№3 (53) 2011ших принципов государственной политики ... на рынке эффективных, безопасных и каче- ... в 2010 году

2011

№3 (53)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

ВИТЕБСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

Научно-практический ежеквартальный рецензируемый журнал

ВЕСТНИК ФАРМАЦИИ

основан в 1997 году

Учредитель – Учреждение образования "Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет"

Редакционная коллегия

Бузук Г.Н. (зам. главного редактора), Генералов И.И., Глембоцкая Г.Т. (Москва), Гурина Н.С., Дейкало В.П., Дорофеева Т.А., Жерносек А.К., Жебентяев А.И., Игнатьева Е.В., Кевра М.К. (Минск), Козловский В.И., Конорев М.Р. (зам. главного редактора), Криштопов Л.Е., Кугач В.В. (главный редактор), Кунцевич З.С., Куркин В.А. (Самара), Пиманов С.И., Покачайло Л.И., Сачек М.М., Сушков С.А. (зам. главного редактора), Трухачева Т.В., Фадеев В.И., Хейдоров В.П., Хуткина Г.А., Царенков В.М. (Минск), Чуешов В.И. (Харьков), Эльяшевич Е.Г. (Минск).

Редакционный совет

Боковикова Т.Н. (Москва), Бурак И.И., Войтехович Ю.Б., Гапанович В.Н. (Минск), Глушанко В.С., Глушнев А.Н. (Гомель), Гнитий В.А. (Брест), Годовальников Г.В. (Минск), Гореньков В.Ф. (Минск), Грицевич Н.Н. (Гродно), Дубовик Б.В. (Минск), Жарков Л.В. (Минск), Залесский В.Е. (Минск), Игнатенко В.С. (Могилев), Ковальчук И.Е. (Минск), Коневалова Н.Ю., Косинец А.Н., Краснюк И.И. (Москва), Масленкина О.В. (Минск), Ламан Н.А. (Минск), Наркевич И.А. (Санкт-Петербург), Рахманько Е.М. (Минск), Реутская Л.А. (Минск), Сосонкина В.Ф. (Минск), Фурса Н.С. (Ярославль), Шеряков А.А. (Минск), Яремчук А.А. (Минск). Журнал зарегистрирован в Министерстве информации Республики Беларусь,

свидетельство №112 от 12.03.2009г. ISSN 2074-9457

Вестник фармации №3 (53) 2011

3

ОГЛАВЛЕНИЕ

СТР.

ОРГАНИЗАЦИЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО ДЕЛА

В.В. Кугач, Е.Н. ТарасоваОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА НА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОМ РЫНКЕ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ …………………………………………………………5

ФАРМАКОГНОЗИЯ И БОТАНИКА

Г.Н. Бузук, Н.А. Кузьмичева ЦВЕТОМЕТРИЧЕСКИЙ И ДЕНСИТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОДЫ АНАЛИЗА В СТАНДАРТИЗАЦИИ ТАБЛЕТОК «АСКОРУТИН» И «РУТАСКОРБИН»..……………12

А.Г. Бузук, Р.А. Юрченко, В.А. Винарский, Г.Н. БузукСРАВНИТЕЛЬНЫЙ ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ТРАВЫ ЧАБРЕЦА ……19

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ

Ю.Г. Чернецкая, П.Т. ПетровВЛИЯНИЕ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И ПРОТИВОМИКРОБНЫЕ СВОЙСТВА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ СУБСТАНЦИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ СОЗДАНИЯ АППЛИКАЦИОННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ГИДРОГЕЛЕВЫХ МАТРИЦ ……………………………………25

В.В. Горбатов, А.И. СачукКОМПЛЕКСООБРАЗОВАНИЕ ЭЛЕМЕНТООРГАНИЧЕСКИХ ПЕРОКСИДОВ С МОЧЕВИНАМИ ………………………………………………………………………………34

Е.В. Кравченко, Е.В. Машко, А.А. Квасюк, П.В. Курман, П.С. Шабуня,С.А. Фатыхова, П.Т. Петров, Д.И. Демид, О.А. КазючицСТАНДАРТИЗАЦИЯ МНОГОКОМПОНЕНТНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГОСРЕДСТВА «РАЦИУМ» И БАД «МЕНТУМ» ПО ПОКАЗАТЕЛЮ КАЧЕСТВА «ПОДЛИННОСТЬ» ………………………………………………………………38

Г.Ю. Чалый, В.П. ХейдоровРАЗРАБОТКА МЕТОДИК ИДЕНТИФИКАЦИИ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕНТОКСИФИЛЛИНА В ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВАХ ………45

В.М. Ершик, А.И. Жебентяев, В.И. Фадеев, О.А. ЕршикВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕТОПРОЛОЛА В ПЛАЗМЕ КРОВИ ……………………………………………………………………………51


4

ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВ

Ю.Г. Чернецкая, А.И. Жебентяев, П.Т. ПетровОПТИМИЗАЦИЯ СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОГЕЛЕВЫХ ПОЛИМЕРНЫХ МАТРИЦ ……………………………………………………………………57

ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

Т.В. Трухачева, О.В. Савинова, Н.И. Павлова, Л.В. Дьячкова, Е.И. БорекоИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТИ СОЧЕТАНИЙ АЦИКЛОВИРА, ЦИКЛОЦИТИДИНМОНОФОСФАТА И БУТАМИНОФЕНА …………………………….66

И.В. Жильцов, Д.В. Моисеев, В.М. Семенов, С.К. ЕгоровКИНЕТИКА РАСПАДА НЕКОТОРЫХ БЕТА-ЛАКТАМНЫХ АНТИБИОТИКОВ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО СЫВОРОТОЧНОГО АЛЬБУМИНА ……73

ИСТОРИЯ ФАРМАЦИИ

А.А. ШеряковИСТОРИЯ РЕГИСТРАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ В РЕСПУБЛИКЕ БЕЛАРУСЬ …………………………………………………………………81

ДИСКУССИИ

В.А. КуликовО РОЛИ ПРОВИЗОРА В ВАЛЕОЛОГИЧЕСКОМ ОБУЧЕНИИ И ВОСПИТАНИИ НАСЕЛЕНИЯ ………………………………………………………………96

ИНФОРМАЦИЯ УП «ЦЕНТР ЭКСПЕРТИЗ И ИСПЫТАНИЙ В ЗДРАВООХРАНЕНИИ»

А.М. Кучко БЕЗОПАСНОСТЬ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ …………………………………………100

5

Вестник фармации №3 (53) 2011 Научные публикации

ОРГАНИЗАЦИЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО ДЕЛА

В.В. Кугач, Е.Н. Тарасова

ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА НА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОМ РЫНКЕ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

Витебский государственный медицинский университет

В статье представлены результаты исследования рынка отечественных лекар-ственных средств в Республике Беларусь в 2006 – 2011 гг. Проведен сравнительный ана-лиз ассортимента лекарственных средств отечественного производства, перечней основных лекарственных средств, динамики регистрации лекарственных средств в Республике Беларусь, изучена экономическая доступность. Установлено, что в период с 2006 по март 2011 г. количество зарегистрированных лекарственных средств отече-ственного производства увеличилось с 495 до 1186 наименований. Увеличилась доля от-ечественных лекарственных средств в Перечне основных с 37% до 49%. Белорусские лекарственные средства более доступны для населения по стоимости.

Ключевые слова: фармацевтический рынок, отечественные лекарственные сред-ства, Республика Беларусь.

ВВЕДЕНИЕ

Принятый в июле 2006 года Закон Ре-спублики Беларусь «О лекарственных сред-ствах» [1] определил, что одним из важней-ших принципов государственной политики нашей страны в сфере обращения лекар-ственных средств является их доступность для населения. Всемирная организация здра-воохранения рассматривает доступность ле-карственных средств в двух аспектах:

физическая доступность – присутствие на рынке эффективных, безопасных и каче-ственных лекарственных средств;

экономическая, или финансовая доступ-ности – наличие в стране лекарственных средств по ценам, приемлемым для различ-ных социальных слоев населения [2].

Важная роль в обеспечении физиче-ской и экономической доступности лекар-ственных средств принадлежит состоянию их собственного производства. Имеет зна-чение количество и материально-техни-ческая база фармацевтических предпри-ятий, а также ассортимент выпускаемой продукции [3]. Существенную роль играет внедрение стандартов надлежащей произ-водственной практики, так как это способ-ствует повышению конкурентоспособно-сти выпускаемых лекарственных средств на внутреннем и внешнем рынках, дает преимущества при участии в конкурсах на получение заказов, увеличивает инвести-ционную привлекательность предприятий [3, 4].

Эффективная деятельность фармацев-тических предприятий в долгосрочной пер-

спективе, обеспечение высоких темпов раз-вития и повышения ее конкурентоспособ-ности в значительной мере определяется уровнем их инвестиционной активности и диапазоном инвестиционной деятельности [5, 6].

Для осуществления стратегии лекар-ственной безопасности в Республике Бе-ларусь выполняется ряд программ, в том числе государственная научно-техническая программа (ГНТП) «Новые лекарственные средства», государственная программа «Им-портозамещающая фармпродукция» [7]. Ос-новной задачей, решаемой в рамках всех им-портозамещающих программ, реализуемых концерном «Белбиофарм», является разра-ботка и освоение выпуска генерических ле-карственных средств.

Целью настоящей работы было изучить доступность лекарственных средств отече-ственного производства для населения Ре-спублики Беларусь.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объектами исследования являлись дан-ные Министерства здравоохранения Респу-блики Беларусь, концерна «Белбиофарм», РУП «Центр экспертиз и испытаний в здра-воохранении», ИЧУП «Профессиональные издания», публикации по исследованию фармацевтического рынка Республики Бела-русь и других стран, нормативные правовые акты. В работе использованы логико-теоре-тические методы исследования (анализ, син-тез, аналогия) и эмпирические (описание, счет, сравнение, документальный метод) [8].

66


РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Во время существования Советского Со-юза и Совета Экономической Взаимопомо-щи имело место разделение труда в странах социалистического лагеря. Производство лекарственных средств развивалось в ГДР, Польше и Венгрии.

Когда распался Советский Союз, пробле-ма собственного производства лекарствен-ных средств в Республике Беларусь стояла особенно остро, так как всего два белорус-ских завода производили 105 наименований лекарственных средств: Борисовский завод медицинских препаратов – 73 наименова-ния, Белмедпрепараты – 32 [3].

В настоящее время лицензию на фарма-цевтическую деятельность, связанную с про-мышленным производством лекарственных средств и их оптовой реализацией, имеют 25 предприятий. В эту цифру не входят пред-приятия, осуществляющие производство медицинских газов. Из них: 1 – в Брестской обл.; 3 – в Витебской обл.; 2 – в Гродненской обл.; 1 – в Могилевскаой обл.; 7 – в Минской обл.; 11 – в г. Минске [9].

В 2010 г. укреплялась материально-тех-ническая база предприятий концерна «Бел-биофарм». С этой целью выполнялись сле-дующие инвестиционные проекты:

– «Создание нового фармацевтического производства в г. Витебске» (государствен-ное предприятие «БелВитунифарм»);

– «Создание производства твердых ле-карственных форм» на ОАО «Борисовский завод медицинских препаратов»;

– «Создание новых, соответствующих международным стандартам GMP, произ-водственных мощностей для лекарственных средств, выпускаемых РУП «Белмедпрепа-раты»;

– «Реконструкция производства проти-воопухолевых средств в форме лиофильно высушенных порошков и растворов для инъ-екций» на РУП «Белмедпрепараты».

Большая работа проводилась фармацев-тическими предприятиями по сертификации производств на соответствие требованиям GMP.

На 01.03.2011 г. в Республике Беларусь

сертифицировано по GMP производств:- ОАО «Борисовский завод медицинских

препаратов» - 6;- РУП «Белмедпрепараты» - 3;- РУП «Минскинтеркапс» - 4 (все);- ОАО «Экзон» - 1;- ООО «Лекфарм» - все производство.Постоянно расширялся ассортимент вы-

пускаемых отечественными предприятиями лекарственных средств.

В рамках ГНТП «Новые лекарственные средства», в результате реализации подпро-граммы «Лекарственные средства» в 2006 - 2010 гг. разработано и внедрено в промыш-ленное производство 18 генерических лекар-ственных средств. Стоимость выпущенной продукции составила более 10 млн. долларов США.

За период 2006 – 2010 гг. в рамках вы-полнения отраслевой программы «Импорто-замещение» освоено производство 65 наи-менований лекарственных средств. Из них 44 наименования относятся к Перечню ос-новных лекарственных средств.

Освоение генерических лекарственных средств позволило снизить цены на лекар-ственные средства и тем самым повысить их экономическую доступность для населения (таблица 1) [10].

За шесть лет – с 2006 по 2011 год – уве-личилось общее количество зарегистриро-ванных в Республике Беларусь лекарствен-ных средств, в том числе производимых отечественными предприятиями и предпри-ятиями концерна «Белбиофарм» (таблица 2).

В связи с мировым финансовым и эко-номическим кризисом количество зареги-стрированных импортных лекарственных средств снижалось в 2007, 2008 и 2009 гг; отечественных – в 2007 и 2008 гг. На-чиная с 2009 года для отечественных и с 2010 года – для импортных лекарственных средств наблюдается рост регистрации (рисунок 1) [11].

Важная роль в обеспечении доступности лекарственных средств принадлежит Переч-ню основных лекарственных средств (в не-которых странах и у нас ранее – Перечень жизненно важных лекарственных средств) [12].

Таблица 1 – Примеры успешных разработок новых лекарственных средств в Республике Беларусь, 2009 г.

Отечественное лекарственное средство Импортные аналогиМилдрокард, раствор для инъекций,

ампулы №10 – 26000 руб.Милдронат, раствор для инъекций,

ампулы №10 – 35283 руб.Левофлоксацин, раствор для инфузий

100 мл – 52000 руб.Таваник, раствор для инфузий

100 мл – 129848 руб.

77


Лекарственные средства включаются в Перечень основных на основе фактических данных, характеризующих их значимость для общественного здравоохранения. Это структура заболеваемости населения, коли-чество и уровень организаций здравоохра-нения, квалификация медицинских работни-ков, финансовые ресурсы, экологические и демографические факторы [12].

Нами установлено, что в течение по-следних пяти лет удельный вес производи-мых или фасуемых в Республике Беларусь лекарственных средств в Перечне основных постоянно увеличивался – с 37% в 2006 до 49% в 2010 году (таблица 3) [2,13,14].

Увеличивалось и потребление лекарствен-ных средств населением Республики Беларусь в стоимостном выражении (таблица 4) [15].

При этом наблюдалось снижение коли-чества проданных упаковок в 2007 г. на 6,3% и в 2009 г. - на 2,1%.

Емкость и другие характеристики фар-мацевтического рынка Республики Беларусь в 2010 году представлены в таблице 5 [11].

В 2010 г. объем рынка в оптовых ценах увеличился на 11,2%, в натуральном выра-жении – на 1,1% по сравнению с 2009 г.

Данные, представленные на рисунке 2, наглядно демонстрируют соотношение день-ги/упаковки в сегменте импортных и отече-ственных лекарственных средств. Доля им-портных лекарственных средств более чем в два раза превышает долю отечественных в денежном выражении, а доля отечественных лекарственных средств преобладает в нату-ральном выражении [11].

Средневзвешенная стоимость упаковки лекарственных средств отечественного про-изводства была в два раза ниже по сравне-нию с импортным лекарственным средством и в 2009, и в 2010 году (таблица 6) [11].

По итогам 2010 г. в ТОП – 10 произво-дителей по объему продаж в стоимостном выражении вошли РУП «Белмедпрепара-ты» (1-е место), ОАО «Борисовский завод медицинских препаратов» (2-е место), ООО «Фармлэнд» (3-е место), ООО «Лекфарм» (7-е место) (таблица 7) [11].

Таблица 2 – Количество зарегистрированных ЛС отечественного производства, 2006 – 2011 гг.

Показатель 2006 г. 2008 г. март 2011 г.Количество ЛС, зарегистрированных в Республике Беларусь

5890 6010 6263

Всего ЛС отечественных производителей / количество ЛС производства предприятий концерна «Белбиофарм»

495 964/500 1186/670

Доля в номенклатуре, % 8,4 16,0/8,3 18,9/10,7

Рисунок 1 –Динамика регистрации лекарственных средств в Республике Беларусь, 2006 – 2010 гг.

88


Таблица 3 – Сравнительный анализ Перечня основных лекарственных средств Республики Беларусь, 2006 – 2010 гг.

Показатель 2006 г. 2008 г. 2009 г. 2010 г.Общее количество ЛС в Перечне основных лекарственных средств (по МНН)

411 480 459 402

В т.ч. производимых или фасуемых в Республике Беларусь ЛС

153 195 214 196

Доля производимых или фасуемых в Республике Беларусь ЛС в Перечне основных ЛС, %

37 40 47 49

Таблица 4 – Показатели фармацевтического рынка Республики Беларусь в 2006 - 2009 гг.Показатели фармацевтического рынка Республики Беларусь

2006 г. 2007 г. 2008 г. 2009 г.

Объем фармацевтического рынка в розничных ценах, млн. долл.

385,5 481 620,8 688,6

Цепные темпы прироста, % – 24,8 29,1 10,9Объем фармацевтического рынка в натуральных показателях, млн. упак.

400,3 374,9 421,7 412,7

Цепные темпы прироста, % 10,1 -6,3 12,5 -2,1Среднедушевое потребление ЛС, долл. (в розничных ценах)

39,5 52,6 64,1 72,5

Таблица 5 – Основные показатели фармацевтического рынка Республики Беларусь в 2010 г.Объем рынка в оптовых ценах $738,8 млн. (+11,2%)Объем рынка в натуральном выражении 417,6 млн. (+1,1%)Среднедушевое потребление ГЛС (через аптеки) $77,00Средняя стоимость упаковки ГЛС, продаваемой через аптеки $3,17Средняя стоимость упаковки ГЛС, закупаемой ЛПУ $1,50

Рисунок 2 – Соотношение стоимости и количества реализованных упаковок отечественных и импортных лекарственных средств на фармацевтическом рынке

Республики Беларусь в 2010 г.

99


Вместе с тем, в ассортиментной полити-ке отечественных предприятий существует ряд проблем.

Из Перечня основных лекарственных средств в стране не производятся 10 из 68 (15%) терапевтических подгрупп АТХ клас-сификационной системы лекарственных средств: G02 Другие средства для лечения гинекологических заболеваний; G03 Поло-вые гормоны и модуляторы половой систе-мы; Н01 Гормоны гипофиза, гипоталамуса и их аналоги; Н04 Гормоны поджелудочной железы; H05 Средства, регулирующие об-мен кальция; L04 Иммунодепрессанты; J07 Вакцины; М03 Миорелаксанты; М04 Проти-воподагрические средства; Р01 Противопро-тозойные средства (таблица 8).

Сравнительный анализ групп АТХ клас-сификационной системы Перечня основных лекарственных средств показал, что в Респу-

Таблица 6 – Показатели стоимости упаковки ЛС отечественного и импортного производства на фармацевтическом рынке Республики Беларусь

Происхождение Средняя стоимость, $2009 г. 2010 г.

Отечественные ЛС 0,65 0,85Импортные ЛС 3,18 3,76Средневзвешенная стоимость 1,6 1,8

блике Беларусь не производятся следующие фармакологические подгруппы: противоми-кробные средства, действующие на кишечник; калийсберегающие диуретики; средства на основе йода; вакцины для профилактики бак-териальных инфекций; иммунодепрессанты; адренергические средства для ингаляционно-го применения; прочие средства ингаляцион-ного применения для лечения обструктивных заболеваний дыхательных путей; антитирео-идные средства; антипсихотические средства (за исключением лития и рисперидона); снот-ворные и седативные средства; цитокины и иммуномодуляторы (за исключением тимуса экстракта) и др. Вместе с тем, количество не производимых в Республике Беларусь фарма-кологических подгрупп уменьшилось с 39 в 2009 г. до 35 в 2010 г. (таблица 8) [13,14].

В перечне основных лекарственных средств для оказания медицинской помощи

Таблица 7 – Топ-10 производителей по объему продаж лекарственных средств на фармацевтическом рынке Республики Беларусь, 2010 г.Рейтинг Производитель Объем продаж,

млн. долл. США2010 г. 2009 г.1 2 Белмедпрепараты 53,3812 1 Борисовский ЗМП 43,1013 3 Фармлэнд 33,1054 4 Sano -Aventis 22,4435 6 Gedeon Richter 20,6676 5 Nycomed 20,4427 12 Лекфарм 16,5568 7 Berlin-Chemie 14,2149 20 Hoffman La-Roche 12,63710 8 Bayer Consumer Care 11,547

Таблица 8 – Сравнительный анализ групп АТХ классификационной системы Перечня основных лекарственных средств, 2009, 2010 гг.

Показатель 2009 г. 2010 г.Количество терапевтических подгрупп АТХ классификационной системы 70 68Не производятся в РБ количество 10 10

% 14,3 14,7Количество фармакологических подгрупп 132 132Не производятся в РБ количество 39 35

% 29,5 26,5

10


[14] 13% составляют лекарственные формы (ЛФ), разрешенные к отпуску без рецепта врача. Из них 78% производятся в Республи-ке Беларусь (таблица 9).

В перечне основных лекарственных средств, обязательных для наличия в апте-ках первой и второй категорий, а также в ап-теках четвертой категории, расположенных в организациях здравоохранения [14], 27% составляют безрецептурные лекарственные формы. Из них 84% производятся в Респу-блике Беларусь (таблица 10).

В Перечне основных ЛС, обязательных для наличия в аптеках третьей и пятой ка-тегорий, а также в аптеках четвертой ка-тегории, расположенных в организациях здравоохранения, оказывающих специали-зированную медицинскую помощь [14], 40% составляют лекарственные формы, разрешенные к отпуску без рецепта врача.

Из них 88% производятся в Республике Бе-ларусь (таблица 11).

Установлено, что с 2006 по 2011 г. ко-личество зарегистрированных в Республи-ке Беларусь лекарственных средств отече-ственного производства выросло с 495 до 1186 и их доля в номенклатуре увеличилась с 8,4% до 18,9%.

Увеличилась доля белорусских лекар-ственных средств в Перечне основных с 37% до 49%. Среди безрецептурных лекарствен-ных средств, входящих в Перечень основ-ных, отечественные лекарственные средства занимают 78 – 88%.

В денежном выражении на фармацевти-ческом рынке Республики Беларусь домини-руют импортные лекарственные средства, в натуральном – отечественные. Белорусские лекарственные средства более доступны для населения по стоимости.

Таблица 9 – Наличие безрецептурных ЛФ в перечне основных ЛС Республики Беларусь для оказания медицинской помощи (на 01.01.2011)

Показатель Общее количество ЛФ, включенных в Перечень

основных ЛС, 2010 г.

Количество ЛФ безрецептурного отпуска, включенных в Перечень

основных ЛС, 2010 г.Лекарственные формы 559 73 (13%)ЛФ производства Республики Беларусь 270 57

Доля ЛФ производства Республики Беларусь 48% 78%

Таблица 10 – Наличие безрецептурных ЛФ в Перечне основных ЛС Республики Беларусь, обязательных для наличия в аптеках первой и второй категорий, а также в аптеках

четвертой категории, расположенных в организациях здравоохранения (на 01.01.2011)Показатель Общее количество ЛФ,

включенных в Перечень основных ЛС


основных ЛСЛекарственные формы 211 57 (27%)ЛФ производства Республики Беларусь 177 48


Таблица 11 – Наличие безрецептурных ЛФ в перечне основных ЛС Республики Беларусь, обязательных для наличия в аптеках третьей и пятой категорий, а также в аптеках

четвертой категории, расположенных в организациях здравоохранения, оказывающих специализированную медицинскую помощь (на 01.01.2011)

Показатель Общее количество ЛФ, включенных в Перечень

основных ЛС


основных ЛСЛекарственные формы 103 41 (40%)ЛФ производства Республики Беларусь 94 36


11


Четыре белорусских фармацевтических производителя – РУП «Белмедпрепараты», ОАО «Борисовский завод медицинских пре-паратов», ООО «Фармлэнд», ООО «Лек-фарм» - входят в десятку лидеров по объему продаж.

SUMMARY

V.V. Kuhach, E.N. TarasovaDOMESTIC MEDICINES IN THE PHARMACEUTICAL MARKET

OF THE REPUBLIC OF BELARUSIn the article results of research of the market

of domestic medicines in the Republic of Belarus in 2006 – 2011 are presented. The comparative analysis of assortment of medicines of a domestic manufacture, essential medicines lists, dynamics of registration of medicines in the Republic of Be-larus is carried out and their economic availability is studied. It is established that during the period from 2006 till March, 2011 the quantity of the registered medicines of a domestic manufacture has increased with 495 to 1186 names. The share of domestic medicines in the essential medicines list has increased from 37 % to 49 %. The Belarus medicines are more accessible to the population at cost.

Keywords: the pharmaceutical market, do-mestic medicines, the Republic of Belarus.

ЛИТЕРАТУРА

1. О лекарственных средствах: Закон Республики Беларусь от 20 июля 2006 г., № 161-З (с изменениями и дополнениями от 15.06.2009) // Национальный реестр право-вых актов Республики Беларусь, 2009 г., № 148, 2/1579.

2. Кугач, В.В. Анализ ассортимента ле-карственных средств отечественных произ-водителей / В.В. Кугач // Вестник фармации. – 2008. – № 3. – С. 16 – 20.

3. Кугач, В.В. Новые технологии в фар-мации Республики Беларусь / В.В. Кугач // Рецепт. – 2007. – №2. – С. 19 – 26.

4. Сертификация по стандарту GMP // Сертификация.Инфо [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.serti kacia.info/certi cation/56.html. – Дата доступа: 23.03.2011.

5. Хачатурян, А.А. Инвестиции / А.А. Хачатурян // Учебный курс [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.e-collage.ru/xbooks/xbook158/index. – Дата до-ступа: 23.03.2011.

6. Инвестиционная деятельность пред-приятия // Экономический анализ [Элек-тронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.grandars.ru/college/ekonomika-firmy/

investicionnaya-deyatelnost-predpriyatiya.html. – Дата доступа: 23.03.2011.

7. Реутская, Л.А. Минздрав: Эффектив-ные, безопасные и качественные лекарства должны быть доступными / Л.А. Реутская // Мир лекарств [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://academpharm.by/archives/4317. - Дата доступа: 25.03.2011.

8. Сабитов, Р.А. Основы научных иссле-дований / Р.А. Сабитов // Основы научных исследований: учебное пособие. – Челяб. гос. ун-т: Челябинск, 2002. – 113 с.

9. Лицензирование [Электронный ре-сурс]. – Режим доступа: http://www.minzdrav.by. – Дата доступа: 23.03.2011.

10. Тумеля, Т.Л. Анализ развития фар-мацевтической промышленности Беларуси. Перспективы импортозамещения / Т.Л. Ту-меля // Рецепт. – 2010. – № 3. – С. 44 – 52.

11. Фармацевтический рынок Республи-ки Беларусь в 2010 году // Рецепт. – 2011. - № 2. – С. 17 – 22.

12. Реутская, Л.А. Состояние лекарствен-ного обеспечения в Республике Беларусь / Л.А. Реутская // Вестник фармации. – 2008. – № 2. – С. 3 – 11.

13. О внесении изменений и дополнений в постановление Министерства здравоохра-нения Республики Беларусь от 16 июля 2007 г. № 65: Постановление Министерства здра-воохранения Республики Беларусь от 16 ок-тября 2009 г. № 111.

14. О внесении изменений и дополнений в постановление Министерства здравоохра-нения Республики Беларусь от 16 июля 2007 г. № 65: Постановление Министерства здра-воохранения Республики Беларусь от 27 сен-тября 2010 г. № 128.

15. Тарасова, Е.Н. Безрецептурные ле-карственные средства на фармацевтическом рынке Республики Беларусь / Е.Н. Тарасова, В.В. Кугач // Вестник фармации. – 2010. – №2. – С. 29 – 38.

16. Россия отстала от Казахстана в обла-сти лекарственного страхования // Россий-ская aармацевтика [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://pharmapractice.ru/. – Дата доступа: 23.03.2011.

Адрес для корреспонденции:

210023, Республика Беларусь, г. Витебск, пр. Фрунзе, 27,Витебский государственный медицинский университет,кафедра организации и экономики фармации с курсом ФПК и ПК,тел. раб.: 8 (0212) 24-94-38.Тарасова Е.Н.

Поступила 04.07.2011 г.

12


ФАРМАКОГНОЗИЯ И БОТАНИКА

Г.Н. Бузук, Н.А. Кузьмичева

ЦВЕТОМЕТРИЧЕСКИЙ И ДЕНСИТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОДЫ АНАЛИЗА В СТАНДАРТИЗАЦИИ ТАБЛЕТОК «АСКОРУТИН» И «РУТАСКОРБИН»


Разработана денситометрическая методика определения флавоноидов в таблет-ках, содержащих рутин, с использованием ацетата свинца в качестве проявляющего реактива, а также офисного сканера и компьютера с программой обработки изобра-жений Imagej. Методика может использоваться для стандартизации лекарственных средств, содержащих флавоноиды, наравне со спектрофотометрической. Определение дополнительных показателей качества (текстуры поверхности таблеток и их цвета) позволяет быстро различать таблетки одинакового состава разных производителей и выявлять фальсифицированную продукцию без химического анализа.

Ключевые слова: цветометрия, денситометрия, стандартизация, флавоноиды, рутин.

ВВЕДЕНИЕ

На фармацевтическом рынке Республи-ки Беларусь часто присутствуют таблетки разных производителей, содержащие оди-наковое количество действующих веществ, но различающиеся по содержанию вспомо-гательных веществ и особенностям техно-логического процесса, и, следовательно, по биодоступности фармакологически актив-ной субстанции. Биоэквивалентные иссле-дования проводятся при регистрации каж-дого генерического лекарственного средства (ЛС), поэтому путем сравнения результатов этих испытаний можно определить произво-дителя ЛС с наивысшей биодоступностью. Однако, с помощью химического анализа лекарственных средств с одинаковым содер-жанием действующего вещества установить производителя не всегда возможно, а значит, проблематично выявлять фальсифицирован-ную продукцию.

В связи с этим разработка экспрессных методов анализа таблеток, позволяющих улавливать и идентифицировать тонкие осо-бенности их производства, является весьма актуальной в условиях вероятной фальси-фикации дорогостоящих лекарственных средств. К числу таких методов можно от-нести цветометрический и денситометриче-ский анализ. В основе этих методов лежит компьютерная обработка цветного изобра-жения, полученного методом сканирования, позволяющая объективно оценивать малей-шие нюансы оттенков цвета и характера по-верхностей изучаемых образцов.

Обычно денситометрию используют в ка-честве экспрессного метода количественного

определения биологически активных веществ в лекарственных средствах, причем в послед-нее время для этого успешно используются не только денситометры, но и обычная офисная техника – планшетные сканеры, а также ком-пьютерные программы анализа изображений. В последние годы ведущие фирмы, производи-тели оборудования для хроматографии, начали выпускать, помимо денситометров, и сканеры, позволяющие осуществить захват изображения, как в видимом, так и УФ-свете (Camag). Подоб-ные методики были успешно разработаны для определения суммы фенольных соединений в корневищах с корнями сабельника болотного (с реактивом Брендта) и для определения суммы алкалоидов в листьях маклейи сердцевидной (с реактивом Драгендорфа) [1-3].

Целью настоящего исследования явля-ется разработка денситометрической и цве-тометрической методик для сравнительной характеристики таблеток различных произ-водителей, содержащих рутин.


Использовали таблетки «Аскорутин» про-изводства ОАО «Киевский витаминный завод» серии 380610 (срок годности до 07.2014), 1 та-блетка содержит кислоты аскорбиновой 0,05 г, рутина 0,05 г, (вспомогательные вещества: са-хар, крахмал картофельный, кальция стеарат, тальк); таблетки «Рутаскорбин» производства «Белмедпрепараты» состава: кислоты аскор-биновой 0,05 г; рутина 0,05 г (вспомогатель-ные вещества: сахар, крахмал картофельный, кальция стеарат, тальк). В качестве стандарт-ного образца использовался рутин. В качестве проявляющего реактива для определения фла-

13


воноидов нами использован насыщенный во-дный раствор основного ацетата свинца, кото-рый дает с рутином осадок интенсивно желто-го цвета.

По 10 таблеток каждого производителя сканировали (сканер EPSON Perfection 1270 в режиме:RGB, 24 бит, 300dpi), полученные изо-бражения обрабатывали с помощью програм-мы Imagej ver. 1.41 h (http:/rsbweb.nih.gov). Для каждой таблетки определяли среднее значение светлоты по каждому R, G и B каналам, также значения параметров текстуры – AngSecMom, Contrast, InvDiffMom, Entrop [4-8]. Получен-ные данные обрабатывали статистически, ис-пользуя программу PAST 2.07.

Затем каждую таблетку взвешивали, из-мельчали в ступке, порошок количественно переносили в мерную колбу вместимостью 100,0 мл с помощью 70% этанола и доводили этим же растворителем до метки. Содержимое колб тщательно перемешивали и оставляли на сутки для отстаивания, поскольку вспомога-тельные вещества (стеарат кальция, тальк) не растворяются в водном этаноле. Количествен-ное содержание рутина в полученном растворе определяли спектрофотометрическим и ден-ситометрическим способами.


Для доказательства линейности зависимо-сти цветометрических характеристик пятен от количества рутина в пятне, а также для изуче-ния стабильности окраски полученных пятен были приготовлены растворы из стандартного образца рутина в этаноле в концентрациях 200, 400, 600, 800 и 1000 мкг/мл. Полученные рас-творы наносили по 5 мкл с помощью микропи-петки на хроматографическую бумагу в виде

полосок длиной около 3 см и шириной до 5 мм, а затем высушивали. В одном пятне, таким образом, содержалось 1, 2, 3, 4 и 5 мкг рутина, соответственно.

Проявление проводили путем погруже-ния бумаги с нанесенными пятнами в насы-щенный раствор основного ацетата свинца на несколько секунд. Окраска пятен рутина становилась интенсивно желтой. Непосред-ственно после извлечения бумаги из рас-твора ее помещали между двумя стеклами и производили сканирование полученного изображения.

Полученное цифровое изображение обра-батывали с помощью компьютерной програм-мы Imagej ver. 1.41 h. В результате получена денситограмма, приведенная на рисунке 1.

Для изучения стабильности окраски пя-тен во времени сканирование повторяли че-рез каждые 10 минут в течение 1 часа. Дина-мика изменений отражающей способности пятен с различным содержанием рутина (в пикселах) в зависимости от времени (в ми-нутах) приведена на рисунке 2. Цветометри-ческие характеристики пятен изменялись в течение этого времени незначительно, но в качестве оптимального времени взаимодей-ствия рутина с ацетатом свинца нами избран 20 минутный промежуток между проявлени-ем и сканированием.

По результатам регрессионного анализа денситограммы, полученной через 20 минут после проявления, установили линейную за-висимость отражающей способности про-дукта реакции рутина с основным ацетатом свинца от концентрации в диапазоне 1-5 мкг в пятне (рис. 3.). Уравнение градуировочно-го графика имело вид Y = a + bX = 0,0049 +3204,67 X (R2 = 0,99). Но, в связи с раз-

Рисунок 1 – Денситограмма стандартного образца рутина, нанесенного в концентрациях от 200 до 1000 мкг/мл

14


Рисунок 2 – Динамика отражающей способности пятен с различным содержанием рутина (от 1 до 5 мкг в пятне) после проявления основным ацетатом свинца

Примечание: Х – содержание рутина, мкг в пятне; Y – площадь пика соответствующего пятна на денситограмме, пикселы.

Рисунок 3 – Градуировочный график зависимости площади пятна на денситограмме от количества рутина

ными характеристиками сканеров и хрома-тографической бумаги, рекомендуется при каждом количественном определении ис-пользовать внешний стандарт.

Метрологические характеристики мето-дики устанавливали путем статистической обработки результатов анализа раствора ру-тина в 70% этаноле в концентрации 496 мкг/мл (точную навеску 0,0496 г ГСО рутина, предварительно высушенного при темпера-туре 130-135оС в течение 3 часов, раствори-ли приблизительно в 80 мл 70% этанола при нагревании на водяной бане, затем объем раствора довели этим же этанолом до 100,0 мл в мерной колбе).

По 5 мкл раствора стандартного образца

рутина наносили на лист хроматографиче-ской бумаги FN-15 размером 7×15 см в виде полосок 5×30 мм в 10 повторностях, прояв-ляли путем погружения в насыщенный рас-твор основного ацетата свинца, помещали между двумя стеклами и сканировали через 20 минут после обработки реактивом. Опре-деляли площадь пиков на денситограмме, как было описано выше. Результаты пред-ставлены в таблице 1 (первая строка).

