748.влияние различных факторов на результаты суперовуляции коров доноров, качество и приживляемость

На правах рукописи

РодольфоуРамирес Родригес

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА РЕЗУЛЬТАТЫ СУПЕРОВУЛЯЦИИ КОРОВ ДОНОРОВ,

КАЧЕСТВО И ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ

03.00.13 - физиология человека и животных

Автореферат диссертации на соискания учёной степени

кандидата биологических наук

Дубровицы Московская область - 2000

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

J6)> pen. &\сОп7- pajf&pefi-tuA

Диссертаиионная работа выполнена в Российском университете дружбы народов и в отделе трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-исследовательского института животноводства (ВИЖ).

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор II. II. СЕРГЕЕВ

доктор биологических наук, профессор И. А. ПОРФИРЬЕВ

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, А. М. ЧОМАЕВ

кандидат биологических наук, А. Н. НОВГОРОДОВ

Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский институт

племенного дела

I Защита диссертации состоится ^О " i&&tfft/ 2000r в 10:00 часов, на заседании диссертационного совет i Д.020.16 02 во Всероссийском научно-исследовательском институт -животноводства. Адрес: 142012. п. Дубровицы, Подольского района, Л.осковской области.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского

научно-исследовательского института животноводства.

Автореферат разослан " 2000г

У Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук . <е-<—-у В.П. ГУБАНОВА


ЦЕНТРАЛЬНАЯ НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА

Мо=к..свльскохоз . академии им. К. A. Tk^KDjjs

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА PfrpffiFtVg > f - с З е £ Актуальность темы.' Современные экономические условия дик

необходимость повышения интенсивности селекционной работы:' по: совершенствованию • племенных и продуктивных качеств животных, а также создания современных высокопродуктивных пород, линий и"гибридов скота, отвечающих требованиям постоянно меняющейся конюктуры рынка. Мощным средством интенсификации воспроизводства служит метод трансплантации эмбрионов. ' .•- .--•

Однако у крупного рогатого скота основным лимитирующим? фактором ' успешного развития и применения метода трансплантации является высокая степень- нарушений репродуктивной функции коров (около 40 'Л). . - . . - .

Существенным ограничением возможностей трансплантации зародышей является также низкая оплодотворяемость яйцеклеток и отклонения в их развитии после их оплодотворения с высоким процентом гибели эмбрионов. '' ' ' •"• ' ' •> * •" с' " '

Проявление фенотипических признаков имеет генетические и. внешние' компоненты, которые можно представлять соответственно как присущие и неприсущие организму; Если жизнеспособность или выживаемость эмбрионов рассматривать, как фенотипический признак, то гибель эмбрионов может происходить в результате дефектов в одном или обоих из этих компонентов или от взаимодействия между ними. Наблюдается три общие тенденции. Во-первых, независимо от метода оплодотворения, процент гибели эмбрионов всегда имеет место. Во-вторых, чем большему воздействию подвергается эмбрион, тем выше эмбриональная' смертность. В третьих, результативность пересадки повышается по мере совершенствования' метода, это предполагает, что некоторые негативные внешние факторы могут быть устранены.

Однако существо причин эмбриональной смертности изучены' недостаточно и вполне очевидно, насколько это важны для внедрения трансплантации е производство.' "

Эффективность применения трансплантации эмбрионов в практике селекции молочного скотоводства во многом зависит от правильного отбора коров-доноров по способности выделять достаточное число качественных эмбрионов после гормональной обработки и искусственного осеменения. Разработка возможных объективных тестов прогнозирования эмбриопродуктивности доноров имеет важное теоретическое и практическое значение для улучшения воспроизводства высокопродуктивных коров. •" , . . . .• . .••. .,,-••• .. .

В России, с 1991 года, происходит устойчивое' "сокращение 'поголовья" скота, сопровождающееся повышением доли коров в стаде и одновременном снижением их продуктивности. Это уменьшает возможности увеличения производства молока.; По данным ФАО популяция крупного рогатого скота в России к 1997 году составляла 39,696 млн. За 3 года, с-1994 года по 1997 году, численность крупного рогатого Скота сократилось на 9,3 млн.'голов


(19,5%). Удой на фуражную корову уменьшился на 536 кг. В нынешней экономической ситуации , при. отсутствий государственной „ поддержки появились серьезные симптомы разрушения i племенного животноводства». ..'.. . . Пересадка эмбрионов в частности важна в развивающихся странах, в том числе в Латинской Америке. На результаты трансплантации эмбрионов влияют и физиологические особенности доноров и реципиентов, а также квалификационная способность специалиста, осушесвляюшего процедуры., ( Известны исследования по изучению этих факторов в странах умеренного климата на животных европейского происхождения (Эрнст Л.К., Сергеев НИ 1989; Куанышбекоа Б М , 1990, Самоделкин А. Г., Гавриков A M , Сергеев НИ. 1996). Однако мало известны научно-обоснованные исследования этих факторов в тропических условиях

Зарубежные авторы отмечают, что несколько стран центральной и южной америки имеют .значительное количество скота и. что развитие животноводства способствует значительным образом улучшению в потребностях питания населения и экономики страны. Однако усилия по созданию государственных программ по трансплантации эмбрионов в большинстве этих стран не дали заметные результаты, и почти невозможно получить достоверную информацию.

; Популяция скота в Гватемале насчитывается 1734 млн. Работа по пересадкам эмбрионов , началась в 1976 г, С 1976 по 1978 гт. трансплантация эмбрионов проводилась на фермах, используя Gyt, Nelore и индо-бразилъские породы скота и было получено 400 стельностей. Между 1979 и 1980 rrv пересадки проводились на коровах брахманой, голштиной и бурой шведской пород. С 1983 по 1986 гг. сообщалось о 70 стельностей в результате трансплантации эмбрионов. Некоторые попытки проводились по пересадке..замороженно-оттаянньк эмбрионов.;

Относительно трансплантации эмбрионов у других сельскохозяйственных животных, в Латинской Америке были сделаны только отдельные попытки. Было сообщение о рождении ягнят, козлят и жеребят, но,число их незначительно. К сожалению исследования, не проводились на аборигенных видах, таких как южис-американские мозоленогие (лама, альпака, викунья), которые имеют большое значение в Перу, Боливии и Чили. . . . Несмотря на то, что некоторые страны имеют основные нормы контроля ввоза заболеваний путем ввозимых эмбрионов, нет четких, хорошо разработанных правил для эмбрионов и

. пересадок, что затрудняет международную коммерцию эмбрионов. . О продаже замороженных .эмбрионов зарубежного или отечественного происхождения

были сообщения только в газетах. К сожалению, невозможно узнать с уверенностью уровень коммерциализации замороженных эмбрионов. . . . . . . . .

Цель и задачи исследований. Целью настоящих •; исследований являлось повысить эффективность, синхронизации . охоты у.' коров-доноров и - телок-реципиентов до 95% и гормональное, индуцирование суперовуляции на 25%. Определить эффективность применение


фолдикулостимулирующего гормона и сурфагона для повышения опяодотворясмости яйцеклеток и выхода эмбрионов, пригодных для трансплантации у доноров при суперовуляции. '

Исходя из этого, были поставлены следующие задачи-. 1 изучить эффективность комбинированного применения биологически активных препаратов

при синхронизации охоты у коров доноров и телок реципиентов; 2 определить эффективности гипофизарных препаратов фолликулостимулирующего гормона

в сочетании с рилизинг-гормонамн при стимуляции овуляции у коров-доноров эмбрионов; 3 изучить влияние различных факторов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов; 4 : изучить влияние рилизинг-гормонов на гормональный фон крови при стимуляции овуляции;

, 5 изучить влияние различных факторов на приживляемость эмбрионов при их пересадке телкам-реципиентам ' Научная новизна Усовершенствованы методы синхронизации охоты у коров и телок на

основе применения современных- гормональных препаратов.. Повышена эффективность индуцирования охоты до 86,&-90,0 % Определены факторы, влияющие - на показатели оплодотворяемости в индуцированную охоту и при суперовуляции. Разработаны методы овариостимуляции с целью ускоренного завершения послеродового периода . и периода восстановления после использования коров в качестве доноров эмбрионов. Изучены эндокринные факторы, лежащие в основе биотехнических методов управления половым циклом коров.. _.

