפר' עולה וכך האטמוספירי מהלחץ גבוה הקיטור אדי של חופשיים. הלחץ מאדים יותר החמים דחוסיםהנבגים. גם נהרסים דקות15 למשך מעלות. בטמפ' זו121ל- באוטוקלב

כלי מעקרים הנבגים. כך את הורסת ולכן בחלבונים צילוב קשרי ,פותחתDNAב- נזקים-UV קרינת-פלסטיק.

בחום להתקלקל שיכולים לחומריםUVב- עיקור שעברו פילטרים באמצעות - סינוןמכניים .אמצעים2בקרינה. או גבוה

כימיים- . אמצעים3פנול, תרכובות הממברנה של הליפידים את ממיסות או התא חלבוני את ההורסות כימיות תרכובותעיקור: וכו'. חמצן ליזול,מי

הממיסים שונים מימית. דטרגנטים בתמיסה עולה חלבונים,יעילותו של לדנטורציה גורם אלכוהולחיטוי:החיידקים. ברוב גם פוגעים ולכן שומנים

מהאוויר- חיידקים מתחילים הם להם נוח מזון קרקע על נוחתים הם מתרבים. כאשר ואינם אדיש במצב הם החיידקים באוויר

קשים. שם התנאים כי באוויר ישרדו העמידים החיידקים להתחלק. רקהאדם. בגוף ספציפיים אזורים עם גומלין יחסי שפיתחו -מיקרואורגניזמיםנורמלית פלורה

גורמים אף ולעתים תועלת לו מביאים ואינם בתוכו או הגוף על החיים ווירוסים - מיקרואורגניזמיםפרזיטיםולמחלה. לנזקלחום- החיידקים עמידות בטמפר' שבין חיים האדם גוף תושבי שהם החיידקים אופטימלי, רוב טמפר' לגידול טווח יש החיידקים לרוב

מעלות.30 טמפר' של מעדיפים בטבע הנמצאים אלה מעלות. אך37-44 נמוכה תכולה בשל לחום העמיד מיוחד מבנה בעל הוא , הנבג תא בכל אחד נבג יוצרים הבאצילוס חיידקי ייחודיות תרכובות ובנוכחות החלבונים של מיוחדת באריזה נמצא בלבד. הוא % מים20 מים, עד של מאודלנבג.Tryptose-phosphateאגר-טבעית. פלורה בידוד-לחיידקי זריעתמעלות37ב- אותם שהדגרנו לפני נפרדת צלחת על ובאצילוס קולי אי חיידקי נחש- זרענו זריעת

יומיים. למשךMalachite greenנק' ירוקות. לראות , אמורים הספורה בדופן למרכיבים - נקשרSafraninספורות. צביעת מתהליך - חלק-המוליזינים, ומכונים לשרוד להם שעוזרים פקטורים מכילים דם אגר על שגדלו חיידקיםהמוליזה

מסביב שקוף חלקים-ירוק המוליזה לראות נוכל דם האגר גבי המוליזה=פיצוץ. על עושים הםשקוף. עיגול יש מסביבה מלאה-מושבה המוליזה לחיידקים. או

בתרבית- חיידקים גידול .4התאים. במספר עליה או התאים של במסה העליה ע"י גידול לקבוע ניתןבינרית. חלוקה ע"י הוא החיידקים התרבותהשינוי מדידת ע"י ביח' נפח החיידקים מספר עליית של בדיקהחיידקים: של גידול עקומת

העוברת האור התרחיף. כמות דרך העובר האור איבוד את . נבדוקהחיידקים תרחיף של בעכירות = גידולlogה- שלבבמס' התאים. שינוי =איןlagה- שלבהתאים. למספר הפוך ביחס נמצאת

המצע הידלדלות בשל יורד התרבית של הגידול = קצבהעמידה שלבהתאים. של במקסימליקטן. -מס' החיידקיםהתמותה שלבבמס' החיידקים. עליה . איןPH ושינוי

את מושבה.מוהלים מתפתחת תא שמכל : בידיעהביח' נפח מס' התאים של חיה ספירה יח' הנפח של החישוב: ההופכי נערך המושבות שמתפתחות ולאחר עשרוניים מיהולים התרחיףהמיהול* מס' המושבות. של הצלחת*ההפכי על שנזרעה

מסוים: זמן פרק באוכ' לאחר התאים מספר .n .מס' הדורות -Noמס' התאים- ההתחלתי.