Для сравнения использовали спектрофо-тометрический метод с добавлением алюми-ния хлорида в качестве комплексообразую-щего реагента (к 0,1 мл раствора стандарт-ного образца рутина прибавляли 0,1 мл 2% раствора алюминия хлорида в этаноле и 2,8

15


Таблица 1 – Сравнительная метрологическая оценка двух методик анализа№ µ ν x s2 s P t (95, 9) Δx ε tвыч F(99; 9,9) Fвыч

1 4,96 9 4,94 0,03 0,18 95 2,26 0,02 1,16 0,41 5,35 3,472 4,96 9 4,93 0,01 0,10 0,03 0,63 1,12

мл 70% этанола; через 30 минут измеряли оптическую плотность полученного раство-ра на СФ-26 при длине волны 410 нм в кюве-те с толщиной слоя 10 мм, используя в каче-стве раствора сравнения 70% этанол).

Таким образом, результаты, полученные при использовании денситометрической методики, не отягощены систематической ошибкой, обладали достаточной сходимо-стью (Sr =0,037), линейностью в диапазоне 1-5 мкг в пробе.

С помощью разработанной методики были проанализированы таблетки «Аскору-тин» и «Рутаскорбин».

Растворы, полученные при растворении таблеток, анализировали аналогично выше-

описанному, используя в качестве внешнего стандарта раствор рутина 496 мкг/мл. Каждый анализируемый и стандартный растворы нано-сили на бумагу в трех повторностях. Содержа-ние рутина в мг определяли по формуле:

Х = m1 × S2 /S1, где m1 – количество рутина в 100 мл раство-

ра внешнего стандарта; S1 – средняя площадь пиков рутина;S2 – средняя площадь пиков определяе-

мого вещества.В тех же растворах было определено

содержание рутина и спектрофотометриче-ским способом. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2 – Результаты анализа таблеток «Аскорутин» и «Рутаскорбин»Рутаскорбин

Масса таблетки

Отклонение от средней массы

таблетки

Количественное содержание рутина в таблетке, определенноеспектрофотометрически денситометрически

г % г г % г г %1 0,3185 -0,0122 -3,69 0,0545 0,0045 8,93 0,0558 0,0058 11,522 0,3292 -0,0015 -0,45 0,0506 0,0006 1,23 0,0475 -0,0025 -5,103 0,3322 0,0015 0,45 0,0492 -0,0008 -1,53 0,0528 0,0028 5,584 0,3366 0,0059 1,78 0,0451 -0,0049 -9,83 0,0444 -0,0056 -11,145 0,3348 0,0041 1,24 0,0498 -0,0002 -0,47 0,0439 -0,0061 -12,296 0,3324 0,0017 0,51 0,0481 -0,0019 -3,84 0,0494 -0,0006 -1,137 0,3259 -0,0048 -1,45 0,0510 0,0010 2,04 0,0565 0,0065 12,908 0,3346 0,0039 1,18 0,0480 -0,0020 -3,95 0,0534 0,0034 6,709 0,3304 -0,0003 -0,09 0,0456 -0,0044 -8,88 0,0432 -0,0068 -13,6310 0,3326 0,0019 0,57 0,0539 0,0039 7,79 0,0555 0,0055 11,04

среднее 0,33072 0,0496 -0,85 0,0502 0,0002 0,45Аскорутин

Масса таблетки

Отклонение от средней массы

таблетки

Количественное содержание рутина в таблетке, определенноеспектрофотометрически денситометрически

г % г г % г г %1 0,3249 -0,00828 -2,49 0,0510 0,0010 2,03 0,0559 0,0059 11,722 0,331 -0,00218 -0,65 0,0470 -0,0030 -5,92 0,0536 0,0036 7,173 0,3233 -0,00988 -2,97 0,0514 0,0014 2,71 0,0557 0,0057 11,504 0,3421 0,00892 2,68 0,0521 0,0021 4,15 0,0568 0,0068 13,655 0,3377 0,00452 1,36 0,0569 0,0069 13,80 0,0557 0,0057 11,436 0,3254 -0,00778 -2,34 0,0526 0,0026 5,28 0,0532 0,0032 6,437 0,3453 0,01212 3,64 0,0433 -0,0067 -13,44 0,0456 -0,0044 -8,808 0,332 -0,00118 -0,35 0,0441 -0,0059 -11,87 0,0456 -0,0044 -8,719 0,3399 0,00672 2,02 0,0491 -0,0009 -1,90 0,0515 0,0015 2,9110 0,3302 -0,00298 -0,89 0,0507 0,0007 1,34 0,0535 0,0035 7,01

среднее 0,33318 0,0498 -0,38 0,0527 5,43

16


Таблица 3 – Параметры текстуры и цветовые характеристики таблеток «Аскорутин» и «Рутаскорбин»

АскорутинПараметры текстуры Цветовые характеристики

N AngSecMom Contrast Correl InvDiffMom Entrop R G B1 0,01 13,56 0,01 0,37 5,61 233,22 228,34 191,352 0,01 11,34 0,01 0,39 5,55 232,97 227,8 189,623 0,01 12,51 0,01 0,4 5,58 232,64 227,48 189,544 0,01 19 0,01 0,39 5,55 234,24 229,84 191,445 0,01 15,18 0,01 0,4 5,49 233,77 229,58 191,496 0,01 17,55 0,01 0,39 5,55 231,96 227,32 190,427 0,01 8,97 0,01 0,4 5,53 230,46 226,04 191,068 0,01 9,39 0,01 0,4 5,46 232,04 227,65 190,69 0,01 13,12 0,01 0,37 5,59 231,07 226,82 193,6410 0,01 10,09 0,01 0,37 5,61 229,04 224,57 188,68

РутаскорбинПараметры текстуры Цветовые характеристики

N AngSecMom Contrast Correl InvDiffMom Entrop R G B1 0,02 20,64 0,01 0,54 4,55 218,89 213,18 153,872 0,02 14,06 0,02 0,53 4,56 219,76 214,2 159,653 0,02 6,07 0,02 0,51 4,72 219,97 214,88 160,244 0,02 6,76 0,02 0,52 4,74 217,54 211,85 153,555 0,02 14,83 0,02 0,5 4,71 217,11 211,23 152,946 0,02 21,45 0,01 0,49 4,74 216,19 211,55 155,267 0,02 15,16 0,02 0,51 4,68 213,37 209,1 153,978 0,02 8,77 0,01 0,54 4,57 216,27 212,89 156,889 0,02 5,4 0,02 0,52 4,58 212,97 208,43 153,0610 0,02 5,65 0,02 0,52 4,66 215,84 212,65 157,83

Таблетки соответствовали требованиям Государственной фармакопеи Республики Бе-ларусь [9] по отклонению в массе отдельных таблеток (не более 5% от средней массы табле-ток) и по однородности дозирования (не бо-лее 15% от среднего содержания). Результаты количественного определения рутина обоими способами вполне сопоставимы и достоверно не различались (Fвыч ≤ Fтабл).

Данные, полученные при определении цветовых характеристик [10-11] и параме-тров текстуры [5-8] таблеток, приведены в

Рисунок 4 – Текстура поверхности таблеток «Аскорутин» (слева) и «Рутаскорбин» (справа)

таблице 3 и на рисунке 4.Для свертывания многомерных данных

был применен метод главных компонент [11]. Полученные данные представлены на рисунке 5.

Из приведенных на рисунке 5 данных следовало, что таблетки различных произ-водителей с одинаковым количеством дей-ствующих веществ и одинаковым составом вспомогательных веществ, но с различной технологией, легко различаются по тексту-ре и цветовым параметрам. Кроме того, из

17


Текстура ЦветРисунок 5 – Результаты анализа методом главных компонент

по параметрам текстуры и цвета

Рутин спектрофотометрически Рутин денситометрическиРисунок 6 – Результаты анализа методом главных компонент по массе таблетки

и содержанию рутина при определении спектрофотометрическим и денситометрическим методами

площади доверительного эллипса видно, что для таблеток «Аскорутин» характерна мень-шая вариабельность параметров текстуры и цвета по сравнению с «Рутаскорбином».

На рисунке 6 приведены данные компо-нентного анализа по массе таблетки и со-держанию рутина, определенного спектро-фотометрическим и денситометрическим

способами. Можно видеть, что при спектро-фотометрическом определении содержания рутина большая изменчивость имеет место в случае аскорутина, в то время как при денси-тометрическом определения рутина разница в вариабельности данных для аскорутина и рутаскорбина значительно меньшая.

В целом же, как можно видеть на рисун-

Текстура + RGB + Спектрофотометрия Текстура + RGB + Денситометрия

Рисунок 7 – Результаты анализа методом главных компонент по массе таблетки, цвету и содержанию рутина при определении спектрофотометрическим и

денситометрическим методами

18


ке 7, анализ методом главных компонент при включении в анализ всех исследованных па-раметров позволяет четко различить таблет-ки различных производителей с одинаковым содержанием действующих веществ. Это вполне достижимо при использовании по-казателей (текстуры и цвета), определяемых недеструктивным способом.

Кроме того, по размерам доверительного эллипса можно судить и о качестве таблеток: меньшая площадь доверительного эллипса свидетельствует о меньшей вариабельности параметров таблеток, т.е. об их качестве.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Разработанная денситометрическая ме-тодика может использоваться для стандарти-зации лекарственных средств, содержащих как рутин, так и другие флавоноиды, нарав-не со спектрофотометрической. Определе-ние дополнительных показателей качества (текстуры поверхности таблеток и их цвета) позволяет быстро различать таблетки оди-накового состава разных производителей и, следовательно, выявлять фальсифицирован-ную продукцию без химического анализа.

SUMMARY

G.N. Buzuk, N.A. KuzmichovaCOLOR AND DENSITY MEASUREMENT

METHODS OF ANALYSIS IN STANDARTIZATION OF TABLETS

«ASCORUTIN» AND «RUTASCORBIN»Density measurement method of deter-

mination of avonoids in rutoside containing tablets was developed. Lead acetate as solution reagent and of ce scanner and computer with image processing program Imagej were used. This method can be used for standartization of avonoids containing pharmaceutical com-position equally with spectrophotometry. De-termination of additional quality characteristic (colour and surface texture of tablets) allows to differentiate tablets of the same content but different manufacturers and therefore to detect falsi ed production without chemical analysis.

Keywords: color measurement method, density measurement method, standartization, avonoids, rutoside.


1. Применение сканера и компьютерных программ цифровой обработки изображе-ний для количественного определения сор-бированных веществ / Ю.Л.Шишкин [и др.] // Журнал аналитической химии. – 2004. – Т.59, №2. – С. 119-124.

2. Ершик, О.А. Применение сканера и компьютерных программ цифровой обра-ботки изображений для количественного определения фенольных соединений корне-вищ с корнями сабельника болотного / О.А. Ершик, Г.Н. Бузук // Вестник фармации. – 2008. – №4. – С.6-12.

3. Погоцкая, А.А. Применение сканера и компьютерных программ цифровой об-работки изображений для количественного определения алкалоидов в листьях маклейи сердцевидной / А.А. Погоцкая, Г.Н. Бузук // Вестник фармации. – 2009. – №4. – С. 32-38.

4. Haralick, R.M. Statistical and structural approaches to texture / R.M. Haralick // Pro-ceedings of IEEE. – 1979. – Vol. 67. – N 5. – P. 786-804.

5. Haralick, R.M. Statistical and structural approaches to texture. Proceedings of the 4th International Joint Conference of Pattern Rec-ognition (1979) pp 45-60.

6. Haralick, R.М. Texture parameters for image classi cation / R.M. Haralick, К. Shan-mugam, I. Dinstein – IEEE Trans SMC. – 1973. – Vol. 3. – P. 610-621.

7. Walker, R.F. Improving co-occurrence matrix feature discrimination / R.F. Walker, P. Jackway, I.D. Longstaff. In: Proceedings of the 3rd Conference on Digital Image Comput-ing: Techniques and Applications (DICTA ‘95); 1995 December 6-8; Brisbane, Australia, 1995. – P. 643-648.

8. Haralick, R.M. Textural features for image classi cation.IEEE / RM. Haralick, К. Shanmugam, I. Dinstein. Trans Syst Man Cy-bern 1973; SMC-3:610-621.

9. Государственная фармакопея Респу-блики Беларусь. Т. 1: Общие методы контро-ля качества лекарственных средств / Центр экспертиз и испытаний в здравоохр.; под общ. ред. Г.В. Годовальникова. – Минск: Минск. гос. ПТК полиграфии, 2006. – С. 199-220.

10. Джад д, Д. Цвет в науке и технике / Д. Джадд, Г. Вышецки. – М.: Эком., 1997. – 339 с.

11. Гонсалес, Р. Цифровая обработка изображений в среде Матлаб / Р. Гонсалес, Р. Вудс, С. Эддинс – Техносфера: М., 2006. – 616 с.


210023, Республика Беларусь,г. Витебск, пр. Фрунзе, 27, Витебский государственный медицинский университет, кафедра фармакогнозии и ботаники,тел. раб.: 8(0212) 37-09-29Бузук Г.Н.


19


А.Г. Бузук1, Р.А. Юрченко1, В.А. Винарский1, Г.Н. Бузук2

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ТРАВЫ ЧАБРЕЦА1Белорусский государственный университет, Минск

2Витебский государственный медицинский университет

В результате фармакогностического и хромато-масс-спектрометрического анали-за лекарственного растительного сырья травы чабреца – Serpylli herba, установлено, что основными компонентами эфирного масла чабреца ползучего являются камфен (1,75-12,62%), β-мирцен – (2,26-14,61%), 1,8-цинеол (0 – 23,12%), камфора (4,24-27,59%), β-кариофиллен (1,12-22,64%), (-)-борнеол (2,02-33,39%) и кариофиллен оксид (3,79-28,7%). Доля тимола и карвакрола в составе эфирного масла составляет всего 0-3,59% и 0-3,69%, соответственно.

Ключевые слова: виды тимьяна, Thymus serpyllum L., эфирное масло, тимол, карвакрол.

ВВЕДЕНИЕ

К достаточно широко распространен-ным на территории Республики Беларусь лекарственным растениям относится чабрец или тимьян обыкновенный или ползучий. В Республике Беларусь род тимьян представ-лен тремя видами [1]:Thymus pulegioides L.- Т. блошиный, T. serpyllum L.- Т. обыкно-венный или ползучий и T. marschallianus - Т. Маршалла.

Наиболее распространенными видами являются тимьян блошиный и тимьян пол-зучий.

Тимьян блошиный – T. pulegioides L. (T. ucrainicus (Klok. et Shost.) Klok.) кустар-ничек, высотой 10-20 см. Произрастает на низинных лугах, сухих травяных склонах, железнодорожных насыпях, по обочинам до-рог, в зарослях кустарников, по березнякам и разреженным смешанным лесам по всей территории Республики Беларусь, встреча-ется довольно часто.

Тимьян ползучий – T. serpyllum L. ку-старничек, высотой 5-15 см. Произрастает по открытым песчаным склонам, дюнно-бу-гристым пескам, булавоносцевым и можже-веловым пустошам, лишайниковым и вере-щатниковым борам, на суходольных лугах, вырубках, опушках, железнодорожных на-сыпях, по обочинам дорог по всей террито-рии Республики Беларусь, встречается часто.

Оба этих вида легко различаются по ха-рактеру опушения стебля под соцветием: у чабреца блошиного стебель четырехгран-ный и опушены только ребра, в то время как у чабреца ползучего стебель в поперечном сечении округлый или округло-четырехгран-ный и опушен со всех сторон.

При заготовке сырья травы чабреца за-готовители, как правило, не различают виды чабреца. В связи с этим сырье может состо-ять как из одной травы чабреца ползучего

или блошиного, так и их сочетаний в различ-ных соотношениях. Предполагается, что их химический состав сходен.

Вместе с тем, имеющиеся в мировой ли-тературе данные свидетельствуют о высокой гетерогенности состава эфирного масла ча-бреца ползучего. Выявлено существование нескольких хемотипов в пределах мирового ареала его произрастания. Некоторые дан-ные такого рода представлены в таблице 1.

Качество сырья Serpylli herba определя-ется содержанием эфирного масла, которого должно быть не менее 0,1% в пересчете на сухое сырье [13].

В качестве дополнительного теста иден-тификации сырья в Государственной фар-макопее Республики Беларусь с целью гар-монизации требований к лекарственному сырью травы чабреца с Европейской фарма-копеей применяется тонкослойная хромато-графия, которая сводится к обнаружению в метиленхлоридном экстракте травы чабреца доминирующих компонентов эфирного мас-ла – тимола и карвакрола.При этом отмеча-ется, что интенсивность окраски зон тимола и карвакрола зависит от происхождения ис-пытуемого сырья.

Анализ лекарственного сырья травы ча-бреца промышленных партий испытатель-ными лабораториями Республики Беларусь выявил в ряде случаев отсутствие в сырье одного из основных компонентов – тимола.

В связи с этим представляло значитель-ный интерес провести оценку химического состава эфирного масла чабреца ползучего, произрастающего на территории Республи-ки Беларусь.

Цель настоящей работы – исследова-ние методом хромато-масс-спектрометрии состава эфирного масла образцов лекар-ственного растительного сырья травы ча-бреца – Serpylli herba, источником кото-рого является чабрец обыкновенный или

20


Происхождение Хемотип Лит-раФинляндия 1 -монотерпеновые углеводороды (33%), 1,8-цинеол (12,5–

15,0%), гермакра-1(10) ,5-диен-4-ол (3–12%), гермакрен D (10,0–12,0%), гермакра -1(10), 4-диен-6-ол;2- монотерпеновые углеводороды (30%), 1,8-цинеол (26%), β-кариофиллен, гермакрен D, гедикариол;3- монотерпеновые углеводороды (27%), 1,8- цинеол (19%), гермакрен D, β- кариофиллен, камфора

2

Финляндия 1- линалоол (21,9–43,8%), линалил ацетат (8,9–17,6%), β- кариофиллен,1,8-цинеол, камфора; 2 - 1,8-цинеол (17,2–27,6%), мирцен (15,4–22,4%), β-карио-филлен (6,8–19,1%), камфора, линалоол

3-4

Литва 1,8-цинеол (16,3–19,0%), β-кариофиллен (9,6–11,3%), мирцен (9,7–10,7%), гермакрен D, камфора

5

Венгрия Карвакрол (39,5-45,9%), тимол, p-цимен, линалоол, нерол 6Украина 1 - тимол (35,1-50,0%), γ-терпинен (12,7-18,0%), p-цимен (8,6-

14,1%);2 – карвакрол (48,4-55,2%), γ-терпинен (10,1-27,1%), p-цимен (7,1-8,0%)

7

Кавказ 1 - тимол (76,1-81,5%), p-цимен, карвакрол, β- кариофиллен, α-терпинеол; 2 – карвакрол (49,0–62,0%), тимол (21,5–29,7%), p-цимен, β- кариофиллен, α-терпинеол

8

Пакистан Тимол (42,6%), p-цимен, карвакрол, борнеол, терпенен-4-ол 9Индия Карвакрол (49,4%), p-цимен, тимол, зингиберен, евгенол 10Индия Тимол (57,6%), p-цимол (20,0%), γ-терпинен, зингиберен,

борнеол11

Китай Тимол (23,9%), 2,4,5-триметилбензиловый спирт (16,9%), p-цимен (16,3%), карвакрол (10,6%), o-бутилфенол

12

Таблица 1 – Преобладающие компоненты эфирного масла Thymus serpyllum L. различных хемотипов

ползучий T. serpyllum L., в сравнении с ти-мьяном блошиным – T. pulegioides L.


Образцы травы тимьянов для исследо-вания были собраны в течение лета 2011 г. в местах его естественного произрастания на территории Витебской и Гродненской об-ластей в фазу цветения и подвергнуты есте-ственной сушке в тени. До анализа образцы хранились в бумажных пакетах. Фармаког-ностический анализ (идентификацию) про-водили согласно Государственной фармако-пее Республики Беларусь [14].

Навеску измельченного растительного сырья массой около 4 г помещали в плоско-донную колбу вместимостью 100 мл и при-ливали 80 мл диэтилового эфира, закрывали пробкой и помещали в ультразвуковую ванну на 15 минут при температуре 20°С. Получен-ный экстракт отфильтровали через стеклян-ный фильтр. Из полученного экстракта эфир отгоняли на роторном испарителе. Получен-ную фракцию липофильных веществ, содер-

жащую и эфирное масло, исследовали мето-дом хромато-масс-спектрометрии на газовом хроматографе Hewlett-Packard 5890/II с ква-друпольным масс-спектрометром (НР MSD 5971) в качестве детектора. Использовали 30-метровую кварцевую колонку НР-5 (сопо-лимер 5%-дифенил-95%-диметилсилоксана) с внутренним диаметром 0,25 мм и толщи-ной пленки неподвижной фазы 0,25 μм. Про-центный состав эфирных масел вычисляли по площадям хроматографических пиков без использования корректирующих коэф-фициентов. Качественный анализ основан на сравнении времен удерживания и полных масс-спектров с соответствующими данны-ми компонентов эталонных масел с данны-ми библиотеки масс-спектрометрических данных Wiley275 (275000 масс-спектров) и каталогов [15-16].


В исследованных эфирных экстрактах обнаруживается до 100 компонентов. Ме-тодом хромато-масс-спектрометрии иденти-

21

Вестник Вестник фармации №3 (53) 2011 Научные публикации

Рисунок 1 – Общий вид хроматограммы эфирной фракции Thymus pulegioides L.(T. ucrainicus (Klok. et Shost.) Klok

фицировано более 20 веществ, относящихся к составным частям эфирного масла (соеди-нения, относящиеся к другим, чем эфирные масла, классам природных соединений, не приводятся). Общий вид хроматограмм по-казан на рисунках 1-2.

Основными компонентами эфирного масла травы чабреца блошиного, как нами ранее было установлено [17], являются кар-вакрол, тимол, β-кариофиллен, β-бисаболен

и р-цимен (таблица 2), при этом среди фе-нольных соединений терпеноидной приро-ды доминирует карвакрол.

Как видно из данных, представленных в таблицах 3-4, основными компонентами эфирного масла чабреца ползучего являют-ся камфен (1,75-12,62%), β-мирцен – 2,26-14,61%), 1,8-цинеол (0 – 23,12%), камфора (4,24-27,59), β-кариофиллен (1,12-22,64%), (-)-борнеол (2,02-33,39%), кариофиллен оксид

Рисунок 2 – Общий вид хроматограммы эфирной фракции Thymus serpyllum L.

22


Таблица 2 – Формулы основных компонентов эфирного масла травы Thymus pulegioides L.(T. ucrainicus (Klok. et Shost.)Klok.) по данным хромато-масс-спектрометрии

Thymus pulegioides L.

Терпинен Цимен Кариофиллен

Тимол Карвакрол Бисаболен

Thymus serpyllum L.

Камфен Борнеол Камфора

Борнилацетат Мирцен Кариофилленоксид

Таблица 3 – Формулы основных компонентов эфирного масла травы Thymus serpyllum L.по данным хромато-масс-спектрометрии

23


Таблица 4 – Состав эфирного масла травы Thymus serpyllum L.по данным хромато-масс-спектрометрии

Код образцов травы Thymus serpyllum L.Соединение 51 52 49 B2 B1 63 64 67 68Камфен 1,75 11,32 11,88 12,62 5,39 10,72 9,78 3,98 9,73β-пинен 0,00 0,00 0,40 0,35 1,32 0,54 0,40 0,54 0,54Сабинен 0,40 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00β-Мирцен 2,26 6,50 3,44 10,57 3,97 14,61 8,83 5,27 6,49dl-Лимонен 0,00 0,00 0,00 0,42 0,22 0,51 0,31 0,32 0,001,8-Цинеол 1,07 0,00 0,00 0,00 23,12 0,64 0,00 0,00 0,00β-Оцимен 0,00 0,56 0,00 0,26 2,99 0,41 0,18 0,00 0,00Δ3-Карен 0,73 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,48 0,00 0,00цис-сабинен гидрат 0,00 0,00 0,00 0,51 1,26 0,88 0,95 0,81 2,70Камфора 4,24 16,48 27,59 19,63 16,38 13,87 14,09 15,11 22,14(-)-Борнил ацетат 0,00 0,00 5,14 8,61 0,00 4,33 2,63 5,97 4,44β-Кариофиллен 19,04 22,64 11,61 1,12 12,03 7,34 11,34 9,41 8,45(-)-Борнеол 33,39 2,02 12,38 24,34 14,65 20,12 26,96 30,81 18,98ГермакренD 2,20 3,03 3,47 8,20 4,09 0,34 0,18 8,33 3,28β-Бисаболен 5,14 0,00 0,00 0,00 0,00 0,85 0,15 1,61 0,40α-Фарнезен 2,54 0,78 0,00 0,32 0,44 2,57 2,35 1,67 1,28β-сесквифелландрен 1,24 5,04 1,37 0,86 0,00 1,49 0,00 0,00 0,76Гераниол 0,00 0,67 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00(-)-транс-Пинан 0,34 0,00 0,00 0,00 0,00 0,24 0,00 0,00 0,22Кариофиллен оксид 10,90 28,70 11,95 10,79 9,80 3,79 15,46 13,55 13,51Гермакрен D-4-ол 1,81 0,00 7,57 0,00 0,00 6,49 0,00 0,38 3,46(+) спатуленол 5,08 0,00 2,77 0,90 0,00 0,00 2,51 0,38 3,60Тимол 0,68 2,25 0,43 0,22 3,59 0,68 0,00 0,27 0,00Карвакрол 0,51 0,00 0,00 0,29 0,63 3,69 0,00 1,61 0,00Геранил ацетат 3,22 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00d-Неролидол 1,98 0,00 0,00 0,00 0,00 5,92 1,16 0,00 0,00

(3,79-28,7%). Доля тимола и карвакрола в со-ставе эфирного масла очень низкая и состав-ляет всего 0-3,59% и 0-3,69%, соответствен-но.

Таким образом, исследованный нами ча-брец ползучий, ввиду очень низкого содер-жания или даже полного отсутствия основ-ных действующих веществ чабреца - тимола и карвакрола, не соответствует требованиям Государственной Фармакопеи Республики Беларусь.

Однако для окончательного решения во-проса о пригодности для заготовки чабреца ползучего в качестве лекарственного сырья необходимы дальнейшие исследования хи-мической изменчивости состава его эфир-ного масла с охватом отбором образцов всей территории Республики Беларусь.


1. Исследованные образцы травы ти-мьяна имеют различный химический состав главных компонентов эфирного масла.

2. Основными компонентами эфирного масла чабреца ползучего являются камфен (1,75-12,62%), β-мирцен – (2,26-14,61%), 1,8-цинеол (0 – 23,12%), камфора (4,24-27,59%), β-кариофиллен (1,12-22,64%), (-)-борнеол (2,02-33,39%), кариофиллен ок-сид (3,79-28,7%). Доля тимола и карвакрола в составе эфирного масла составляет всего 0-3,59% и 0-3,69%, соответственно.

3. Дальнейшие исследования химической изменчивости состава эфирного масла тимья-нов являются весьма актуальными и могут привести к выявлению на территории Респу-блики Беларусь их различных хемотипов.

SUMMARY

A.G. Buzuk, R.A. Jurchenko, V.A. Vinarskiy, G.N. Buzuk

COMPARATIVE PHARMACOGNOSTICAL ANALYSIS OF GRASS THYME

As a result of pharmacognostical and the chromato-mass spectrometrical analy-sis of the medicinal vegetative raw materi-

24


als grass thyme – Serpylli herba it is estab-lished, that main components of essential oil of Thymus serpyllum L are camphene (1,75-12,62%), β-myrcene-2,26-14,61%), 1,8-cin-eole (0 – 23,12%), camphor (4,24-27,59%), β-caryophyllene (1,12-22,64%), (-)-borneol (2,02-33,39%)and caryophyllene oxide (3,79-28,7%). Proportion of thymol and carvacrol in the essential oil is very low and is only 3,59%, and 0-3,69%, respectively.

Keywords: thyme species, Thymus serpyl-lum L., essential oil, thymol, carvacrol.


1. Определитель высших растений Бела-руси / Под ред. В.И.Парфенова. – Мн., Ди-зайн ПРО, 1999. – 472 с.

2. Stahl-Biskup, E. Essential oil polymor-phism in Finnish Thymus species / E.Stahl-Biskup, I.Laakso // Planta Med. – 1990. - Vol. 56. – P.464–468.

3. Ivars, L. Kemotaxonomiska undersokn-ingarav Thymus serpyllum / L.Ivars // Farm. Aikak.-Farmaceutisk Notisblad. – 1964. Vol.73. – P.324–332.

4. Von Schantz, M. and Ivars, L. Uber die Zusammensetzung des atherischen oles von Thymus serpyllum ssp. tanaensis (Hyl.) / M.Von Schantz, L.Ivars // Jalas. Ann. Univ. Turku. A. II – 1964 – Vol. 32. – P.301–307.

5. Loziene, K. Chemical composition of the essential oil of creeping thyme (Thymus serpyllum L. s.l.) growing wild in Lithuania / K.Loziene, J.Vaiciuniene, P.R Venskutonis // Planta Med. – 1998. – Vol. 64. – P. 772–773.

6. A comparison between the oil and su-percritical carbon dioxide extract of Hungar-ian Wild Thyme (Thymus serpyllum L.) / M.Oszagyan [et al.] // Essent. Oil Res.-1996. – Vol.8. – P.333–335.

7. Composition of essential oils from the aboveground part of the Thyme / S.V. Sur [et al.] // Khim. Farm. Zh. – 1988. –Vol. 22. – P.1361–1366.

8. Abetisjan, R.G. The essential oils of Mentha longifolia (L.) Huds. and Thymus ser-pyllum L. (Armenian SSR) / R.G. Abetisjan [et al] // Rast. Res. – 1988. – Vol. 24. – P.605–610.

9. Sattar, A. Essential oils of the species of Labiatae part IV. Composition of the essential

oil of Thymus serpyllum / A.Sattar, M.S. Malik, S.A.Khan // Pakist. J. Sci. Ind. Res. – 1991. – Vol. 34. – P.119–120.

10. Razdan, T.K. Zur Zusammensetzung des Quendeloles (Thymian) / T.K. Razdan, G.L.Koul // Riechstoffe, Aromen, Korperp- egemittel. – 1975. – Vol. 25. – P.166–168.

11. Gulati, B.C. Essential oil from Thymus serpyllum / B.C. Gulati, R. Gupta // Indian Per-fumer. – 1977. – Vol.21. – P. 162–163.

12. Zhang, Hongli Study on chemical con-stituents of essential oil from Thymus mon-golicus Ronn / Hongli Zhang, Youmin Wang, Zhenjie Zhang // Acta Bot. Boreal.-Occident. Sin.–1992. – Vol. 12. – P. 245–248.

13. Государственная фармакопея Респу-блики Беларусь. В 3 т. Т. 2. Контроль качества вспомогательных веществ и лекарственного растительного сырья / УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; под ред. А.А. Шерякова. – Молодечно: Типография «Победа», 2008. – 472 с.

14. Государственная фармакопея Респу-блики Белорусь. В 3 т. Том 1. Общие методы контроля качества лекарственных средств / УП «Центр экспертиз и испытаний в здраво-охранении»; под ред. Г. В. Годовальникова. – Минск: Гос. ПТК полиграфии, 2006. – 656 с.

15. McLafferty, F.M. The Wiley / F.M. McLafferty, D.B. Stauffer // NBS Registry of Mass Spectral Data; Wiley-Interscience, 1989. Vol. 1–7.

16. Eight Peak Index of Mass Spectra; Roy-al Society of Chemistry: University of Notin-ham, England, ThirdEdition, 1983. Vol. 1–2.

17. Фармакогностический анализ травы чабреца – Serpylli herba / А.Г. Бузук [и др.] // Вестник фармации. – 2010. – № 4. – С.33-37.


210023, Республика Беларусь,г. Витебск, пр. Фрунзе, 27,Витебский государственныйМедицинский университет,кафедра фармакогнозии с курсом ФПК и ПК,тел. раб.: 8 (0212) 37-09-29, [email protected]Бузук Г.Н.


25


ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ

Ю.Г. Чернецкая1, П.Т. Петров2

ВЛИЯНИЕ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И ПРОТИВОМИКРОБНЫЕ СВОЙСТВА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ СУБСТАНЦИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ СОЗДАНИЯ АППЛИКАЦИОННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ

СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ГИДРОГЕЛЕВЫХ МАТРИЦ1РУП «Белмедпрепараты», г. Минск

2 ГУ Научно-производственный центр «Институт фармакологии и биохимии Национальной академии наук Беларуси», г. Минск

Изучена устойчивость фармацевтических субстанций в отношении ионизирую-щего излучения. Установлено, что при воздействии поглощенной дозы излучения 25±5 кГр на субстанции в сухом виде сохраняется структура, физико-химические свойства и антимикробная активность ципрофлоксацина гидрохлорида, левофлоксацина гемиги-драта, метронидазола, цефотаксима натрия, диоксидина, мирамистина и гентамици-на сульфата. Показано, что воздействие ионизирующего излучения на водные растворы субстанций при указанной дозе приводит к деструкции активных веществ.

Проведено исследование стабильности вышеуказанных субстанций, включенных в состав гидрогелевых полимерных матриц. Левофлоксацин, ципрофлоксацин, метрони-дазол, цефотаксим и диоксидин после воздействия ионизирующего излучения препят-ствовали образованию трехмерной полимерной структуры матрицы. Гидрогели приоб-ретали окраску, у них отсутствовали эластичность и прочность, снижалась концен-трация активных веществ.

Установлено, что антибиотик группы аминогликозидов гентамицин и антисептик из группы четвертичных аммониевых соединений мирамистин устойчивы к воздей-ствию ионизирующего излучения в указанных дозах и могут быть использованы в тех-нологии получения гидрогелевых матриц. Сохранение структуры и химико-фармацев-тических свойств данных соединений доказано с использованием физико-химических и микробиологических методов анализа.

Ключевые слова: гидрогелевые матрицы, ионизирующее излучение, поглощенная доза излучения, фармацевтические субстанции, противомикробные средства.

ВВЕДЕНИЕ

Нами разработана новая лекарственная форма противомикробных и ранозаживля-ющих средств на основе гидрогелевых по-лимерных матриц [1]. Гидрогелевые пласти-ны – стерильная эластичная лекарственная форма для наружного применения, имеющая фиксированные геометрические размеры и содержащая одно или более действующих веществ [2]. Лекарственные средства на ос-нове гидрогелевых матриц применяют для лечения свежих травматических, гранули-рующих (инфицированных и неинфициро-ванных) ран, пролежней, трофических вяло-гранулирующих язв, рожистого воспаления, термических ожогов 2–3а и 3б–4 степени в фазе регенерации [3-5].

Гидрогелевые матрицы получают в ре-зультате воздействия ионизирующего из-лучения на водные растворы биологически совместимых полимеров медицинского на-

значения – поливинилпирролидона и полиэ-тиленоксида. Использование радиационного сшивания в технологии дает возможность получения гидрогелей с необходимыми для данной лекарственной формы свойствами (эластичность, прочность, набухаемость) путем подбора условий облучения (мощ-ность дозы, доза), также обеспечивающих стерильность готовой лекарственной формы [6].

Обеспечение стабильности химико-фар-мацевтических свойств действующих ве-ществ и гидрогелевой основы является од-ной из важных проблем при создании новых аппликационных лекарственных средств. Известно влияние ионизирующего излуче-ния на физико-химические и биологические свойства фармацевтических субстанций и гидрогелей, содержащих противомикробные вещества [7,8].

Цель настоящей работы – подобрать устойчивые к ионизирующему излучению

26


фармацевтические субстанции, обладающие антимикробной активностью, для включе-ния в качестве активных ингредиентов в со-став гидрогелевых матриц.


Объектами исследования служили суб-станции противомикробного действия: ципрофлоксацина гидрохлорид (рег. № 699/04/10, НД РБ 0212С-2010), левофлок-сацина гемигидрат (рег. № 945/07/10, НД РБ 0537С-2010), метронидазол (рег. № 476/02/10, НД РБ 0215С-2010), цефотаксим натрия (рег. № 992/07/09, НД РБ 0582С-2009), гентамицина сульфат (рег. № 239/01/10, НД РБ 0048С-2010), миритин (мирамистин) (рег. № 582/03/10, НД РБ 0050С-2010), диокси-дин (рег. № 1038/08/09, НД РБ 0623С-2009) в форме сухих порошков, водных растворов и гидрогелей.

На рисунке 1 приведены структурные формулы исследуемых субстанций.

Проводили исследование водных рас-творов фармацевтических субстанций в со-ответствующих известных терапевтически эффективных концентрациях: ципрофлокса-цина гидрохлорид – 2 мг/мл, левофлоксаци-на гемигидрат – 5 мг/мл, метронидазол – 4 мг/мл, цефотаксим натрия – 5 мг/мл, мира-мистин – 0,5 мг/мл, гентамицина сульфат – 1 мг/мл, диоксидин – 5 мг/мл.

Гидрогели получали с использованием вспомогательных веществ и технологии, описанных ранее [9].