Практическая значимость работы.

Усовершенствованные методы синхронизации охоты у коров и .телок. позволяют эффективно планировать и проводить индуцирование суперовуляции у доноров и экономически, эффективно проводитьэмбриопересадки реципиентам. -• •

Ускоренное восстановление репродуктивной функции лактируюших коров доноров после-извлечения, а также корректирование послеотельной воспроизводительной активности позволяет получать эмбрионы за период времени не превышающий экономически обоснованный сервис-период. •'.*- • •• ' . . . " ' " ' ' - • •

Апробация работы Материалы диссертации доложены на ежегодных научно-практических конференциях Российского университета дружбы народов (1998-1999). .

Публикации- По материалам диссертации опубликована 1 печатная работа в центральном журнале России " Племенное дело". • - • • • • • ' • . .

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на ИЗ страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов• собственных исследований,, обсуждения, выводов и практическое: предложение. Цифровой материал представлен в.12 таблицах, иллюстрирован 1 рисунок. Список литературы включает 120 источников отечественных и зарубежных авторов;


6

' ' • • • ' * 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ В качестве доноров эмбрионов были использованы высокопродуктивные племенные

коровы и телки черно-пестрой породы опытного хозяйства «Щапово», фермы «Кузенево» и фермы «Лукошкино» экспериментального хозяйства «Кленово-Чегодаево» ВИЖа Московской области, Реципиентами служили 417 телок случного возраста черно-пестрой породы живой массой 350-380 кг.

Для синхронизации охоты доноров и реципиентов и стимуляции овариальной активности были использованы лростагландины — Pg F2a, эстрофан, а также в сочетании с гипофизарными гормонами ФСГ фоллитропин и ГСЖК, гонадолиберины - диригисгран и сурфагон.

Доноры были обработаны на 10-12-й день или на 7-9-й день и 13-15-й день полового цикла, в зависимости от поставленного опыта,- гипофизарными гормонами ФСГ фоллитропин и ГСЖК. Перед обработкой инъецировали 2-х кратно тетравит в дозе^ по 10 мл по общепринятой схеме. Первая инъекция в деньобработки и вторая - через 48 часов после первой. Гонадолиберины и лютеинизирующий гормон вводили 48 • часов после применения простагландина, перед осеменением.

' На 7-ой день от первого осеменения — извлечение эмбрионов по методике ВИЖа. Первый день охоты принимается за «0» день полового цикла.

Обнаружение, оценка качества, кратковременное хранение эмбрионов, подготовка их к пересадке осуществились по методикам ВИЖа

Группа I 11

III. ,

Число животных 30 30

.30

Препарат Эстрофан

Эстрофан + СГЖК

. СГЖК + Эстрофан+ Сурфагон«

Доза " 500 мкг 500 мкг 15 мкг

1000 ИЕ 500 мкг 15 мкг

День введения препарата 10-12

7-9,13-15 '

7-9,13-15

1.2. СХЕМА ИССЛЕДОВАНИИ ПО СТИМУЛЯЦИИ ПОСЛЕРОДОВОЙ ОВАРИАЛЬНОЙ. АКТИВНОСТИ У КОРОВ

Группа•

I И

III t • :

. IV

. V - .

Число животных

50 30

50

; . ' 3 0 - ••.::

;-,:•;•- 50

Препарат '

-Фоллитропин + Сурфагон

ГСЖК + Сурфагон

Фоллитропин + PgF2a +

+ Сурфагон гсжк.

+ PgF2a + + Сурфагон

Доза

. 500 ИЕ 15 мкг

1000ИЕ 15 мкг

1000 ИЕ 500 мкг

1 15 мкг 1000 ИЕ 500 мкг 15 мкг

День введения препарата после отела

. . •5 12 • 5 12 12 -12 14

-II 13 15


7

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3 I Изучение эффективности комбинированного применения биологически активных препаратов

при синхронизации охоты у коров-доноров и телок-реинпиентов, Целью синхронизации охоты коров является получение качественного индуцированного

цикла. Сурфагон - препарат способный, по имеющимся экспериментальным данным, в определенной степени корректировать гормональный фон, а также наряду с этим ослаблять или устранять последствия его нарушения. ' ' ' . • • • '

Провели сравнительные исследования эффективности комбинированного применения

простаглаилина в сочетании с гонадотропином и гонадолиберином на трех группах животных

(схема!) . , ; .-- ' " , . , . ' ' . ' ' Результаты опыта представлены в таблице. 1. В группе I, в которой . при синхронизации

охоты проводили только эстрофаном, и получили наилучшие результаты при обработке коров с 10 по 12-й день полового цикла, служила контролем. Животных опытных групп обрабатывали в период с 7-9 и 13-15-й день полового цикла при наличии хорошо выраженного желтого тела в одном из яичников. Группы II и III обработали простагландином эстрофаном в дозе 500 мкг в сочетании с ГСЖК в дозе 500 И Е. Животным группы III, перед первым осеменением дополнительно вводили синтетический гонадолиберин (сурфагон) в дозе 15 мкг.

Анализ результатов- опыта показал, что введение гонадотропинов положительно корректирует недостатки, связанные с неблагоприятными исходными факторами, на момент начала обработок. В группе II общее количество животных пришедших в охоту было 86,6 %; это близко к показателю в контрольной группе: 90,0 %. Количество животных, проявивших признаки: охоты в оптимальный 48-часовой интервал после применения простагландина - 66,7 %, оказалось также близко к показателю в контрольной группе - 70,0 %. Введение в комплекс синтетического гонадолиберина (сурфагона) увеличивало процент прихода в охоту до уровня в контрольной группе. При этом необходимо отметить, что большинство коров в группе III (83.4 %) пришло в охоту через оптимальные 48 часов после обработки против 70,0% в контроле.

Таким образом, введение в режим обработок с простагландинами' гонадотропинов улучшает результаты синхронизации охоты. Синтетический гонадолиберин корректирует процесс овуляции при возможных его нарушениях, и эффективность синхронизации охоты существенно возрастает. _ . ' . . , . .


X

1. ВЛИЯНИЕ КОМБИНИРОВАННОГО МЕТОДА ОБРАБОТКИ КОРОВ-ДОНОРОВ НА , РЕЗУЛЬТАТЫ СИНХРОНИЗАЦИИ ОХОТЫ

'• ' • • • ' ' '•• * Показатель

Число животных, П -% Пришло в охоту, П - %

В том числе через, П-°/о

24 часов 48 часов 72 часов

Не проявили признаков охоты, П - % Пригодные к индуцированию суперовуляции,!