.

1עצמה. = לאוכ' להכפיל הדרוש דור-הזמן זמן/Kלחלוקה. חלוקה שבין התא-התקופה מחזורהגידול- קצבKבדקה. חלוקות -מספר

לאנטיביוטיקה חיידקים רגישות בדיקת.5סינטטיים. אנטימיקרוביאלים -חומריםכימותרפויטיקהחיידקים. של למוות או הגידול לעיכוב הגורמות מיקרוביאלי - מולק' ממקוראנטיביוטיקההמאכסן. בתאי לפגוע מבלי בחיידקים שלו:לפגוע בסלקטיביות הוא האנטיביוטי הטיפול חשיבותלאנטיביוטיקה: חיידקים של הרגישות לקביעת שיטות

חיידקים תרבית של הגידול לעיכוב הדרוש המינימלי הריכוז במבחנות. קביעת -מיהוליםtube Dilutionא.MICחיידקים105כ- של בריכוז חיידקים מבחנה לכל ומכניסים אנטיביוטיקה של כפולים מיהולים . מכילים

.MICחיידקים= של צמיחה אין שבו ביותר הנמוך הריכוז מהו – ובודקים במ"ל. מדגיריםחיידקים. של צמיחה אין שבו ביותר הגבוה למיהול הכוונה

106כ- מזון, זורעים קרקע של צלחת באגר. על האנטיביוטיקה של דיפוזיה"-הדיסקיות ."שיטתב

בדיפוזיה עוברת ידוע. האנטיביוטיקה בריכוז באנטיביוטיקה הספוגות דיסקיות דשא.מניחים חיידקים,זריעת

הקוטר את ובודקים לדיסקית. מדגירים מסביב יצמחו לא אנטיביוטיקה לאותה הרגישים האגר. חיידקים אל לאנטיביוטיקה. אם רגישות קיימת האם קובעים מסחרית סטנדרט טבלת חיידקים.לפי צמיחת אין שבו

שווה או גדול הנמדד הקוטר לאנטיביוטיקה.אם עמיד החיידק אז המוגדר מהקוטר קטן הנמדד הקוטררגיש. החיידק המוגדר לקוטרהדופן. בסינתזת מתיצילין,אמוקסיצילין-פגיעהחלבונים. בסינתזת אריתרומיצין-פגיעהבסינתזת ציפרופלוקסצין-פגיעה DNA.

השוואה בין המעבדות באימונולוגיה אימונופרסיפטציה

Dean and בשיטתWebb

המאגלוטינציההטבעת מבחןאלייזה שיטתוהמוליזה

הנוגדן שםוהאנטיגן

BSAאנטיגן=RaBSAנוגדן=

RγGאנטיגן-=אנטיגןSRBCRASRBCנוגדן-

האנטיגן תכונותוהנוגדן

מסיס, נוגדן אנטיגןכנגדו. המכוון ספציפי

או אנטיגן קשירת או מסיס נוגדן

לפאזה חלקיקי מסיסה לא מוצקה

חלקיקי אנטיגן שליו חלקיקי או

אנטיגן קשורמסיס.

תכונות הקומפלקס

אנטיגן-נוגדן

בתנאים שוקע פיסיקוכימיים מתאימים=

אימונופרסיפטציה.מסיס. בלתי כלומר

קשירת לאחר הנוגדן או האנטיגן המוצקה לפאזה

או אנטיגן מוסיפים שקשור נבדק נוגדן

מכן לאנזים.לאחר סובסטרט מוסיפים לאנזים ספציפי

ומתקבלת צבע. ריאקצית

הצבע עוצמת היא המתקבלת

לריכוז ישר ביחס התצמיד

הנבדק האימונולוגי קשירת מידת שכן

התצמיד נוגדן=אנטיגן

למידת מקבילהסובסטרט. פירוק

לקפילרת מכניסים נוגדן זכוכית

בשתי ואנטיגן נפרדות. שכבות וישנה במידה

אז ספציפיות המפגש במקום קו יתקבל ביניהם

פרסיפיטציה.