Радиационную обработку (поглощенная доза 25±5 кГр) проводили на линейном уско-рителе электронов УЭЛВ-10-10 ГНУ «ОИ-ЭиЯИ-Сосны» НАН Беларуси. Ускоритель снабжен конвейерной системой; скорость конвейера регулируется от 0,5 до 6 см/с. Мощность пучка ускоренных электронов – до 10 кВт, энергия электронов – до 10 МэВ. Линейный ускоритель электронов работает в импульсном режиме: длина импульсов регу-лируется от 3 до 7 мкс, частота следования импульсов – от 150 до 400 Гц. Ускоритель обеспечивает непрерывный процесс иони-зирующего облучения, высокую равномер-ность поглощенной дозы, высокую произво-дительность и постоянный автоматический контроль за процессом облучения.

Проводили сравнительный анализ фар-мацевтических субстанций и их растворов до и после облучения по следующим пока-зателям: описание, идентификация, рН рас-твора, посторонние примеси, количествен-ное содержание активной субстанции, анти-микробная активность.

Гидрогелевые матрицы анализировали

по следующим показателям: внешний вид, рН водной вытяжки, степень набухания, количественное содержание активных суб-станций.

Идентификацию и структурные из-менения действующих веществ определя-ли с использованием методов ИК- и УФ-спектроскопии.

ИК-спектры исследуемых облученных субстанций, записанные с использованием дисков KBr (1 мг препарата в 400 мг KBr), сравнивали с ИК-спектрами субстанций, не подвергавшихся воздействию ионизирую-щего излучения. Анализ проводили на ИК-спектрометре Фурье (Perkin Elmer, Герма-ния) в области от 4000 до 670 см-1.

Спектры поглощения растворов фар-мацевтических субстанций, а также экс-трактов гидрогелевых матриц записывали на спектрофотометре Lambda 25 UV/VIS Spectrometer (Perkin Elmer, Германия) в диа-пазоне длин волн от 220 до 400 нм. Макси-мумы поглощения в данном диапазоне длин волн обусловлены наличием в структуре соединений ароматических колец, гетеро-циклов и сопряженных двойных связей. В качестве растворителей использовали 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной (для ципрофлоксацина, левофлоксацина, метро-нидазола) и спирт этиловый 96 % (для мира-мистина). Концентрация ципрофлоксацина в пробах составляла 5,0 мкг/мл, левофлокса-цина - 5,0 мкг/мл, метронидазола – 20,0 мкг/мл, мирамистина - 0,5 мг/мл.

Содержание основного вещества и по-сторонние примеси в исследуемых фарма-цевти-ческих субстанциях и их растворах определяли согласно фармакопейным ме-тодикам и действующей нормативной до-кументации. Методики были оптимизиро-ваны для анализа действующих веществ в гидрогелевых матрицах с учетом специфики лекарственной формы: подобраны массы на-весок гидрогелей, экстрагенты, соотноше-ния навеска: экстрагент, время экстракции. Количественное определение мирамистина проводили методом высокоэффек-тивной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ис-пользованием хроматографа «Agilent 1200 Series» со спектрофотометрическим детек-тором модели Agilent G1314B по разрабо-танной нами методике [10].

Сравнительный анализ антимикробной активности фармацевтических субстан-ций проводили в отношении тест-культур микроорганизмов, приведенных в Государ-ственной фармакопее Республики Беларусь, т. I и входящих в спектр активности иссле-дуемых субстанций: Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р, Pseudomonas aeruginosa ATCC

27


9027. Определение минимальной подавляю-щей концентрации (МПК) субстанций и их водных растворов до и после воздействия ионизирующего излучения определяли с ис-пользованием метода двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде [11] в двух повторностях. В качестве основных

N

O

OH

O

N

CH3N O

CH3

F

. 1/2 H20N

O

FOH

O

N . HCl

NH

Левофлоксацина гемигидрат Ципрофлоксацина гидрохлорид

N

S

O CH3

OOO

Na

O

NH

O

NO

CH3

N

S

NH2N

NOH

O2N

CH3

Цефотаксим натрия Метронидазол

O

NH-R1

NH2R

HO

NH2

NH2

O

OH

NH-CH3

O

O

OH

CH3

.H2SO4

Гентамицина сульфат

N

N

OH

OH

O

O

Диоксидин

N+ NH

O

CH3

CH3

CH3

.H2O

Cl-

Мирамистин

Рисунок 1 – Структурные формулы исследуемых фармацевтических субстанций противомикробного действия

использовали растворы субстанций в воде для инъекций с концентрацией 1000 мкг/мл. Из основных растворов готовили рабо-чие растворы с концентрацией 100 мкг/мл в стерильной питательной среде, которые последовательно двукратно разводили. В качестве питательной среды использовали

28


ций, не подвергавшихся радиационному воздействию, процент совпадения спектров составил для ципрофлоксацина гидрохлори-да – 99,8 %, левофлоксацина гемигидрата - 99,7 %, метронидазола – 99,0 %, мирамисти-на – 99,6 %, цефотаксима натрия – 99,7 %, диоксидина – 99,2 %. Следовательно, после радиационной обработки не произошло зна-чительных изменений в структуре молекул фармацевтических субстанций и образова-ния примесей.

Проведен спектральный анализ в УФ-области растворов исследуемых фармацевтичес-ких субстанций и экстрактов гидрогелевых матриц с данными соединени-ями.

Спектры поглощения растворов ципроф-локсацина имеют максимум при длине вол-ны 277±2 нм, левофлоксацина – при 292±2 нм. Спектры поглощения раствора после радиационной обработки и экстракта ги-дрогелевой матрицы, содержащих ципроф-локсацин, идентичны спектру поглощения исходной субстанции (рисунок 2). Однако, интенсивность поглощения для облученно-го раствора ципрофлоксацина и экстракта ниже интенсивности электронных спектров исходной субстанции. Аналогичные резуль-таты получены при анализе спектров погло-щения растворов левофлоксацина.

В УФ-спектрах метронидазола отмеча-ется полоса поглощения с максимумом при длине волны 277±2 нм. Для раствора метро-нидазола, облученного поглощенной дозой 25 кГр, и экстракта гидрогеля с данным со-единением также наблюдается снижение оп-тической плотности в максимуме 277 нм.

Анализ УФ-спектров мирамистина пока-зал, что характерные максимумы интенсив-ности поглощения при длинах волн 257±2 нм, 262±2 нм и 270±2 нм наблюдаются в спектрах поглощения растворов субстанции (до и после облучения) и экстракта гидроге-левой матрицы. В спектрах поглощения об-лученного раствора мирамистина характер-ных полос при данных длинах волн не обна-руживается (рисунок 3).

Проведенный спектральный анализ в УФ-области показал устойчивость иссле-дованных фармацевтических субстанций в сухом виде к воздействию ионизирующего излучения поглощенной дозой 25±5 кГр. В то время как при облучении водных рас-творов наблюдается снижение оптической плотности (левофлоксацин, ципрофлокса-цин, метронидазол) или смещение максиму-мов поглощения в УФ-спектрах растворов субстанций (мирамистин), что обусловлено радиационной деструкцией выше указанных соединений.

мясо-пептонный бульон. Посевным мате-риалом служили взвеси суточных агаровых культур вышеперечисленных тест-штаммов. Посевная доза составляла 105 КОЕ/мл. Кон-тролем служили инокуляты, не содержащие субстанций. Пробирки инкубировали при 37 oС в течение 24 – 48 ч. Результаты учитыва-ли, определяя наличие или отсутствие роста микроорганизмов в среде, содержащей раз-личные разведения веществ. Последняя про-бирка ряда с задержкой роста (прозрачная питательная среда) соответствует МПК пре-парата в отношении данного штамма.

Степень набухания (α) гидрогелевых ма-триц определяли весовым методом [12]. Око-ло 2,00 г фрагмента гидрогелевой пластины помещали в коническую колбу вместимо-стью 100 мл, приливали 50 мл воды. Через 48 часов извлекали фрагмент и определяли его массу. Степень набухания (α) вычисляли по формуле:

,0

0

mmm

где m0 – начальная масса образца, г; m – масса образца после набухания, г.


При воздействии ионизирующего излу-чения полимерные компоненты (поливинил-пирролидон, полиэтиленоксид) подвергают-ся радиационному сшиванию, что приводит к формированию стабильной трехмерной структуры гидрогелевых матриц. Но в то же время существует опасность радиационной деструкции активных субстанций, включен-ных в состав растворов полимеров, являю-щихся основой матрицы.

На первом этапе были проведены иссле-дования субстанций, проявляющих макси-мальный антимикробный эффект, для вклю-чения в новую лекарственную форму – ги-дрогелевые пластины.

Изучена возможность включения в со-став гидрогелевых полимерных матриц широко используемых как в системной, так и в местной терапии инфекций кожи, ран, мягких тканей, противомикробных средств группы фторхинолонов (ципрофлоксацина, левофлоксацина), производных нитроими-дазола (метронидазола), цефалоспоринов (цефотаксима), аминогликозидов (гентами-цина), хиноксалинов (диоксидина), антисеп-тиков (мирамистина) (рисунок 1).

Установлено, что ИК-спектры фарма-цевтических субстанций после облучения в сухом виде поглощенной дозой 25±5 кГр идентичны ИК-спектрам образцов субстан-

29


1 – субстанция до облучения; 2 – субстанция после облучения; 3 – раствор после облучения; 4 – экстракт гидрогелевой матрицы.

Рисунок 2 – Спектры поглощения растворов ципрофлоксацина

1 – субстанция до облучения; 2 – субстанция после облучения; 3 – раствор после облучения; 4 – экстракт гидрогелевой матрицы.

Рисунок 3 – Спектры поглощения растворов мирамистина

ных водных растворах можно пренебречь прямым воздействием ионизирующего излу-чения. Процессы радиационной деструкции и химические превращения в данном случае обусловлены косвенным радиационным воз-действием. Радиолиз воды сопровождается образованием активных частиц (H2O → e-aq, H, OH, H2, O, H2O2, H+aq, OH-aq), которые, взаимодействуя с растворенным веществом, приводят к его деструкции и химическим превращениям [13, 14].

В настоящей работе представлены ре-зультаты сравнительного физико-химическо-го анализа водных растворов фармацевтиче-ских субстанций противомикробного дей-ствия (ципрофлоксацина, левофлоксацина,

Выполнен сравнительный анализ суб-станций в сухом виде до и после облучения по следующим показателям: описание, по-сторонние примеси, количественное содер-жание основного вещества.

После воздействия ионизирующего из-лучения наблюдалось незначительное сни-жение содержания основного вещества и по-вышение концентрации примесей, внешний вид субстанций не изменялся. Результаты физико-химического анализа подтвердили устойчивость исследованных фармацевтиче-ских субстанций в сухом виде к воздействию облучения электронами высокой энергии по-глощенной дозой 25±5 кГр.

При облучении субстанций в разбавлен-

30


Наименование растворов

Описание рН Количественное содержание, мг/мл

До облучения

Послеоблучения

Дооблучения


Дооблучения


1 2 3 4 5 6 7Раствор лево-флоксацина

Желтовато-зеленый

Красно-ко-ричневый

7,30 6,75 5,05 3,90 (78,2 %)

Раствор цип-рофлоксацина

Слегка желтоватый

Коричневый 4,35 3,15 2,08 1,03 (49,1 %)

Раствор мет-ронидазола

Бесцвет-ный

Лимонно-желтый

6,40 4,40 4,00 2,15 (53,75 %)

Раствор цефотаксима

Зеленова-то-желтый

Коричневый 5,10 5,04 5,02 3,52 (70,12 %)

Раствор гента-мицина


Желто-ко-ричневый

4,90 3,00 1,03 0,59 (57,5 %)

Раствор мира-мистина


Бесцветный 5,75 4,65 0,52 -*

Раствор диоксидина

Зеленова-то-желтый

Коричневый 5,75 4,50 4,90 3,20 (65,31 %)

Таблица 1 – Характеристика физико-химических свойств водных растворов фармацевтических субстанций после воздействия ионизирующего излучения

поглощенной дозой 25±5 кГр

* – не идентифицируется при данных условиях анализа (методика ВЭЖХ).

метронидазола, гентамицина, мирамистина, цефотаксима, диоксидина) до и после об-лучения. Установлено, что при воздействии ионизирующего излучения поглощенной до-зой 25±5 кГр происходит изменение окраски водных растворов, снижение концентрации действующих веществ и рН растворов (та-блица 1).

Проведено исследование влияния иони-зирующего излучения на антимикробную активность субстанций и их растворов ме-тодом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде (таблица 2). По-сле радиационной обработки антимикроб-ная активность исследуемых субстанций оставалась достаточно высокой. Увеличение МПК растворов после облучения свидетель-ствует о частичной потере биологической активности субстанций, что обусловлено их деструкцией при действии ионизирующего излучения.

Следующим этапом исследования было проведение химико-фармацевтического ана-лиза гидрогелевых матриц, содержащих фар-мацевтические субстанции, с целью определе-ния составов, перспективных для внедрения в производство и клиническую практику.

Полученные гидрогелевые матрицы анализировали по следующим показателям: описание, механические свойства, рН во-дной вытяжки, степень набухания, количе-ственное содержание действующего веще-ства. Результаты исследования приведены в

таблице 3. Все растворы композиций поли-меров гидрогелей были бесцветными, по-сле воздействия ионизирующего излучения гидрогелевые матрицы с левофлоксацином приобретали ярко-оранжевую окраску, с ци-профлоксацином – ярко-желтую, с метрони-дазолом – желто-коричневую. Кроме того, данные гидрогели не обладали необходимы-ми механическими свойствами. Появление окраски указывает на то, что в результате воздействия ионизирующего излучения про-исходит образование продуктов деструкции указанных действующих веществ. Ингиби-руется процесс радиационного сшивания по-лимеров, то есть не происходит образования трехмерной структуры гидрогелевой матри-цы. О деструкции левофлоксацина, ципроф-локсацина, метронидазола, цефотаксима и диоксидина в составе гидрогелей также свидетельствует низкое количественное со-держание активных субстанций в экстрактах гидрогелевых матриц (таблица 3).

Гидрогели с гентамицином и мирамисти-ном оставались бесцветными и прозрачны-ми после облучения ускоренными электро-нами. Данные гидрогелевые матрицы обла-дали эластичностью, прочностью, степенью набухания, характерными для данной лекар-ственной формы, что свидетельствует о фор-мировании трехмерной полимерной струк-туры гидрогелевой пластины. Стабильность гентамицина и мирамистина подтверждена результатами определения их концентра-

31


Таблица 2 – Значения МПК субстанций и их растворов после воздействия ионизирующего излучения поглощенной дозой 25±5 кГр

Наименованиетест-штамма

Наименование препарата МПК субстанции,

мкг/мл1 2 3 4

Pseudomonas aeruginosaATCC 9027

Левофлоксацин Субстанция до облучения 0,390Субстанция после облучения 0,390Раствор субстанции после облучения 0,780

Ципрофлоксацин Субстанция до облучения 0,195Субстанция после облучения 0,195Раствор субстанции после облучения 0,390

Гентамицин Субстанция до облучения 0,390Субстанция после облучения 0,390Раствор субстанции после облучения 0,780

Мирамистин Субстанция до облучения 6,250Субстанция после облучения 6,250Раствор субстанции после облучения 12,500

Staphylococcus aureus

АТСС 6538-Р

Левофлоксацин Субстанция до облучения 0,390Субстанция после облучения 0,390Раствор субстанции после облучения 0,780

Ципрофлоксацин Субстанция до облучения 0,195Субстанция после облучения 0,195Раствор субстанции после облучения 0,390

Гентамицин Субстанция до облучения 0,195Субстанция после облучения 0,195Раствор субстанции после облучения 0,390

Мирамистин Субстанция до облучения 3,125Субстанция после облучения 3,125Раствор субстанции после облучения 6,250

Таблица 3 – Физико-химические свойства гидрогелевых матриц, содержащих фармацевтические субстанции

Образец Описание рН Степень набухания,

г/г

Количественное содержание

действующего вещества, %

Гидрогелевые матрицы с левофлоксацином (0,5%)

Ярко-оранжевые, не эластичные

7,05 Не определялась 0,290 (57,9 %)

Гидрогелевые матрицы с ципрофлоксацином (0,2%)

Ярко-желтые, не эластичные

4,65 1,100,067 (33,5 %)

Гидрогелевые матрицы с метронидазолом (1,0%)

Желто-коричневые, не эластичные

6,30 Неопределялась 0,630 (63,0 %)

Гидрогелевые матрицы с гентамицином (0,1%)

Бесцветные, проз-рачные, эластичные

5,87 1,080,098 (98,0 %)

Гидрогелевые матрицы с мирамистином (0,05%)

Бесцветные, проз-рачные, эластичные

6,95 1,050,049 (98,0 %)

Гидрогелевые матрицы с цефотаксимом (0,5%)


5,25 Не определялась 0,326 (65,2 %)

Гидрогелевые матрицы с диоксидином (0,5%)


4,70 Неопределялась 0,285 (57,0 %)

32


ции в лекарственной форме. О сохранении структуры этих действующих веществ также свидетельствуют результаты спектрального анализа экстрактов гидрогелевых матриц, изложенные выше.

Методами ИК- и УФ-спектроскопии, ВЭЖХ и микробиологического анализа по-казано, что физико-химические и антими-кробные свойства субстанций, облученных поглощенной дозой 25±5 кГр в сухом виде, практически не изменяются. Однако, уста-новлено, что в водных растворах происходит деструкция данных субстанций в результа-те взаимодействия с продуктами радиолиза воды.

Растворы полимеров при включении в их состав левофлоксацина, ципрофлокса-цина, метронидазола, цефотаксима и диок-сидина под воздействием ионизирующего излучения не образовывали трехмерной по-лимерной структуры, так как органические фтор-, серосодержащие и нитросоединения с сопряженными двойными связями (рису-нок 1) являются эффективными акцептора-ми свободных радикалов и имеют высокую константу взаимодействия с продуктами радиолиза воды. Гидрогели, содержащие ве-щества аналогичной структуры, приобрета-ли окраску, у полученных матриц отсутство-вали эластичность и прочность, снижалась концентрация активных субстанций.

Таким образом, на основании получен-ных результатов исследования установле-на целесообразность включения в состав гидрогелевых матриц антибиотика группы аминогликозидов гентамицина и антисепти-ка широкого спектра действия мирамистина. Гидрогелевые матрицы с данными лекар-ственными средствами обладают необходи-мыми для данной лекарственной формы фи-зико-химическими свойствами: эластично-стью, прозрачностью, степенью набухания. Стабильность включенных в состав гидро-гелей гентамицина и мирамистина, доказан-ная выше, обеспечивает противомикробные и ранозаживляющие свойства матрицам.


1. Изучено влияние ионизирующего из-лучения поглощенной дозой 25±5 кГр на фармацевтические субстанции противоми-кробного действия в форме сухих порош-ков. С использованием ВЭЖХ, ИК-и УФ-спектроскопии показано сохранение струк-туры и физико-химических свойств ципроф-локсацина гидрохлорида, левофлоксацина гемигидрата, метро-нидазола, цефотаксима натрия, гентамицина сульфата, диоксидина, мирамистина.

2. Показано, что при воздействии иони-зирующего излучения на водные растворы исследуемых фармацевтических субстанций происходит изменение их физико-химиче-ских свойств: появление окраски, снижение количественного содержания действующих веществ, падение рН растворов.

3. Установлено, что после радиационной обработки сухих фармацевтических суб-станций их антимикробная активность не снижалась. Увеличение МПК растворов по-сле облучения свидетельствует о снижении биологической активности лекарственных средств, что обусловлено процессом радио-лиза.

4. Проведенный химико-фармацевти-ческий анализ показал, что исследованные органические фтор-, серосодержащие и ни-тросоединения с сопряженными двойными связями (левофлоксацин, ципрофлоксацин, метронидазол и др.) в составе гидрогелей под воздействием ионизирующего излуче-ния подвергаются деструкции и являют-ся ингибиторами процесса радиационного сшивания, в связи с чем не могут быть ис-пользованы в процессе получения данной лекарственной формы.

5. В качестве действующих веществ для включения в гидрогелевые полимерные ма-трицы выбраны антибиотик группы ами-ногликозидов гентамицин и антисептик из группы четвертичных аммониевых соедине-ний мирамистин. При воздействии ионизи-рующего излучения на растворы компонен-тов гидрогелевой матрицы с выше указанны-ми соединениями сохраняется их структура, физико-химические и антимикробные свой-ства, что доказано с использованием био-логических и инструментальных методов (ВЭЖХ, спектральный анализ).

SUMMARY

Y.G. Chаrnetskaya, P.T. PetrovINFLUENCE OF THE IONIZING RADIA-

TION ON PHYSICO-CHEMICAL AND ANTIMICROBIAL PROPERTIES OF

THE PHARMACEUTICAL SUBSTANCES USED FOR CREATION OF APPLICATED

MEDICAL PRODUCTS ON THE BASIS OF HYDROGEL MATRIXES

The stability of pharmaceutical substanc-es against the action of ionizing radiation was studied. It was established that the in uence of the absorbed dose of radiation 25±5 kGy on the substance in a dry state saved the structure, physico-chemical properties and antimicrobic activity of cipro oxacin hydrochloride, levo- oxacin hemihydrate, metronidazole, ucona-zole, cefotaxime sodium, dioxydine, myramist-

33


in and gentamycin sulfate. It was shown that the in uence of the ionizing radiation on the water solutions of substances at the speci ed dose leads to the destruction of active substances.

The stability of indicated above substances included in the structure of hydrogel of polymer matrixes was studied. Levo oxacin, cipro oxa-cin, metronidazole, uconazole, cefotaxime and dioxydine after the in uence to of the ionizing radiation interfered with the formation of three-dimensional polymeric structure of a matrix. The hydrogels became colored, lost their elas-ticity and solidity, the concentration of active substances decreased.

It was established that the aminoglycoside antibiotic gentamycin and antiseptic myramis-tin which relates to quarternary ammonium compounds were stable against the in uence of the ionizing radiation in the speci ed doses and can be used for production of hydrogel ma-trixes. Saving of structure and pharmaceutical properties of those compounds was proved with the use of physico-chemical and microbiologi-cal methods of the analysis.

Keywords: hydrogel matrix, ionizing radia-tion, absorbed dose of radiation, pharmaceutical substances, antimicrobial agents.


1. Противомикробное и ранозаживля-ющее средство на основе гидрогелевой по-лимерной матрицы: пат. 11060 Республика Беларусь: МПК (2006) А 61L 15/16/ Петров П.T. [и др.]; заявитель и патентооблада-тель РУП «Белмедпрепараты» (BY); заявл. 21.10.2005; опубл. 30.06.2007 // Афiцыйны бюл. / Нац. цэнтр iнтэлектуал. уласнасцi. – 2008. – № 4 (63). – С. 62.

2. Государственная фармакопея Ре-спублики Беларусь: офиц. издние / РУП «Центр экспертиз и испытаний в здраво-охранении»; ред. Г.В. Годовальников. – Минск: МГПТК полигра-фии, 2006. – Т. 1. – 656 с.

3. Лечение травматических дефектов мягких тканей конечностей с использовани-ем лекарственных форм на основе гидрогеля /А.В. Руцкий [и др.] // Здравоохранение. – 2007. - № 12. – С. 63-70.

4. Карман, А.Д. Лечение гнойных ран, рожистого воспаления с использованием «Гидрогелевых пластин мирамистина» / А.Д. Карман // Мед. журн. – 2007. – № 1. – С.

48-50. 5. Применение «Гидрогелевых пластин

гентамицина» в лечении рожистого воспа-ления и инфицированных ран / А.Д. Карман [и др.] // Мед. панорама. – 2007. – № 2. – С. 9-11.

6. Кабанов, В.Я. Получение полимерных биоматериалов с использованием радиаци-онно-химических методов/ В.Я. Кабанов // Успехи химии. – 1998. – Т 67, № 9. – С. 861 – 895.

7. Rosiak, J. Polyacrylamide hydrogels as sustained release drug delivery dressing materials / J. Rosiak, K. Burozak, W. Pekala // Radiat. Phys. Chem. – 1983. – Vol. 22, № 3-5. – Р. 907 – 915.

8. Radiation crosslinked hydrogels as sustained release drug delivery systems / W. Pekala [et al.] // Radiat. Phys. Chem. – 1986. – Vol. 27, № 4. – Р. 275 – 285.

9. Противомикробная активность новых лекарственных средств на основе гидрогеле-вых полимерных матриц / Ю.Г. Чернецкая [и др.] // Вестник фармации – 2009. – № 3. – С. 63 – 75.

10. Разработка и валидация методики определения мирамистина в гидрогелевых полимерных матрицах с использованием вы-сокоэффективной жидкостной хроматогра-фии / Ю.Г.Чернецкая [и др.] // Вестник фар-мации – 2010. – № 3. – С. 67 – 77.

11. Методы определения чувствительно-сти микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Инструкция по применению.- Минск: ГУ «Республиканский центр гигие-ны, эпидемиологии и общественного здоро-вья» МЗ РБ, 2009. – 83 с.

12. Тагер, А.А. Физико-химия полиме-ров / А.А. Тагер. – М.: Химия, 1968. – 536 с.

13. Пикаев, А.К. Современная радиаци-онная химия. Радиолиз газов и жидкостей / А.К. Пикаев. – М.: Наука, 1986. – 440 с.

14. Шарпатый, В.А. Радиационная хи-мия биополимеров / В.А. Шарпатый. - М.: Энергоиздат, 1981. – 168 с.


220007, Республика Беларусь,г. Минск, ул. Фабрициуса, 30,РУП «Белмедпрепараты»,тел./факс 8(017)220 31 42,e-mail: [email protected]Чернецкая Ю.Г.


34


В.В. Горбатов, А.И. Сачук

КОМПЛЕКСООБРАЗОВАНИЕ ЭЛЕМЕНТООРГАНИЧЕСКИХ ПЕРОКСИДОВ С МОЧЕВИНАМИ


В работе проведено исследование термохимии растворов элементоорганических пе-роксидов с мочевинами. Установлено, что элементоорганические пероксиды с мочеви-нами образуют донорно-акцепторные комплексы состава 1:1. Прочность комплексов возрастает с увеличением электронодонорной способности замещенной мочевины и электроноакцепторной способности пероксида.

Ключевые слова: элементоорганические пероксиды, мочевины, комплексы.

ВВЕДЕНИЕ

Элементоорганические пероксиды (ЭОП) подгруппы кремния являются перспективны-ми инициаторами радикальной полимериза-ции виниловых мономеров [1]. Электронодо-норные добавки ускоряют термораспад ЭОП подгруппы кремния. При этом первичной ста-дией термораспада пероксидов является реак-ция комплексообразования пероксидов с элек-тронодонорами [2], в том числе с мочевинами [3]. Для подтверждения первичной стадии комплексообразования пероксида с электроно-донором и более детального выяснения меха-низма комплексообразования в системе перок-сид-электронодонор было проведено термохи-мическое изучение растворов ЭОП подгруппы кремния с мочевинами.

Целью данной работы является термохи-мическое исследование комплексообразова-ния в системе ЭОП-мочевина, определение состава и констант устойчивости комплек-сов, природы химической связи в них, выяв-ление влияния природы пероксида и мочеви-ны на комплексообразующую способность ЭОП.


Термохимию растворов ЭОП с мочеви-нами изучали на примере несимметричных ЭОП подгруппы кремния (таблица 1) с раз-личными гетероатомами в молекуле перок-сидного соединения.

Пероксиды получали и очищали по из-вестной методике [1]. Все пероксиды пред-ставляли собой бесцветные жидкости, устой-чивые при обычных условиях в течение дли-тельного времени. Содержание основного вещества в них составляло не менее 99,8%.

В качестве мочевин использовали неза-мещенную мочевину, фенилмочевину, бен-зилмочевину, 1,3-дифенилмочевину, метил-мочевину, этилмочевину, пропилмочевину, бутилмочевину и неопентилмочевину (та-блица 2).

Растворителем являлся диглим, который очищали по методике [4]. Твердые замещен-ные мочевины и карбамид очищали много-кратной перекристаллизацией из абсолют-ного этанола до содержания основного ве-щества 99,8%.

Энтальпии смешения растворов пе-роксидов с добавками мочевин в диглиме определяли калориметрическим методом при 298 К по описанной методике [5]. При таких условиях исследованные вещества длительное время не претерпевали замет-ных изменений. Разность температуры ка-лориметра за время опыта определяли при помощи термометра Бекмана.

Значение постоянной калориметра и теплоемкости раствора определяли путем расчета по аддитивной схеме. По рассчи-танной теплоемкости системы и изменению температуры за время опыта рассчитывали энтальпии смешения компонентов реакци-онной смеси, при этом изменение энтальпий смешения проводилось при различных мо-лярных соотношениях исходных веществ.


Калориметрическим методом в адиа-батическом калориметре были определены энтальпии смешения растворов пероксидов (I-III) в диглиме с изученными мочевинами при 298 К (таблица 3).

Как следует из таблицы 3, энтальпии смешения ЭОП подгруппы кремния со все-ми изученными мочевинами отрицательны во всей области концентраций растворов, то есть при смешивании пероксида и моче-вины, растворенных в диглиме, тепло выде-лялось. При этом максимальное выделение тепла соответствует мольному соотноше-нию пероксид: мочевина, равному 1:1, что свидетельствует об образовании комплекса состава 1:1.

По полученным значениям энтальпий смешения растворов пероксидов (I-III) с мочевинами при различных соотношениях

35


Вещество Структурная формула1. Триметил (трет.бутилперокси) кремния (I)

Si O O C CH3

CH3

CH3H3C

H3C

H3C

2. Триметил (трет.бутилперокси) германия (II)

Ge O O C CH3

CH3

CH3H3C

H3C

H3C

3. Триэтил (трет.бутилперокси) олова(III) H5C2Sn-O-O-C CH3

CH3

CH3

H5C2

H5C2

Таблица 1 – Исследованные элементоорганические пероксиды

Вещество Структурная формула1. Мочевина

CO

NH2

NH22. Фенилмочевина

CO

NH2

NH-C6H53. Бензилмочевина

CO

NH2

NH-CH2-C6H54. 1,3-Дифенилмочевина

CO

NH-C6H5

NH-C6H5

5. Алкилмочевины

CO

NH2

NH-Rгде R=СН3, С2Н5, С3Н7, С4Н9, СН2С(СН3)3

Таблица 2 – Исследованные мочевины

36

компонентов по методу [5] рассчитаны тер-модинамические параметры комплексообра-зования ЭОП с мочевинами, которые при-ведены в таблице 4 для оловоорганического пероксида с алкилмочевинами и бензилмо-чевиной при 298 К. При этом учитывались энтальпии физического смешения компо-нентов с диглимом.

Из таблицы 4 следует, что в присуствии алкилмочевин абсолютные значения Кс и ΔН° увеличиваются в следующем ряду ради-калов R: СН3, С2Н5, С3Н7, С4Н9, СН2С(СН3)3. В этом же ряду уменьшалась алгебраическая величина индукционных констант Тафта алифатических радикалов σ* [6]. Комплек-сообразование (С2Н5)3SnOOC(CH3)3 в дигли-ме в присутствии алкилмочевин и бензилмо-чевины описывалось корреляционным урав-нением Тафта [6]:

Кс, iLg ---------- = ρ * σ* (1) Кс, огде Кс, i и Кс, о – константы устойчиво-

сти комплекса оловоорганического перок-


сида с алкилмочевиной и метилмочевиной, соответственно (таблица 4), ρ – константа реакции.

Численное значение константы реак-ции ρ рассчитывали по уравнению Тафта с использованием данных таблицы 4 и для (С2Н5)3SnOOC(CH3)3 ρ = -1,1. Аналогично, используя значения Кс комплексообра-зования пероксидов (I-III) с алкилмоче-винами, рассчитали константы реакции ρ для германийорганического и кремний-органического пероксидов. Для перок-сида (CH3)3GeOOC(CH3)3 ρ = - 0,81, а для (CH3)3SiOOC(CH3)3 ρ = - 0,72. Отрицатель-ное значение константы реакции ρ показы-вало, что при образовании комплекса про-исходил перенос электронной плотности от алкилмочевины (или бензилмочевины) к молекуле пероксида, причем этот пере-нос электронной плотности тем больше, чем выше электронодонорная способность замещенной мочевины. При этом необхо-димо отметить, что введение электронодо-норных заместителей в молекулу мочеви-

Мочевина Содержание мочевины (моль %) в смеси пероксид-мочевина20 35 50 65 80

(CH3)3SiOOC(CH3)3

1,3-дифенилмочевина -450 -680 -800 -760 -500Фенилмочевина -480 -740 -890 -800 -530Бензилмочевина -590 -840 -980 -900 -600Мочевина -690 -1020 -1190 -1030 -730Этилмочевина -770 -1100 -1280 -1120 -800Бутилмочевина -800 -1150 -1330 -1180 -840

(CH3)3GeOOC(CH3)3

1,3-дифенилмочевина -460 -700 -830 -780 -520Фенилмочевина -500 -770 -920 -820 -550Бензилмочевина -610 -880 -1050 -950 -640Мочевина -720 -1080 -1280 -1100 -760Этилмочевина -800 -1180 -1390 -1220 -850Бутилмочевина -840 -1250 -1450 -1290 -880

(С2Н5)3SnOOC(CH3)3

1,3-дифенилмочевина -430 -790 -1010 -800 -520Фенилмочевина -620 -980 -1220 -1020 -720Бензилмочевина -990 -1480 -1800 -1510 -1010Мочевина -1510 -2410 -2800 -2420 -1580Метилмочевина -1560 -2490 -2900 -2500 -1610Этилмочевина -1870 -2800 -3300 -2930 -2010Пропилмочевина -2000 -2980 -3400 -3180 -2220Бутилмочевина -2180 -3130 -3600 -3320 -2400Неопентилмочевина -2580 -3510 -3900 -3620 -2780

Таблица 3 – Энтальпии смешения ΔН (Дж/моль смеси) пероксидов (I-III) в диглиме с мочевинами при различном соотношении компонентов (моль %) при 298 К

37


ны увеличивало абсолютные значения Кс и ΔН° (таблица 4), то есть увеличивало проч-ность комплекса пероксида с замещенной мочевиной, а введение электроноакцеп-торного бензильного радикала в молекулу мочевины уменьшало прочность комплек-са. Комплексообразующая способность с алкилмочевинами уменьшалась в ряду пе-роксидов: III, II, I.

Из таблицы 4 следует, что существует

линейная зависимость между термодина-мическими параметрами ΔН° и ΔS° реакции комплексообразования пероксида с электро-нодонором. Физический смысл корреляции ΔН° и ΔS° состоит в том, что чем прочнее межмолекулярная связь в комплексе (то есть чем больше абсолютное значение ΔН°), тем больше степеней свободы теряет система при комплексообразовании (то есть больше абсолютное значение ΔS°).

Таблица 4 – Константы Тафта (σ*) и термодинамические параметры комплексообразования (С2Н5)3SnOOC(CH3)3 с алкилмочевинами и бензилмочевиной в диглиме при 2980 К

Мочевина Кс, л/моль

-ΔG°, кДж/моль

-ΔН°, кДж/моль

-ΔS°, кДж/моль*К

σ*

Бензилмочевина 2,74 2,50 2,97 1,58 +0,215Метилмочевина 4,73 3,83 4,56 2,45 0,000Этилмочевина 6,10 4,48 5,33 2,85 -0,100Пропилмочевина 6,33 4,57 5,44 2,92 -0,115Бутилмочевина 6,57 4,66 5,54 2,95 -0,130Неопентилмочевина 7,18 4,88 5,80 3,09 -0,165


Установлено, что элементоорганические пероксиды подгруппы кремния с мочеви-нами образуют донорно-акцепторные ком-плексы состава 1:1.

Прочность комплексов возрастает с уве-личением электронодонорной способности замещенной мочевины и электроноакцеп-торной способности пероксида.

SUMMARY

V.V. Gorbatov, A.I. SachukTHE COMPLEX FORMATION

OF ELEMENT-ORGANIC PEROXIDES WITH UREAS

The research of thermochemistry of solutions of element-organic peroxides with ureas is con-ducted. It is installed that element-organic perox-ides with ureas make donor-acceptor complexes of composition 1:1. Durability of complexes in-creases with electronicdonors property of ureas and electronicacceptors property of peroxide.

Keywords: element-organic peroxides, ure-as, complexes.


1. Александров, Ю.А. Элементоорга-нические пероксидные инициаторы / Ю.А. Александров, Б.В. Сульдин // Труды по хи-

мии и химической технологии. – Горький. – 1965. – №3. – С. 228-231.

2. Горбатов, В.В. Разложение кремний-органических пероксидов в присутствии электронодоноров / В.В. Горбатов, Н.В. Яблокова // Химия элементоорганических соединений. – 1976. -№4. – С. 59-61.

3. Горбатов, В.В. Термораспад элемен-тоорганических пероксидов в присутствии мочевины / В.В. Горбатов, Э.Я. Морозова, А.И. Сачук // Вестник фармации. – 2010. - №1 (47). – С. 61-68.

4. Вайсбергер, А. Органические раство-рители / А. Вайсбергер, Э. Проскауэр, Э. Тупс. – М.: И. Л, 1958. – 549 с.

5. Николаев, П.Н. Энтальпии смешения двухкомпонентных систем / П.Н. Николаев, И.Б. Рабинович // Труды по химии и химической тех-нологии. – Горький. – 1961. - №2. – С. 242-245.