П - %

I (контроль) Эстрофан

30-100,0 27 - 90,0 3 - 10,0

' 21 -70,0 3 - 10,0 3 - 10,0

27 - 90,0 •

Группа 11

Эстрофан + ГСЖК

30- 100.0 26 - 86.6

2-6.7 •20-66,7

4 - 13,2 4 - 13.3 24 - 80,0

III Эстрофан + ГСЖК

+ Сурфагон 30-100,0 27 - 90,0

2-6,6 25 - 83.4

-3 - 10,0

27 - 90,0

3 2. Определение эффективности гипофнзарных препаратов фолликулостнмулируюшего ' гормона в сочетании с рилизинг-гормонами при СТИМУЛЯЦИИ ОВУЛЯЦИИ У коров-доноров

Восстановление в послеродовой период воспроизводительной функции у коров является одной-из серьезных задач зооветеринарной службы. Чаще всего нарушения • этой функции возникают на почве задержания последа, атонии матки или заболевания яичников (персистентное желтое тело, гипофункция, киста и другие) и для их устранения используют различные лекарственные и гормональные препараты. При этом удается профилактировать послеродовые осложнения, но надежно гарантировать в короткое время восстановление воспроизводительной функции не удается, так как все применяемые препараты не моделируют тот гормональный фон, который характерен для стадии возбуждения полового цикла.

Испытали действие гонадотропинов в сочетании с гонадолиберинами, а также их сочетание с синтетическими простаглндинами при стимуляции овуляции у коров доноров после отела (схема

2).'-""."'';""_''." " '_', '"" [~'~' ' ' / " ' '. м. ' / ' . :

При клинических исследованиях контролировали наличие желтого тела беременности и развития фолликула.

Влияние введения препаратов на развитие овариальной активности после отела приведено в таблице 2. У опытных животных, в сравнении с контрольной группой, достигнуто более раннее наступление овуляции.-Первая овуляция после отела у животных экспериментальных групп наступила в среднем на 3,7-2,0 дня раньше, чем в контроле. При анализе.стимулирующего овуляцию действия обработок констатировали более выраженное действие в группах IV и V: число животных с овуляцией до 15 дней после отела возросло до 36,7-40,0 %; число животных с овуляцией после 15 дней после отела соответственно понизился до 63,3-60,0 %.

Для более детального анализа степени воспроизводительного статуса животных после проведения осеменения вывели показатели индексов осеменения (таблица 3). Окончательные


результаты наиболее благоприятные в группах; IV H"V', У 62,00-63,33 % животных достигла оплодотворяемосгь после 1-го осеменения; общая оплодотворяемосгь доведена до? 93,33-96,00 % и индекс осеменения до 1,65. При этом сервис-период сокращен до 72,3-67,5 дней.'* •""•';

Таким образом, это дает основание предполагать возможным вызывать суперовуляцию-в индуцированный после отела цикл или последующий спонтанный, т с есть более раннее после отела использование коровы в качестве донора. .'•-'• ' " ...•*•'•-

•2. ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЕ ГИПОФИЗАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ • ' ФОЛЛИКУЛОСТИМУЛИРУЮЩЕГО ГОРМОНА В СОЧЕТАНИИ С РИЛИЗИНГ-ГОРМОИАМИ

ПРИ СТИМУЛЯЦИИ ОВУЛЯЦИИ У КОРОВ-ДОНОРОВ

Группа

• • - . • • - : •

. .. -I

• < " i :•

• ш •••

IV

V

Препарат

. . . - ' - , - • •

-' • Контроль

Фоллитропин + Сурфагон

ГСЖК -+ Сурфагон

Фоллитропин + PgF2a+ • Сурфагон.

ГСЖК . + Pg F2a + Сурфагон 1

-Число живот

НЫХ '

if : •

50 30

50 •

30

50

Число животных с . , наличием в яичниках .

на день обработки Желтое • Желтое

. тело беремен

ности,' -. П.

. • ' . / • •

27 . 12 .

' • 2 7

16

2 6 - -1 - •- •

тело и -фолликула или только фолликула,

П - • ' • » • • • ' " '

' ' . : • : • • ' !

23 • д18'

23

• 1 4 '

• 24 . ..,•• .„ .

• • '' Срок ' • ' • •' ' • i : \

Интервал; .после отела, дней- '

л .

.,..,.. •> ." .... !"

20,1 ± 3,4 18,1 ±4,0

17,4 ±3,4

16,4 ±2,1

16,4 ±3,1 • • А ' : >

первой'овуляции ' * | • . . п > -1 • ,

'' Число животных

с овуляцией

.до 15 дней после отела;-П-%-

"10-20,0 6-20 ,0 . .

"19-38,0

11-36,7

20 -'40,0 v ' • • - , . . • - .

• '•* 1

Ч и с л о ЖИВОТНЫХ!

с овуляцией > после •>

15 дней " после , отела, .••

П-% 40 - 80,0 24 - 80,0

31-62,0

19-63,3

30-60,0 • : . . • ' •

3. ВЛИЯНИЕ ГОРМОНАЛЬНОЙ СТИМУЛЯЦИИ У КОРОВ-ДОНОРОВ ПОСЛЕ ОТЕЛА НА, . ОПЛОДОТВОЯЕМОСТЬ, ИНДЕКС ОСЕМЕНЕНИЯ И СЕРВИС-ПЕРИОД

Группа

1 11

111 <. IV

V

Препарат,;

. ! Г . -

Контроль Фоллитропин • + Сурфагон •

ГСЖК + Сурфагон

Фоллитропин + PgF2a + Сурфагон

ГСЖК + PgF2a + Сурфагон

Число, Живот

ных '

50 30

. 50.

30

50

Оплодотворяемосгь после -1-гоосемё-'

-нения; П~У& ' 26 - 52,00 17-56,67

28 - 58,00, ,

19-63,33

31-62,00 .

• О б щ а я ••( оплодотворяе.-мость, П-%'

• • * . " 1 • • - . . * .

48 - 96,00 29 - 96,67

,49-98,00 .,

28-93,33

48-96,00

i Индекс осеменения,

1,95 1,70

,.. U S , .

1,65

1,65

Сервис-- » период,. , сутки

85,05 ± 44,05 75,6 ± 29,00

74,6 ±,42,65

72,3 ± 21,75

67,5 ± 21,75


10 .

3.3. Влияние различных факторов на уровеньсуперовуляиин и качество эмбрионов : • 3,3 1 Изучение влияния продолжительности охоты на стадию развития эмбрионов и их качество

Процесс овуляции индуцированных к росту фолликулов затягивается во времени: Это подтверждается тем, что на 7-8 день индуцированного цикла после осеменения находят эмбрионы на разной стадии развития. . . , ; > , • • .- , s . . i r

Проведены исследования на 51 корове (таблица 4) после индуцирования суперовуляции фоллитропкном в синхронизированный (группе I) и спонтанный циклы (группе II) Выяснили, что у части коров-доноров охота продолжалась на второй и третьи сутки. Этих животных осеменяли, соответственно, З'и. 4 раза с интервалом 12 часов на всем протяжении охоты. Увеличению

. продолжительности охоты и кратности осеменения соответствовало увеличение числа овуляций на положительного.донора, с 7,5 до 8,7 в группе t и с 6,9 до 8,4 в группе II. Однако наилучшая оплодотворяемость-установлена при трехкратном - осеменении — 93,9 и 93,6 %. Увеличение продолжительности охоты до 36 часов и числа осеменении до 4 приводило к снижению оплодотворяемости яйцеклеток до 72 и 84,6 %, соответственно.' ,

Таким образом, оплодотворяемость яйцеклеток у коров-доноров повышается с увеличением продолжительности охоты от 12 до 24 часов, а следовательно, с увеличением кратности проведения осеменения до 3.. • ' . ' Дальше, было изучено влияние продолжительности охоты на стадию развития эмбрионов и их.-: качество; По .результатам; проведенного- опыта (таблица 5) установлено, что отклонение продолжительности охоты.от среднего показателя, то есть до 12 часов и ее увеличение до 36 часов, не влияет на показатели среднего числа клеточных структур на донора, но отмечается уменьшение'.числа эмбрионов пригодных-для. трансплантации. Причем число эмбрионов на близких стадиях развития (поздние морулы и ранние бластоцисты) колебалось в пределах 49,1-51,9 %. При наличии эмбрионов на стадии ранней и поздней морулы и поздней бластоцисты.