יש כאשר של הצמתה ע"י האנטיגן

יווצר הנוגדן פרח. של מבנה מספיק אין כאשר

נוגדנים נקבל להצמתה

של שקיעה של ומבנה אנטיגן

כפתור.

משתנה ריכוזשל..

משתנה האנטיגן ריכוז הנוגדן ריכוז ואילו

קבוע.

בודקים אם תלויאנטיגן. או נוגדן

נוגדן ריכוז וריכוז משתנהקבוע. אנטיגן

של כמותית קביעהמטרה ונוגדנים אנטיגניםמוחלטים בערכים

רגישה שיטה לזיהוי וספציפית

של וכמותי איכותינוגדן. או אנטיגן

איכותית שיטה של מהיר לזיהוי

מערכותאנטיגן-נוגדן

נוגדן כיול

הטובה ההשקעהשונות כאשר תתקבל ביותר

האנטיגן כמויות תהיינה והנוגדן

אקוויולנטיות, לאחר יישאר לא ההשקעה

לביצוע יותר קלה מאשר

האימונופרסיפטציה.

מהירה שיטה איכותית להוכחה

נוגדן של קיומו על מסיבית בכמות

הנבדק. לאנטיגן

של עודף העליון בנוזלנוגדן. של או אנטיגן

בשיטת אימונופרסיפטציה Dean and Webbספציפי. לנוגדן מסיס אנטיגן בין סרולוגית : תגובה ע"י המתקבלת העקומה לפי נקבע במערכת והנוגדן האנטיגן כמויות בין האופטימלי היחס

אנטיגן. של משתנות כמויות ע"י נוגדן של קבועה כמות השקעת-BSA .אנטיגן=RaBSAאנטי. ארנבת - נוגדןELISAמוצק. מצע פני על אימונואנזימתי -בוחן-RγGאנטיגן=-PBS-ELISA= פשוטות. במערכות בבקרה שמשמש ספציפי בלתי חלבון שלילית, מהווה כביקורת -משמשג'לטין-

לפלטה. האנטיגן היקשרות ומניעת הפלטה מיסוך לצורך משתמשים במע' מורכבותPBS-TWEEN.בופר-

-Alkaline phosphataseהנבדק. =אנזיםPBS-Tביותר. גבוהה נוגדן כמות היתה שבה ביותר הנמוך המיהול עם בבאר צבע -נקבל

אנטיגן-נוגדן. – קישור יש השניה -בהדגרהוהמוליזה: המאגלוטינציה(. RASRBC) בארנבת שפותח ( ובנוגדןSRBC) כבש של אדומים דם : אנטיגן-תאיהמאגלוטינציה-

נוגדן אליהן קשרו אשר הדם כדוריות של המוליזה מקבלים שבעזרתו במשלים -המוליזה: משתמשיםספציפי.

-PBSפוספט. =בופרהנוגדנים: כייל

של המינימלי להמוגלוטינציה=פרח. הריכוז ,שגורם הנוגדן של ביותר הגבוה -המוגלוטינציה=המיהוללהצמתה. שגורם נוגדן

הדם. כדורית המוליזה=פיצוץ נראית בו ביותר הגבוה -המוליזה-המיהול איזור על עובדים אנטיגן-נוגדן. הם התצמיד את לפרק בתפקידם אנזימתים חלבונים -משלים= אוסף

FCאנטיגן-נוגדן. תצמיד שאין המוליזה- משום תהיה לא כפתורים הנוגדן. כשיש של הציר לאזור שקרוב פרח-צלולות. עכורות. מבחנות המבחנות ולכן