6. Денисов, Е.Т. Кинетика гомогенных химических реакций / Е.Т. Денисов. – М.: Высшая школа, 1978. – С. 136-139.Адрес для корреспонденции:

210023, Республика Беларусь,г. Витебск, пр. Фрунзе, 27, Витебский государственный медицинский университет,кафедра общей, физической и коллоидной химии,тел. раб.: 8(0212) 37-23-24,Горбатов В.В.


38


Е.В. Кравченко, Е.В. Машко, А.А. Квасюк, П.В. Курман, П.С. Шабуня,С.А. Фатыхова, П.Т. Петров, Д.И. Демид, О.А. Казючиц

СТАНДАРТИЗАЦИЯ МНОГОКОМПОНЕНТНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА «РАЦИУМ» И БАД «МЕНТУМ» ПО ПОКАЗАТЕЛЮ КАЧЕСТВА

«ПОДЛИННОСТЬ»

Государственное учреждение «Научно-производственный центр «Институт фармакологии и биохимии Национальной академии наук Беларуси»,

г. Минск

Разработаны методики определения качества многокомпонентного лекарственно-го средства «Рациум» и БАД «Ментум» на основе лекарственного растительного сырья (ЛРС) по показателю «Подлинность». Установлено соответствие капсул «Рациум» и «Ментум», полученных в лабораторных условиях и в условиях промышленного произ-водства, требованиям нормативной документации.

Ключевые слова: лекарственное средство «Рациум», БАД «Ментум», мелисса лекарственная, валериана лекарственная, мята перечная, зверобой продырявленный, БАВ, подлинность.

ВВЕДЕНИЕ

Глобальные эпидемиологические иссле-дования, проводимые Всемирной организа-цией здравоохранения (ВОЗ) и исследования в отдельных странах показывают, что нерв-но-психические расстройства (в т. ч. паниче-ские, генерализованные тревожные и обсес-сивно-компульсивные расстройства) в тече-ние жизни переносит значительная часть на-селения, причем подавляющее большинство случаев остается недиагностированным и нелеченным [1]. Согласно расчетам ВОЗ, в конкретный момент времени ментальные и поведенческие нарушения отмечаются у 10 % населения в целом и у около 20% в пер-вичном звене оказания медицинской помо-щи [1].

Лечение нервно-психических рас-стройств, как правило, длительное, поэтому особое значение имеют безопасность и пе-реносимость применяемых лекарственных средств. Известно, что длительное приме-нение психотропных средств седативного и анксиолитического действия сопровождает-ся развитием выраженных побочных явле-ний, формированием синдрома зависимо-сти. Фармацевтические продукты, получен-ные из лекарственного растительного сырья, достаточно эффективны и характеризуются высокой безопасностью, чем и объясняется их востребованность: согласно данным ВОЗ, предпочтение лекарственным средствам рас-тительного происхождения отдают до 80% населения планеты [2]. В связи с этим все большую роль приобретают лекарственные средства и БАД, регулирующие процессы торможения центральной нервной системы (ЦНС), на основе традиционно применяемо-го растительного сырья (мелисса лекарствен-

ная (Melissa of cinalis), валериана (Valeriana of cinalis), мята перечная (Mentha piperita), зверобой (Hypericum perforatum) и др.).

Идентификация отдельных компонентов комплексных лекарственных средств и БАД на основе растительного сырья является не-простой задачей, так как растительное сырье содержит значительное число различных по химической природе активно действующих веществ в невысоких концентрациях.

Обеспечение качества лекарственных средств в соответствии с принципами GMP [3] является важной и актуальной задачей. При определении характеристики «Подлин-ность» препаратов на основе лекарственного растительного сырья (ЛРС) целесообразно использование всего комплекса методов, ре-комендованных Государственной фармако-пеей Республики Беларусь (ГФ РБ), а также зарубежными фармакопеями (USP, BP и др.): физических (микроскопический анализ, спектрофотометрия), химических (спец-ифические химические реакции) и физико-химических (тонкослойная хроматография (ТСХ), высокоэффективная жидкостная хро-матография (ВЭЖХ)) [4-7].

Установление подлинности того или иного вида растительного компонента в ле-карственных средствах и БАД связывают с наличием как специфических индивидуаль-ных веществ, так и групп соединений [7].

Для валерианы лекарственной харак-терны сесквитерпеновые соединения (вале-реновая, ацетоксивалереновая кислоты [8], валеренал, валеранон), а также валепотриа-ты и алкалоиды (валерин, хотенин) [9]. В со-став мелиссы лекарственной входят: эфир-ное масло (0,06-1%), включающее цитраль (до 62%), гераниол, линалоол, кариофиллен, альдегиды монотерпеноидов, полифеноль-

39


ные соединения, флавоноиды и др. [10-12]. Листья мяты перечной содержат до 3% эфирного масла, в том числе - l-ментол (до 65%), а также ментилацетат, пинен, лимо-нен, цинеол, пулегон, жасмон и другие моно-циклические терпены, флавоноиды и др. [13, 14]. Основными действующими веществами зверобоя являются гиперицин, гиперфорин, псевдогиперицин, кверцетин, эфирные мас-ла и ксантоны [15-17].

В государственном учреждении «Науч-но-производственный центр «Институт фар-макологии и биохимии Национальной акаде-мии наук Беларуси» (ИФБ НАН Беларуси) разработаны отечественное лекарственное средство «Рациум», содержащее порошок корневищ с корнями валерианы лекарствен-ной, порошок листьев мяты перечной, по-рошок травы мелиссы лекарственной и био-логически активная добавка к пище (БАД) «Ментум», содержащая порошок корневищ с корнями валерианы лекарственной, поро-шок листьев мяты перечной, порошок травы мелиссы, порошок травы зверобоя. Качество названного лекарственного средства и БАД нормируется по проекту ФСП РБ «Рациум, капсулы в контурной ячейковой упаковке №21×2» и ТУ BY 500043647.003-2010 «До-бавка биологически активная к пище «Мен-тум», соответственно.

В нашей стране не разработана нор-мативная документация на лекарственные средства и БАД, в состав которых входит совместно ЛРС валерианы, мяты, мелиссы либо названных компонентов и зверобоя. Не решены вопросы использования ТСХ и ВЭЖХ, УФ-спектрофотометрии для стан-дартизации лекарственных средств и БАД соответствующего состава.

Задача исследования - разработать мето-дики стандартизации лекарственного сред-ства «Рациум», капсулы в контурной ячей-ковой упаковке №21×2» (далее по тексту «Рациум») и БАД «Добавка биологически активная к пище «Ментум» (далее по тексту «Ментум») по показателю «Подлинность», а также провести оценку качества лекарствен-ного средства и БАД.


В исследованиях использовали твер-дые желатиновые капсулы «Рациум» (0,4 г) с.030610, 040810, наработанные в Экспери-ментально-внедренческом отделе ИФБ НАН Беларуси, и с. 011210, 021210, полученные в ГП «Академфарм» ИФБ НАН Белару-си, а также твердые желатиновые капсулы «Ментум» (0,4 г) с. 010110, 020110, 011210, 021210, 031210, наработанные в Экспери-

ментально-внедренческом отделе ИФБ НАН Беларуси.

При разработке методов контроля по показателю «Подлинность» за основу были взяты методики частных фармакопейных статей, представленные в Государственной фармакопее Республики Беларусь (ГФ РБ, т. 2, разделы: «Валерианы корневища с кор-нями», «Зверобоя трава», «Мелиссы трава», «Мяты перечной листья», т. 3, раздел: «Ва-лерианы корневища с корнями»), а также методы фармацевтического анализа, описан-ные в доступной научной литературе для со-ответствующего ЛРС [4, 18-23]. Определяли БАВ, входящие в состав «Рациум» и «Мен-тум» (валереновая кислота [24], ацетоксива-лереновая кислота [4], цитраль [25], ментол [4], цинеол [26], карвон [27], ментилацетат [4], флавоноиды [4]) и другие БАВ, для ко-торых показана противотревожная, антиде-прессантная активность.

Для проведения анализа использованы методы спектрофотометрии, ТСХ и ВЭЖХ в соответствии с требованиями ГФ РБ (т. 1; пп. 2.2.25; 2.2.27; 2.2.29) [4]. Хроматографию в тонком слое сорбента осуществляли на пла-стинках «Alugram». УФ-спектрофотометрию проводили на приборе «Agilent 8453 UV-Vis», ВЭЖХ – на приборе «Agilent 1200 с диодно-матричным детектором».

В исследованиях использовали стан-дартные образцы (СО): цитраль (Aldrich, lot.: S28189-459), ментол (Sigma-Aldrich, lot.: 05617MH), цинеол (Aldrich, lot.: 1398664 20509122), тимол (AppliChem, lot.: 9O007867), ментилацетат (Fluca, lot.: 1433603 33109097), валереновая кислота (Fluka, lot.: ВСВС1897V), ацетоксивалерено-вая кислота (Chromadex, lot.: 00001090-10А).


Лекарственное средство «Рациум» и БАД «Ментум» относятся к числу много-компонентных средств, что предполагает подтверждение наличия целого ряда индика-торных БАВ.

Для идентификации валерианы лекар-ственной в лекарственном средстве «Раци-ум» выбран метод ВЭЖХ. За основу при-нята методика, рекомендуемая ГФ РБ для определения сесквитерпеновых кислот (ва-лереновая, ацетоксивалереновая кислоты) в сырье валерианы (корневищах и корнях) [4]. С учетом того, что предлагаемый в ГФ РБ метод для анализа ЛРС валерианы требует использования фармакопейного СО экстрак-та валерианы, который не доступен отече-ственному фармпроизводителю по причи-нам коммерческого характера, использова-

40


ли СО веществ-свидетелей: валереновой и ацетоксивалереновой кислот. Определение сесквитерпеновых кислот проводили, по-переменно хроматографируя на жидкостном хроматографе со спектрофотометрическим детектором метанольный экстракт содержи-мого капсулы «Рациум» и растворы СО вале-реновой кислоты (50 мкг/мл) и ацетоксива-лереновой кислоты (50 мкг/мл) в метаноле, получая не менее трех хроматограмм для каждого из растворов. Использовали колон-ку длиной 0,25 м, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненную силикагелем октадецил-силильным для хроматографии с размером частиц 3,5 мкм. Скорость подвижной фазы составляла 1,25 мл/мин. Детектирование осуществлялось при длине волны 220 нм. В качестве подвижной фазы А служил аце-тонитрил-раствор 5 г/л фосфорной кислоты (20:80, об/об), подвижной фазы В – раствор 5 г/л фосфорной кислоты-ацетонитрил (20:80, об/об) (таблица 1).

Пригодность хроматографической си-стемы определяли по хроматограмме раство-ра сравнения: коэффициент асимметрии для пиков валереновой и ацетоксивалереновой кислот составлял не более 2, относительное стандартное отклонение для площадей пи-ков валереновой и ацетоксивалереновой кис-лот – не более 2%, разрешение между пика-ми валереновой и ацетоксивалереновой кис-лот – не менее 7. Для идентификации пиков валереновой и ацетоксивалереновой кислот использовали полученные хроматограммы растворов сравнения (рисунки 1А, 1Б).

Определение БАВ листьев мяты (мен-тол, цинеол, ментилацетат) в лекарственном средстве «Рациум» и травы мелиссы (ци-траль) проведено методом ТСХ (ГФ РБ, п. 2.2.27), рекомендованным ГФ РБ для иден-тификации соответствующего ЛРС [4].

Обнаружение БАВ мяты перечной про-водили согласно методике, описанной в ГФ РБ в разделе «Мяты перечной листья» [4]. Хроматографию проводили в системе рас-творителей этилацетат-толуол (5:95). Объ-емы наносимых проб: 10 мкл раствора сравнения и 20 мкл испытуемого раствора. Пластинку опрыскивали раствором анисо-вого альдегида и нагревали при температу-ре от 100ºС до 105ºС в течение 5-10 минут. Хроматограмму просматривали в видимом

и УФ-свете при длине волны 254 нм. На хроматограмме в УФ-свете обнаруживалась слабая зона поглощения (карвон, пулегон, на рисунке 2А отмечена прерывистой линией), расположенная немного ниже зоны тимола (Rf – 0,62±0,04) на хроматограмме раство-ра сравнения. При просмотре при дневном свете на хроматограмме испытуемого рас-твора обнаруживались в нижней трети зона от темно-синего до фиолетового цвета, со-ответствующая ментолу (Rf – 0,28±0,04), слабая зона от фиолетово-синего до корич-невого цвета, соответствующая цинеолу (Rf – 0,41±0,06), далее – зона синевато-фиолето-вого цвета, соответствующая ментилацетату (Rf - 0,78±0,03) (рисунок 2А).

Обнаружение БАВ мелиссы в лекар-ственном средстве «Рациум» осуществляли, используя эфирное масло, полученное в со-ответствии с требованиями ГФ РБ (раздел «Мелиссы трава») [4]. Хроматографию про-водили в системе растворителей этилацетат-гексан (10:90). Объемы наносимых проб - 10 мкл раствора сравнения и 30 мкл испытуемо-го раствора. Пластинку опрыскивали раство-ром анисового альдегида и нагревали при температуре от 100ºС до 105ºС в течение 10 минут. Просматривали хроматограмму при дневном свете. На хроматограмме испытуе-мого раствора обнаруживалась двойная зона серовато-фиолетового цвета (Rf - 0,47±0,02), соответствующая двойной зоне цитраля на хроматограмме раствора сравнения. Выше зоны цитраля обнаруживалась зона красно-вато-фиолетового цвета, соответствующая эпоксикариофиллену (Rf - 0,59±0,03) (рису-нок 2Б).

Для идентификации валереновой кисло-ты в БАД «Ментум», содержащейся в ЛРС валерианы, оптимальным представляется использование описанного в литературе метода ТСХ [3], не требующего дорогосто-ящего оборудования и реактивов, характе-ризующегося точностью и воспроизводи-мостью. Содержимое капсул обрабатывали 70% спиртом, хроматографию осуществляли в системе растворителей ацетон-гексан (1:2). После обработки хроматограммы реагентом - раствором ванилина в серной кислоте - четко видна зона малинового цвета в форме «шапочки» с Rf - 0,46 - 0,54, которая соот-ветствует валереновой кислоте [7].

Таблица 1 – Условия для подвижной фазы хроматографирования при оценке качества лекарственного средства «Рациум» методом ВЭЖХ

Время (мин) Подвижная фаза А (%, об/об) Подвижная фаза В (%, об/об)0-5

5-1818-20

5555→20

20

4545→80

80

41


Дополнительным показателем подлин-ности БАД «Ментум» является подтвержде-ние наличия в ней валепотриатов. На основа-нии литературных данных для идентифика-ции указанных соединений выбрана цветная качественная реакция со смесью кислоты хлористоводородной (концентрированной) и кислоты уксусной безводной (36:25) с об-разованием пирилиевой соли валтрата (по-является желто-зеленое окрашивание, по-степенно переходящее в интенсивно-синее) [22].

Кроме того, оценку показателя «Под-линность» для БАД «Ментум» на наличие

А

Б

А. – Определение сесквитерпеновых кислот в лекарственном средстве «Рациум» (с. 021210), 220 нм:

1 – ацетоксивалереновая кислота (12,659 мин), 2 – валереновая кислота (20,835мин).Б. – Хроматограмма, полученная для стандартных образцов веществ-свидетелей:

1 – ацетоксивалереновая кислота, 2 – валереновая кислота.

Рисунок 1 – Оценка качества лекарственного средства «Рациум» по показателю «Подлинность»

БАВ мелиссы, мяты и зверобоя проводили по наличию фенольных соединений – ги-дроксикоричных кислот. С учетом того, что в состав БАД входят мелисса и мята, содер-жащие розмариновую кислоту, для их иден-тификации использовали методику, рекомен-дованную ГФ РБ (п. 2.2.25) [4]. УФ-спектр водно-спиртового извлечения содержимого капсул «Ментум» (1:20 000) имеет характер-ные максимумы поглощения при длинах волн 280 ± 5 нм и 326 ± 2 нм. При этом максимум поглощения λmax = 326 ± 2 нм соответствует розмариновой кислоте – доминирующему фе-нилпропаноиду мяты и мелиссы (рисунок 3).

42

Оценка показателя «Подлинность» для капсул «Рациум» с. 030610, 040810, 011210, 021210 и «Ментум» с. 010110, 020110, 011210, 021210, 031210, проведенная в От-деле поведенческой фармакологии, Лабора-тории физико-химических исследований и

Лаборатории фармацевтических испытаний ИФБ НАН Беларуси с использованием при-веденных выше методик, подтвердила соот-ветствие качества названных лекарственных средств и БАД требованиям нормативно-технической документации.

А. – Наличие БАВ мяты перечной: 1 – «Рациум» (с. 011210). 2 – CО: ментол (а), цинеол (б), тимол (в), ментилацетат (г).

Б. – Наличие БАВ мелиссы: 1 – «Рациум» (с. 021210). Эпоксикариофиллен (д). 2 – СО – цитраль (е).

Рисунок 2 – Последовательность зон на хроматограммах ТСХ извлечений из лекарственного средства «Рациум»


Рисунок 3 – УФ-спектр водно-спиртового раствора, полученного при анализе капсул БАД Ментум» (c. 010110)

43


На основании полученных данных раз-дел «Спецификация» проекта ФСП РБ «Ра-циум, капсулы в контурной ячейковой упа-ковке №21×2» «Подлинность» изложен в следующей редакции: «Кислота валерено-вая: на хроматограмме испытуемого раство-ра, полученной при количественном опреде-лении, время удерживания пика валереновой кислоты должно соответствовать времени удерживания основного пика на хромато-грамме раствора РСО валереновой кислоты. Цитраль: на хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться двойная зона от серовато – фиолетового до синева-то – фиолетового цвета, соответствующая зоне цитраля. Биологически активные веще-ства порошка листьев мяты: при просмотре в ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм на хроматограмме должна обнаружи-ваться слабая зона поглощения, расположен-ная немного ниже зоны тимола на растворе сравнения, на хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться: в нижней трети зона от темно – синего до фиолетово-го цвета, соответствующая ментолу, слабая зона от фиолетово – синего до коричневого цвета, соответствующая цинеолу; в средней части хроматограммы - зона синевато - фи-олетового цвета, соответствующая ментила-цетату». Раздел «Физико-химические пока-затели» TУ BY 500043647.003-2010 «Добав-ка биологически активная к пище «Ментум» содержит следующие требования: «Наличие кислоты валереновой должно подтверждать-ся характерной реакцией на кислоту валере-новую, валепотриатов - качественной реак-цией на валепотриаты, флавоноидов -харак-терной реакцией на флавоноиды» [28].

ВЫВОДЫ

Разработаны методики определения ка-чества многокомпонентного лекарственного средства и БАД на основе ЛРС – лекарствен-ного средства «Рациум» и БАД «Ментум» - по показателю «Подлинность».

В раздел «Подлинность» проекта ФСП РБ «Рациум, капсулы в контурной ячейко-вой упаковке №21×2» включены следующие наименования показателей: «Определение наличия кислоты валереновой», «Наличие цитраля», «Наличие биологически активных веществ листьев мяты». В соответствии с ТУ BY 500043647.003-2010 «Добавка био-логически активная к пище «Ментум» (фи-зико-химические показатели) качество на-званной БАД нормируется по следующим показателям: «Наличие кислоты валерено-вой», «Наличие валепотриатов», «Наличие флавоноидов».

Установлено, что сопутствующие БАВ и вспомогательные вещества, присутству-ющие в лекарственном средстве и БАД, не препятствуют идентификации индикатор-ных соединений валерианы, мяты, мелиссы, зверобоя.

При оценке капсул «Рациум» с. 030610, 040810, 011210, 021210 и «Ментум» с. 010110, 020110, 011210, 021210, 031210 установлено их соответствие показателям качества, регламентируемым проектом ФСП РБ «Рациум, капсулы в контурной ячейковой упаковке №21×2» и ТУ BY 500043647.003-2010 «Добавка биологически активная к пище «Ментум» соответственно.

SUMMARY

E.V. Кravchenko, E.V. Mashko, А.А. Kvаsyuk, P.V. Kurman, P.S. Shabunya,

S.А. Fatykhova, P.T. Petrov, D.I. Demid, O.A.Kazyuchits

STANDARDIZATION OF MULTICOMPONENT DRUG «RATSIUM» AND NUTRACEUTICAL «MENTUM» BY

QUALITY INDEX «IDENTITI»We have developed the methods of

determining the quality of multicomponent pharmaceutical products based on medicinal plant material (drug «Ratsium» and nutraceu-tical «Mentum») by «Identiti» index. The cor-respondence of the capsules «Ratsium» and «Mentum», obtained in the laboratory and in industrial production, to the requirements of regulatory documents has been established. We have established that the «Ratsium» and «Mentum» capsules produced in laboratory and industrial conditions meet the regulatory requirements.

Keywords: drug «Ratsium», nutraceutical «Mentum», melissa of cinalis, valeriana of ci-nalis, mentha piperita, hypericum perforatum, biologically active substances, identity.


1. Ушкалова, А. В. Эффективность и без-опасность антидепрессивных и седативных средств растительного происхождения / А.В. Ушкалова, Т.С. Илларионова // Фарматека. – 2007. – № 20. – С. 10.

2. Вознесенская, Т.Г. Эмоциональный стресс и профилактика его последствий / Т.Г. Вознесенская // РМЖ. – 2006. – Т. 14, – №9. – С. – 694–697.

3. Пятигорская, Н. В. GMP для произ-водства лекарственных препаратов из расти-тельного сырья / Н. В. Пятигорская // Фарма-ция. – 2010. – №4. – С. 34 – 37.

4. Государственная фармакопея Респу-

44


блики Беларусь // Ред. Годовальников Г.В. 1-3 тт. Молодечно. 2009.

5. United States Pharmacopоeia. – 31–th Ed. – Rockville: United States Pharmacopeial Convention, Inc. 2008. – 2105 p.

6. British Pharmacopoeia 2007 Incorporat-ing the Requirements of the 5 Edition of the European Pharmacopoeia 1997 as amended by Supplement 2007. – System Simulation Ltd., 2007. – 1680 p.

7. Определение показателя качества «Подлинность» в процессе стандартизации многокомпонентных лекарственных фито-препаратов / Л. Н. Дунец [и др.] // Молеку-лярно–биологические и физико–химические методы идентификации биологических объ-ектов и материалов различного происхож-дения. Материалы ІІ Республиканской на-учно–практической конференции. – Минск. – 2003. – С. 174-180.

8. Yuan, C.S. The gamma–aminobutyric acidergic effects of valerian and valerenic acid on rat brainstem neuronal activity / C S. Yuan [et al.] // Anesth Analg. – 2004. – Vol. 98, – №2. – P. 353-358.

9. Национальный нтернет–портал Ре-спублики Беларусь [Электронный ресурс] / Электронный справочник лекарственных средств Видаль / – Режим доступа: http://www.vidal.kz/poisk_preparatov/valerianae–extract_16991.htm – Дата доступа: 2.12.2010.

10. Akhondzadeh, S. Melissa of cinalis extract in the treatment of patients with mild to moderate Alzheimer´s disease: a double blind, randomized, placebo controlled trial / S. Akhondzadeh [et al.] // Jornal Neurol Neurosurg Psychiatry. – 2003. – Vol. 74, – №7, – P. 863–866.

11. Carnat, AP. The aromatic and polyphe-nolic composition of lemon balm (Melissa of- cinalis L. subsp. Of cinalis) tea / AP. Carnat [et al.] // Pharm Acta Helvetiae. – 1998. – Vol. 72. – P. 301–305.

12. Hohmann, J. Protective effects of the aerial parts of Salvia Of cinalis, Melissa Of cinalis and Lavandula angustifolia and their constituents against enzyme-dependent and enzyme-independent lipid peroxidation / J. Hohmann [et al.] // Planta Med. – 1999. – Vol. 65. – P. 576-578.

13. Дикевич, Е.А. Применение препара-тов растительного происхождения при лече-нии соматоформных расстройств / Е. А. Ди-кевич, Д. М. Иванова // РМЖ. – 2008. – Т. 16, – №26. – С. 1801.

14. Национальный интернет-портал Ре-спублики Беларусь [Электронный ресурс] / Зеленая аптека / – Режим доступа: http://www.herbarius.info/special/aether/mentha_piperita/– Дата доступа:15.11.2010.

15. Volz, H.P. Controlled clinical trials of Hypericum extracts in depressed patients – an overview / H. P. Volz // Pharmacopsychiatry. – 1997. – Vol. – P. 3072–3076.

16. Whiskey, E. A systematic review and meta-analysis of Hypericum perforatum in de-pression: a comprehensive clinical review / E. Whiskey, U. Werneke, D. Taylor // Int Clin Psychopharmacol. – 2001. – Vol. 16, – №5. – P. 239–252.

17. St. John’swort extract (LI 160) in so-matoform disorders: results of a placebo–con-trolled trial / H.P. Volz [et al.] // Psychopharma-cology. – 2002. – Vol. – 164. – P. 294–300.

18. Количественное определение сум-мы валепотриатов в корневищах с корнями Valeriana of cinalis / О. А.Коновалова [и др.] // Хим.–фармац. журн. – 1983. – №7. – С. 831 – 836.

19. Хишова, О. М. Количественное опре-деление валепотриатов корневищ с корнями валерианы лекарственной / О. М. Хишова, И. В. Пугач // Рецепт. – 2002. – Т. 25, – №5. – С. 15-17.

20. Попов, Д.М. Контроль качества пре-паратов валерианы фотоколориметрическим методом / Д.М. Попов // Хим.– фармац. журн. – 1986. – №4. – С. 464-467.

21. Хишова, О. М. Разработка техноло-гии, методов стандартизации и биофарма-цевтическая оценка таблеток корневищ с корнями валерианы («Валерад») и синюхи: дис. … канд. фармац. наук. – Витебск. – 1999. – 138 с.

22. Шабельянов, Е.В. К вопросу каче-ственного и количественного определения валепотриатов в таблетках валерианы, по-крытых оболочкой / Е.В. Шабельянов, А.А. Шеряков // Фармация Беларуси на рубеже ве-ков. Республиканская научно–практическая конференция. Тезисы докладов. – Минск – 2001. – С. 134-135.

23. Хишова, О.М. Стандартизация ле-карственного препарата капсулы валерианы, пустырника и боярышника / О. М. Хишова // Фармация XXI века: материалы Седьмого съезда фармацевтов Республики Беларусь. – Витебск. – 2004. – С. 200-202.

24. Valeriana of cinalis root extracts have potent anxiolytic effects in laboratory rats / K. Murphy [et. all.] // Phytomedicine internacional journal of phytoterapy and phytopharmacology. – 2010. – Vol. 17. – P. 674-678.

25. Gurgel, do Vale T. Central effects of cit-ral, myrcene and limonene, constituents of essen-tial oil chemotypes from Lippia alba (Mill.) / T. Gurgel do Vale, E. Couto Furtado, JG. Santos Jun-ior // Phytomedecine. – 2002. – №9. – P.709-714.

26. Anxiolytic–like effect of the monoter-pene 1,4–cineole in mice / P. B. Gomes [et al.]

45


// Pharmacology Biochemistry and Behaviour. – 2010. – Vol. 96. – P. 287-293.

27. De Sousa, D. P. In uence of the chirali-ty of (R)–(–)– and (S)–(+)–carvon in the central nervous system: A comparative study / D.P. De Sousa, F.F. De Farias nobrega, R.N. De Almei-da // Chirality. – 2007. – Vol. 19. – P. 264-268.

28. TУ BY 500043647.003–2010 «Добав-ка биологически активная к пище «Ментум».

Г.Ю. Чалый, В.П. Хейдоров

РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ИДЕНТИФИКАЦИИ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕНТОКСИФИЛЛИНА В ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВАХ


Определены оптимальные условия и разработана простая, доступная, высокочув-ствительная фотометрическая методика количественного определения пентоксифил-лина в индивидуальном виде и лекарственных формах, которая была апробирована в анализе таблеток, капсул и раствора для инъекций.

В ходе экспериментальных исследований было обнаружено, что диклофенак на-трия при взаимодействии с гипохлорит-ионами дает специфичную реакцию образо-вания устойчивого окрашивания. Это наблюдение послужило основой для разработки способа идентификации диклофенака натрия и пентоксифиллина в одной пробе без предварительного разделения. Предложенный способ является простым, доступным и негромоздким в выполнении, не требует наличия стандартных образцов, наличия спе-циального дорогостоящего оборудования и реактивов; не требует для проведения ана-лиза наличия высококвалифицированных специалистов.

Ключевые слова: идентификация, количественное определение, пентоксифиллин, диклофенак натрия.

ВВЕДЕНИЕ

Пентоксифиллин (ПФЛ), применяется в медицинской практике при нарушениях периферического кровообращения (эндар-териит, болезнь Рейно и др.), цереброва-скулярной патологии (атеросклеротические нарушения, ишемические состояния, после перенесенного инфаркта и др.), сосудистой патологии глаз, диабетической нефроангио-патии и других диабетических ангиопатиях, функциональных нарушениях слуха.

Для количественного определения ПФЛ в литературе описаны различные методы.

По Европейской Фармакопее, также как и по Британской, ПФЛ (навеску 0,200 г одной пробы) растворяют в 5 мл безводной уксус-ной кислоты, добавляют 20 мл уксусного ан-гидрида. Титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты, конец титрования определяют по-тенциометрически [1, 2]. Описанный метод применяется для определения ПФЛ в инди-видуальном виде (субстанции), однокомпо-нентных лекарственных формах (таблетках,

растворах, инъекционных растворах). Недостатком этого метода является низ-

кая избирательность и трудоемкость анали-за, низкая чувствительность и как следствие - большой расход исследуемого вещества на одно титрование (200 мг).

Известны методы спектрофотометри-ческого определения ПФЛ в лекарственных формах [3, 4].

Они заключаются в растворении испыту-емого образца в воде и разведении до опре-деленной концентрации с последующим из-мерением оптической плотности полученно-го раствора при 274 нм относительно воды. Параллельно измеряют оптическую плот-ность раствора стандартного образца ПФЛ.

Недостатками этих методов являются низкая избирательность вследствие невоз-можности одновременного определения не-скольких соединений без пробоподготовки или специальных приемов и возможность ис-пользования лишь для объектов с известным составом, где отсутствуют вещества с похо-жим или перекрывающимся УФ-спектром.

Адрес для корреспонденции: 220141, Республики Беларусь,г. Минск, ул. Купревича,2,Институт фармакологии и биохимииНациональной академии наук Беларуси,тел. раб.: 8(017) 263-70-42,Кравченко Е.В.


46


В литературе описан фотометрический метод определения ПФЛ [5], который заклю-чается в окислении ПФЛ избытком йода в присутствии щелочи с последующим опре-делением непрореагировавшего йода и про-ведением контрольного опыта. Описывают-ся два варианта определения оставшегося йода (варианты А и В).

Определение йода по варианту А за-ключается в использовании растворов п-N-метиламинофенола и изониазида. Оптическую плотность полученных окрашенных растворов измеряют при λmax 620 нм. Раствором сравне-ния служит дистиллированная вода. Одновре-менно проводят контрольный опыт.

По варианту Б непрореагировавшего йода определяют с помощью раствора кра-сителя шерстяного синего и измеряют опти-ческую плотность при длине волны 540 нм.

Данный способ имеет ряд существенных недостатков:

− применение йода в качестве реаген-та-окислителя (йод является летучим веще-ством и возможны его потери (испарение) при протекании реакции в течение 5 мин при 45-50˚С; йодид-ионы окисляются кисло-родом воздуха);

− недостаточная специфичность прово-димой цветной реакции, т.к. применяемые реактивы имеют окраску;

− низкая чувствительность (680 и 16 мкг для варианта А и В, соответственно);

− невысокая селективность (присут-ствие в пробе веществ с восстановитель-ными свойствами приведет к ошибкам при определении);

− относительная трудоемкость: приме-нение шести химических реактивов и прове-дение контрольного опыта;

− короткое время устойчивости окра-шенного соединения (до 20 минут), что будет затруднять проведение серийных анализов.

Цель настоящей работы – разработка но-вой цветной реакции и способа более про-стого, доступного и экономичного в расходо-вании анализируемого вещества, позволяю-щего повысить чувствительность, точность и селективность определения ПФЛ в инди-видуальном виде и в лекарственных формах.


В работе использовали фармацевтиче-ские субстанции фармакопейной чистоты. Для приготовления рабочих растворов ис-пользовали бидистиллированную воду. Ра-бочий раствор гипохлорита натрия с концен-трацией 1,35×10−2 М готовили разбавлением реактива, полученного по описанной ранее методике [6]. Растворы хранили в склянках

из темного стекла, концентрацию гипохло-рита контролировали йодометрически.

Для создания рН реакционной среды использовали растворы кислоты хлористо-водородной 0,1 М и натрия гидроксида 0,1 М. Оптическую плотность замеряли на спек-трофотометре СФ-46, спектры поглощения снимали на регистрирующем спектрофото-метре Specord 250.


Для разработки простой, доступной, высокочувствительной методики количе-ственного определения пентоксифиллина были использованы экспериментальные ре-зультаты изучения кинетики реакции окис-лительного превращения пентоксифиллина под действием гипохлорит-ионов [7]. В ходе данной работы были изучены различные факторы, влияющие на выход окрашенных продуктов реакции.

Влияние рН среды на ход реакции изуча-ли, используя 0,1 н. раствор хлороводород-ной кислоты. Было установлено, что мак-симум оптической плотности, соответству-ющий наибольшему выходу конечного про-дукта реакции, наблюдается при добавлении к реакционной смеси от 1 мл 0,1 н. раствора HCl.

Влияние концентрации гипохлорита. Исследовали влияние концентрации гипох-лорита в диапазоне от 0,1 мг/мл до 1,6 мг/мл. Оптимальной была найдена концентрация 0,9-1,1 мг/мл, в пределах которой оптиче-ская плотность достигает максимума, соот-ветствуя максимальному накоплению конеч-ного продукта.

Влияние концентрации фенола. В ходе исследований использовали 6% раствор фе-нола. Изучали влияние концентрации этого реагента в области от 1,2 мг/мл до 9,6 мг/мл. Оптимальной для проведения реакции на пентоксифиллин была концентрация фе-нола 4,8-9,6 мг/мл, в пределах которой оп-тическая плотность достигает максимума и практически не изменяется.

Влияние температуры и времени взаимодействия с реагентами. Изменяя время взаимодействия пентоксифилли-на с гипохлоритом в диапазоне от 5 с до 20 мин при условии постоянства всех остальных условий, было выбрано опти-мальное время – 5 мин, при оптимальной температуре 23оС.

Аналогично выяснили оптимальное вре-мя взаимодействия реакционной смеси с фе-нолом: 20-25 минут при температуре 60оС.

Таким образом, была разработана мето-дика определения пентоксифиллина фотоме-

47


трическим методом.Методика определения пентоксифил-

лина. Готовят раствор путем растворения 15 мг пентоксифиллина в очищенной воде в колбе на 50 мл. Отмеривают 0,6 мл при-готовленного раствора пентоксифиллина (180 мкг), помещают в пробирку, добав-ляют 1,0 мл 0,1 М раствора кислоты хло-ристоводородной, воды очищенной до 6,5 мл. Затем в пробирку быстро добав-ляют 1,0 мл 1%-го раствора гипохлорита натрия, перемешивают и термостатируют реакционную смесь при температуре 23˚С. Через 5 минут в пробирку быстро прилива-ют 1,0 мл 6%-го раствора фенола и 1,5 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида. Содер-жимое пробирки хорошо перемешивают и помещают в водяную баню (t=55±5˚С) на 20 мин. Затем пробирку со смесью ох-лаждают и измеряют оптическую плот-ность полученного окрашенного раство-ра при длине волны 630 нм (полученный окрашенный раствор устойчив при стан-дартных условиях в течение нескольких суток). Раствором сравнения служит смесь реактивов без определяемого вещества. По величине оптической плотности окрашен-ного раствора находят содержание ПФЛ в исследуемом растворе из градуировочного графика для ПФЛ или по формуле:

Сx – содержание ПФЛ в анализируемой пробе, мкг;

Dx – оптическая плотность анализируе-мой пробы;

Dст – оптическая плотность стандартного раствора;

Сст – содержание ПФЛ (мкг) в пробе стандартного раствора.

Стандартный раствор ПФЛ готовят пу-тем растворения 15 мг ПФЛ в очищенной воде в мерной колбе на 50 мл. Определенные объемы стандартного раствора в пределах 0,1-1,4 мл переносят в пробирки, добавля-ют 1,0 мл 0,1 М раствора кислоты хлори-стоводородной, воды очищенной до 6,5 мл. Затем в пробирку быстро добавляют 1,0 мл 1%-го раствора гипохлорита натрия, пере-мешивают и термостатируют реакционную смесь при температуре 23˚С. Через 5 минут в пробирку быстро приливают 1,0 мл 6%-го раствора фенола и 1,5 мл 0,1 М раствора на-трия гидроксида. Содержимое пробирки хо-рошо перемешивают и помещают в водяную баню (t=55±5˚С) на 20 мин. Затем пробирку со смесью охлаждают и измеряют оптиче-скую плотность полученного окрашенного

, где

раствора при длине волны 630 нм. Раство-ром сравнения служит смесь реактивов без определяемого вещества.