" - - , . , . . . • ' - ! , • • . > ' : ' . . . > ' • ' • • ' • ' . • - • - - •• f ; ч : , • ! • • • • • - . • • ' • • • • г - . '

число эмбрионов пригодных для трансплантации, снизилось до 11,1-23,1 %. Лучшие результаты . были••• получены от доноров, у которых охота длилась 12-24 часов Большинство эмбрионов i находились на", стадии • поздней морулы и • ранней^ бластоцисты. При этом пригодных для • трансплантации эмбрионов было почти в два раза больше, чем в других случаях (86,7 против 49,1

• • Й 5 1 , 9 « ) ; ' Л: . ^ ; . . ' ''•)": • • " . ' • - " . _. • • . - • • ~.''у. • . : ' ' • ' " . ' ; • '

Таким образом, количество эмбрионов; пригодных для трансплантации и стадия их-развития* у суперовулировавших- коров-доноров t в определенной/ степени' зависят от. продолжительности охоты. . •. • i -


4 ВЛИЯНИЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ОХОТЫ. И КРАТНОСТИ ОСЕМЕНЕНИЯ НА УРОВЕНЬ ОПЛОДОТВОРЯЕМОСТИ ЯЙЦЕКЛЕТОК У КОРОВ-ДОНОРОВ

Продолжительность охоты,часов

12 24 36

12 24 36

Кратность осеменения Группа

Число коров %

Среднее число*"'

овуляции; Синхронизированный половой цикл 2 3 4

I 4 10 6

20 50

7,5 • • •• 3,0

30 | 8,7 Спонтанный половой цикл

2 3 4'

II 8 16 7

25,8 51,6 22,6

• 6 , 9 7,3 8,4

Оплодотворя-емость-

яйцеклеток, %

85,0 93,2 72,7

-> 85,0 93,6 84,6

5. ВЛИЯНИЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ОХОТЫ НА СТАДИЮ РАЗВИТИЯ ЭМБРИОНОВ И • ИХ КАЧЕСТВО

Продолжитель

ность охоты, Часов

<12

. 12-24

>24;'_

Стадия развития

извлеченных эмбрионов

Поздние' морулы и

ранние бластоцисты

Ранние и поздние. -

. морулы и* бластоцисты

Поздние морулы и •


Ранние и поздние -

морулы и бластоцисты

Поздние морулы и .


Ранние и поздние

морулы и ' бластоцисты

Число доноров, • п

11

3

23

5

И

W

Общее число клеточных структур

П

57

26

128

43

52

72

в том числе, эмбрионов•

• пригодных для трансплантации

П

28

6'

III

10 .

.27;

8

%

. 49, Г

1

23,1

86,7

; 23,3

51,9

11,1

' • • • ' • • :

'Число •• клеточных структур

на донора,: П

•5,2±1,3

8,7 ±1,1

5,6 ±1,4

" 8,6 ± 1,6 ;

4,7 ± 0,9

7,2 ±1,2

Число • Эмбрионов -

" пригодных для трансплантации

на донора, П

2,6±0,б

2,0 ±0,5

; " 4,8 ±0,6

• 2,0 ±0.3

. .2,5 ±0,4

6,8±0,2


12

3.3 2. Изучение влияния морфо-функцнонального состояния яичников, которое приходится на мдмент начала обработок на результаты синхронизации охоты -: ' '.'..' \ '. Изучали влияния.морфо-фуикционального;состояния яичников! которое приходится на

момент начала обработок на результаты синхронизации охоты. - У 90 коров трех групп охоту синхронизировали простагландином зстрофаном в дозе 500

мкг (таблица 6). Группы подбирали с учетом стадий полового цикла I группу сформировали из животных; находившихся на 7-9-й день полового цикла; II группу из животных, находившихся на 10-12-й день полового цикла, и III группу из животных,-находившихся на 13-15-й день полового цикла. В одном из яичников всех животных было диагностировано типичное желтое тело. Перед обработкой брали пробы крови для определения концентраций прогестерона ичстрадиола.

• ..Лучшие результаты показали животные II группы. Большинство из них пришло в охоту, f"̂ причем через равный интервал времени — 48 часов после инъекции эстрофана. До 24 w после 48 часов пришли в охоту лишь по 3 особи. Признаки охоты не проявили лишь 10 % коров У 90 % обработанных животных, то есть у всех пришедших в охоту, на 8-10-й день'индуцированного цикла диагностировали. желтое тело при отсутствии пальпируемого фолликула. . Это служило основным показателем для вызывания суперовуляции. '""' '

Результаты, полученные от животных других групп, оказались низкие.. Сроки прихода в охоту коров'в группах 11 иL III значительно варьировали. Не проявивших признаков охоты животных в группах I и III было 26,7 %. Пригодных же для использования в качестве доноров было меньше: 16,7% н 36,1 %, то есть в 5 и 2,5 раза меньше. •'•'•:

Анализ показателей гормональных профилей Показывает, что уровень прогестерона в крови животных групп I и Ш перед обработкой - 0,5-0,7 нг/мл - был низок и характеризовал отсутствие возможности быстрого лизиса под действием экзогенного простагландина. Тем не менее, такое функциональное состояние характерно для соответствующих периодов цикла, так как всего лишь 13,4 и 29,5 % коров в этих группах имели приемлемые концентрации прогестерона - в 1,8 и 2,0 нг/мл соответственно. Это в определенной степени обусловило 48-часовой интервал прихода этих животных в охоту,'и следовательно, физиологическое состояние их яичников, позволяющее стимулировать суперовуляцию. ' ~ ]' " > <v . . ; ~ ••

Сопоставление соотношений концентрации прогестерона и эстрадиола'с результатами синхронизации показывает, что характерное для середины лютеальной фазы, цикла (группа II) сочетание - высоких концентраций прогестерона и средних концентрации эстрадиола соответствовало оптимальному интервалу прихода коров в охоту - 48 часов. Сочетание более высокого значения эстрадиолаI с . более-, низким значением-•. прогестерона- соответствовало сокращению аналогичного интервала до 24 часов, а сочетания более низких концентраций как эстрадиола, так и прогестерона - увеличению интервала до 72 часов.'