По разработанной методике с учетом оптимальных условий были проведены кон-трольные определения пентоксифиллина в модельных растворах, по результатам кото-рых затем построили градуировочный гра-фик. Полученные результаты обработали статистически, данные представлены в та-блице 1.

Подчинение основному закону светопо-глощения наблюдается в широком интерва-ле в пределах 3,0-30,0 мкг в 1 мл конечного объема реакционного раствора (10 мл). От-крываемый минимум ПФЛ составляет 0,32 мкг/мл. Метрологическая характеристика указывает на хорошую воспроизводимость и точность определения ПФЛ на основе иссле-дованной реакции.

Способ может быть использован для определения пентоксифиллина в ампуль-ных растворах и в таблетках, наполнители и стабилизаторы не мешают определению основного вещества. Разработанная мето-дика была апробирована для определения пентоксифиллина в готовых лекарственных средствах: таблетках «Пентоксифиллин 100 мг № 10» (серия 120808), «Пентоксифиллин, раствор для инъекций 2% 5 мл № 10» (се-рия 1160708), выпускаемых на Борисовском заводе медицинских препаратов, капсулах «Пентоксифиллин-МИК 200 мг № 50» (се-рия 1020309) производства УП «Минскин-теркапс». Полученные результаты указыва-ют на хорошую воспроизводимость и точ-ность определения пентоксифиллина пред-лагаемым способом, относительная ошибка определения не превышает 1%.

При исследовании возможности опреде-ления пентоксифиллина в таблетках «Дикло-пентил» производства РУП «Белмедпрепа-раты» (состав: диклофенака натрия – 50 мг; пентоксифиллина – 100 мг) оказалось, что раствор диклофенака натрия при взаимо-действии с гипохлорит-ионами приобретает устойчивое желтое окрашивание в присут-ствии пентоксифиллина. Это наблюдение послужило основой для разработки способа идентификации диклофенака натрия и пен-токсифиллина в одной пробе без предвари-тельного разделения.

Метод УФ-спектрометрии не позволя-ет идентифицировать диклофенак и пен-токсифиллин при совместном присутствии, так как их максимумы очень близки (276 и 274 нм, соответственно).

Известен способ испытания на подлин-ность диклофенака и пентоксифиллина в од-ной пробе методом ВЭЖХ [8]. Однако этот

48


способ имеет ряд недостатков: длительность проведения анализа; высокая стоимость обо-рудования и реактивов; требуется специаль-ное техническое оснащение и применение дефицитных химических реактивов (хлор-ная кислота, ацетонитрил, триэтиламин); токсичность используемых растворителей; потребность в высококвалифицированных специалистах.

В литературе [9] описаны способы опре-деления подлинности диклофенака и пен-токсифиллина по качественным цветным реакциям:

для определения подлинности диклофе-нака натрия: с серебра нитратом (белый оса-док), с железа (III) хлоридом (желто-корич-невый осадок), с меди (II) сульфатом (свет-ло-зеленый осадок), с кислотой серной кон-центрированной (малиновое окрашивание), с калия дихроматом, с натрия нитритом, с калия перманганатом, с калия йодатом, с ре-активом Марки, с кислотой хлористоводо-родной;

для определения подлинности пенток-

Таблица 1 – Результаты количественного определения пентоксифиллина на основе разработанной реакции

Взято ПФЛ, мкг/10мл

Найдено ПФЛ, мкг/10мл

Метрологические характеристики

X S2 S SX

80 80,65 80,06 0,17782 0,42168 0,17215 0,55-«- 79,58-«- 80,43-«- 79,80-«- 80,16-«- 79,75180 180,53 180,12 0,43990 0,66325 0,27077 0,39-«- 180,87-«- 179,78-«- 179,14-«- 180,64-«- 179,77240 239,03 239,97 0,49962 0,70684 0,28856 0,31-«- 239,33-«- 240,57-«- 239,70-«- 240,55-«- 240,63

сифиллина: мурексидная проба (пурпурно-красное окрашивание), с танином (белый осадок), с йодом в среде кислоты хлористо-водородной, с реактивом Зонненштейна (бе-лый осадок), с реактивом Шейблера (белый осадок), с реактивом Драгендорфа (желтый осадок).

Однако, многие реактивы являются сложными и дефицитными и не позволяют определять диклофенак натрия и пентокси-филлин в одной пробе без предварительного разделения.

Таким образом, критический анализ лите-ратуры показывает, что разработка простого, доступного, экспрессного, высокочувстви-тельного, унифицированного и быстрого спо-соба определения подлинности диклофенака натрия и пентоксифиллина при их совместном присутствии в смеси, не требующего специ-ального оборудования и высококвалифициро-ванных специалистов представляет интерес и является актуальной задачей.

На основании проведенных исследова-ний подобраны оптимальные условия и раз-

X – средний результат определения;S2

S SX

0,95 – точность определения

– дисперсия (сходимость);– стандартное отклонение (воспроизводимость);– стандартное отклонение среднего результата определения

Примечание:

49


работана методика идентификации диклофе-нака натрия и пентоксифиллина в смеси без предварительного разделения на примере таблеток «Диклопентил».

Методика. 0,280 г порошка тщательно растертых таблеток «Диклопентил» (с содер-жанием диклофенака натрия и пентоксифил-лина по 50 и 100 мг, соответственно) поме-щают в мерную колбу вместимостью 50 мл и добавляют 40 мл воды. Процесс раство-рения проводят при помешивании в течение 1-2 минут. Затем доводят объем колбы водой до метки, перемешивают, дают отстояться и фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Для определения отмеривают 1 мл полученного раствора, к пробе прибавляют воды до 10 мл общего объема, прибавляют 1,0 мл 0,1 М раствора кислоты хлористо-водородной, затем прибавляют 1 мл 1 %-го раствора натрия гипохлорита. Перемешива-ют и нагревают до 70˚С.

Если в исследуемой пробе присутству-ет диклофенак натрия, то появляется жел-то-оранжевое окрашивание (таблица 2, проба 1).

Затем к этой же пробе прибавляют 1 мл 6 %-ного раствора фенола и 1,5 мл 0,1 М рас-твора натрия гидроксида и продолжают на-гревать содержимое пробирки до 70˚С.

Если в исследуемом препарате присут-ствует пентоксифиллин, то через 1 минуту появляется темно-синее окрашивание, ко-торое приобретает максимальную устой-чивую окраску через 3 минуты (таблица 2, проба 2).

Время одного анализа составляет 5 минут.Образование окрашенного продукта в

результате реакции натрия гипохлорита с диклофенаком натрия в присутствии кисло-ты хлороводородной может быть представ-лено следующим образом (схема I).

Окрашенный продукт имеет характер-ный спектр поглощения в видимой области с максимумом при 461 нм (рисунок 1), что и определяет желто-оранжевую окраску рас-твора.

Предварительно было исследовано влияние разной концентрации сопутству-ющих веществ. Установлено, что их при-сутствие в количествах,значительно пре-вышающих те, которые обычно встреча-ются в рецептуре, не мешает проведению реакции, что позволяет определять под-линность диклофенака натрия и пентоки-филлина в одной пробе без отделения со-путствующих компонентов. Определению диклофенака натрия не мешают пентокси-филлин, теофиллин, кофеин, ацикловир, антипирин, дипрофиллин, теобромин, ди-базол, тиамин, папаверин, димедрол, аце-тилсалициловая кислота, натрия бензоат, аскорбиновая кислота, терпингидрат и др. Определению пентоксифиллна не меша-ют дибазол, тиамин, папаверин, димедрол, ацетилсалициловая кислота, натрия бензо-ат, аскорбиновая кислота, кодеина фосфат, терпингидрат и др.

Предложенный способ является про-стым, доступным и негромоздким в выпол-нении; не требует наличия стандартных об-

Таблица 2 – Результаты исследованияИспытуемый

раствор, с содержанием

Наблюдаемая окраска раствора при добавлении

Результаты определения

кислоты хлористо-водородной и натрия

гипохлорита

фенола и натрия гидроксида

диклофенак натрия

пентоксифиллин

диклофенака натрия (проба 1) желто-оранжевая

желто-оранжевая

(не меняется)+ −

пентоксифиллина(проба 2) бесцветная темно-синяя − +

диклофенака натрия и пентоксифиллина (проба 3)

желто-оранжевая темно-синяя + +

HN

COONaCl

Cl

N

COONaCl

Cl O

+NaOCl, H+(I)

50


разцов; не требует наличия специального дорогостоящего оборудования и реактивов; не требует для проведения анализа наличия высококвалифицированных специалистов, имеет высокую избирательность.

Методика была апробирована на заводе РУП «Белмедпрепараты» и принята для вне-дрения.

На данном этапе изучается возможность количественного определения пентоксифил-лина и диклофенака натрия в смеси на осно-ве предлагаемого способа идентификации.


1.Разработаны оптимальные условия проведения реакции окисления пентокси-филлина гипохлорит-ионами, позволяющие качественно и количественно определять пентоксифиллин. Методика обладает высо-кой чувствительностью, хорошей селектив-ностью и апробирована в анализе готовых лекарственных форм.

2. Разработанный способ экспресс-иден-тификации диклофенака натрия и пентокси-филлина может быть использован для опре-деления подлинности этих веществ, как при совместном присутствии так и по отдельно-сти, при этом наполнители и стабилизаторы не мешают определению основных веществ.

SUMMARY

G.Ju. Chaly, V.P. HeidorovTHE DEVELOPMENT OF TECHNIQUES

OF THE IDENTIFICATION AND QUANTI-TATIVE DEFINITION OF PENTOXIFYL-

LINE IN PHARMACEUTICALSOptimum conditions are de ned and the

simple, accessible, high-sensitivе photometric

technique of quantitative de nition of pentoxi-fylline in the substance and commercial formu-lations was developed. This technique has been approved in the analysis of tablets, capsules and solution for injections.

During experimental researches it was revealed, that diclofenac sodium with hy-pochlorite-ions gives specific reaction of formation of steady colouring. This super-vision has formed a basis for development of identification diclofenac sodium and pen-toxifylline in one test without preliminary division. The offered method is simple, ac-cessible and not bulky in performance, does not demand presence of standard samples, presence of the special expensive equip-ment and reagents; does not demand for carrying out of the analysis the presence of highly skilled experts.

Keywords: identi cation, quantitative as-say, pentoxifylline, diclofenac sodium.


1. European Pharmacopoeia, 2006.2. British Pharmacopoeia, 2001, Volume I.3. ФС РБ 0519-09. Пентоксифиллин, рас-

твор для инъекций 2 %.4. Аналитическая нормативная докумен-

тация АНД Р.10.02/05407. Пентоксифиллин, таблетки.

5. Sastry, C.S. Determination of pentoxi-fylline in pharmaceutical formulations using iodine as oxidizing agent/ C.S. Sastry, P.Y. Naidu. // Talanta. – 1998. – Vol.46. № 6. – P.1357-1362.

6. Heidorov, V.P. Oxidation of 1,3,7-tri-methylxanthine by hypochlorite ion / V.P. Hei-dorov [et al.] // Russian Journal of Physical Chemistry A, Focus on Chemistry. – 2011. –

Рисунок 1 – Спектр поглощения окрашенного продукта реакции диклофенака натрия с натрия гипохлоритом в видимой области

51


Vol. 85, № 8. – P. 1358-1362.7. Чалый, Г.Ю. Уникальные химико-

биологические свойства гипохлорит-ионов и их применение / Г.Ю. Чалый, В.П. Хей-доров // Вестник ВГМУ. – 2011. – № 3. – С. 178-187.

8. ВФС РБ 1120-07. Таблетки «Дикло-пентил» кишечнорастворимые.

9. Беликов, В.Г. Фармацевтическая хи-мия. – Пятигорск, 2008. – 616 с.

В.М. Ершик, А.И. Жебентяев, В.И. Фадеев, О.А. Ершик

ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕТОПРОЛОЛА В ПЛАЗМЕ КРОВИ


Предложена методика определения метопролола в плазме крови методом высо-коэффективной жидкостной хроматографии с применением флуориметрического детектора. В процессе пробоподготовки метопролол с внутренним стандартом (би-сопролол) экстрагируют смесью гептан – хлористый метилен – дихлорэтан – пропа-нол-2 (24:10:2:1). Исследуемые вещества элюируют смесью ацетонитрил: 0,1% раствор трифторуксусной кислоты в градиентном режиме. Расход подвижной фазы составля-ет 1,0 мл/мин. Детектирование осуществляют при длине волны возбуждения/эмиссии 225/310 нм. Нижняя граница определяемых содержаний составляет 0,6 нг/мл. Концен-трацию метопролола рассчитывают по двум градуировочным графикам, линейным в диапазонах 0,6 – 20,2 нг/мл и 10,1 – 323 нг/мл.

Ключевые слова: метопролол, ВЭЖХ, плазма крови.

ВВЕДЕНИЕ

Метопролол (1-[4-(2-Метоксиэтил) фе-нокси]-3-[(1–метилэтил)амино]-2–пропа-нол) применяется при артериальной гипер-тензии, ишемической болезни сердца, на-рушениях сердечного ритма, гипертиреозе, для профилактики приступов мигрени. Ме-топролола тартрат выпускается в виде та-блеток, покрытых пленочной оболочкой 25, 50 и 100 мг [1]. На территории Республики Беларусь зарегистрированы лекарственные средства метопролола известных производи-телей: Эгилок (EGIS PLC, Венгрия), Беталок ЗОК (AstraZeneca AB, Швеция), Корвитол (Berlin-Chemie AG (Menarini Group), Герма-ния), Метопролола тартрат (Apotecnia S.A., Испания). Объем рынка метопролола на тер-ритории Республики Беларусь достаточно велик, поэтому экономически целесообраз-ны выпуск генерического лекарственного средства метопролола и проведение испы-таний биоэквивалентности с оригинальным лекарственным средством.

В литературе описывается ряд методик

определения метопролола в плазме крови. В работе [2] очистку аналита от компонен-тов матрицы осуществляли высаливанием белков ацетонитрилом и экстракцией липо-фильных веществ смесью дихлорметан-изо-пропиловый эфир (1:1). Внутренний стан-дарт при этом не использовали. В работах [3, 4] пробоподготовку осуществляли жид-кость-жидкостной экстракцией из щелоч-ной среды с использованием дихлорметана и смеси этилацетат-диэтиловый эфир (2:1), соответственно. После упаривания органи-ческой фазы досуха сухой остаток раство-ряли и хроматографировали. В качестве вну-треннего стандарта использовали пиндолол и атенолол, соответственно. Авторы работ [5] и [6] после экстракции дихлорметаном и этилацетатом, соответственно, предложили проводить дополнительную очистку путем экстракции липофильных примесей гекса-ном, либо путем реэкстракции метопроло-ла из органической фазы раствором серной кислоты. В качестве внутреннего стандарта использовали дилтиазем и бисопролол. В работе [7] пробоподготовку осуществляли


210023, Республика Беларусь,г. Витебск, пр. Фрунзе, 27,Витебский государственныймедицинский университет,кафедра общей, физической и коллоидной химии,тел. раб.: 8 (0212) 37-23-24Чалый Г.Ю.


52


методом твердофазной экстракции с исполь-зованием сорбента С2.

При пробоподготовке методом высали-вания белков нам не удалось получить удов-летворительной сходимости результатов, что связано с сорбцией аналита на поверхности осаждаемых белков. Кроме того, отсутствие внутреннего стандарта также негативно вли-яет на сходимость результатов. При исполь-зовании в качестве экстрагента сложных эфиров и их смесей аналит сильно загрязнен компонентами матрицы, что увеличивает пределы определения и время, необходимое для полного разделения пиков метопролола и компонентов матрицы. Содержащаяся в экстракте вода также ухудшает метрологи-ческие характеристики методики. Примене-ние дополнительных процедур очистки (ре-экстракция, экстракция гексаном) приводит к значительному усложнению пробоподго-товки, что в сочетании с большим количе-ством анализируемых образцов приводит к значительным затратам времени.

Целью настоящего исследования явля-ется разработка и валидация методики ко-личественного определения метопролола в плазме крови, воспроизводимой в условиях аналитической базы биоэквивалентных ис-пытаний и пригодной для анализа большого количества образцов.


В работе использовали фармакопейный стандартный образец метопролола тартрата и рабочий стандартный образец бисопроло-ла (внутренний стандарт).

Реактивы: ацетонитрил для хромато-графии; натрия гидроксид, ч.д.а.; кислота трифторуксусная; кислота уксусная ледяная, о.с.ч.; гептан ч.д.а.; пропанол-2 ч.д.а.; хлори-стый метилен, ч.д.а.; 1,2-дихлорэтан, ч.д.а.

Исследования проводили на жидкостном хроматографе Waters, оснащенном флуори-метрическим детектором. Хроматографи-ческая колонка – Zorbax Eclipse XDB С-18 4,6×150 мм, зернение 5 мкм, температура ко-лонки 30oС. Разделение проводили в гради-ентном режиме (таблица 1). Подвижная фаза А представляла собой 0,1% раствор трифто-руксусной кислоты в воде; подвижная фаза

B – ацетонитрил для хроматографии. Расход элюента 1,0 мл/мин. Длина волны возбуж-дения/эмиссии 225/310 нм. Объем вводимой пробы составлял 20 мкл.

Методика пробоподготовки (жид-кость-жидкостная экстракция)

В экстракционные пробирки помещают по 1,0 мл размороженной плазмы крови 1 мл 0,05М раствора натрия гидроксида, 0,200 мл рабочего раствора внутреннего стандар-та (раствор бисопролола в воде, 400 нг/мл) и 3 мл экстракционной смеси (гептан – хло-ристый метилен – дихлорэтан – пропанол-2 (24:10:2:1).

Содержимое пробирок перемешивают на шейкере 7 минут и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут. Органиче-скую фазу (верхний слой) переносят в поли-пропиленовые пробирки и упаривают досу-ха в токе воздуха при температуре 35-40°С.

Содержимое пробирок растворяют в 0,100 мл подвижной фазы и 20 мкл получен-ного раствора хроматографируют на хрома-тографе, оснащенном флуориметрическим детектором.


Терапевтические концентрации при приеме 100 мг метопролола составляют от 0,03 мкг/мл до 0,28 мкг/мл. Период полувы-ведения – 3-4 часа (быстрые метаболизеры). Метопролол на 11% связан с белками [8].

При проведении биоэквивалентных ис-пытаний осуществляют слежение за концен-трацией лекарственного вещества в плазме крови в течение четырех периодов полувыве-дения. Теоретическая минимальная концен-трация метопролола в плазме крови через 4 периода полувыведения должна составлять 17,50 - 1,88 нг/мл ( 4

max 2/CСтеор ). Пред-полагаемый диапазон концентраций мето-пролола должен составлять 300 – 1,88 нг/мл.

Удельный коэффициент поглощения ме-топролола не высок (при 274 нм в кислой среде составляет 52 [8]), в то же время ме-топролол способен флуоресцировать. Поэто-му в большинстве работ при исследовании фармакокинетики метопролола используют метод ВЭЖХ с флуориметрическим детек-тированием.

Время, мин А, % (об.) В, % (об.) Режим0-6,0 77,0 → 63,0 23,0 → 37,0 Градиентный

6,0-7,0 63,0 37,0 Изократический7,0-8,0 63,0 → 77,0 37,0 → 23,0 Градиентный8,0-9,0 77,0 23,0 Изократический

Таблица 1 – Режим градиентного элюирования

53


В ходе предварительных исследований установлено, что наилучшая сходимость ре-зультатов наблюдается при использовании в качестве экстрагента хлористого метиле-на и смеси гептан – хлористый метилен – дихлорэтан – пропанол-2 (24:10:2:1) (копия системы растворителей пробирок Agilent Toxi-tubes А). В качестве оптимального экс-трагента была выбрана последняя смесь, так как в отличие от хлористого метилена у нее плотность меньше плотности воды, что об-легчает отбор органического слоя из экстрак-ционных пробирок. В качестве внутреннего стандарта нами были испытаны бисопролол, атенолол и пиндолол. Атенолол практически не экстрагируется предложенной нами си-стемой растворителей. При использовании бисопролола и пиндолола наблюдаются со-поставимые по сходимости результаты. В качестве внутреннего стандарта нами был выбран бисопролол.

В ходе выполнения биоэквивалентных испытаний оказалось, что концентрация аналита в плазме крови некоторых добро-вольцев, отобранной через 4 периода полу-выведения, значительно ниже теоретически рассчитанной. Поэтому в процессе работы было приготовлено два дополнительных градуировочных раствора с концентрацией метопролола 1,2 и 0,6 нг/мл.

При валидации разработанной методики по параметру правильность было обнаружено, что результаты количественного определения метопролола отягощены систематической по-грешностью (tэксп > tкрит (P=0,95; n=9)) при использо-вании градуировочного графика в диапазоне концентраций 0,6 – 323 нг/мл. Для примера в таблице 2 представлены результаты расчета концентрации метопролола в плазме крови по одному градуировочному графику, в котором концентрация аналита в нижней и верхней

точках отличается более чем в 500 раз.Поэтому при расчетах использовали два

градуировочных графика: градуировочный график 1, построенный для концентраций 10,1 – 322,5 нг/мл; градуировочный график 2 – для концентраций 0,6 – 20,2 нг/мл. При анализе данных, полученных при исследо-вании плазмы добровольцев, концентрацию метопролола рассчитывали по градуиро-вочному графику 1, а если она оказывалась менее 20,2 нг/мл, то расчеты проводили по градуировочному графику 2.

Результаты количественного определе-ния метопролола в плазме крови по методу «введено-найдено» (в разные дни) представ-лены в таблице 3.

Правильность (R, %) и воспроизводи-мость (RSD, %) результатов находились в пре-делах критериев приемлемости (85,0-115,0% и 0-15,0%, соответственно). Относительная погрешность определения (δ, %) не превы-шала 15,0% (в области нижней концентра-ции – 20,0%). Не наблюдалось статистически значимых отклонений от истинного значения определяемой величины (tэксп<tкр. (f=8, P=0,95) ).

Диапазон определяемых концентраций метопролола по предложенной методике составил 0,6 – 323 нг/мл, нижняя граница определяемых содержаний метопролола – не более 0,6 нг/мл.

Расчет концентрации метопролола осу-ществляли по двум градуировочным гра-фикам, которые частично перекрываются в области концентраций 10,1 и 20,2 нг/мл. Поэтому нами проводилась дополнительная процедура валидации, чтобы убедиться, что результаты, рассчитанные по обоим граду-ировочным графикам в области перекрыва-ния, отличаются статистически незначимо (tэксп < tкр (f=16, p=0,95)). Результаты представлены в таблице 4.

Введено, нг/мл Найдено, мкг/мл RSD, % R, % δ, % tэксп

323 323±5 2,4 100,2 1,59 0,25161 160±3 2,8 99,4 1,84 0,6280,6 79,9±2,5 4,7 99,1 3,10 0,5740,3 40,1±0,7 2,5 99,6 1,63 0,4920,2 20,2±0,5 3,9 100,2 2,53 0,1810,1 10,2±0,4 6,1 101,1 4,01 0,555,0 5,1±0,2 5,6 100,8 3,67 0,432,5 3,0±0,2 7,8 117,2 5,10 5,641,3 1,5±0,1 7,7 122,7 5,05 7,170,6 0,9±0,1 9,5 139,1 6,18 8,92

Таблица 2 – Результаты расчета концентрации метопролола в плазме крови (P=0,95; n=9) по одному градуировочному графику

54


Введено, нг/мл Найдено, мкг/мл RSD, % R, % δ, % tэксп

Градуировочный график 110,1 10,5±0,4 6,0 104,2 6,2 2,0161 160±3 2,8 99,5 2,8 0,6323 323±5 2,4 100,2 2,4 0,2

Градуировочный график 20,6 0,6±0,1 12,9 103,4 15,8 0,810,1 10,1±0,4 6,3 99,9 6,4 0,120,2 20,2±0,5 3,9 100,2 3,9 0,1

Таблица 3 – Результаты количественного определения метопролола в плазме крови (P=0,95; n=9)

Таблица 4 – Сравнение результатов расчета содержания метопролола в плазме крови по двум градуировочным графикам в области их перекрывания

Введено, нг/мл

Найдено по градуировочному графику 1

(Сср 1, нг/мл)

Найдено по градуировочному графику 2

(Сср 2, нг/мл)Отношение,

% tэксп

10,1 10,5 10,1 104,3 1,9020,2 20,5 20,2 101,5 1,08

Методика обладает удовлетворительной специфичностью: на хроматограммах об-разцов плацебо не обнаружено хроматогра-фических пиков со временами удерживания, соответствующими метопрололу и бисопро-лолу (внутренний стандарт).

Замороженные образцы плазмы выдер-живают два цикла заморозки/разморозки, после размораживания устойчивы не менее 1 часа. После пробоподготовки образцы устойчивы не менее 18 часов при хранении в автосамплере хроматографа. При долговре-менном хранении образцы плазмы добро-

вольцев устойчивы не менее 36 дней. Исход-ный стандартный раствор внутреннего стан-дарта (400 мкг/мл бисопролола в метаноле) устойчив в течение 36 дней при стабилиза-ции его с помощью добавки ледяной уксус-ной кислоты. Рабочий стандартный раствор внутреннего стандарта (400 нг/мл бисопро-лола в воде) устойчив в течение 24 часов.

Типичная хроматограмма метопролола в плазме крови представлена на рисунке 1.

Методика обладает удовлетворительной робастностью: открываемость в течение все-го периода исследования находилась в пре-

Рисунок 1 – Типичная хроматограмма образца плазмы, содержащей метопролол

55


делах 85-115% (в области нижней границы определяемых содержаний – в пределах 80-120%). Результаты представлены в таблице 5. Относительное стандартное отклонение угловых коэффициентов градуировочных графиков 1 и 2, полученных в различные дни, составляло 2,4 и 2,7%, соответственно. Вре-мя удерживания хроматографических пиков метопролола и бисопролола на хроматограм-мах, полученных в течение всего периода исследований, составляло 3,92 и 5,78, соот-ветственно, при относительном стандартном отклонении – 0,88 и 0,78, соответственно.

Разработанная методика успешно апро-

Таблица 5 – Открываемость метопролола в различные дни

№ образцаВведено метопролола, нг/мл

0,6 161 323Найдено, нг/мл R, % Найдено, нг/мл R, % Найдено, нг/мл R, %

1 0,7 114,5 158 97,9 328 101,72 0,5 86,3 156 96,6 312 96,73 0,7 117,7 167 103,6 321 99,64 0,8 119,4 160 99,0 324 100,45 0,5 84,7 156 96,7 313 96,96 0,6 99,5 167 103,6 321 99,47 0,6 94,7 157 97,4 324 100,48 0,7 112,9 159 98,7 328 101,79 0,6 100,7 164 101,7 337 104,5

Среднеезначение 0,7 103,4 160 99,5 323 100,2

SUMMARY

V.M. Yorshyk, A.I. Zhebentyaev, V.I. Fadeev, O.A. Yorshyk

VALIDATION OF METHOD FOR QUANTATIVE DETERMINATION OF METOPROLOL IN BLOOD PLASMAReverse phase liquid chromatographic

method was developed and validated for the es-timation of Metoprolol in blood plasma. Meto-prolol was extracted using an internal standard (Bisoprolol) and mixture of Heptane: Methyl-ene chloride: Ethylene dichloride: Propyl alco-hol-2 V/V (24:10:2:1).

Chromatographic analysis was performed on a Zorbax Eclipse XDB С-18 4,6×150mm column ID (5 micron particle size) at 30°С tem-perature in gradient mode, with mobile phase containing acetonitrile: 1% tri uoroacetic acid and uorimetric detection with an excitation wavelength of 225 nm, and emission wave-length of 310 nm. The ow rate was 1.0 ml/min

The lower limit of quanti cation of Metopro-lole is 0,6 ng/ml. The linearity of the method was in two ranges 0,6 – 20 ng/ml and 10,1 – 323 ng/ml.

Keywords: metoprolol, HPLC, blood plasma.

бирована при проведении биоэквивалент-ных испытаний лекарственного средства Кардилок, производства ООО «Фармтехно-логия», в сравнении с лекарственным сред-ством Эгилок, производства «Эгис А.О.», Венгрия.

ВЫВОДЫ

Предложена методика определения ме-топролола в плазме крови методом ВЭЖХ. Все рекомендованные валидационные кри-терии [9] находились в пределах критериев приемлемости.


1. Справочник Видаль. Лекарствен-ные препараты в России: Справочник / М.: АстраФармСервис – 2006 г. – 1536 с.

2. Enantioselective determination of meto-prolol acidic metabolite in plasma and urine us-ing liquid chromatography chiral columns: ap-plications to pharmacokinetics / P.M. Cerqueira [et al.] // Journal of Chromatography B. – 2003. - Vol. 783. – P. 433–441.

3. Roivas, K.L. Receptor binding assays in analysing the bioavailability and pharmacody-namic bioequivalence of active drug moieties / K.L. Roivas, P.J. Neuvonen // Eur. J. Clin. Phar-macol. – 1994. – Vol. 46. – P. 237-242.

4. Yilmaz, B. Determination of metoprolol in human plasma and urine by high-performance liquid chromatography with uorescence detec-tion / B. Yilmaz, A. Asci, S. Arslan // J. Sep. Sci. – 2010. – Vol. 33. – P. 1904–1908.

5. Al-Saidana, S.M. Pharmacokinetic eval-uation of guar gum-based three-layer matrix tablets for oral controlled delivery of highly soluble metoprolol tartrate as a model drug / S.M. Al-Saidana [et al.] // European Journal of

56


Pharmaceutics and Biopharmaceutics. – 2004. – Vol. 58. – P. 697–703.

6. Qin, Li. Simultaneous analysis of trama-dol, metoprolol and their metabolites in human plasma and urine by high-performance liquid chromatography / Li Qin, Wang Rui // Chinese Medical Journal. – 2006. – Vol. 119. – I. 23. – P. 2013-2021.

7. Mistry, B. A sensitive assay of metopro-lol and its major metabolite a-hydroxy meto-prolol in human plasma and determination of dextromethorphan and its metabolite dextror-phan in urine with high-performance liquid chromatography and uorometric detection / B. Mistry, J. Leslie // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. – 1998. – Vol. 16. – P. 1041–1049.

8. Moffat, A.C. Clarke’s isolation and identi cation of drugs in pharmaceuticals / A.C. Moffat. – Second Edition. – London: Тhe pharmaceutical press, 1986. – 1684 p.

9. Guidance for Industry. Bioanalytical Methods Validation. 2001. - 21 p.


210023, Республика Беларусь, г. Витебск, пр. Фрунзе, 27,Витебский государственный медицинский университет,кафедра токсикологическойи аналитической химии,тел. раб.: 8 (0212) 37-00-06.Ершик В.М.


57


ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВ

Ю.Г. Чернецкая1, А.И. Жебентяев2, П.Т. Петров3

ОПТИМИЗАЦИЯ СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОГЕЛЕВЫХ ПОЛИМЕРНЫХ МАТРИЦ

1РУП «Белмедпрепараты», г. Минск2Витебский государственный медицинский университет

3ГУ Научно-производственный центр «Институт фармакологии и биохимии Национальной академии наук Беларуси», г. Минск

Представлены результаты разработки состава и технологии получения лекар-ственных средств на основе гидрогелевых полимерных матриц.

Осуществлен выбор компонентов и их оптимальных массовых соотношений для получения гидрогелевой основы. С использованием ЯМР-спектроскопии установлено, что в результате воздействия ионизирующего излучения происходит сшивание входя-щих в состав поливинилпирролидона и полиэтиленоксида. Благодаря формированию трехмерной структуры гидрогелевые матрицы не растворимы в воде, органических растворителях, не плавятся при нагревании, приобретают механическую прочность и эластичность.

Определены стерилизующая (20 кГр) и максимально допустимая (30 кГр) дозы ио-низирующего излучения, при облучении в диапазоне которых лекарственные средства на основе гидрогелевых полимерных матриц стерильны, обладают необходимыми меха-нической прочностью, эластичностью, а также сорбционными свойствами, позволяю-щими впитывать раневой экссудат и высвобождать введенные в состав действующие вещества для обеспечения противомикробного и ранозаживляющего действия.

Ключевые слова: гидрогелевые матрицы, ионизирующее излучение, поглощенная доза, радиационная полимеризация, разрывное усилие, степень набухания, степень вы-свобождения действующих веществ.

ВВЕДЕНИЕ

Гидрогели – перекрестно-сшитые гидро-фильные полимеры, характеризуются хоро-шей биологической совместимостью и ши-роко применяются как раневые покрытия, искусственная кожа, сердечно-сосудистые, хрящевые имплантанты, искусственная ро-говая оболочка, контактные линзы, системы доставки лекарственных средств.

Для получения полимерных гидрогелей используют следующие основные методы: радикальная полимеризация гидрофиль-ных мономеров (акриламида, гидроксилал-кил-метакрилатов, акриловой кислоты и ее солей, N-винилпирролидона и др.) в при-сутствии сшивающих агентов (этиленгли-кольдиметакрилата, метиленбисакриламида и др.); сшивание гидрофильных олигомеров (например, олигоэтиленгликолей) или поли-меров (поли-акриламида, полиэтиленокси-да, поливинилового спирта, поликислот, по-лиаминов и др.) обычными методами синте-за сетчатых полимеров; прививка указанных выше мономеров к природным полимерам (крахмалу, целлюлозе, декстрану, желатину); химические реакции полимеров, например,

гидролиз сшитого и (или) привитого полиа-крилонитрила [1].

В последнее время одним из перспек-тивных способов получения полимерных ги-дрогелей является радиационно-химическая технология. Преимуществом использования радиационной полимеризации является воз-можность регулирования густоты полимер-ной сетки путем подбора величины погло-щенной дозы и концентрации компонентов, чистота получаемых продуктов (отсутствие инициаторов, низкомолекулярных примесей в отличие от химической полимеризации) [2]. Важной особенностью данного способа является также то, что стерилизация гидро-гелевого покрытия происходит на стадии его получения под действием ионизирующего излучения, что позволяет исключить стадию дополнительной стерилизующей обработки покрытия.

В имеющихся литературных данных приведены результаты исследований обра-зования гидрогелей при воздействии иони-зирующего излучения на водные растворы акриламида при различных условиях (кон-центрация мономера, поглощенная доза, мощность дозы) [3, 4]. Подробно изучены

58


свойства гидрогелей на основе радиаци-онно-сшитого полиакриламида с широким спектром свойств (гидрофильность, модуль упругости, набухаемость и др.), применяе-мых для получения контактных линз, в каче-стве покрывающего агента в рентгеновских пленках с целью экономии серебра, средств для лечения ран и ожогов больших площа-дей [3-7].

В работах [8-18] представлены данные о радиационно-сшитых гидрогелях на основе поливинилового спирта (ПВС). Исследован механизм гелеобразования при облучении водных растворов и свойства полученных гидрогелей [8, 9]. В работе [10] приведены данные об использовании гидрогелей на ос-нове ПВС в качестве раневых покрытий, ха-рактеризующихся равномерной адгезией к ране и безболезненным удалением при пере-вязках. Изучены ранозаживляющие гидроге-ли, приготовленные с использованием ради-ационной полимеризации водных растворов полиэтиленоксида (ПЭО) и ПВС. Показано, что радиационное сшивание полимеров при облучении в водных растворах достигает-ся при меньших дозах, чем при облучении полимера в твердом или расплавленном со-стоянии, из-за участия в сшивании свобод-ных OH-радикалов, образуемых в результате радиолиза воды [11]. Широко используются гидрогели на основе радиационно-сшитого поливинилпирролидона (ПВП), обладающие высокой гидрофильностью и хорошей био-совместимостью [19-20].

Воздействие ионизирующего излуче-ния используется в синтезе гидрогелей не только на основе синтетических, но и природных полимеров. Исследовано об-разование гидрогелей на основе альгина-тов [21, 22], желатина [23], коллагена [24]. Описаны композиции на основе радиаци-онно-сшитого ПВС с крахмалом [14, 16] и с хитозаном [17, 18]. Изучена зависимость прочности и набухания гидрогелей от со-держания хитозана и условий облучения, рассмотрено использование таких гелей в качестве перевязочных материалов [17]. Предложен новый метод получения гидро-гелей с применением желатина, декстрана и альбумина, заключающийся в функцио-нализации природных полимеров путем введения в них двойных связей с последу-ющим сшиванием γ-облучением [25]. В ра-боте [26] приведены результаты исследо-вания механических свойств, биоадгезии и биологического действия хитозановых пленок. Данные пленки были рекомендо-ваны к использованию в качестве средств для заживления ран и ожогов.

Приведенные литературные данные

свидетельствуют о многообразии исследо-ва-тельских направлений в этой области. Од-нако актуальной остается задача разработки современных ранозаживляющих средств на полимерной основе, обладающих противо-микробным действием и способствующих процессам репарации и эпителизации. Кроме того, увеличение ассортимента аппликацион-ных лекарственных средств является не только целесообразной, но и необходимой задачей.

Цель настоящей работы – осуществить выбор компонентов, оптимизировать состав и параметры получения гидрогелевых поли-мерных матриц с использованием радиаци-онной полимеризации.


В качестве исходных компонентов для получения гидрогелевых матриц были ис-пользованы мономеры акриламид (Merck, кат. № 800830), метакриламид (Merck, кат. № 805792), винилпирролидон (Merck, кат. № 808518), акриловая кислота (Merck, кат. № 800181), метакриловая кислота (Merck, кат. № 800578), сшивающий агент N, N/ - метилен-бисакриламид (Merck, кат. № 805968), а также синтетические: повидон (поливинилпирроли-дон) (ГФ РБ, т. 2, с. 234, К-17, К-90, производства AppliChem, Гер-мания); макрогол (поли-этиленоксид) 400, 1500 (ГФ РБ, т. 2, с. 192, производства ОАО «Сибур-Нефтехим», РФ) и природные поли-меры: агар (Евр. фарм., производства Merck, Германия); декстран (ГФ РБ, т. 3, с. 256, про-изводства Pharmacosmos A/S, Дания), жела-тин (Merck, кат. № 104078), хитозан (Sigma, кат. № 3646). В качестве активных субстан-ций использовали гентамицина сульфат (рег. № 239/01/10), миритин (мирамистин) (рег. № 582/03/10).

Приготовление гидрогелевых полимер-ных матриц осуществляли по следующей схеме:

- приготовление водных растворов ком-понентов (мономеров и полимеров);

- розлив растворов в полимерные под-ложки определенной формы и размера;

- герметичная упаковка в полиэтилено-вые пакеты и укладка в транспортную тару;

- радиационная обработка.Проведен отсеивающий эксперимент,

цель которого – подбор мономеров и поли-меров синтетического и природного проис-хождения, водные растворы которых способ-ны образовывать трехмерную полимерную структуру под воздействием ионизирующе-го излучения.

Для получения полимерной основы использовали синтетические мономеры:

59


акрил-амид (АА), метакриламид и винил-пирролидон (ВП) при их различном соот-ношении и концентрации от 5,0 до 20,0%. В качестве сшивающего агента исполь-зовали N, N/ – метилен-бисакриламид (МБАА) в количестве 0,5 – 5,0 %. С целью увеличения механической прочности в со-став полимерных композиций вводили 1,0 – 20,0 % ПВП, эластичности – 1,0 – 5,0 % пластификаторов ПЭО 400 и ПЭО 1500, адгезии к кожным покровам – 0,5 – 3,0 % акриловой (АК) или метакриловой кисло-ты. В качестве наполнителей в составе ги-дрогелей также использовали природные полимеры агар, декстран, желатин в кон-центрации 1,0 – 5,0 %.

Готовили водные растворы компонен-тов. Приготовленные растворы перед облу-чением разливали толщиной слоя 2-4 мм в полимерные подложки с внутренним разме-ром 6х9 см, накрывали покровной полипро-пиленовой пленкой, помещали и герметично запаивали в полиэтиленовые пакеты. При проведении эксперимента растворы полиме-ров в первичной упаковке плотно и упорядо-ченно слоями укладывали в коробки. Между слоями укладывались пленочные дозиметры с феназиновым наполнителем СО ПД(Ф)Р 5/50 или полиметилметакрилатные (ПММА) Harwell Red Perspex СО ПД(Ф)Р 5/50, кото-рые нумеровались и координаты которых фиксировались. Сверху на коробке устанав-ливались реперы – дозиметры, по показани-ям которых определяли полученные в объеме минимальные и максимальные значения доз. Радиационную обработку объектов исследо-вания проводили на электронном ускорителе УЭЛВ-10-10 в ГНУ «ОИЭиЯИ-Сосны» На-циональной академии наук Беларуси.

Изучали физико-химические свойства полученных гидрогелевых матриц: внешний вид, механическую прочность, степень на-бухания, степень высвобождения действую-щих веществ.

Механическую прочность гидрогелевых пластин определяли на разрывной маши-не РМБ-30-2М в соответствии с методикой определения показателя сопротивления раз-рыву [27]. Сопротивление разрыву выража-ли величиной разрывного усилия в ньюто-нах. Измеряли разрывное усилие гидрогеле-вых пластин (по 5 образцов размером 15х120 мм). Относительная погрешность измерений составила ± 10 %.

Степень набухания (α) гидрогелевых матриц определяли гравиметрическим ме-тодом [28]. Количественное определение мирамистина проводили с использованием жидкостной хроматографии по ранее опи-санной методике [29], гентамицина – по био-

логической активности с использованием метода диффузии в агар (ВФС РБ 1029-06).

Для анализа структуры компонентов гидрогелевых полимерных матриц ис-пользовали ЯМР-спектроскопию. Запись спектров ЯМР проводили на спектрометре AVANCE-500 c рабочей частотой 500 МГц для ядер 1Н и 125 МГц – для ядер 13С. Анали-зировали растворы соединений в D2O c до-бавлением СD3COCD3 в качестве внутренне-го стандарта. Химические сдвиги сигналов протонов соединений определяли по сигна-лу примесей ацетона (СНD2COCD3, δ=2,05 м.д. в спектре 1Н) и метильной группы СD3 стандарта δ=30,2 м.д. Запись спектров про-водили с учетом релаксации протонов всех соединений.

Определение стерильности проводили в соответствии с требованиями ГФ РБ, 2.6.1 [30]. Так как гидрогелевые матрицы в усло-виях испытания обладают антимикробным действием, для испытания на стерильность использовали метод мембранной фильтрации. Среднюю пробу, состоящую из фрагментов гидрогелевых пластин общей площадью около 10 см2, помещали в стерильную колбу и прили-вали стерильный раствор 9 г/л натрия хлорида в количестве не менее 20 мл на 1 фрагмент ги-дрогелевой пластины. Образец встряхивали в течение не менее 10 минут. Полученные смы-вы с гидрогелевых пластин фильтровали через один мембранный фильтр, затем фильтр про-мывали трижды стерильным раствором 9 г/л натрия хлорида, порциями по 100 мл каждая. Фильтр разделяли на две части: одну часть по-мещали в 100 мл тиогликолевой среды, другую – в 100 мл среды Сабуро. Инкубировали при соответствующих температурах в течение 14 суток.


Оптимизация состава основы гидро-гелевых матриц. В ходе проведения иссле-дований осуществляли выбор компонентов и их оптимальных массовых соотношений для получения основы гидрогелевых матриц.

На первом этапе отбор полимерных ком-позиций проводили по внешнему виду полу-ченных после облучения гидрогелевых ма-триц: окраска, прозрачность, однородность, эластичность.

На основании результатов предваритель-ных исследований выбрано 13 композиций, состав которых представлен в таблице 1.

Установлено, что при облучении водных растворов акриламида и винилпирролидона в концентрации 4 % и выше и их смесей об-разуются прозрачные жесткие гидрогели. При соотношении АА:ВП – 3:2 (композиция № 1)

60


были получены гидрогели с удовлетворитель-ными структурно-механическими свойствами.

Добавление акриловой и (или) метакри-ловой кислот в количестве 0,5 – 3,0 % в во-дные растворы мономеров не сказывалось на механических свойствах получаемых в результате облучения гидрогелевых матриц, но существенно увеличивало их адгезию к поверхности кожи (композиции № 2, 3).

В связи с тем, что коммерческие продук-ты АК и ВП содержат токсичные органиче-ские примеси, их использование для полу-чения гидрогелевых матриц медицинского назначения требует проведения предвари-тельной очистки фракционной перегонкой под вакуумом. Исследовали возможность получения гидрогелевых матриц с уменьше-нием концентрации АК и ВП или без них. Анализ полученных гидрогелей показал, что наименьшая концентрация АК в растворах, придающая гидрогелям необходимые для удержания на поверхности кожи адгезивные свойства, составляет 0,5 %. Уменьшение со-держания АК и ВП в облучаемых растворах компенсировалось увеличением содержания в них акриламида до 10 % – композиция № 4. Использование для получения гидрогеле-вых матриц водных растворов метакрилата и метакриловой кислоты не давало каких-либо преимуществ по сравнению с намного более дешевыми и доступными акриламидом и акриловой кислотой.

Исследования показали, что полученные из мономеров гидрогели (композиции № 1 – 4) не обладали необходимыми для гидро-гелевых матриц эластичностью и механиче-

Таблица 1 – Составы полимерных композиций

ской прочностью.Введение в составы ПВП увеличивало

механическую прочность гидрогелевых ма-триц (композиция № 5), а пластификатора ПЭО 1500 – эластичность (композиция № 6). Для увеличения механической прочно-сти также использовали природный полимер декстран (композиция № 7).

Сравнительный анализ по внешнему виду показал, что составы № 1 - 7 бесцвет-ны, прозрачны, однородны, но обладают недостаточной механической прочностью (разрывное усилие - менее 4,0 H) и эластич-ностью.

Изучена возможность замены ПВП К17 с молекулярной массой 10000 Да на высоко-молекулярный ПВП К90 (М.м. 360000 Да). Гидрогелевые матрицы, в состав которых входил ПВП К90 (состав № 8), по своим ме-ханическим свойствам превосходили гидро-гелевые матрицы, содержащие ПВП низко-молекулярный.

С использованием метода радиационной полимеризации получали гидрогелевые ма-трицы из водных растворов акриламида, в состав которых вводили нетоксичный био-совместимый природный полимер хитозан (композиции № 9 - 11). Так как хитозан не растворим в воде, его вводили в водные рас-творы акриламида с полимерами в виде пред-варительно приготовленного 5 % раствора в 5 % акриловой кислоте. Гидрогели, получа-емые из композиции 11, обладали удовлет-ворительными структурно-механическими свойствами, тогда как гели из составов 9 и 10 были неэластичными и хрупкими.

№п/п

Содержание компонентов, % (мас.)АА ВП МБАА АК ПЭО-

400ПЭО-1500

ПВП К 17

ПВП К 90

Декстран Хитозан Агар

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 121 6 4 0,52 7 0,5 33 7 0,5 31 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 124 10 0,5 0,55 10 0,5 0,5 5,06 10 0,5 0,5 1,5 5,07 10 0,5 0,5 1,5 5,0 3,08 10 0,5 0,5 1,5 5,09 10 0,5 0,5 1,5 0,510 10 0,5 0,5 1,5 3,0 0,511 10 0,5 0,5 1,5 5,0 0,512 1,5 7,5 1,013 3,0 20,0 2,0

61


Известно, что мономер акриламид яв-ляется канцерогеном, и его использование в составе полимерных композиций может привести к нежелательным последствиям при длительном применении гидрогелей. Акриламид проявляет токсическое действие, легко проникая через кожу [31]. Кроме того, возможно взаимодействие остаточных мономеров с химически активными лекар-ственными средствами при их включении в гидрогелевые матрицы. В связи с этим так-же разрабатывались составы и технология получения гидрогелей из биосовместимых полимеров медицинского назначения: ПВП, ПЭО, декстрана, агара.

Дальнейший выбор полимерной осно-вы проводили на основании изучения сле-дующих свойств: внешний вид, рН водной вытяжки, степень набухания, механические свойства. Результаты изучения показателей качества представлены в таблице 2.

Наилучшими свойствами для данной ле-карственной формы (прозрачностью, одно-родностью, степенью набухания, эластично-стью, механической прочностью) обладали гидрогели на основе полимерной компози-ции № 12. Увеличение концентрации компо-нентов (композиция № 13) снижало механи-ческую прочность, эластичность и степень набухания гидрогелевых матриц.

Введение в состав № 12 перед облучени-ем антисептика мирамистина (0,05 %) и ан-тибиотика гентамицина (0,1 %) не влияло на структурно-механические свойства гидроге-левых матриц.

Анализ структуры гидрогелевых ма-триц. Трехмерная полимерная структура гидрогелевых матриц образуется в резуль-тате воздействия ионизирующего излуче-ния на водные растворы полимеров [32]. В выбранном для дальнейшего изучения составе гидрогелевой основы (композиция № 12), главным образом, гидроксильные радикалы (OH), образующиеся в процессе радиолиза воды, отрывают атомы водоро-да от структурных единиц ПВП и ПЭО с образованием макрорадикалов. Макрора-

дикалы, вступая в реакции рекомбинации, образуют новые внутри- и межмолекуляр-ные ковалентные связи (сшивки), в ре-зультате образуется гидрогелевая матрица, представляющая собой трехмерную по-лимерную сетку, содержащую гидратнос-вязанную воду. Агар не сшивается с ПВП и ПЭО, а играет роль наполнителя. Полу-ченные гидрогели не растворимы в воде и органических растворителях, не плавятся при нагревании, приобретают эластич-ность и механическую прочность.

В 1Н ЯМР спектре гидрогеля иденти-фицированы сигналы ПЭО в области 3,56–3,58 м.д. Основное количество сигналов в спектре принадлежит основному компонен-ту - ПВП. Это подтверждается сравнением спектра исходного ПВП с его расчетной мо-делью и спектром гидрогелевой матрицы. В спектре гидрогеля для ПВП наиболее харак-теристичными являются сигналы в области 1,45–2,32 и 3,18–3,67 м.д.

При рассмотрении 1Н ЯМР спектров гидрогеля, облученного дозами 25 кГр (рисунок 1) и 35 кГр, видно, что практи-чески полностью исчезают сигналы ПВП (остаточное количество составляет 3,0 и 1,5 %, соответственно). На наш взгляд, это связано с процессом образования трехмер-ной полимерной структуры гидрогелевой матрицы. Сравнение интегральных интен-сивностей в ЯМР спектре исходного рас-твора и спектре раствора полимеров по-сле облучения позволило оценить степень сшивки ПВП и ПЭО (около 98 %) при об-лучении дозой 25–35 кГр.

Выбор оптимального диапазона по-глощенных доз облучения. При разработке технологии получения гидрогелевых матриц необходимо было подобрать оптимальную дозу ионизирующего излучения для получе-ния гидрогелевых пластин с необходимыми для данной лекарственной формы физико-химическими свойствами. Подбором вели-чины поглощенной дозы можно также регу-лировать скорость выделения из полимерной матрицы действующих веществ.

№ компо-зиции

Внешний вид рН водной

вытяжки

Степень набухания,

г/г

Механическая прочность (разрывное усилие, Н)

№ 7 Бесцветные, прозрачные, неэластичные 5,6 1,3 Менее 4,0№ 8 Бесцветные, прозрачные, неэластичные 5,5 1,5 4,8№ 11 Бесцветные, непрозрачные, эластичные 4,5 1,3 4,2№ 12 Бесцветные, прозрачные, эластичные 6,2 1,1 5,9№ 13 Бесцветные, прозрачные, неэластичные 6,0 0,9 4,5

Таблица 2 – Физико-химические свойства полимерных матриц

62


При низких значениях поглощенной дозы не достигался достаточный уровень стерильности, не обеспечивались необходи-мая степень полимеризации и механические свойства гидрогелевых матриц. Однако, ра-диационная обработка будет достаточно де-шевой, а степень деструкции компонентов и особенно лекарственных средств, входящих в состав гидрогелей, будет минимальной. При высоких значениях поглощенной дозы продукт может стать жестким, степень раз-ложения введенного действующего веще-ства и радиационная составляющая стои-мости изделия будут высокими. Кроме того, могут возникнуть проблемы, связанные с увеличением токсичности за счет повышен-ного образования радикалов.

Таким образом, диапазон доз ионизиру-ющего излучения должен быть оптималь-ным и ограниченным стерилизующей дозой снизу и максимально допустимой дозой - сверху. Для медицинских изделий этот диа-пазон доз обычно составляет от 15 до 40 - 50 кГр; для изделий, требующих высокого уровня стерильности (УС = 10-6), - от 25 до 50 кГр [33].

В результате определения стерильности с использованием метода мембранной филь-трации установлено, что стерилизующей для

лекарственных средств на основе гидрогеле-вых полимерных матриц является поглощен-ная доза 15 - 20 кГр.

С целью определения величины макси-мально допустимой дозы ионизирующего излучения проводили изучение влияния по-глощенной дозы на внешний вид, механиче-ские свойства, степень набухания и степень высвобождения действующих веществ.

Влияние поглощенной дозы иони-зирующего излучения на механические свойства гидрогелевых матриц. Изучено влияние поглощенной дозы ионизирующего излучения на механические свойства гидро-гелевых матриц. В таблице 3 представлены результаты проведенных испытаний.

Как видно из табличных данных, с уве-личением поглощенной дозы облучения ме-ханическая прочность гидрогелей возраста-ла. Следует отметить, что снижение вели-чины разрывного усилия для гидрогелевых матриц, полученных при дозе более 25 кГр, связано с изменением структуры гидрогеля (уменьшались его эластичность и текучесть). Аналогичные результаты получены при ис-следовании механических свойств гидроге-левых пластин, содержащих мирамистин и гентамицин. Следовательно, введение в со-став гидрогелей данных субстанций не вли-

1 – до облучения; 2 – после облучения поглощенной дозой 25 кГрРисунок 1 – Спектры 1Н ЯМР гидрогелей

Таблица 3 – Влияние поглощенной дозы ионизирующего излучения на разрывное усилие гидрогелевых полимерных матриц

Доза облучения

Разрывное усилие, Н1 2 3 4 5

15 кГр менее 4,0 менее 4,0 менее 4,0 менее 4,0 менее 4,020 кГр 5,1 5,2 5,0 5,1 5,125 кГр 6,0 6,0 5,9 5,9 5,830 кГр 5,7 5,5 5,6 5,5 5,635 кГр 5,0 5,1 4,9 4,8 4,945 кГр 4,5 4,7 4,8 4,6 4,7

63


яло на механические свойства гидрогелевых матриц.

Установлено, что для образования поли-мерной основы с необходимыми структурно-механическими свойствами требуется доза ионизирующего излучения не менее 20 кГр. При увеличении дозы свыше 30 кГр снижа-лись механическая прочность, эластичность, гидрогели приобретали желто-коричневую окраску, внутри образовывалось большое количество газовых пузырьков.

Влияние поглощенной дозы ионизи-рующего излучения на степень набухания гидрогелевых матриц. Зависимость степе-ни набухания от поглощенной дозы ионизи-рующего излучения выражается типичной кривой: с увеличением поглощенной дозы степень набухания гидрогелей уменьшается (рисунок 2). Максимальная степень набуха-ния характерна для гидрогелей, облученных дозой, эквивалентной 10 кГр, минимальная (равновесная) – при дозе 40 кГр.

Достоверных различий зависимости сте-пени набухания гидрогелей без действую-щих веществ, с мирамистином и с гентами-цином от поглощенной дозы не установлено.

Влияние поглощенной дозы ионизи-рующего излучения на степень высво-бождения действующих веществ. Спо-собность гидрогелей к набуханию в воде дает возможность пролонгированного вы-свобождения предварительно введенных лекарственных субстанций вследствие их постепенной диффузии через набухшие в воде поры гидрогеля. Проведено изучение влияния поглощенной дозы ионизирующе-го излучения на степень высвобождения мирамистина и гентамицина из гидрогеле-вых матриц. Как видно из представленной на рисунке 3 графической зависимости,

более 90 % мирамистина высвобождается при воздействии ионизирующего излуче-ния дозой, эквивалентной и менее 30 кГр. Аналогичные результаты получены при анализе гидрогелевых матриц, содержа-щих гентамицина сульфат.

В результате проведенных исследований осуществлен выбор компонентов, оптими-зирован состав и параметры получения ги-дрогелевых полимерных матриц с исполь-зованием радиационной полимеризации. На основании полученных результатов опреде-лена оптимальная доза ионизирующего из-лучения, эквивалентная 25±5 кГр, обеспе-чивающая гидрогелевым матрицам стериль-ность, эластичность, механическую проч-ность, необходимые сорбционные свойства и способность к полному высвобождению действующих веществ.


1. Разработана технология получения ги-дрогелевых матриц с использованием иони-зирующего излучения: осуществлен подбор компонентов полимерной основы, подобра-ны их оптимальные массовые соотношения, параметры радиационной обработки.

2. В результате проведенных исследова-ний с использованием ЯМР-спектроскопии подтверждена структура поливинилпир-ролидона и полиэтиленоксида – основных компонентов гидрогелевой основы. Анализ спектров гидрогелей до и после радиацион-ной обработки показал, что степень сшивки полимеров составляет около 98 % при облу-чении поглощенной дозой 25 – 35 кГр.

3. Исследование влияния поглощенной дозы излучения на степень набухания гидро-гелевых матриц показало, что с увеличением

1 – гидрогелевые матрицы с мирамистином, 2 – гидрогелевые матрицы с гентамицином, 3 – гидрогелевые матрицы без действующих веществ

Рисунок 2 - Зависимость степени набухания гидрогелевых матриц от поглощенной дозы ионизирующего излучения

64


Рисунок 3 - Зависимость степени высвобождения действующих веществ гидрогелевых матриц от поглощенной дозы облучения

дозы ионизирующего излучения от 10 до 40 кГр уменьшается степень набухания гидро-гелевых матриц от 130 до 80.

4. Установлена зависимость степени вы-свобождения действующих веществ от по-глощенной дозы излучения. Высвобождение из полимерной основы более 90 % мирами-стина и гентамицина происходит при дозе, не превышающей 30 кГр.

5. Определены стерилизующая (20 кГр) и максимально допустимая (30 кГр) дозы ио-низирующего излучения, при облучении в диапазоне которых лекарственные средства на основе гидрогелевых полимерных матриц сте-рильны, обладают механической прочностью, эластичностью, сорбционными свойствами, позволяющими впитывать раневой экссудат и высвобождать введенные в состав действу-ющие вещества для обеспечения противоми-кробного и ранозаживляющего действия.

Авторы выражают благодарность Л.П. Ро-гинцу за консультации и проведение радиаци-онной обработки гидрогелевых матриц и С.А. Ламоткину за помощь при проведении исследо-ваний с использованием ЯМР-спектроскопии.

SUMMARY

Y.G. Chаrnetskaya, A.I. Zhebentyaev, P.T. Petrov

COMPOSITION AND FORMULATION OF HYDROGEL POLYMERIC MATRIXESResults of the development of the composi-

tion and technology for nished formulations of medical products based on hydrogel polymeric matrixes are summarized below.

Basic components and their mass ratios to produce the hydrogel basis were selected. By means of NMR-spectroscopy it was proved that the exposure to ionizing radiation leads to the

cross-linking of polyvinylpyrrolidone and poly-ethylene oxide. Because of the formation of a 3D-structure the resulting hydrogel matrixes are insoluble in water and organic solvents, do not melt when heated and possess suf cient me-chanical strength and elasticity.

The sterilization radiation dose (20 kGy) and maximum allowable dose (30 kGy) were determined. Under the exposure to the ionizing radiation within the above dose limits the hydro-gel polymeric matrixes become sterile, obtain the suf cient mechanical strength and elasticity and sorption properties which provide the pos-sibility to effectively absorb the wound ef uent and to release incorporated active ingredients with antimicrobial and wound-healing activity.

Keywords: hydrogel matrixes, ionizing ra-diation, absorbed dose, radiation-induced po-lymerization, breaking strength, swelling index, release index for active ingredients.


1. Полимерные гидрогели. Химиче-ская энциклопедия. [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.xumuk.ru/encyklopedia/2/3521.html. 15.04.2011.

2. Кабанов, В.Я. Получение полимерных биоматериалов с использованием радиаци-онно-химических методов/ В.Я. Кабанов // Успехи химии. – 1998. – Т 67, № 9. – С. 861 – 895.

3. Radiation crosslinked hydrogels as sus-tained release drug delivery systems / W. Pekala [et al.] // Radiat. Phys. Chem. – 1986. – Vol. 27, № 4. – Р. 275 – 285.

4. Rosiak, J. Acrylamide hydrogels / J. Ro-siak, K. Burozak, W. Pekala // 5th Symp. on Ra-diation Chemistry. – 1982. – Р. 741 – 749.

5. Mengping, Q. Radiat. Phys. and Chem. –

65


1993. – Vol. 42. – Р. 193. 6. Rosiak, J. Am. Chem. Soc. Polym. Prepr.

– 1990. – Vol. 31. –Р. 361. 7. Rosiak, J. Polyacrylamide hydrogels as

sustained release drug delivery dressing materi-als / J. Rosiak, K. Burozak, W. Pekala // Radiat. Phys. and Chem. – 1983. – Vol. 22, № 3-5. – Р. 907 – 915.

8. Wenxiu, Ch. Radiat. Phys. and Chem. – 1985. – Vol. 43. – Р. 26.

9. Ikada, I. Radiat. Phys. and Chem. – 1985. – Vol. 9, № 4-6. – Р. 633.

10. Heat resistance poly(vinyl alcohol) hy-drogel / F. Yoshii [et al.] // Radiat. Phys. and Chem. – 1995. – Vol. 46, № 2. – Р. 169 – 174.

11. Yoshii, F. Hydrogel wound dressing by radiation/ F. Yoshii // JAERI-Conf. – 2002. – № 3. – Р. 11 –15.

12. Preparation of pH-sensitive poly(vinyl alcohol-g-methacrylic acid) and poly(vinyl al-cohol-g-acrylic acid) hydrogels by gamma ray irradiation and their insulin release behaviour / S.-E.Park [et al.] // J. Appl. Polym. Sci. – 2004. – Vol. 91, № 1. – Р. 638 – 640.

13. Physical properties of gamma irradiated poly(vinyl alcohol) hydrogel preparations / A.V. Mondino [et al.] // Radiat. Phys. and Chem. – 1999. – Vol. 55, № 5-6. – Р. 723 – 726.

14. PVA-Sago starch hydrogel and the pre-liminary clinical animal study of the hydrogel / K. Hashim [et al.] // JAERI-Conf. – 2002. – № 3. – Р. 19 – 31.

15. Characterization of poly(vinyl alcohol) hydrogel for prosthetic intervertebral disc nu-cleus / D. Darwis [et al.] // Radiat. Phys. and Chem. – 2002. – Vol. 63. – Р. 539 – 542.

16. Hashim, K. Radiation crosslinking of starch/water-soluble polymer blends for hydro-gel/ K. Hashim [et al.] // JAERI-Conf. – 2000. – № 3. – Р. 23 – 31.

17. Nho, Y. C. Preparation and properties of PVA/PVP hydrogels containing chitosan by radiation/ Y. C. Nho, K. R. Park // J. Appl. Polym. Sci. – 2002. – Vol. 85, № 8. – Р. 1787 – 1794.

18. Park, K.R. Synthesis of PVA/PVP hy-drogels having two-layer by radiation and their physical properties/ K.R. Park, Y.C. Nho // Ra-diat. Phys. and Chem. – 2003. – Vol. 67, № 3-4. – Р. 361 –365.

19. Hilmy, N. Radiat. Phys. and Chem. – 1993. – Vol. 42. – Р. 911.

20. Weibin, W. Radiat. Phys. and Chem. – 1993. – Vol. 42. –Р. 947.

21. Effects of calcium alginate on cellular wound healing processes modeled in vitro / J. W. Doyle [et al.] // J. Biomed. Mater. Res. – 1996. – Vol. 32, № 4. – Р. 561 – 568.

22. Thomas, А. Alginates from wound dressings active human macrophages to secrets

tumour necrosis factor-alpha / A. Thomas, K.G. Harding, K. Moore // Biomaterials. – 2000. - Vol.21, №17. – Р. 1797 – 1802.

23. Dybek, К. Studies on dressings for den-tal surgery use. Part 3: Effect of gamma-radia-tion and of formaldehyde on properties of ge-latinous dental dressings / K. Dybek, A.Kubis, J. Rosiak // Pharmazie. – 1992. – Vol. 47, № 4. – Р. 273 – 274.

24. Bellincampi, L. // J. Appl. Polym. Sci. – 1997. – Vol. 63. – Р. 1493.

25. Kamath, K. J. Am. Chem. Soc. Polym. Prepr. – 1992. – Vol. 33. – Р. 91.

26. Khan, T. Mechanical, Bioadhesive Strength and Biological Evaluations of Chi-tosan lms for Wound Dressing / T. Khan, K. Peh, H. Ch,ng // J. Pharm Pharmaceut Sci. – 2000. – Vol. 3, № 3. – Р. 303 – 311.

27. Лабораторный практикум по цел-люлозно-бумажному производству: учеб-ное пособие для вузов/ С.Ф. Примаков [и др.] – М. Лесн. пром-ть, 1980. – С. 139 – 143.

28. Тагер, А.А. Физико-химия поли-меров / А.А. Тагер. - М.: Химия, 1968. – 536 с.

29. Разработка и валидация методики определения мирамистина в гидрогеле-вых полимерных матрицах с использо-ванием высокоэффективной жидкостной хроматографии / Ю.Г. Чернецкая [и др.] // Вестник фармации – 2010. – № 3. – С. 67 – 77.

30. Государственная фармакопея Респу-блики Беларусь: офиц. изд-ние / РУП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; ред. Г.В. Годовальников. – Минск: МГПТК полиграфии, 2006. – Т. 1. – 656 с.

31. Акриламид. Химическая энцикло-педия. [Электронный ресурс]. – Режим до-ступа: http://www.xumuk.ru/encyklopedia/90.html. 27.06.2011.

32. Пикаев, А.К. Современная радиаци-онная химия. Радиолиз газов и жидкостей / А.К. Пика-ев. - М.: Наука, 1986. – 440 с.

33. ГОСТ Р ИСО 11137- 2-2008. Стери-лизация медицинской продукции. Радиаци-онная стерилизация. Часть 2. Установление стерилизующей дозы ISO 11137-2:2006. Стандартин-форм. - Москва, 2010.


220007, Республика Беларусь,г. Минск, ул. Фабрициуса, 30,РУП «Белмедпрепараты»,тел./факс 8(017)220 31 42e-mail: [email protected]Чернецкая Ю.Г.


66


ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

Т.В. Трухачева1, О.В. Савинова2, Н.И. Павлова2, Л.В. Дьячкова1, Е.И. Бореко2

ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТИ СОЧЕТАНИЙ АЦИКЛОВИРА, ЦИКЛОЦИТИДИНМОНОФОСФАТА И БУТАМИНОФЕНА

1РУП «Белмедпрепараты», г. Минск2ГУ «Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и

микробиологии», г. Минск

Выполнено сравнительное изучение степени противовирусной активности сочета-ний субстанций ацикловира, циклоцитидинмонофосфата (модифицированного нукле-озида) и бутаминофена в отношении вариантов вируса герпеса простого в эксперимен-тах на культуре клеток. Установлен синергизм противовирусного действия сочетаний ацикловира и бутаминофена; циклоцитидинмонофосфата и бутаминофена. На основе результатов исследования проведен подбор оптимальных количественных соотношений действующих веществ для суммации и усиления противовирусного действия. Полученные данные являются экспериментальным обоснованием разработки новых комбинированных противогерпетических мазевых лекарственных средств, целью создания которых является повышение эффективности и безопасности противовирусной терапии.

Ключевые слова: вирус герпеса простого, лекарственная устойчивость, ацикловир, нуклеозид, бутаминофен, синергизм, резистентность.

ВВЕДЕНИЕ

Среди вирусных заболеваний особое место занимают герпетические инфекции, представляющие серьезную медико-соци-альную проблему [1].

Современная медицина располагает зна-чительным арсеналом противовирусных ле-карственных средств лечения герпетических инфекций. Одним из наиболее эффективных и чаще всего применяемых в медицинской практике противогерпетических лекарствен-ных средств (ЛС) является ацикловир (аци-клогуанозин) (рисунок 1).

Ингибируя вирусную ДНК-полимеразу, ацикловира трифосфат блокирует синтез вирусной ДНК [2, 3]. ЛС обладает очень низкой токсичностью, так как не действует на ДНК-полимеразу клеток человека и неак-

тивен в здоровых клетках. Широкое применение ЛС на основе аци-

кловира привело к возникновению ацикло-вир-резистентных штаммов вируса, что су-щественно снижает возможности в терапии больных, страдающих герпесвирусными за-болеваниями.

В настоящее время во многих лабора-ториях проводятся исследования, направ-ленные на поиск соединений, проявляющих антигерпетические свойства. К числу таких соединений относятся бутаминофен и ци-клоцитидинмонофосфат [4, 5].

Бутаминофен (2-гидрокси-3,5-ди-трет-бутил-N-фенил-анилин) – антиоксидант фе-нольной природы, обладающий противови-русной активностью (рисунок 2).

В настоящее время выпускается мазевая форма бутаминофена (Бутаминофен 2 %,

Рисунок 1 – Структурная формула ацикловира

Рисунок 2 – Структурная формула бутаминофена

OHH3C

CH3

CH3

H3C

H3C CH3

NH

67


мазь, рег. уд. МЗ РБ № 06/09/941). Получе-ние субстанции бутаминофена и состав его мазевой формы защищены патентами Респу-блики Беларусь [6, 7].

Бутаминофен обладает противовирус-ной активностью при лечении герпетиче-ских заболеваний кожи и слизистых оболо-чек (герпес простой, опоясывающий, герпес половых органов), способствует быстрому купированию воспалительного процесса, снижает зуд, отек, гиперемию, ускоряет об-разование корок, препятствует появлению свежих высыпаний [3].

Циклоцитидинмонофосфат (2,2’-ангидро-D-арабинофуранозил-цитозин-5’-моно-фосфат моногидрат) является синтетическим аналогом пуринового нуклеозида (рисунок 3). Эффективен в отношении вирусов: Herpes simplex I и II, Varicella Zoster [3, 5].

На основе циклоцитидинмонофос-

O

H

H

HH

N

N

NH

O

OH

OP

O

OH

HOxH2O

Рисунок 3 – Структурная формула циклоцитидинмонофосфата

фата (ц-ЦМФ) выпускается ряд мазевых ЛС: нуклеавир 5%, мазь (рег. уд. МЗ РБ № 04/10/1150) [8] и нуклеавир, глазная мазь (рег. уд. МЗ РБ 06/08/1290) [3].

При изучении противовирусной актив-ности на культуре клеток было установле-но, что по степени выраженности противо-вирусного эффекта ц-ЦМФ и бутаминофен активнее ацикловира и фосфоноуксусной кислоты (ФК) в тех случаях, когда инфици-рование происходит ацикловир-устойчивым или ФК-устойчивым вариантами вируса гер-песа. Это является существенным преиму-ществом ц-ЦМФ и бутаминофена [4, 5].

В ходе клинических испытаний мази бутаминофеновой 2% было показано, что эффективность терапии повышается при со-вместном применении с мазью ацикловира [3].

Становится очевидной важность иссле-дований, направленных на создание новых противогерпетических средств. С одной стороны, это поиск новых химических со-

единений, угнетающих вирусспецифиче-ские процессы и обладающих различными механизмами противовирусной активности. С другой стороны, это создание комбиниро-ванных средств на основе известных фарма-цевтических субстанций с тем, чтобы обе-спечить синергизм противогерпетической активности и оказать воздействие на возбу-дителей герпетической инфекции с развив-шейся устойчивостью к ацикловиру. В лите-ратуре описана возможность ингибирования штаммов вируса герпеса простого I типа, устойчивых к действию ацикловира, фосфо-ноуксусной кислоты или их комбинации, пу-тем сочетанного применения трех средств, имеющих различный механизм действия и способных ингибировать репродукцию аци-кловир-резистентного вируса: аденинараби-нозида, рибавирина и фосфономуравьиной кислоты; ксилоарабинозида, рибавирина и фосфономуравьиной кислоты и др. [9].

Основной целью нашей работы является изучение противовирусной активности соче-таний ацикловира, ц-ЦМФ и бутаминофена, а также подбор оптимальных количествен-ных соотношений действующих веществ, достаточных для суммации и усиления про-тивовирусного действия.


В качестве объектов исследования ис-пользовали зарегистрированные субстанции ацикловира (рег. уд. МЗ РБ № 735/05/10), ци-клоцитидинмонофосфата (рег. уд. МЗ РБ № 07/07/702), бутаминофена (рег. уд. МЗ РБ № 06/08/935). Субстанции предварительно ана-лизировали с целью подтверждения их соот-ветствия требованиям действующей норма-тивной документации (НД).

В работе была использована субстан-ция Ацикловир серии А041213, производи-тель «Zhejiang Charioteer Pharmaceutical Co. Ltd.», Китай. В соответствии с требованиями НД субстанция представляет собой белый или почти белый кристаллический порошок, малорастворимый в воде, легкорастворимый в диметилсульфоксиде, практически нерас-творимый в спирте этиловом 96 %. Раство-рим в разведенных растворах минеральных кислот и щелочей.

Содержание основного вещества и до-пустимый предел гуанина в субстанции определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) [10]. Хроматографирование проводили на жид-костном хроматографе с УФ-детектором. Использовали колонку размером 250 х 4,6 мм, заполненную силикагелем октадецил-силильным для хроматографии (размер ча-

68


стиц - 5 мкм). Подвижная фаза – смесь ук-сусной кислоты ледяной и воды в соотноше-нии 1:1000. Скорость подвижной фазы – 3,0 мл/мин, детектирование осуществляли при длине волны 254 нм, объем вводимой про-бы – 20 мкл. В качестве растворов сравне-ния использовали растворы фармакопейных стандартных образцов (ФСО) ацикловира и ФСО гуанина. Содержание ацикловира в субстанции должно быть не менее 98,5 % и не более 101,0 % в пересчете на безводное вещество. Допустимый предел гуанина – не более 0,7 %.