'1Л • ~ *

Приемлемые результаты. 48-часовой интервал прихода животных в охоту и наибольший процент пригодных для последующего использования из них-'в-группах 1 и III-получены при соотношениях • близких к средним показателям концентрации .эстрадиола,, типичных для соответствующих стадий .цикла н.< удовлетворительных показательных прогестерона, подтверждающих секреторную активность желтого тела. Отклонения в сторону увеличения либо уменьшения от такой кониентрации эстрадиола при низких показателях прогестерона приводят либо к рассеиванию срока прихода в охоту животных в группах I и III, либо к её отсутствию во всех трех группах.,. ' . : • • \',

Таким образом, общее снижение результативности синхронизации половых циклов у коров в период с 7-го по 15-й день спонтанного цикла при наличии хорошо выраженного желтого тела в одном из яичников происходит из-за неудовлетворительных показателей гормональных профилей у коров, обрабатываемых с 7-го по 9-й день и с 13-го по 15-й день,полового цикла. При этом необходимо отметить,. что подавляющее большинство коров, пригодных для • индуцированной суперовуляции, оказались в числе пришедших, в охоту через 48 часов с после обработки. Применение простаглакдина Fj, вызывает лизис желтого тела в течение нескольких часов, затем овуляцию фолликула... При этом большинство особей; приходит, в охоту через >48 часов после инъекции препарата.•• Простагландин Fj« оказывает лютелитическое действие с 5-6-го по 15-16-й день спонтанного полового цикла. Однако обработка до 10-го и после-12-го дня цикла даже при наличии типичного желтого тела в яичниках не всегда обеспечивает полноценный и синхронный его лизис у части коров, что приводит к разбросу сроков прихода в охоту или ее отсутствию;

Данные по горьюнальноиу профилю перед проведением синхронизации половых циклов коров-доноров только простагландином служат ценным диагностическим тестом,' Оптимальными кониентрации прогестерона можно считать 3,1 нг/мл и эстрадиола 28,9 пг/мд .̂.-i • •. •

, ,. 6. ВЛИЯНИЯ СТАДИИ ПОЛОВОГО.ЦИКЛА И ГОРМОНАЛЬНОГО ПРОФИЛЯ НА' -• РЕЗУЛЬТАТЫ СИНХРОНИЗАЦИИ ОХОТЫ

Группа

i

п=зо

II

П=30

Интервал от обработки до начала охоты,

в часах"

24 48

. 7 2 ЗСЕГО

' -24' • • • ,48"'. - •

J2, ,,..-

Число ' ••' ц животных ,. пришедших ":' на охоту

п 1 1 " 1 -

4 5 10 19 3

•21 ..з

%

13,3 16,7 33,4 63,3 10,0 70,0 10,0

•"' Гормональный профиль ' '" *...••.;• перед обработкой.. • •.

' ! . v ' • ' • •« ;' •

Прогестерон,'. нг/мл

,'•.. . ,.. ....... 0,5 ±0.3 1.8 ±0.2

< '0,8 ±0,1 ... ,

1,9±0.2 3,1 ±0 .3 '

- .1,5 ±0.3

Эстрадиол,. , пг/мл

18.0 ±1,4 19.6 40.1 20,6 ±0,1"

- •

31,9 ±2,0 28,9 ±1,7 26,0 ±2,0

' Числе ч .. ;При

инду! супе

П

-4 1

- .5 -3

' 2Г ) : . 3 ' :•

животных, годных и >"•'• дированию » . ровуляции

В % к числу животных, пришедших " в охоту•-•"

-13,4 3,3

.16,7 ... 10,0 70.0

1 >. 10,0- "


н Продолжение таблицы 6

Группа

Интервал от обработки до начала охоты,

в часах '

ВСЕГО < m

п=30 1 М" 48

72 ВСЕГО

ВСЕГО ПО 3 ГРУППАМ

Число -: животных • пришедших

на охоту •

П

27 U 4

. 4 19 63

%

90,0 36,7 13,3 13,3 63,3 70,0

• Гормональный профиль _ • • перед обработкой -

Прогестерон,' нг/мл

-0,7 ±0,3 2,0 ± 0,2

•0,7 + 0.1 --

Эстрадиол, пг/мл

-30,1 ±3,0 27,0 ±2,1 21,6 + 2.3

--

Число животных, '" пригодных к-

, . индуцированию . . суперовуляции -

П,

27 2; 9

. --Н 38

В % г числу животных,

пришедших в охоту •

90,0 6,6 29,5

-36,1 42,2 •

3.3 3 Изучение влияния исходного гормонального профиля на суперояуляторную реакцию . • яцчников и качество эмбрионов. •. . . . Проведен: опыт с • целью изучение .влияния-исходного гормонального профиля на

суперовуляторную реакцию яичников и качество эмбрионов. -• . . : _ В опыт брали животных, находящихся в состоянии спонтанного и индуцированного цикла к не. менее чем через-два. месяца после; отела, в группу I отобрали животных по наличию спонтанной • охоты; в г группу I I , - синхронизированной охоты Pg F2a/OKK. Животных обрабатывали фоллитропином/Pg F2o начиная с 10-го дня цикла по 4-дневной схеме. * Через 48 ;

часов после инъекции простагландина проводили-осеменения ректо-цервикальным методом на протяжении охоты с интервалом 12 часов двойными дозами' замороженно-оттаянной • спермы одного и того же. производителя. Перед началом обработок брали пробы крови для определения концентрации прогестерона и эстрадиола.-. ••••".

На основании клинических данных состояния яичников выделили'4 уровня реакции суперовуляции: 1-й уровень—12 и более желтых тел; 2-й уровень - 8-11 желтых тел; 3-й уровень -4-7 желтых тел; 4-й уровень - 3 и меньше желтого тела. Аналогично,- по реэультатам извлечения» пригодных для пересадки эмбрионов, выделили также четыре уровня:- 1-й уровень - 9 и больше эмбрионов; 2-й уровень - 5-8 эмбрионов; 3-й уровень - 1-4 эмбрионов; 4-й уровень - отсутствие пригодных для пересадки эмбрионов (таблице 7) • ,

. Затем сопоставили средние значения концентраций прогестерона и эстраднола в крови доноров с уровнем их реакции.

Полученные данные показывают, что в группе, коров, обработанных в индуцированный цикл (группа П)," каждому уровню реакции, как по количеству овуляции, так и по получению пригодных для пересадки эмбрионов соответствует определенный исходный гормональный фон. Наиболее отчетливо это • находит- выражение в: отношении концентраций прогестерона.• С повышением концентрации прогестерона, увеличивается число овуляций (от 3 при 1,2 иг/мл до 1?


1 5

- . . . - . , ' . . . . . . . . [_ 1 . „ , . . нг/мл)' Также увеличивается* выход числа нормальных эмбрионов (от О при 1,3 нг/мл до 9 при

. , . ' • : - * • ' " ' • ' . • • • •

4,0 нг/мл). Аналогичная корреляция наблюдается, и в группе 1. Необходимо отметить,'что средние значения исходных концентраций прогестерона в

группе II (с индуцированным циклом) выше аналогичных значений в группе I, обработанной в спонтанный цикл. Это по видиму, связано с увеличением обшей массы лютеальной ткани, образованной вследствие примененной схемы синхронизации. . , ,iv

Из.'проведенных данных следует,' что оптимальная; активность желтого • тела, предполагающая результативность гормонального индуцирования суперовуляции, обусловливает концентрацию прогестерона в крови доноров от 2,9 до 4,0 нг/мл. При всем этом возможны отступления от выявленной тенденции, связанные, вероятно, с индивидуальными особенностями обработанных животных и с тем, что число клеточных структур не взаимосвязано с исходной концентрацией прогестерона-при минимальных ее значениях. В то же время корреляция числа овуляций и неовулировавшых фолликулов даже с минимальными значениями прогестерона'имеет место. Взаимосвязь между исходными концентрациями эстрадиола и числом клеточных структур выявлена не была. .. • ; . - . . '-' •'• • * "

Таким образом, определение исходных концентраций прогестерона в крови коров-доноров • позволяет в определенной мере предсказывать об эмбриопродуктивности отбираемых животных.

7. ВЛИЯНИЕ ИСХОДНОГО ГОРМОНАЛЬНОГО ПРОФИЛЯ В КРОВИ У КОРОВ-ДОНОРОВ НА СУПЕРОВУЛЯТОРНУЮ РЕАКЦИЮ ЯИЧНИКОВ И КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ .,

Показатель

Число '' овуляции ' (желтых • тел) • • Число

эмбрионов, пригодных • для-трансплан

тации

Уровень• реакций

Суперову-ЛЯЦИИ

>12 8-11 .••• 4-7 <3 > 9 5-8-1-4

Отсутствие-

Группа I ' спонтанный цикл ':' •

Число животных,.