Для определения суммы сопутствующих примесей использовали метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) [10] с применением для анализа ТСХ пластинки со слоем сили-кагеля F254 (Kieselgel 60 F254 фирмы «Merck», Германия) и смеси растворителей: хлоро-форм – метанол – аммиака раствор концен-трированный (80:20:20). Суммарное содер-жание сопутствующих примесей, оцененное по интенсивности окраски пятен, видимых в ультрафиолетовом (УФ) – свете, в сравне-нии с пятнами на хроматограммах раство-ров сравнения, должно быть не более 1,0 %. Воду в субстанции ацикловира определяли полумикрометодом (не более 6 %) [10].

Для анализа использовали субстанцию Циклоцитидинмонофосфат серии 010705, производитель РУП «Белмедпрепараты». В соответствии с требованиями фармакопей-ной статьи субстанция представляет собой белый мелкокристаллический порошок без запаха, растворимый в воде, очень малорас-творимый в спирте этиловом 96 %, практи-чески нерастворимый в хлороформе.

Содержание основного вещества в суб-станции определяли методом абсорбцион-ной спектрофотометрии в УФ-области [10] путем измерения величины оптической плотности испытуемого раствора в макси-муме поглощения при длине волны 262 нм и с учетом удельного показателя поглощения ц-ЦМФ при этой длине волны. Содержание ц-ЦМФ должно быть от 98,0 % до 101 % в пересчете на сухое вещество.

Посторонние примеси в субстанции определяли методом ТСХ с использованием пластинки со слоем целлюлозы для хромато-графии F254 и смеси растворителей: бутанол – кислота уксусная ледяная – вода (5:2:3). На хроматограмме испытуемого раствора, кро-ме основного пятна, допускается наличие дополнительного пятна, не превышающего по величине и интенсивности окраски пятна раствора сравнения (не более 2 %).

Для определения потери в массе при вы-сушивании навеску субстанции ц-ЦМФ су-шили при температуре от 90°С до 95°С (не

более 3 %) [10].В эксперименте использовали субстан-

цию Бутаминофен серии 020205, производи-тель РУП «Белмедпрепараты». Субстанция представляет собой кристаллический или мелкокристаллический порошок белого или белого с желтоватым или сероватым оттен-ком цвета, легкорастворимый в хлороформе и эфире, умеренно растворимый в гексане и спирте этиловом 96 %, практически нерас-творимый в воде.

Для определения содержания основно-го вещества в субстанции применяли метод абсорбционной спектрофотометрии в УФ-области при длине волны 280 нм. Для расче-та количественного содержания бутамино-фена в субстанции использовали молярный показатель поглощения бутаминофена при длине волны 280 нм. Содержание бутамино-фена должно быть от 95,0 % до 102 % в пере-счете на сухое вещество.

Присутствующий в субстанции в ка-честве примеси анилин (не более 0,005%) определяли методом газовой хроматографии (ГХ) на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором [10]. Сумму примесей определяли методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе с УФ-детектором. Использовали колонку размером 250 х 4,6 мм, заполненную силикагелем октадецилси-лильным для хроматографии (размер частиц – 5 мкм). Подвижная фаза – смесь ацетони-трила и воды в соотношении 4 : 1. Скорость подвижной фазы – 1,0 мл/мин, детектиро-вание осуществляли при длине волны 280 нм, температура колонки – 25°С. Содержа-ние суммы примесей в фармацевтической субстанции должно быть не более 3 %. Для определения показателя «Потеря в массе при высушивании» субстанцию бутамино-фена сушили в вакуум-сушильном шкафу при температуре (80±1)°С и остаточном дав-лении, не превышающем 0,7 кПа (8 мм рт. ст.) в течение 4 часов. Допускается потеря в массе не более 2 %.

При изучении токсичности и противо-вирусной активности субстанции растворя-ли в бидистиллированной воде для получе-ния исходного раствора (с добавлением 10% спирта этилового для водонерастворимой субстанции бутаминофена) с концентрацией 5 мг/мл. Последующие разведения готовили на среде поддержки культур клеток.

Пороговое значение токсичности суб-станций определяли на монослойных куль-турах клеток первичных фибробластов эм-брионов кур (ФЭК) и рабдомиосаркомы че-ловека (RD). Монослойную культуру ФЭК выращивали с использованием гемогидро-лизата с добавлением 10% сыворотки крови

69


крупного рогатого скота (оба препарата про-изводства предприятия «Диалек»), культуру клеток RD – с использованием среды 199 (Sigma) с добавлением 10% сыворотки крови эмбрионов крупного рогатого скота. После формирования сплошного монослоя клетки отмывали от ростовой среды и покрывали средой поддержки (среда 199), содержащей различные концентрации исследуемых ве-ществ (двукратный шаг разведений). После 48–72 ч инкубации при температуре 37оС оценивали состояние монослоя клеток по морфологии при малом увеличении микро-скопа (80). Максимальную концентрацию веществ, в присутствии которой отсутство-вали грубые изменения клеток, принимали как максимальную переносимую (толерант-ную) концентрацию (МПК). Дополнитель-ную информацию о состоянии клеток по-лучали в ходе выполнения экспериментов по испытанию противовирусных свойств методом редукции бляшек, где индикатором жизнеспособности клеток (ФЭК) служило равномерное прокрашивание монослоя ви-тальным красителем (нейтральный красный, Sigma), включенным в состав наносимого на клетки питательного покрытия.

Противовирусные свойства бутамино-фена, ацикловира и ц-ЦМФ изучали в экс-периментах на культурах клеток ФЭК и RD с вирусом герпеса простого I типа (ВГП-1, штамм 1С, чувствительный к действию аци-кловира). Исследования выполняли методом редукции бляшек на культуре ФЭК и мето-дом оценки цитопатического эффекта (ЦПЭ) на культуре клеток RD. Монослойные куль-туры клеток, выращенные во флаконах, от-мывали от ростовой среды, инфицирова-ли 0,01–0,001 бляшкообразующих единиц (БОЕ) или 50% тканевых цитопатогенных инфицирующих доз (ТЦИД50) на 1 клетку (БОЕ/клетка или ТЦИД50/клетка) вирусов путем нанесения на клетки разведения ви-руссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 ч при температуре 37оС. Затем жидкость удаляли и клетки покрывали агаровым по-крытием на основе среды 199 (Sigma) или средой поддержки (среда 199), содержащи-ми различные концентрации субстанций исследуемых средств. Для каждой из кон-центраций исследованных субстанций ис-пользовали 2–4 флакона с культурой клеток. Подробно использованные методы описаны ранее [11, 12]. Критерием наличия противо-вирусного действия считали различия в ти-тре вируса в сравнении с контролем. Обра-ботку полученных данных выполняли обще-принятыми в вирусологии методами опре-деления числа инфекционных единиц, Рида и Менча, статистики для малых значений n

в несгруппированном ряду данных [13, 14]. Концентрации действующих веществ, пода-вляющие репродукцию вируса на 50% (EC50) и 90% (ЕС90), а также доверительный интер-вал их значений при 95% вероятности (I95) вычисляли с использованием компьютерной программы, основанной на пробит-анализе и взвешенной линейной регрессии [15]. От-ношения МПК/EC50 и МПК/EC90 использова-ли в качестве величин, свидетельствующих о широте диапазона активных нетоксичных концентраций вещества.

При исследовании комбинаций бута-минофена и ацикловира, бутаминофена и ц-ЦМФ характер эффекта сочетания (синер-гическое, аддитивное, индифферентное или антагонистическое действие) определяли на основании фракционального индекса инги-бирования (ФИИ = (EC50 вещества А в ком-бинации/EC50 вещества А отдельно) + (EC50 вещества В в комбинации/EC50 вещества В отдельно)), значения которого менее 0,9 рас-ценивали как свидетельство синергизма дей-ствия; 1,0 – как аддитивный эффект; от 1,1 до 1,9 – как индифферентный эффект и 2,0 – как антагонизм действия [16].


Результаты химического анализа суб-станций ацикловира, цЦМФ и бутаминофе-на указанных серий приведены в таблице 1. Согласно полученным данным, субстанции соответствовали требованиям НД и могли быть использованы в дальнейшем экспери-менте.

При определении порогового значения токсичности субстанций ориентировались на значения МПК. Нетоксичными для куль-тур клеток оказались субстанции ациклови-ра и ц-ЦМФ (МПК >1 600 мкг/мл). Значи-тельно более низкое значение МПК имела субстанция бутаминофена (25 мкг/мл). По-роговое значение токсичности исследован-ных средств для эмбриональных культур клеток птиц (ФЭК) и трансформированных клеток млекопитающих (RD) практически не различалось.

Полученные значения МПК субстанций использовали в дальнейшем для вычисления показателей, свидетельствующих о широте специфической противовирусной активно-сти.

Согласно данным, полученным при ис-следовании противовирусной активности субстанций ацикловира, ц-ЦМФ и бутами-нофена, наиболее высокой противовирусной активностью в отношении ВГП-1 обладала субстанция ацикловира (таблица 2).

Несколько менее выраженную, однако

70


также высокую противовирусную актив-ность проявила субстанция ц-ЦМФ. Обе субстанции, ацикловира и ц-ЦМФ, характе-ризовались наличием большого диапазона концентраций с подавлением репродукции ВГП-1 более чем на 1 lg (в 10 раз). Об этом свидетельствовали высокие значения отно-шений МПК/ЕС90. Субстанция бутаминофе-на, согласно полученным данным, облада-ла слабой противовирусной активностью. Для этого средства характерно отсутствие широкого диапазона концентраций полного подавления репродукции вируса, имеющего место в случае использования ацикловира и ц-ЦМФ.

Различие результатов, полученных в исследовании на разных культурах клеток, объяснялось в основном использованными

Таблица 1 – Основные показатели качества ацикловира, ц-ЦМФ и бутаминофена(Хср± Sxср; P=0,95, n=6)

Фармацевтическаясубстанция

Показатели качества(допустимые пределы)Количественное содержание, %

Вода/потеря в массе при высушивании, %

Примеси, %

Ацикловир серия А041213

99,8 ± 0,028 в пересчете на безводное вещество (98,0 % -101,0 %);гуанина – 0,2 ± 0,002 (допустимый предел не более 0,7 %)

Вода – 4,84 ± 0,038 (норма - не более 6,0 %)

Сумма сопутствующих примесей – менее 1,0*

ц-ЦМФ серия 010705

99,2 ± 0,033 в пересчете на сухое вещество (98,0 %-101,0 %)

Потеря в массе при высушивании – 2,06±0,02(норма - не более 3,0 %)

Сопутствующие примеси – менее 2,0*

Бутаминофенсерия 020205

98,3 ± 0,05 в пересчете на сухое вещество(95,0 %-102,0 %)

Потеря в массе при высушивании – 0,24 ± 0,003 (норма - не более 2,0 %)

Сумма примесей – 1,83 ± 0,003 (норма - не более 3,0 %)

Примечание: *- критерии приемлемости: на хроматограмме раствора стандартного образца (РСО) должно быть четко видно пятно; на хроматограмме испытуемого раствора величина удер-живания Rf пятна должна быть равной Rf пятна РСО аналогичной концентрации

Таблица 2 - Вирусингибирующие свойства субстанций ацикловира, ц-ЦМФ и бутаминофена

Фармацевтическаясубстанция

Культура клетокФЭК RD

EC50 (I95)EC90 (I95),мкг/мл

МПК/EС50МПК/EC90

EC50 (I95)EC90 (I95),мкг/мл

МПК/EС50МПК/EC90

Ацикловир 0,08 (0,10÷0,07)0,23 (0,27÷0,20)

>20 000>6 956

0,23 (2,7÷0,002)4,2 (47,9÷0,37)

>6 956>381

ц-ЦМФ 0,27 (4,1÷0,02)3,4 (50,1÷0,23)

>5 925>471

2,2 (3,2÷1,5)15,5 (23,0÷10,5)

>727>103

Бутаминофен 8,1 (10,7÷6,1)59,1 (78,4÷44,5)

3,10,4

11,7 (13,2÷10,4)30,4 (38,5÷24,0)

2,10,8

методами.Противовирусные свойства сочетаний

субстанций бутаминофена и ацикловира, а также субстанций бутаминофена и ц-ЦМФ в отношении ВПГ-1 были определены в сравнительном исследовании на культуре клеток RD (таблица 3). При этом исследо-вали субстанции каждого из средств в не-обходимом диапазоне концентраций как индивидуально, так и с добавлением одной фиксированной концентрации субстан-ции второго средства. Сочетания субстан-ций ацикловира и бутаминофена, а также ц-ЦМФ и бутаминофена исследовали в от-дельных экспериментах, выполненных в разное время. В связи с этим значения эф-фективных концентраций бутаминофена в соответствующих строках таблицы разли-

71


чаются.Установлено увеличение противовирус-

ного действия для всех исследованных соче-таний субстанций. Об этом свидетельство-вали вычисленные значения ЕС50 и ЕС90. В частности, ЕС50 и ЕС90 субстанции бутами-нофена в сочетании с субстанцией ацикло-вира уменьшились в 292,5 и 9,6 раза, ЕС50 и ЕС90 субстанции ацикловира в сочетании с субстанцией бутаминофена – в 76,7 и 8,2 раза, соответственно. В свою очередь, ЕС50 и ЕС90 субстанции бутаминофена в сочетании с субстанцией ц-ЦМФ уменьшились в 3,5 и 3,9 раза, ЕС50 и ЕС90 субстанции ц-ЦМФ в со-четании с субстанцией бутаминофена – в 5,5 и 2,2 раза соответственно. Вариабельность показателей противовирусного действия бу-таминофена в разных экспериментах может быть связана, прежде всего, с плохой раство-римостью в воде.

Полученные данные свидетельство-вали о возможности снижения количества активно действующих веществ в комбини-рованной лекарственной форме без потери эффективности. Количественные соотноше-ния субстанций для суммации и усиления противовирусного действия могут быть раз-личными, за исключением концентраций, находящихся ниже минимальных пороговых значений (ниже ЕС50, определенных для со-четаний веществ).

Вычисленные значения ФИИ для соче-таний субстанций бутаминофена с ацикло-виром и бутаминофена с ц-ЦМФ составили

Таблица 3 - Вирусингибирующие свойства сочетаний субстанций ацикловира и бутаминофена и ц-ЦМФ и бутаминофена

Сочетания фармацевтическихсубстанций

Противовирусные свойстваEC50 (I95),мкг/мл

EC90 (I95),мкг/мл ФИИ

Сочетание ацикловир + бутаминофенАцикловир 0,23 (2,7÷0,002) 4,2 (47,9÷0,37)

0,02

АЦВ + 3 мкг/мл бутаминофена 0,003 (0,008÷0,001) 0,51 (1,3÷0,20)

Бутаминофен 11,7 (13,2÷10,4) 30,4 (38,5÷24,0)Бутаминофен + 1,5 мкг/мл

ацикловира 0,04 (0,17÷0,08) 3,15 (14,6÷0,68)

Сочетание ц-ЦМФ + бутаминофенц-ЦМФ 2,2 (3,2÷1,5) 15,5 (23,0÷10,5)

0,46

ц-ЦМФ + 3 мкг/мл бутаминофена 0,4 (2,3÷0,06) 7,1 (44,8÷1,1)

Бутаминофен 4,6 (5,0÷4,3) 8,9 (9,5÷8,3)Бутаминофен + 3 мкг/мл

ц-ЦМФ 1,3 (1,4÷1,2) 2,3 (2,5÷2,1)

0,02 и 0,46,соответственно. Таким образом, при выполнении изуче-

ния противовирусной активности сочетаний субстанций бутаминофена и ацикловира, а также бутаминофена и ц-ЦМФ установлено синергическое противовирусное действие. Полученные данные свидетельствовали о возможности снижения количества активно действующих веществ в комбинированных лекарственных формах бутаминофена с аци-кловиром и бутаминофена с ц-ЦМФ до 2 и более раз без потери эффективности.


1. Выполнено сравнительное опреде-ление степени противовирусной активно-сти сочетаний бутаминофена, ацикловира, ц-ЦМФ.

2. Установлен синергизм противовирус-ного действия сочетаний этих фармацевти-ческих субстанций.

3. Экспериментально подтверждена воз-можность снижения количества действу-ющих веществ в комбинированной лекар-ственной форме до 2 и более раз для комби-наций субстанций бутаминофена с ацикло-виром и бутаминофена с ц-ЦМФ.

SUMMARY

T.V. Truhacheva, O.V. Savinova, N.I. Pavlova, L.V. Diyachkova, E.I. Boreko

COMPARATIVE STUDY

72


OF THE SPECIFIC ANTIVIRAL ACTIVITY OF COMBINATIONS

OF ACYCLOVIR, CYCLOCITIDINMONOPHOSPHATE

AND BUTAMINOPHEN AGAINST HERPES SIMPLEX VIRUS

The comparative study of the degree of the antiviral activity of combinations of acyclovir, cyclocitidinmonophosphate (a modi ed nucleo-side), butaminophen against strain of the herpes simplex virus.

The synergistic action of butaminophen in combinations with acyclovir or cyclocitidin-monophosphate was established.

The data obtained provide the experimen-tal basis for the development of new combined antiherpetic ointments with enhanced antiviral activity. The clinical usage of such formulations will prevent the development of the drug resist-ance of the herpes virus. It is particularly impor-tant in case of chronic recurrent diseases.

Keywords: herpes simplex virus, drug re-sistance, acyclovir, nucleoside, butaminofen, synergism, resistance.


1. Исаков, В.А. Герпесвирусная инфек-ция: Рекомендации для врачей / В.А. Исаков, С.Б. Рыбалкин, М.Г. Романцов. – СПб., 2006. – 96 с.

2. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в Беларуси: Справочник / М.: АстраФармСервис, 2007. – С. 192.

3. Лекарственные средства РУП «Бел-медпрепараты»: Справочник / С.В. Шляхтин [и др.]; под ред. Т.В. Трухачевой. – 5-ое изд. – Минск, 2011. – С. 91 – 92, 111 –112, 431 – 434.

4. Трухачева, Т.В. Современные отече-ственные лекарственные средства для этио-тропной терапии герпесвирусной инфекции. Сообщение 1. Ацикловир и бутаминофен / Т.В. Трухачева [и др.] // Вестник фармации. – 2007. – №1 (35). – С. 53 – 66.

5. Современные отечественные лекар-ственные средства для этиотропной терапии герпесвирусной инфекции. Сообщение 2 / Т.В. Трухачева [и др.] // Вестник фармации. – 2007. – №2 (36). – С. 54 – 63.

6. Противовирусное средство для лече-ния инфекций, вызванных вирусом просто-го герпеса: пат: 6503 Республика Беларусь: МПК7, А 61К 31/05, А 61Р 31/22 / Андреева О.Т [и др.]; заявитель ОАО «Белмедпрепара-ты»; Учреждение БГУ «Научно-исследова-тельский институт физико-химических про-блем» (BY) - №а20000964; заявл. 25.10.2000; опубл. 30.09.2004//Афiцыйны бюл. / Нац. Цэнтр iнтэлектуал.уласнацi. – 2004. – №3

(42). – С. 98.7. Средство против вируса герпеса: пат:

6594 Республика Беларусь: МПК7, А 61К 31/05, А 61Р 31/22 / Андреева О.Т [и др.]; заявитель ОАО «Белмедпрепараты»; Учреж-дение БГУ «Научно-исследовательский ин-ститут физико-химических проблем» (BY) - №а20000963; заявл. 25.10.2000; опубл. 30.12.2004//Афiцыйны бюл. / Нац. Цэнтр iнтэлектуал.уласнацi. – 2004. – №4 (43). – С. 104.

8. Противовирусное средство: пат: 11470 Республика Беларусь: МПК(2006), А 61К 31/7042, А 61К 31/66 / Трухачева Т.В [и др.]; заявитель РУП «Белмедпрепараты» (BY) - №а20070194; заявл. 23.02.2007; опубл. 30.10.2008//Афiцыйны бюл. / Нац. Цэнтр iнтэлектуал.уласнацi. – 2008. – № 6 (65). – С. 66.

9. Галегов, Г.А. Ингибирование репро-дукции штаммов вируса герпеса простого типа 1 с лекарственной устойчивостью / Г.А. Галегов, В.Л. Андронова // Антибиотики и химиотерапия. – 2000. – № 1. – С. 5 – 9.

10. Государственная фармакопея Ре-спублики Беларусь: офиц. изд-ние: в 3 т. / Центр экспертиз и испытаний в здравоохра-нении; под общей ред. Г.В. Годовальникова. – Минск: МГПТК полиграфии, 2006. – Т.1. – 656 с.

11. Хмара, М.Е. Предпосылки сочетан-ного применения ацикловира и метронидазо-ла для терапии хронического герпетического энцефалита (экспериментальные исследова-ния и клинические наблюдения) / М.Е. Хма-ра, Е.И. Бореко, И.И. Протас // Медицинская панорама. – 2005. – № 9. – С. 30 – 33.

12. Савинова, О.В. Использование но-вых производных бетулина в комбинации с ремантадином для ингибирования ре-продукции вируса гриппа / О.В. Савинова, Н.И. Павлова, Е.И. Бореко // Антибиотики и химиотерапия. – 2009. – Т. 54, № 5 – 6. – С. 16 –20.

13. Семенов, Б.Ф. Некоторые статисти-ческие методы, используемые при обработке результатов вирусологических исследова-ний: Руководство по лабораторной диагно-стике вирусных и риккетсиозных болезней / Б.Ф. Семенов; под ред. П.Ф. Здродовского и М.И. Соколова. – М.: Медицина, 1965. – С. 208 – 218.

14. Рокицкий, П.Ф. Биологическая ста-тистика. / П.Ф.Рокицкий. – Минск: Вышэй-шая школа, 1973. – 326 с.

15. Fung. К.P. A computer program in Вasic for estimation of ED50 and LD50 / К.P. Fung // Computers in Biology and Medicine. – 1989. – Vol. 19, № 2. – P. 131 – 135.

16. Janz, С. Combined interaction of

73


antiherpes substances and interferon beta on the multiplication of herpes simplex virus / С. Janz, R.Wigand // Arch. Virol. – 1982. – Vol. 73. – P. 135 – 143.


220007, Республика Беларусь,г. Минск, ул. Фабрициуса, 30,РУП «Белмедпрепараты»,тел. (017)2203927, факс (017)2203142,e-mail: [email protected],Дьячкова Л.В.


И.В. Жильцов, Д.В. Моисеев, В.М. Семенов, С.К. Егоров

КИНЕТИКА РАСПАДА НЕКОТОРЫХ БЕТА-ЛАКТАМНЫХ АНТИБИОТИКОВ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО СЫВОРОТОЧНОГО АЛЬБУМИНА


Настоящая работа посвящена исследованию влияния человеческого сывороточного альбумина (ЧСА) на бета-лактамы. Показано, что гидролиз четырех антибиотиков бе-та-лактамного ряда (бензилпенициллина, цефалексина, азтреонама и имипенема) под воздействием ЧСА статистически значимо ускоряется, что обусловливает дополни-тельный распад 2,3% азтреонама, 7,5% бензилпенициллина, 10,8% цефалексина и 11,9% имипенема к шестому часу инкубации при температуре 37°С. При этом вид кинетиче-ских кривых распада бензилпенициллина, цефалексина и имипенема под воздействием ЧСА характерен для ферментативных реакций 1-го порядка, а азтреонама – нулевого порядка. Повышение температуры инкубации с 37°С до 39°С приводит к ускорению ка-тализируемого альбумином распада имипенема в среднем на 14,0%, а цефалексина – на 15,7%. Бета-лактамные антибиотики, не разрушающиеся под воздействием ЧСА, не разрушаются и цельной сывороткой крови. По отношению к бета-лактамным анти-биотикам, разрушаемым ЧСА, нативная сыворотка крови в некоторых случаях может проявлять существенно более высокую (для бензилпенициллина разница может превы-шать 30%) бета-лактамазную активность, чем очищенные препараты альбумина лю-бого происхождения в нормальной для человеческой крови концентрации. Таким обра-зом, бета-лактамазная активность сыворотки крови распространяется не только на нитроцефин, но и на другие антибиотики бета-лактамного ряда, широко используемые в практике здравоохранения.

Ключевые слова: бета-лактамные антибиотики, человеческий сывороточный аль-бумин, нативная сыворотка крови, бета-лактамазная активность, ВЭЖХ.

ВВЕДЕНИЕ

Феномен собственной бета-лактамаз-ной активности человеческой крови изве-стен достаточно давно. Так, было показа-но, что аналоги карбапенемов (в частно-сти, 2-метилпенем-3-карбоксиловая кисло-та) разрушаются альбуминами человече-ской крови, причем глобулиновая фракция подобной активностью не обладает [1]. В 1972 г. группа исследователей компании Glaxo Research Ltd, изучая свойства син-тезированного ими хромогенного цефало-спорина нитроцефина, описала значимый распад бета-лактамной связи указанного антибиотика под воздействием, в числе

прочего, сыворотки человеческой крови, причем было показано, что данное ее свой-ство опосредуется в первую очередь альбу-миновой фракцией [2]. Тем не менее, углу-бленное исследование данного феномена на тот момент не производилось, реакция была сочтена неспецифической, и обна-руженное явление было забыто на много лет. В 1994 г. научный коллектив во главе с B. Nerli повторно описал феномен ин-тенсивного распада нитроцефина под воз-действием человеческого сывороточного альбумина [3, 4]. Попытка выявить распад некоторых других антибиотиков цефало-споринового ряда (в частности, цефтри-аксона, цефоперазона и цефсулодина) под

74


воздействием ЧСА не увенчалась успехом, и в результате феномен необычно высокой собственной бета-лактамазной активно-сти человеческой крови остался незаме-ченным научным сообществом. В 2007 г. явление необычно интенсивного распада нитроцефина под воздействием сыворотки человеческой крови было независимо от других исследователей обнаружено нашим научным коллективом [5].

Природа собственной бета-лактамазной активности сыворотки крови никогда и ни-кем подробно не изучалась: до сих пор неиз-вестны особенности данной активности, ее механизм, а также возможное клиническое значение. Ранее мы убедительно доказали, что бета-лакта мазная активность – неотъ-емлемое свойство человеческой крови, и она на 86-100% обусловлена ее альбумино-вой фракцией. Помимо ЧСА, большинство белковых фракций крови обладает незначи-тельной бета-лактамазной активностью, со-ставляющей приблизительно 9,6% от общей сывороточной. В частности, поликлональ-ные IgG также обладают собственной бе-та-лактамазной активностью, но их вклад в общую сывороточную активность не превы-шает 10-15%. Нами был также выявлен ряд особенностей сывороточной бета-лактамаз-ной активности, в частности, оптимум рН, зависимость скорости реакции от темпера-туры и ионной силы раствора, была изучена кинетика реакции распада нитроцефина, ка-тализируемого ЧСА (соответствует реакции первого порядка с Km=0,115). Было также установлено, что наличие бета-лактамазной активности ЧСА критически зависит от со-хранности третичной структуры последнего и в то же время не зависит от присутствия кофакторов. Мы доказали наличие в составе молекулы альбумина активного центра, от-ветственного за связывание бета-лактам ных антибиотиков и разрушение нитроцефина, смоделировали его трехмерную структуру и аминокислотный состав, а также реконстру-ировали механизм катализа [6, 7]. Тем не ме-нее, остается открытым вопрос – может ли ЧСА катализировать гидролиз бета-лактам-ной связи каких-либо антибиотиков, кроме нитроцефина? Согласно имеющимся публи-кациям, вероятность этого нельзя исключить [1], но конкретных научных данных о харак-тере воздействия ЧСА на реально применя-емые в клинической практике антибиотики бета-лактамного ряда нет до сих пор. Соот-ветственно, целью настоящего исследования было изучить взаимодействие ЧСА с анти-биотиками бета-лактамного ряда из числа наиболее широко применяемых в клиниче-ской практике.


Определялась бета-лактамазная актив-ность препарата ЧСА, очищенного спирто-вой седиментацией по Кону [8] на Витеб-ской областной станции переливания крови. Рабочая (в пробе) концентрация альбумина составляла 50 мг/мл.

Поскольку методика, основанная на рас-паде нитроцефина, позволяет анализиро-вать гидролиз бета-лактамной связи только собственно нитроцефина, для исследова-ния взаимодействия других бета-лактамов с сывороткой крови и ЧСА мы использовали высокоэффективную жидкостную хромато-графию (ВЭЖХ). Данный метод не позво-ляет непосредственно регистрировать факт распада бета-лактамной связи антибиотика, фиксируя лишь убыль количества анализи-руемого вещества, но существуют способы обойти данное ограничение.

Для выполнения ВЭЖХ-анализа исполь-зовали жидкостный хроматограф Agilent 1100 с фотодиоднометрическим детектором G1315B и системой автоматического ввода пробы (автосэмплером). Разделение про-изводили на хроматографической колонке Zorbax Eclipse XDB-C18 150×4,6 мм (размер частиц сорбента – 5 μm). В качестве подвиж-ной фазы (элюента) применяли смесь ацето-нитрила (пр-во Sigma) и 0,01 М KH2PO4 (pH 3,0), температура колонки составляла 30°С, давление в системе – 150-170 бар. Для опре-деления имипенема вместо 0,01 М KH2PO4 с рН 3,0 использовали 0,01 М фосфатный буферный раствор (ФБР) с рН 7,4. Соотно-шение ацетонитрила и буферного раствора подбирали таким образом, чтобы общее вре-мя одного анализа не превышало 15 минут, а время удерживания антибиотика составляло не менее 5 минут. Регистрацию производи-ли путем динамического (5 раз в секунду) замера уровня поглощения выходящего из колонки элюата в ультрафиолетовом диа-пазоне в максимумах спектра антибиотика при λ=210, 225, 235, 260, 266 либо 300 нм, в зависимости от определяемого образца [9]. Подтверждение присутствия в пробе изучае-мого антибиотика проводили по совпадению времени удерживания и спектра поглощения в анализируемом образце со стандартным образцом, а изменение концентрации в дина-мике устанавливали по уменьшению площа-ди под кривой (mAU×C) данного пика при последующих замерах.

Для эксперимента было использовано 13 антибиотиков бета-лактамного ряда, все – химически чистые субстанции пр-ва Sigma либо Vetranal: азтреонам (CAS 78110-38-0), амоксициллин (CAS 26787-78-0), ампи-

75


циллин (CAS 69-52-3), бензилпенициллин (CAS 69-57-8), имипенем (CAS 74431-23-5), пиперациллин (CAS 59703-84-3), цефалек-син (CAS 15686-71-2), цефокситин (33564-30-6), цефоперазон (CAS 113826-44-1), це-фотаксим (CAS 64485-93-4), цефтазидим (MDL MFCD00153936), цефтриаксон (CAS 104376-79-6), цефепим (CAS 88040-23-7). Соотношение концентраций антибиотиков и ЧСА (во всех случаях 1 моль/л) составляло 1:1.

В качестве контрольных проб использо-вали рабочие растворы антибиотиков, раз-веденные в 2 раза добавлением 0,1 М ФБР, рН 7,4. Контрольные и опытные пробы ин-кубировали при температуре 37°С в течение 3240 минут, причем содержание исследуе-мых антибиотиков в них замеряли перед на-чалом инкубации, затем – каждые 15 минут до истечения первого часа инкубации, затем – каждые 30 минут до истечения 2 часа ин-кубации, затем – каждый час до истечения 6 часов инкубации, после чего – на 1440, 1800, 2940 и 3240 минутах. По результатам замеров вычисляли долю антибиотика (в % от количества, исходно внесенного в про-бу), содержащуюся в каждой паре проб на момент регистрации хроматограммы, и на основании полученных данных строили кривые убыли антибиотиков. Достоверность различий убыли антибиотиков в парах опыт-ных и контрольных проб определяли при по-мощи F-теста с использованием программы GraphPad Prism 5.

Перед загрузкой смеси ЧСА с изучаемым антибиотиком на ВЭЖХ-колонку произво-дили депротеинизацию: к 1 объему пробы добавляли 2 объема метанола (х.ч.), пробу энергично встряхивали на вортексе, после чего образовавшийся осадок отделяли цен-трифугированием при 14 000 об/мин в тече-ние 5 минут, а надосадочную жидкость ис-пользовали для проведения ВЭЖХ-анализа [10].

Согласно полученным нами ранее дан-ным [6, 7], повышение температуры до фи-зиологически допустимых цифр, реально наблюдаемых в клинической практике у вы-соколихорадящих больных (39-40°С), при-водило к существенному повышению бета-лактамазной активности сыворотки крови. Мы предположили, что данная закономер-ность распространяется не только на реак-цию гидролиза нитроцефина, но и на катали-зируемый ЧСА распад остальных бета-лак-тамных средств. С целью эксперименталь-ной проверки указанного предположения было приготовлено две серии контрольных и опытных проб одинакового состава; одну серию инкубировали при температуре 37°С,

вторую – при температуре 39°С. В качестве субстратов были использованы химически чистые субстанции имипенема и цефалекси-на (см. выше); производили инкубацию ра-бочих растворов данных препаратов с ЧСА. Содержание исследуемых антибиотиков в контрольных и опытных пробах определяли при помощи ВЭЖХ-анализа; в дальнейшем производили межсерийное сравнение коли-чества антибиотиков, выявленного в опыт-ных и контрольных пробах на определенный момент времени. Достоверность различий убыли антибиотиков в соответствующих па-рах опытных и контрольных проб определя-ли при помощи F-теста.

Для доказательства факта распада бета-лактамной связи бензилпенициллина (БП) в процессе взаимодействия с ЧСА к рабочему раствору БП добавляли 100 ЕД пеницилли-назы (ФС 42-2059-92), затем производили ВЭЖХ-определение количества БП в про-бе непосредственно после внесения пени-циллиназы и через 30 минут инкубации при комнатной температуре (22°С). Время удер-жания продуктов распада, образовавшихся вследствие воздействия пенициллиназы, в дальнейшем сравнивали со временем удер-жания продуктов распада, образовавшихся в результате взаимодействия БП и ЧСА.

Поскольку все вышеописанные экспери-менты производились с очищенным препа-ратом ЧСА, возник вопрос о реальной доле вклада остальных белковых фракций сыво-ротки крови в ее суммарную бета-лактамаз-ную активность. Данный вопрос уже под-нимался ранее и был решен для реакции ги-дролиза нитроцефина: вклад глобулиновой фракции (и, в частности, поликлональных IgG) в суммарное количество разрушаемого нативной сывороткой крови нитроцефина в основном не превышал 10-15% [6, 7].

Тем не менее, ситуация с остальными бета-лактамными антибиотиками требова-ла прояснения, поскольку ранее нами было доказано, что и механизм катализа, и кине-тика реакции их распада могут существенно отличаться от таковых для нитроцефина. В связи с этим мы предприняли эксперимент по оценке вклада неальбуминовых фракций сыворотки крови в процесс гидролиза БП и цефтриаксона. Выбор пал на указанные антибиотики, поскольку ранее был строго доказан факт гидролиза бета-лактамной свя-зи БП под воздействием ЧСА, равно как и полное отсутствие гидролиза цефтриаксона в аналогичных условиях. Оба антибиотика чрезвычайно широко применяются в кли-нической практике в качестве средств для стартовой антибактериальной терапии и яв-ляются типичными представителями своих

76


групп (природные пенициллины и парен-теральные цефалоспорины 3-го поколения, соответственно). При изучении распада ука-занных бета-лактамных антибиотиков под воздействием нативной сыворотки крови ис-пользовали 2 образца сыворотки, отличаю-щиеся высокой собственной бета-лактамаз-ной активностью (оба получены от больных с инфильтративным туберкулезом легких). Кроме того, для сравнения с ЧСА спиртовой очистки в данном эксперименте нами был использован препарат ЧСА особо высокой чистоты пр-ва Sigma.


Оказалось, что большая часть изученных антибиотиков (ампициллин, цефоперазон, пиперациллин, цефтазидим, цефтриаксон, цефотаксим и цефокситин) не взаимодей-ствовала с ЧСА – кривые их распада с тече-нием времени в опытных (с альбумином) и контрольных (самораспад) пробах оказались практически идентичными, а разница между ними – статистически незначимой.

В то же время, распад 4 антибиотиков (бензилпенициллина, цефалексина, азтрео-нама и имипенема) под воздействием ЧСА статистически значимо (во всех случаях р<0,0001) ускорялся по сравнению со спон-танным распадом в контрольных пробах. Примечательно, что и имипенем, и азтрео-нам разрушались лишь немногими бета-лак-тамазами бактерий, в частности, карбапене-мазами (имипенем), а также БЛРС, принад-лежащими к функциональной группе 2be (азтреонам).