п 15

- 25 30 ,. 12 8-15-15 6-

Прогестерон,*"

... нг/мл

3,1 ± 1,2 2,9 ±0,3 2,6 ±0,3 1,2 ±0,3

^ 3,4 ±0 .2 ' 2.9 ±0,4 2,5 ± 0,4 1,2 ±0,3

Эстрадиол, пг/мл

29,7 ± 2,6 :

24,7 ± 2.8 • 29,0 ± 2.0 26,7 ±2,3

'33,6 ±5,0 23,8 ± 2,3 26,0 ± 2,4 29,0 ± 2,8

Синхр

Число Живот-. н ы х , ••

П 26

• 40 . 30 16 12 • 23 . 17 16

Группа II. юнизированный цикл ГРй F2a-rC)KK) . •

Прогестерон,

. нг/мл -

4,0 ±1,7 3,2 ± 1,7 2.9 ± 0,7 1.2 ±0,8 4.0 ±1,9 3.4 ±0,7 2,8 ± 0,3 1,3 ±0,4

Эстрадиол, ' пг/мл -

23.5 ±1.6 19.8 ±1 ,4 ' 18,3 ±1,2 19,1 ±1,2 21,5 ±5,7

•20,6 ±1,5 17,3 ± 1,2 17,3 ±1,0

3 3.4. Влияние включения в схему обработок коров-донооов синтетических гонадолиберинов или лютеинизируюшего гормона на продолжительность охоты и качество эмбрионов -С учетом того, что колебания продолжительности охоты при гормональном индуцировании

суперовуляции коррелируют с ее показателями, а также литературных данных о том, что введение экзогенного гонадолиберина или лютеинизируюшего гормона оптимизирует продолжительность.


охоты. и компенсирует возможный дефицит ЛГ, изучали влияния экзогенного гонадолиберина или лютеинизирующего гормона на продолжительность охоты и результаты суперовуляции. ;

При вызывании суперовуляции фоллихулостимулнрующим , ropM0HOM/Pg-F2o по четырехдневной схеме на четырех i-pynnax коров, через 48 часов после введения простагландина, переа первым осеменением животных опытных групп вводили синтетические гонадолибернны или ЛГ (таблица 8)

Животным группы I не вводили синтетические гонадолибернны, и она служила контролем, группе 1] ввели 0,5 г дигнетрана (Чехия); группе III 15 мкг сурфагона; группе IV 1000 ИЕ овогон-ТИО. В опытных группах (И -, I.V) осеменение проводили двукратно с интервалом ,12. часов .

Осеменение .коров .в контрольной группе проводили спустя 48 часов, после, введения простагландина, на протяжении охоты с интервалом 12 часов. ,

i • , Средняя продолжительность охоты коров групп II, III иДУ.составила соответственно 20,7;

18,0 и 19,0против,28,8 часов в контроле, В среднем, клеточных структур на донора было больше я группе 1. Однако, эмбрионы пригодных для трансплантации на донора были в пользу опытных групп. При этом следует отметить снижение числа дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток- Процент эмбрионов, пригодных для трансплантации, в опытных группах составил по^уплам: 74,6; 74,6 и 81,1 %, соответственно.- В то же времяхак в к«птх>ле 'г этот;,̂ .показатель - был :лишь-•<47;3,•%.'• i Количество дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных'яйцеклеток" в * контрольной, группе (28,0 и-24,7 %), более чем в два раза превышало аналогичные показатели в опытных группах; 11,9 и 13,5%-Н; Н,4и 11,9 % - Ш; 9,5 и 9,5%-IVсоответственно.•' . . . . . . ' ... ., - •„;..-'•• , . !

Таким образом, включение синтетических гонадолиберинов или ЛГ в схеме индуцирования суперовуляции корректирует процесс овуляции при возможных его нарушениях. При снижении

, 1 . . ' •. . . •_

числа ( извлеченных клеточных', структур, возрастает процент' эмбрионов, пригодных для трансплантации. Эффективность вызывания суперовуляции существенно возрастает. .,

Проведен опыт по использованию определения концентрации ЛГ для выбора оптимального времени осеменения коров-доноров при суперовуляторном процессе (таблица 9). Исследования проводили на 19 коровах-донорах. ; . . ! . ' . • ' : '"•-••' - ' • " - . . ,

'.. Параллельно с определением-гормональных параметров регулярно использовали метод

ректальной пальпации яичников, начиная с момента инъекции простагландина и во время всей

продолжительностиэструса, . , г •' ' , " ' . . ' . . . • > • " • • • ' • • ; • : , . : . •. . Как.видно по данным таблицы 9, в интервале, до.41,0-42,0;часа после «HieKumrPg Fjo

наступает течка, а через 48,0 часов предовупяторный пик ЛГ.;; . . -,' . ,: . . . . ! • • • -Применение ректальной пальпации.показало, что после пика ЛГ интервал до качала

овуляций составляет , 20-24 . часа.,, Поэтому •, время осеменения необходимо определить: таким


образом, чтобы сперма, введенная в проводящую систему самки, завершила процесс капацитакии к моменту овуляторного процесса, то есть первое осеменение надо проводить через 48 часов после инъекции простагландина. • .' •- • ' • . . . • • . , • , .

8. ВЛИЯНИЕ ВКЛЮЧЕНИЯ В СХЕМУ ОБРАБОТОК КОРОВ ДОНОРОВ СИНТЕТИЧЕСКИХ ГОНАДОЛИВЕРИНОВ ИЛИ ЛЮТЕИНИЗИРУЮЩЕГО ГОРМОНА НА

ПРОДОЛЖИТЕЛНОСТЬ ОХОТЫ И КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ

Показатель

Число обработанных коров, п - %

Число положительных доноров, п - %

Средняя продолжительность охоты, часов

Получено клеточных

структур, п - % Получено

пригодных для трансплантации эмбрионов, п - %

Получено дегенерированных эмбрионов, п - %

Получено не оплодотворенных яйцеклеток п - %

Всего, В среднем

Всего, В среднем,

Всего, В среднем

Всего, > В среднем

I

КОНТРОЛЬ

13-100

13-100

• 28,8 ± 2,3

93 -100 7,1 ±0,6

44-47,3 3,4 ±0,8

26 - 28,0

2,0 ±0,8 23-24,7 1,8 ±0,7

Группы II

5,0 Г"•• ДИРИГЕС-;

ТРАНА 11 - 100

11-100

20,7 ±2,2 -

67 -100 '6,1 ±1,0

50-74,6 4,5 ±0,6

8 - 11,9

0,7 ±0,2 9-13.S 0,8 ±0,3

III 15МКГ

СУРФАГОНА

20-100

20- 100

••• 18,0 + 2,4 -ч

134-100 • 6,7 ± 0,7

100-74,6 5,0 ±0,7

18 - 13,4 • 0,9 ±1,4

16-11,9" 0,9 ±0,3

IV 1000 ИЕ овогон-

ТИО 13-100

13- 100

19.0 ±2,4

74 -100 5,7 ±0,8:

60-81,1 4,6 ±0,5

7-9,5

0,5 ± 0 , 5 ' • 7» 9,5 •<-0,5 ±0,1

9. ИНТЕРВАЛ МЕЖДУ ИНЪЕКЦИЕЙ ПРОСТАГЛАНДИНА. НАЧАЛОМ ЭСТРУСА И ПИКОМ ЛЮТЕИНИЗИРУЮЩЕГО ГОРМОНА

Препараты' •

ФСГ - Р.ч F2ct ФОЛЛИТрОПИН — Р К F 2 0

Число ЖИВОТНЫХ,

П 9

• • • ю

Интервал времени от введения простагландина до начала эструса, часов

41,3 ±2,3 • 42,0 ±5,5

Интервал времени от введения простагландина до

пика ЛГ, часов 48,5 ± 3,0 48,1 ± 3.9

3.4 Влияние рилизинг-гормонов на гормональный фон крови при стимуляции ОВУЛЯЦИИ. . ., . Большое значение для прогнозирования,. понимания сущности и создания, приемлемых в

условиях практики методов корректировки процесса суперовуляции, в случае его нарушения,. имеет изученность гормональных профилей суперовулирующих. коров в ответ на действие -гонадотропных препаратов. . , , , ,-•..«• . - , . . . • . - .• - -ч

Были произведены исследования с.целью анализа.эндокринного аспекта, лежащего в основе стимулирования воспроизводительной активности. Для этого соответствие объединенных) показателей суперовуляции, вызванной фоллитропином/Pg F2a у коров в послеотельный период при наиболее типичных проявлениях спонтанных половых циклов. гормональным профилям


IX

отразили графически (рисунок I). Гормональные • исследования проиллюстрировали • причину неудовлетворительных

показателей суперовуляции,' индуцированной в первый половой цикл после родов: это низкая концентрация прогестерона перед обработкой (рисунок JA) Однако гормональное индуцирование активности функциональной деятельности яичников в послеотельныи период дало возможность получить удовлетворительные показатели суперовуляции (3-5 эмбрионов на донора) в индуцированный половой цикл и позитивные показатели (<$ эмбрионов) в последовавший спонтанный половой цикл (рисунки 1Б и 1 В).

Общепризнанно считать, что вызывание суперовуляции в первый после отела цикл оказывается безуспешным. В то же время наши исследования показали возможность вызывать положительные показатели суперовуляторной реакции. .

Большой интерес представляет выяснение роли эндокринных факторов, лежащих в основе воспроизводительной активности на протяжении послеопгельного периода.-' Наиболее показательна в этом отношении - низкая концентрация прогестерона. Это. происходит вследствие функциональной неполноценности желтого тела, что в свою очередь, вызвано отсутствием завершения инволюции • матки * и общей послеотельной перестройки (рисунок 1 А) Однако направленная стимуляция активности : функциональной г деятельности . яичников ведет к активизации восстановления репродуктивной функции в. целом. Значения концентрации прогестерона, аналогичным среднестатическим показателям, которые л являются нормой для соответствующего периода- спонтанных циклов, сформировавшихся' после окончательного завершения. послеотельного - периода,* свидетельствуют о наступлении' полной - нормализации половой функции (рисунки 1Б и 1В). * • ••

"Исследования показали, .что • пригодность коров для индуцирования ' суперовуляиии определяется градацией концентрации прогестерона в крови животного. Причем, показанием к началу обработки будет неуклонное повышение концентрации от базального значения в нулевой день цикла до'наивысшего значения, характерного для середины цикла.

Непосредственной причиной-" нарушений процесса суперовуляции .являются преждевременная или поздняя овуляций, отсутствие овуляции большого-или меньшего'числа фолликулов и сочетание этих нарушений. Они в свою очередь, обуславливают послеовуляторные сдвиги в гормональном балансе,. ответственном за регуляцию нормального оплодотворения и развития • эмбрионов. Своевременно зафиксированный • гормональный /дисбаланс позволяет нормализировать процесс путем введения препаратов гонадолиберина или ЛГ. '

"Таким образом, исследования указывают на состоятельность корректирования овариальной функции в ранний период после отела.* Показатели суперовуляиии вызванной в спонтанный цикл, последовавшей за индуцированным указывают на .тенденцию к последовательному улучшению


показателей Это говорит о более медленном процессе восстановления и стабилизации морфофункцнонального состояния* эндометрия и внутриматочной среды относительно срока стабилизации циклических процессов в яичниках. С другой стороны, очевидно, что, достигаемая за счет послеродовой овариостимуляции, стабилизация функциональной деятельности яичников ускоряет восстановительные процессы в матке.

т l i b

СШИПШНЫЙ 1DK-1

Оюатншы: -ретчльтзты)

J0 30 40 Лииосле отела

Дмм гмиж етдащ

El Обр^онш > ш а н — Л ижж пае»

Д м после «кем

Рисунок А Изменения концентрации прогестерона в крови у коров—доноров при индуцировании суперовуляции в послеродовой период.


20 ,

3.S. Пересалка эмбрионов телкам-реципиентам Факторы, влияющие на их '" приживляемость .. ... . • >

Изучали влияния различных уровней суперовуляторного ответа коров-доноров и качества вымываемых эмбрионов на уровень приживляемости при пересадке телкам-реципиентам. Для этого были проанализированы результаты 274-х пересадок свежеполученных эмбрионов (таблица 10). - • • •

Пересаживаемые эмбрионы были извлечены за 2-3 часа до пересадок у 38 коров-доноров черно-пестрой породы. Дтя вызывания суперовуляции использовали ФСГ в дозе 45 мг, который инъецировали в течение 4-х дней убывающимися дозами.

Приживляемость установили путем ректальных исследований на стельность через три месяца после пересадки.

Процент эмбрионов хорошего и отличного качества при увеличении уровня суперовуляции достоверно снижался. При среднем уровне реакции (5-8 овуляции) он составил 33,0 и 29,0 %, при очень высокой реакции (от 13 до 16 овуляции) было получено лишь 10,0 и 28,0 % эмбрионов отличного и хорошего качества соответственно.

Эмбрионы получены при высоком уровне суперовуляции, приживлялись хуже, чем при низком и среднем: при очень высокой реакции - 28,0 % против 43,0 и 42,0 % при низкой и средней реакции. . .

Анализ приживляемости замороженко-оттаянкых эмбрионов (таблица 11) также показал, что при высоком уровне суперовуляции,-приживлялись хуже, чем при низком и среднем: эмбриопродуктивности донора 1-4 эмбрионов приживляемость составила 48,3 %, тогда как при эмбриопродуктивности от 9 и более только 30,4 %.- \

Важным фактором, влияющим на результаты эмбриопересадок у крупного рогатого скота, является физиологическое состояние желтого- тела яичника, которое обеспечивает соответствующий для данного периода полового цикла уровень прогестерона в крови. Доказано, что существует связь уровня приживляемости эмбрионов и концентрацией прогестерона в крови телок-реципиентов.

В таблице 12 приведены данные о влиянии качества > желтого тела яичников на лриживлияемость замороженно-оттаянных эмбрионов.

При использовании. реципиентов, у которых диагностировали отличное желтое тело яичника, приживляемость составляла 48,2 %, хорошее • 36,2 %, удовлетворительное - 28,8 %. -

Из приведенного следует, что средний уровень эмбриопродуктивности (5-8 овуляции) позволяет получить большое количество эмбрионов отличного и хорошего качества и более высокий уровень приживляемости. При трансплантации замороженно-оттаянных эмбрионов более высокую приживляемость показали эмбрионы полученные от коров-доноров с низкой и средней


2!

эмбрнопродуктивностью. При трансплантации особо ценных эмбрионов следует использовать телок-реципиентов, у которых диагностировано отличное или хорошее желтое тело в яичнике на день пересалки ""

10 . ВЛИЯНИЕ УРОВНЯ СУПЕРОВУЛЯЦИИ И КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ НА ИХ ИРИЖИВЛЯКМОСТЬ '

Показатели. ;

• ' Число коров-доноров Получено эмбрионов

На донора Процент эмбрионов от числа овуляций

Извлеченные клеточные

структуры, % Эмбрионы

Отличные Хорошие

Удовлетворительные Де генерированные

Неоплодотворенные -яйцеклетки

Приживляемость после пересадки, %

•..- • - Число овуляции

отО до4-ч

. 6 17 2,8

70,0 + 11,1

57,0 ± 10.8 35,0 ±10,8

8,0 ± 4,2

43,0 ± 12,0

от 5 до 8

.7 . .-52 7,4

93,0 ± 3,5 33,0 ±4 ,3 29,0 ±4 ,3 15,0 ±3 ,1

6,0 ± 3,8

17,0 ± 1,3

42,0 + 6,8

. о т 9 до 12.

- - 13 86 6,6

55,0 ± 5,4-23,0 ± 2 , 7 27.0 ± 2,6 30,0 ± 2 , 8

13.0 ± 1 , 8

7,0 ±1 ,4 ' .

34,0 ±5 .1

. •• • От 13 до 16

12 „ 119 9,9

62,0 ± 4,5 10 ,0+1 ,4 28 ,0+ 1,5 36,0 ± 1 , 7

9,0 ± 0,8

17,0 ± 1 , 2 :

28,0 ±4 ,1 11. ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЗАМОРОЖЕННО-ОТТАЯННЫХ ЭМБРИОНОВ•••'. •

В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ЭМБРИОПРОДУКТИВНОСТИ ДОНОРА

• • . - . • ' . . . . . . . . . . .

Оттаяно эмбрионов Нежизнеспособные

Процент от числа оттаянных Пересажено эмбрионов -Стельные реципиенты

Процент приживляемое™ •

Разовая эмбриопродуктивность " От 1 до 4 •

эмбрионов 33

... 4 • • 12.1

29 14

• 4 8 , 3 • •

О т 5 я о 8 эмбрионов

75 - - - . - • 7 - • • . ' • • ' •

9,3 68

• 24 •• • - ::35,3 • •- - -

• От 9 и больше эмбрионов

48 2

' 4,2 46

• • • . 14-30,4

12 ВЛИЯНИИ КАЧЕСТВА ЖЕЛТОГО ТЕЛА ЯИЧНИКА НА ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ ПОСЛЕ ПЕРЕСАДКИ

•Показатели

Пересажено эмбрионов Стельные реципиенты - •

Процент стельности

• • ' ' • • . . - • . - ' Качество желтого тела ••> . . • • - : . Отличное

33 16

. . .- 4 8 , 2 . . : ••• .

Хорошее 58

• • • • . . 2 1 - > •

36,2

Удовлетворительное 5 2 •••

• • • • > : • . 1 5 ".- ; •

. 28,8 . . . . . . • ; . . , 4. ВЫВОДЫ. .

1. При индуцировании охоты с целью получения синхронного течения индуцированного цикла у доноров и реципиентов, гонадотропины, вводимые в сочетании с простагландином, унифицируют овариальные процессы в период с 7-го по 15-й день цикла, что улучшает результаты синхронизации охоты.. Синтетический гокадолиберин корректирует* процесс овуляции: при возможных его нарушениях, и < эффективность синхронизации охоты. существенно возрастает.


2. Введение в схемы овариости'муляции препаратов гонадолиберииа на 14-15 день после отела стимулирует первую овуляцию и становление регулярности половых циклов Вследствие этого на. более ранний срок можно передвигатьj • одноразовое получение эмбрионов от высокопродуктивных; лактирующих коров. Это позволяет ' максимально приблизить межотельный'интервал у лактирующих коров-доноров к экономически обоснованному для условий ' молочно-товарного производства межотельному . интервалу. А при возможных

' отклонениях функциональной деятельности яичников и эндометрия служит как лечебно-профилактическое. мероприятие Возможно ускорение, восстановления репродуктивной

. функции коров после'индуцирования суперовуляции:> ' 3. Рассеянность овуляций, оплодотворяемость яйцеклеток, количество эмбрионов пригодных для

трансплантации и стадия их развития у суперовулировавших коров-доноров в определенной степени зависят от продолжительности охоты. Оплодотворяемость яйцеклеток у коров-

. доноров повышается с увеличением продолжительности!охоты от; 12 до 24 часов, а t . . . . . j

следовательно, с увеличением кратности проведения осеменения до 3. 4. Данные, по гормональному профилю перед проведением*синхронизации половых циклов

коров-доноров только простаглаидином служат: ценным диагностическим тестом. Обшее снижение результативности синхронизации половых циклов у коров в период с 7-го по 15-й день спонтанного цикла при наличии хорошо выраженного желтого тела в одном из яичников происходит из-за. неудовлетворительных показателей гормональных профилей у коров,

... обрабатываемых с 7-го по 9-й день и с 15-го.по-15-й день полового цикла. Оптимальными-• " концентрации прогестерона можно считать 3,1 нг/мл и эстрадиола 29,9 пг/мл. ' •5. Определением исходных- концентраций прогестерона в1 крови коров-доноров позволяет

правильно оценить овариальную активность* после' отела и уточнять'данные клинического контроля перед синхронизацией охоты и индуцированием суперовуляции и в определенной мере предсказывать эмбриопродуктивности отбираемых животных.* ,

б. Включение синтетических гонадолиберинов или ЛГ в схему индуцирования суперовуляции, корректирует процесс овуляции при > возможных его нарушениях,- При снижении числа извлеченных клеточных > структур возрастает процент: эмбрионов пригодных для трансплантации. Эффективность вызывания суперовуляции существенно возрастает.

'7. Время осеменения необходимо определить таким образом, чтобы - сперма, введенная в проводящую систему самки, завершила процесс капацитации< к моменту овулягорного процесса, то есть ' первое - осеменение надо проводить через 48 ! часов после инъекции

' простагландина. ' " '" v

8. Показатели суперовуляшш, вызванной в спонтанный - цикл, последовавший за индуцированным, указывают на тенденцию к последовательному улучшению. С другой


21

стороны, очевидно, что достигаемая за счет послеродовой овариостнмупяцки, стабилизация функциональной деятельности яичников ускоряет восстановительные процессы в матке

9. Средний уровень эмбриопропуктивности (5-8 овуляши) позволяет получить большое количество эмбрионов отличного и хорошего качества и более высокий уровень приживляемости. При трансплантации замороженно-оттаякных эмбрионов более высокую приживляемость показали эмбрионы, полученные от коров-доноров с низкой и средней эмбриопродуктивностью При трансплантации особо ценных эмбрионов следует использовать телок'реципиентов, у которых диагностировано отличное или хорошее желтое тело в яичнике на день пересадки.

S. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ С целью профилактики послеотелных расстройств и улучшения показателей

суперовуляции коровам донорам следует проводить раннее стимулирование активности яичников комбинированным применением гонадотропина, простаглаидина и гонадолиберина на 11-й, 13-й и 15-й день после отела соответственно.

б. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОПУБЛИКОВАНЫ В СТАТЬИ 1. Р. Рамирес, И. Порфирьев, Н Сергеев / ВЛИЯНИЕ ВКЛЮЧЕНИЯ В СХЕМУ ОБРАБОТОК

КОРОВ-ДОНОРОВ СИНТЕТИЧЕСКИХ ГОНАДОЛИБЕРИНОВ И ОВОГОН-ТИО НА ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ОХОТЫ И КАЧЕСТВО ЭМБРИНОВ // Племенное Дело - 2000г.-№ 1. \ ) \

7 Лес****, *,->. 0/>9*>с<*"*-"f**,*. 7«" ttftC-Г/Ы/.



Documents

748.влияние различных факторов на результаты суперовуляции коров доноров, качество и приживляемость