Графики убыли концентрации бензил-

пенициллина, цефалексина и имипенема в опытных пробах имели экспоненциаль-ный вид. Подобная форма кине тических кривых характерна для реакций 1-го по-рядка, типичных для истинных фермен-тов. В случае же азтреонама имела место реакция нулевого порядка, скорость кото-рой не зависела от концентрации субстра-та, поскольку график убыли концентрации данного препарата имел линейный вид (см. рисунки 1-4).

По смоделированному нами процессу к 6 часу с момента введения обсуждаемых антибиотиков в человеческий организм их взаимодействие с ЧСА приводило к гидро-лизу дополнительных (плюс к уровню са-мораспада) 2,3% азтреонама, 7,5% бензил-пенициллина, 10,8% цефалексина и 11,9% имипенема. Формулы, по которым произ-водился расчет количества антибиотиков, распавшегося к определенному моменту времени, приведены на рисунках 1-4. Та-ким образом, бета-лактамазная активность альбумина может обусловливать распад значимых количеств бета-лактамных пре-паратов, реально применяемых в клиниче-ской практике, тем самым снижая их кли-ническую эффективность.

Повышение температуры с 37°С до 39°С приводило к ускорению распада имипенема в среднем на 14,0% (максимальная разница – 33,3% – наблюдалась к 6 часу инкубации), а цефалексина – в среднем на 15,7% (данная разница оставалась практически неизменной на протяжении всего срока инкубации). Вы-явленные различия являлись статистически значимыми (для имипенема р<0,0001, для цефалексина р=0,0016). Напомним, что по-

Рисунок 1 – Распад бензилпенициллина под воздействием ЧСА. Квадратами обозначен самораспад, ромбами – распад, катализируемый ЧСА

77


вышение температуры инкубации с 36°С до 39°С приводило к распаду дополнительных 11,5% нитроцефина; таким образом, полу-ченные данные хорошо согласуются между собой. Можно заключить, что у лихорадя-щих больных с температурой тела 39°С и более распад бета-лактамных антибиотиков под воздействием ЧСА существенно уско-ряется, что должно приводить к снижению их клинической эффективности и требует, как минимум, коррекции используемых доз в сторону увеличения.

Добавление 100 ЕД пенициллиназы к рабочему раствору БП с последующей реги-страцией хроматограммы показало, что вре-

мя удержания единственного образующего-ся при этом продукта распада (2,7 минуты) в точности соответствовало времени удержания единственного продукта распада, образующе-гося при взаимодействии БП с ЧСА (также 2,7 минуты); пик на хроматограмме, соответству-ющий данному продукту распада, становился заметным спустя 24 часа инкубации опытной пробы при температуре 37°С, и в дальнейшем площадь под кривой данного пика неуклонно возрастала с течением времени. Таким обра-зом, можно считать доказанным, что при вза-имодействии ЧСА и БП происходил гидролиз последнего по бета-лактамной связи, как и при воздействии пенициллиназы.

Рисунок 2 – Распад цефалексина под воздействием ЧСА. Квадратами обозначен самораспад, ромбами – распад, катализируемый ЧСА

Рисунок 3 – Распад имипенема под воздействием ЧСА. Квадратами обозначен самораспад, ромбами – распад, катализируемый ЧСА

78


К сожалению, использованный нами препарат пенициллиназы оказался не в со-стоянии разрушить цефалексин, имипенем и азтреонам, поскольку перечисленные анти-биотики отличаются высокой естественной устойчивостью к воздействию подавляю-щего большинства бета-лактамаз. Соответ-ственно, проверить, распадается ли бета-лактамная связь в молекулах данных анти-биотиков под воздействием ЧСА, не пред-ставилось возможным.

Анализ взаимодействия БП и цефтри-аксона с нативной сывороткой крови по-казал, что: 1) цефтриаксон не разрушал-ся под воздействием нативной сыворотки крови (как и под воздействием ЧСА); 2) нативная сыворотка крови гидролизова-ла БП существенно быстрее по сравне-нию с ЧСА; в среднем разница в уровнях бета-лактамазной активности сыворотки крови и чистого альбумина составила 12,2 процентных пункта в пользу сыво-ротки (U-тест Манна-Уитни, р=0,0053). Можно заключить, что нативная сыво-ротка крови в некоторых случаях де-монстрировала бета-лактамазную актив-ность, превышающую активность ЧСА (в нормальной для человеческой крови концентрации) до 32,5%, т.е. фактически на треть. Следует особо отметить, что активность обоих использованных в экс-перименте препаратов ЧСА (полученных спиртовой седиментацией по Кону на Витебской областной станции перелива-ния крови и особо высокой очистки пр-ва Sigma) в отношении БП оказалась аб-солютно идентичной. Убыль количества

Рисунок 4 – Распад азтреонама под воздействием ЧСА. Квадратами обозначен самораспад, ромбами – распад, катализируемый ЧСА

БП в пробах под воздействием нативной сыворотки крови носила экспоненциаль-ный характер с постепенным выходом на плато (как и в случае с обоими препара-тами ЧСА). Подобный вид кинетической кривой характерен для реакции первого порядка, типичной для пенициллиназы.


1. С помощью современного метода ВЭЖХ доказано, что распад четырех ан-тибиотиков бета-лактамного ряда (бен-зилпенициллина, цефалексина, азтре-онама и имипенема) под воздействием ЧСА статистически значимо ускорялся по сравнению со спонтанным распадом в контрольных пробах. Согласно полу-ченным нами данным, к шестому часу с момента введения перечисленных препа-ратов в организм человека их взаимодей-ствие с ЧСА должно привести к гидро-лизу дополнительных (плюс к уровню самораспада) 2,3% азтреонама, 7,5% бен-зилпенициллина, 10,8% цефалексина и 11,9% имипенема. Таким образом, бета-лактамаз ная активность альбумина мо-жет обусловливать распад значимых ко-личеств бета-лактамных антибиотиков, реально применяемых в клинической практике, тем самым снижая их клини-ческую эффективность. При этом вид ки-нетических кривых распада бензилпени-циллина, цефалексина и имипенема под воздействием ЧСА характерен для фер-ментативных реакций 1-го порядка, а в случае с азтреонамом – нулевого порядка.

79


2. ЧСА оказался способен разрушать ан-тибиотики, традиционно используемые как препараты дальнего резерва у больных с тя-желым течением бактериальных инфекций – имипенем и азтреонам; указанные антибио-тики считаются устойчивыми к воздействию большинства бактериальных бета-лактамаз.

3. Повышение температуры с 37°С до 39°С приводило к ускорению катализируе-мого альбумином распада имипенема в сред-нем на 14,0% (до 33,3% к 6 часу инкубации), а цефалексина – в среднем на 15,7%. Таким образом, у лихорадящих больных с темпера-турой тела 39°С и выше распад бета-лактам-ных антибиотиков под воздействием ЧСА существенно ускорялся, что должно приво-дить к дополнительному снижению их кли-нической эффективности.

4. Бета-лактамные антибиотики, не разрушающиеся под воздействием ЧСА, не разрушались и цельной сывороткой крови. По отношению к бета-лактамным антибио-тикам, разрушаемым ЧСА, нативная сыво-ротка крови в некоторых случаях может проявлять существенно более высокую (для бензилпенициллина разница дости-гает 32,5%) бета-лактамазную активность, чем очищенные препараты альбумина лю-бого происхождения в нормальной для че-ловеческой крови концентрации. Данная разница в активности определенно обу-словлена вкладом глобулиновых белковых фракций сыворотки крови.

SUMMARY

I.V. Zhyltsou, D.V. Moiseev, V.M. Semenov, S.K.Egorov

KINETICS OF DECAY OF SOME BETA-LACTAM ANTIBIOTICS UNDER THE IN-FLUENCE OF HUMAN SERUM ALBUMIN

The present work is dedicated to inves-tigation of impact of human serum albumin (HSA) at beta-lactams. We have demonstrat-ed that impact of HSA accelerates hydrolysis of 4 beta-lactams (namely, benzylpenicillin (BP), cefalexin, aztreonam and imipenem), and this acceleration is statistically reliable. It produces the additional destruction of 2,3% of aztreonam, 7,5% of BP, 10,8% of cefalexin and 11,9% of imipenem by the 6th hour of in-cubation at 37°С. Meanwhile, the appearance of kinetic curves of BP, cefalexin and imipen-em decay is typical for enzymatic reactions of the 1st order, but aztreonam one – for zero or-der. Increase of incubation temperature from 37°С to 39°С results in average acceleration of albumin-catalyzed imipenem decay by 14,0%, and that of cefalexin – by 15,7%. Beta-lactam preparations which are not destroyed

by HSA also can’t be degraded by the whole blood serum. If beta-lactam is capable of be-ing hydrolyzed by HSA, native blood serum may show much higher beta-lactamase activ-ity against it (above 30% of additional decay for BP) than any puri ed HSA preparations of any origin in concentrations what are normal for human blood serum. Thus, beta-lactamase activity of human blood serum extends to not only nitroce n, but also to other antibiotics of beta-lactam class which are widely used in health service practice what de nitely is of a certain clinical importance.

Keywords: beta-lactam antibiotics, human serum albumin, native blood serum, beta-lacta-mase activity, HPLC.


1. An investigation of the destruction of the beta-lactam ring of penems by the albumin drug-binding site / H. Bruderlein [et al.] // Can. J. Biochem. – 1981. – Vol. 59, №10. – P. 857-866.

2. Novel method for detection of b-lacta-mases by using a chromogenic cephalosporin substrate / H.C. Callaghan [et al.] // Antimicro-bial agents and chemotherapy. – 1972. – Vol. 1, №4. – P. 283-288.

3. Nerli, B. An unknown hydrolase activity of human serum albumin: beta-lactamase activ-ity / B. Nerli, F.García, G. Picó // Biochem. Mol. Biol. Int. – 1995. – Vol. 37, №5. – P. 909-915.

4. Nerli, B. Evidence of human serum albu-min beta-lactamase activity / B. Nerli, G. Picó // Biochem. Mol. Biol. Int. – 1994. – Vol. 32, №4. – P. 789-795.

5. Необычно высокий уровень распада антибиотиков бета-лактамной группы в че-ловеческой плазме и сыворотке крови / И.В. Жильцов [и др.] // Материалы Евро-Азиат-ского Конгресса по инфекционным болез-ням. – Витебск, 2008. – Том 1. – C. 85-86.

6. Исследование природы бета-лактамаз-ной активности сыворотки крови человека / И.В. Жильцов [и др.] // Сборник материалов конференции «Достижения фундаментальной, клинической медицины и фармации» (65-я на-учная сессия сотрудников ВГМУ, 24-25 марта 2010 г.). – Витебск. – 2010. – С. 189-192.

7. Природа бета-лактамазной активно-сти сыворотки крови / И.В. Жильцов [и др.] // Материалы Первого конгресса Евро-Ази-атского общества по инфекционным болез-ням. Журнал инфектол. – 2010. – Том 2, №4. – С. 67-68.

8. Способы получения иммуноглобулинов для внутривенного введения и их клиническое применение / Н.П. Сивакова [и др.] // Трансфу-зиология. – 2008. – Том 9, №1. – С. 4-12.

80


9. Moffat, A.C. Clarke’s Analysis of Drugs and Poisons. Third edition / A.C. Moffat, M. David Osselton, Brian Widdop // Pharmaceuti-cal Press. – 2005. – 1248 p.

10. De Abreu, L.R.P. HPLC determination of amoxicillin comparative bioavai lability in healthy volunteers after a single dose admin-istration / L.R.P. de Abreu, R.A.M. Ortiz // J. Pharm. Pharmaceut. Sci. – 2003. – Vol. 6, №2. – P. 223-230.


210023, Республика Беларусь,г. Витебск, пр. Фрунзе, 27, Витебский государственный медицинский университет, кафедра инфекционных болезней,тел. раб.: 8(0212) 24-33-46E-mail: [email protected]Жильцов И.В.


УВАЖАЕМЫЕ КОЛЛЕГИ!

Учреждение образования «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет» с 20 октября 2011 г. по 1 февраля 2012 г. проводит заочную Интернет-конференцию, посвященную 30-летию факультета подготовки иностранных граждан и 10-летию стоматологического факультета.

По итогам конференции будет издан сборник материалов в электронном виде.

Основные вопросы, планируемые для обсуждения· Актуальные вопросы повышения качества высшего медицинского образования на

современном этапе.· Дистанционное обучение в медицинских вузах: задачи, технологии, опыт, проблемы

и перспективы.· Междисциплинарная интеграция в медицинском вузе.· Инновационные технологии в подготовке студентов стоматологического факультета.· Интернационализация белорусского медицинского образования, экспорт

образовательных услуг и участие Республики Беларусь в международном образовательном сотрудничестве.

· Проблемы и перспективы подготовки медицинских кадров для зарубежных стран с использованием языка-посредника (английского языка).

Формы участия в конференции1. Статьи будут размещаться на сайте университета www.vgmu.vitebsk.by с целью

дальнейшего обсуждения.2. Будет проведено дискуссионное обсуждение представленных статей путем

пересылки по электронной почте кратких сообщений-реплик и размещения их на сайте конференции.

3. Лучшие статьи и отзывы будут представлены к публикации.4. Организационный комитет конференции оставляет за собой право предварительной

экспертизы поступивших материалов на предмет возможности открытой публикации на сайте конференции.

Участие в конференции – бесплатное.С правилами оформления статей и порядком участия в конференции можно ознакомиться

на сайте ВГМУ.

Наши контакты:Тел./факс: +375 (212) 246-256e-mail: [email protected]сайт: www.vgmu.vitebsk.by

81


ИСТОРИЯ ФАРМАЦИИ

А.А. Шеряков

ИСТОРИЯ РЕГИСТРАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ В РЕСПУБЛИКЕ БЕЛАРУСЬ

Республиканское унитарное предприятие «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении», г. Минск

В статье приводятся исторические данные о формировании системы регистрации лекарственных средств в Республике Беларусь с 1991 года до наших дней: создание регу-ляторных органов, издание нормативных правовых актов и их реализация.

Ключевые слова: регистрация, лекарственное средство, исторические данные.

Лекарственные средства во всем мире являются особой продукцией, которая мо-жет нанести вред здоровью человека при на-рушении правил создания, испытания, про-изводства, хранения, реализации и примене-ния. Поэтому должна существовать жесткая государственная система контроля за лекар-ственными средствами как таковыми и пред-приятиями, учреждениями и организациями, занятыми в процессе их обращения. Иными словами, контролироваться должны все ста-дии продвижения лекарственного средства от его создания до потребления.

Во время существования СССР в соот-ветствии с рекомендациями Министерства здравоохранения СССР при Министерстве здравоохранения БССР была организова-на фармакологическая комиссия (приказ Министерства здравоохранения БССР от 3 июня 1991 г. №102 «О создании фармаколо-гической комиссии Минздрава БССР») [1]. Фармакологическая комиссия была органи-зована с целью совершенствования системы экспертной оценки новых лекарственных средств и более широкого привлечения к указанной работе специалистов из союзных республик. Фармакологическая комиссия выполняла работы по первичной эксперт-ной оценке материалов на новые фармако-логические средства, выдавала разрешение на клиническую апробацию и применение зарубежных лекарственных препаратов, за-регистрированных в других странах, а так-же осуществляла контроль за проведением клинических испытаний новых препаратов, проводимых на территории республики.

После распада СССР (8 декабря 1991 г. в Беловежской пуще главами трех республик в составе СССР было подписано соответ-

ствующее соглашение о прекращении суще-ствования Союза Советских Социалистиче-ских Республик) была полностью разруше-на государственная система регистрации и контроля качества лекарственных средств. Появились предпосылки проникновения на потребительский рынок некачественных ле-карственных средств.

В целях защиты фармацевтического рынка Республики Беларусь и безопасного использования населением лекарственных средств в 1993 году при Министерстве здра-воохранения было создано Главное управ-ление по фармации, медицинской технике и регламентации, которое осуществляло го-сударственную регистрацию лекарственных средств, медицинской техники и товаров на-родного потребления.

В 1993 году Верховным Советом Респу-блики Беларусь был принят Закон Республи-ки Беларусь «О здравоохранении» (№2435-XII от 18 июня 1993 г.), в котором статьей 31 предусматривалось проведение клиниче-ских и медико-биологических исследований на человеке, а статьей 54 – производство, реализация и применение лекарственных средств разрешались только после прохож-дения государственной регистрации [2].

С целью проведения экспертных работ по оценке эффективности и безопасности подаваемых на регистрацию лекарственных средств, приказом Министерства здравоох-ранения от 15 ноября 1993 года №262 «О Фармакологическом комитете Министер-ства здравоохранения Республики Беларусь» фармакологическая комиссия была преоб-разована в Фармакологический комитет [3]. Вышеуказанным приказом отменен приказ Министерства здравоохранения БССР от

82


3 июня 1991 г. №102, а также утверждены состав и Положение о Фармакологическом комитете Министерства здравоохранения Республики Беларусь. Утверждено 26 спе-циализированных экспертных комиссий из 87 ведущих специалистов страны в области медицины и фармакологии. Основными за-дачами Фармакологического комитета опре-делены:

- оценка материалов доклинических ис-пытаний новых фармакологических средств (известных лекарственных средств, предла-гаемых по новым показаниям) с целью ре-шения вопроса о целесообразности разреше-ния их клинических испытаний;

- оценка результатов клинических ис-пытаний новых фармакологических средств (известных лекарственных средств, предла-гаемых по новым показаниям) с целью ре-шения вопроса о рекомендации к примене-нию в медицинской практике и регистрации;

- оценка документов на новые зарубеж-ные лекарственные средства с целью реше-ния вопроса о рекомендации к применению в медицинской практике и регистрации;

- подготовка предложений по пересмо-тру номенклатуры лекарственных средств с целью исключения из государственного ре-естра малоэффективных и морально уста-ревших лекарственных средств, а также под-готовка предложений-заданий по разработке новых лекарственных средств, необходимых здравоохранению.

21 января 1994 года приказом Министер-ства здравоохранения Республики Беларусь №22 «О создании Фармакопейного комитета Министерства здравоохранения Республи-ки Беларусь» был создан Фармакопейный комитет [4]. При Фармакопейном комитете было организовано 7 специализированных экспертных комиссий из 26 специалистов (химическая; фармацевтическая; фармаког-ностическая; по медицинским ферментным, гормональным, иммунологическим и бакте-рийным препаратам; по препаратам крови и кровезаменителей; по антибиотикам; по рас-смотрению материалов на упаковку).

Основными задачами Фармакопейного комитета являлись:

- оценка нормативно-технических доку-ментов, характеризующих качество лекар-ственных средств, предлагаемых для клини-ческих испытаний;

- рассмотрение и подготовка к утверж-дению проектов временных фармакопейных и фармакопейных статей, определяющих требования, предъявляемые к качеству ле-карственных средств и лекарственного рас-тительного сырья, применяемых для лечеб-ных, диагностических и профилактических

целей и методов их контроля;- подготовка к изданию Государственной

фармакопеи Республики Беларусь.Согласно вышеуказанным приказам оба

комитета организованы при Министерстве здравоохранения, организационно-методи-ческое руководство работой комитетами воз-ложено на Главное управление по фармации, медицинской технике и регламентации Ми-нистерства здравоохранения.

12 февраля 1994 года Министерством здравоохранения Республики Беларусь было утверждено «Временное положение о порядке перерегистрации зарубежных ле-карственных средств» [5], в соответствии с которым перерегистрации подлежат все за-рубежные лекарственные средства, прошед-шие регистрацию в установленном порядке в Министерстве здравоохранения СССР и в Министерстве здравоохранения Республики Беларусь по истечении пяти лет с момента предыдущей регистрации или перерегистра-ции. Перерегистрация проводилась Мини-стерством здравоохранения Республики Бе-ларусь через Главное управление по фарма-ции, медицинской технике и регламентации. Для перерегистрации лекарственного сред-ства представлялись документы (на языке оригинала с переводом на русский или бе-лорусский язык): заявление; регистрацион-ное удостоверение из страны, где оно про-изводится, и разрешение на продажу из этой и других стран; изменения и дополнения к инструкции по медицинскому применению и листку-вкладышу; новые данные о приме-нении в медицинской практике; изменения в нормативно-техническую документацию, в состав лекарственного средства и методики контроля его качества (по препаратам, заре-гистрированным в бывшем Министерстве здравоохранения СССР, полную методику контроля их качества); в случае необходи-мости могли быть затребованы любые до-полнительные сведения, характеризующие лекарственное средство в условиях его про-изводства. При этом указывалось, что фирма несет полную юридическую и моральную ответственность за достоверность представ-ленных сведений. В том случае, если фирма не представила в установленные сроки все необходимые документы, лекарственное средство подлежало исключению из числа зарегистрированных и разрешенных к ме-дицинскому применению в Беларуси. Факт перерегистрации оформлялся выдачей реги-страционного удостоверения установленно-го образца.

Принятие вышеуказанных документов положило начало регистрации лекарствен-ных средств в нашей стране. С 1993 года по

83


1999 год в стране действовала как регистра-ция лекарственных средств бывшего СССР, так и регистрация лекарственных средств Республики Беларусь. Первое регистраци-онное удостоверение в Республике Беларусь выдано в 1993 году на лекарственное сред-ство «Амоксициллин-Тева в лекарственной форме капсулы 250 мг, форте 500 мг, суспен-зия 125 мг, форте 250 мг» (регистрационное пасведчанне Б-2-ЛС №1/93), подписанное заместителем Министра - председателем Фармакологического комитета Шитиковым Б.Д.

12 июня 1996 года Министерством здра-воохранения Республики Беларусь было принято «Временное положение о предъяв-ляемых требованиях к нормативной доку-ментации по контролю качества лекарствен-ных средств, представляемых зарубежными фирмами для регистрации (перерегистра-ции) в Министерство здравоохранения Ре-спублики Беларусь» [6]. Данное положение распространялось на лекарственные сред-ства и фармацевтические субстанции. В со-ответствии с Временным положением нор-мативная документация должна была вклю-чать:

- состав с указанием всех необходимых ингредиентов, в том числе и вспомогатель-ных веществ, красителей и т.д. на лекар-ственную форму (таблетку, капсулу, флакон и т.д.) со ссылкой на нормативную докумен-тацию, по которой осуществлялся контроль их качества;

- спецификацию готового продукта с указанием всех параметров, по которым определялось качество лекарственного сред-ства, допустимые пределы их соблюдения;

- описание методов контроля указанных параметров;

- сертификат качества с указанием всех параметров нормативной документации и результатов анализа лекарственного сред-ства;

- сведения об условиях хранения, сроке годности, подтвержденного исследованиями по стабильности в течение указанного срока;

- сведения об упаковке с представлением образцов блистера, развернутой индивиду-альной упаковки, этикетки.

Объем работы в данном направлении постоянно возрастал. Штатная численность специалистов Главного управления была не-велика. В целях совершенствования работы по государственной регистрации и регламен-тации лекарственных средств было органи-зовано УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении». Приказом Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 15 октября 1997 г. № 250 «О создании государ-

ственного предприятия «Республиканский центр экспертиз и испытаний в здравоохра-нении» был утвержден Устав предприятия, даны полномочия по утверждению штатно-го расписания и определены иные поруче-ния административного характера [7]. На 01.12.1997 г. штатная численность предпри-ятия составляла всего одну единицу – дирек-тора предприятия Годовальникова Г.В. 12 ян-варя 1998 года предприятие фактически на-чало свою деятельность и штатная числен-ность предприятия составляла 71 единицу, из них уже в январе 1998 г. было занято 26 штатных единиц. На конец 1998 г. в штатном расписании насчитывалось 80 штатных еди-ниц, из которых фактически было занято 70. На данный период в структуре центра было 4 основных подразделения: управление ле-карственных средств (и.о. начальника управ-ления, заместитель директора Тимошина В.В.); управление гигиенической регламен-тации и регистрации (начальник управления Солонец Т.М.); управление медицинской техники (начальник управления Столяров А.Ю.) и управление лицензирования и ин-спекции (начальник управления Левшуков О.Е.) и 4 вспомогательных подразделения: административно-управленческого персона-ла; управление учета, анализа и ценообра-зования; административно-хозяйственного отдела; отдела информации и информатики.

На управление лекарственных средств возложена функция по осуществлению ра-бот по регистрации (перерегистрации) ле-карственных средств, а также по ввозу ле-карственных средств, в том числе наркоти-ческих лекарственных средств, психотроп-ных веществ и прекурсоров, поступающих на таможенную территорию Республики Беларусь.

В этот период были разработаны и при-няты основные нормативные правовые акты по проведению процедур, гарантирующих качество, безопасность и эффективность ле-карственных средств.

Практика работы Фармакологическо-го и Фармакопейного комитетов показала целесообразность проведения заседаний президиума обоих комитетов совместно, так как невозможно рассматривать порознь фармакологические и фармацевтические аспекты регистрируемых лекарственных средств. Министерством здравоохранения 18 марта 1998 года издается приказ за №88 «О Фармакологическом и Фармакопейном комитетах Министерства здравоохранения Республики Беларусь» [8], которым утверж-дается состав обоих комитетов и группы экспертов, положение о Фармакологиче-ском и Фармакопейном комитетах, назна-

84


чается председатель Фармакологического и Фармакопейного комитетов Курченков А.С. – заместитель Министра здравоохранения. Организационно-методическое руководство работой обоих комитетов возлагается на на-чальника Главного управления по фармации, медицинской технике Министерства здра-воохранения Республики Беларусь Стульбу Н.А., а осуществление организационного и технического обеспечения работы Фармако-логического и Фармакопейного комитетов – на директора ГП «Республиканский центр экспертиз и испытаний в здравоохранении» Годовальникова Г.В. Вышеуказанным прика-зом ГП «Республиканский центр экспертиз и испытаний в здравоохранении» поручено проведение всех работ по экспертной оцен-ке материалов на лекарственные средства, а также ежемесячное представление в Минз-драв информации о принятых к рассмотре-нию и зарегистрированных лекарственных средствах.

Персональный состав Фармакологиче-ского комитета: Курченков А.С. – предсе-датель, заместитель Министра здравоохра-нения; Гашек Л.Е. – заместитель председа-теля, начальник отдела фармации Главного управления по фармации, медицинской тех-нике Минздрава; Годовальников Г.В. – заме-ститель председателя, директор ГП «Респу-бликанский центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; Захаревский А.С. – за-меститель председателя, профессор кафе-дры фармакологии Минского государствен-ного медицинского института; Тимошина В.В. – секретарь, заместитель директора ГП «Республиканский центр экспертиз и испы-таний в здравоохранении; члены комитета – Гореньков В.Ф., Данусевич И.К., Дубовик Б.В., Кевра М.К., Талапин В.И. Состав груп-пы экспертов Фармакологического комитета утвержден из 101 специалиста 26 специали-зированных экспертных комиссий.

Персональный состав Фармакопейного комитета: Курченков А.С. – председатель, заместитель Министра здравоохранения; Гашек Л.Е. – заместитель председателя, на-чальник отдела фармации Главного управ-ления по фармации, медицинской технике Минздрава; Годовальников Г.В. – замести-тель председателя, директор ГП «Респу-бликанский центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; Царенков В.М. - заме-ститель председателя, генеральный дирек-тор ОАО «Белмедпрепараты»; Тимошина В.В. – секретарь, заместитель директора ГП «Республиканский центр экспертиз и испы-таний в здравоохранении; члены комитета – Бондаренко А.И., Гореньков В.Ф., Костю-ченко О.И., Пилько Е.К., Пленина Л.В., По-

лякова Л.В., Титов Л.П. Состав группы экс-пертов Фармакопейного комитета утвержден из 37 специалистов 7 специализированных экспертных комиссий.

Дополнительно к ранее поставленным задачам, задачами Фармакологического ко-митета стали следующие:

- подготовка предложений по прове-дению клинических испытаний, а также рассмотрение и одобрение инструкций по клиническим испытаниям новых фарма-кологических средств, а также известных лекарственных средств, предлагаемых по новым показаниям, и новых зарубежных ле-карственных средств;

- рассмотрение и одобрение инструкций по медицинскому применению лекарствен-ных средств и листков-вкладышей;

- рассмотрение и одобрение названий новых лекарственных средств;

- оказание консультативной помощи раз-работчикам новых лекарственных средств и клиническим учреждениям по вопросам требований к объему и качеству доклиниче-ских и клинических испытаний;

- экспертная оценка методических указа-ний и рекомендаций по экспериментальным и клиническим испытаниям новых лекар-ственных средств;

- внесение предложений по определению порядка отпуска лекарственных средств (по рецептам, без рецепта, только для стациона-ров), отнесение их к спискам наркотических средств, психотропных веществ, спискам А и Б, внесение предложений по клиническим испытаниям новых фармакологических средств.

Дополнительными, к ранее поставлен-ным задачам Фармакопейного комитета, определены следующие задачи:

- подготовка предложений по пересмо-тру временных фармакопейных и фармако-пейных статей с целью повышения требова-ний к качеству лекарственных средств и со-вершенствования методов контроля;

- рассмотрение проектов изменений, до-полнений к временным фармакопейным и фармакопейным статьям;

- рассмотрение материалов по измене-нию сроков годности лекарственных средств и лекарственного растительного сырья;

- внесение предложений по определению порядка отпуска лекарственных средств (по рецептам, без рецепта, только для стациона-ров), отнесение их к спискам наркотических средств, психотропных веществ, спискам А и Б;

- экспертная оценка нормативной до-кументации на зарубежные лекарственные средства, представляемые для регистрации;

85


- рассмотрение проектов руководящих документов, определяющих порядок разра-ботки и установления требований к качеству лекарственных средств;

- рассмотрение проектов ГОСТов, ОСТов, ТУ на тару, упаковку и упаковочные материалы, используемые в производстве лекарственных средств;

- рассмотрение проектов ГОСТов, ОСТов на реактивы, вспомогательные вещества, ис-пользуемые в производстве лекарственных средств.

В приказ Министерства здравоохранения от 18.03.1998 г. №88 «О Фармакологическом и Фармакопейном комитетах Министерства здравоохранения Республики Беларусь» не-однократно вносились изменения и допол-нения по персональному составу (приказ от 09.06.1999 г. №196, приказ от 05.07.2002 г. №110, приказ от 27.11.2007 г. №911).

В 1998 году (приказ Министерства здра-воохранения от 8 мая 1998 г. №142 «О фор-мировании базы данных о лекарственных средствах и изделиях медицинской техники, зарегистрированных в Республике Беларусь, и по вопросам лицензирования фармацевти-ческих видов деятельности») [9] положено начало формирования базы данных о заре-гистрированных лекарственных средствах, а в 1999 году (приказ Министерства здраво-охранения от 23 января 1999 г. №83 «О фор-мировании и распространении реестров») [10] ответственным за создание, ведение и распространение Реестра лекарственных средств определен ГП «Республиканский центр экспертиз и испытаний в здравоох-ранении». Этим приказом директору ГП «Республиканский центр экспертиз и испы-таний в здравоохранении» Годовальникову Г.В. поручено обеспечить разработку про-

граммного обеспечения Реестра лекарствен-ных средств. Первый Реестр лекарственных средств на бумажном носителе был издан по состоянию на 1 января 2000 года. В нем со-держалось 4232 зарегистрированных лекар-ственных средства, в том числе 690 – отече-ственного производства. Данные о регистра-ции лекарственных средств представлены в таблице 1.

По состоянию на 01.01.2011 г. в Респу-блике Беларусь зарегистрировано 5424 ле-карственных средства (без фармацевтиче-ских субстанций) 50 стран. За последние 3 года Государственный реестр лекарственных средств пополнился лекарственными сред-ствами Мальты, Республики Корея, Японии, Таиланда, Ирана, Вьетнама, Индонезии, Сингапура, Монако.

Из всего числа зарегистрированных ле-карственных средств в Республике Бела-русь на долю оригинальных лекарственных средств приходится 19,9% или 1078 лекар-ственных средств, генерических – 79,0% (4288 лекарственных средств) и инноваци-онных – 1,1% (58 лекарственных средств).

В 2010 г. подано на регистрацию (пере-регистрацию) 1626 лекарственных средств, из них зарегистрировано 492 (30,3%) лекар-ственных средства (123 – отечественного производства и 369 – зарубежного произ-водства), перерегистрировано 787 (48,4%) лекарственных средств (195- отечественного производства и 592 – зарубежного производ-ства).

В ходе регистрации и перерегистрации 131 лекарственному средству отказано в регистрации (перерегистрации) (8,0%), 216 (13,3%) лекарственных средств снято с рас-смотрения по просьбе заявителя в связи с невозможностью устранить замечания экс-

Таблица 1 – Данные о регистрации лекарственных средств (фармацевтических субстанций) в Республике Беларусь

По состоянию на: Отечественные ЛС Зарубежные ЛС Всего ЛС01.01.2000 690 3542 423201.01.2001 750 3697 444701.01.2002 802 3577 437901.01.2003 931 4763 569401.01.2004 812 4842 565401.01.2005 830 4854 568401.12.2005 643 3904 454701.12.2006 990 4260 525001.12.2007 1353 4775 612801.12.2008 1558 5181 673901.12.2009 1207 5016 622301.12.2010 1164 5027 619101.01.2011 1107 4317 5424

86


пертов. Из 1997 поданных на внесение изме-нений в регистрационное досье в 17 случаях отказано во внесении изменений (0,85%), в 86 (4,3%) случаев - снято с рассмотрения по просьбе заявителя в связи с невозможностью устранить замечания экспертов.

С целью повышения качества проведе-ния клинических испытаний, а также усиле-ния контроля за проведением лабораторных исследований при регистрации зарубежных лекарственных средств и лекарственных средств отечественного производства Ми-нистерством здравоохранения был принят приказ от 27 августа 1998 года №236 «Об ут-верждении перечней учреждений, на базе ко-торых проводятся клинические испытания и лабораторные исследования лекарственных средств» [11]. Данным документом опреде-лены клинические базы для проведения кли-нических испытаний лекарственных средств по 20 основным заболеваниям, определена база (4-я городская клиническая больница г. Минска (кафедра клинической фармаколо-гии МГМИ) для проведения биоэквивалент-ных исследований генерических средств, а также 14 лабораторных баз для контроля качества лекарственных средств, в том чис-ле гомеопатических, иммунобиологических, препаратов крови и кровезаменителей. При-казом поручено ГП «Республиканский центр экспертиз и испытаний в здравоохранении» совместно с главным клиническим фарма-кологом Министерства здравоохранения Кеврой М.К. разработать и утвердить поло-жение о порядке аккредитации учреждений здравоохранения по проведению клиниче-ских испытаний и аттестации специалистов, занимающихся клиническими испытания-ми; генеральным директорам БелРПП «Фар-мация», ОПП «Фармация» и ПП «Миноб-лфармация» принять меры по оснащению контрольно-аналитических лабораторий необходимыми приборами и оборудовани-ем, а также провести аккредитацию лабора-торий в установленном порядке; Минскому государственному медицинскому институту принять меры по оснащению кафедры кли-нической фармакологии приборами, обору-дованием и реактивами, необходимыми для проведения биоэквивалентных исследова-ний генерических препаратов.

Все вышеуказанные документы, при-нятые Министерством здравоохранения Ре-спублики Беларусь в период с 1993 по 1998 гг, касающиеся регистрации лекарственных средств, носили ведомственный характер. В связи с чем, в целях безопасности при при-менении лекарственных средств, в стране назрела необходимость принятия документа на уровне правительства Республики Бела-

русь. Первым таким документом явилось по-становление Совета Министров Республики Беларусь от 7 декабря 1998 года №1870 «О некоторых вопросах обращения на терри-тории Республики Беларусь лекарственных средств, изделий медицинского назначения и медицинской техники» [12]. Постановле-нием установлено, что Министерство здра-воохранения осуществляет регистрацию ле-карственных средств, ввозимых и произве-денных на территории Республики Беларусь, осуществляет государственный контроль их качества; приостанавливает и аннулирует действие регистрационных удостоверений на лекарственные средства; утверждает нор-мативную документацию на лекарственные средства; разрабатывает и утверждает переч-ни лекарственных средств, отпускаемых по рецепту и без рецепта врача, списки А и Б лекарственных средств и правила их хране-ния. Данным постановлением поручено Ми-нистерству здравоохранения внести в уста-новленном порядке на утверждение в Совет Министров Республики Беларусь положе-ние о порядке регистрации лекарственных средств, издать до 1.01.2000 г. Государствен-ный реестр лекарственных средств. Этим же постановлением разрешено использование на территории Республики Беларусь Госу-дарственной фармакопеи СССР Х и ХI из-даний до издания Государственной фармако-пеи Республики Беларусь.

В 1999 году при активном участии спе-циалистов ГП «Республиканский центр экс-пертиз и испытаний в здравоохранении» Тимошиной В.В. и Поляковой Л.В. разра-ботан и утвержден 18 июня 1999 года ГОСТ Республики Беларусь «Фармакопейные ста-тьи. Порядок разработки, согласования и ут-верждения» [13]. Данный документ введен 01.10.1999 г. и действовал до мая 2008 года. Стандарт устанавливал порядок разработки, согласования, утверждения, регистрации, обновления фармакопейных и временных фармакопейных статей на лекарственные средства, а также требования к их построе-нию, изложению, оформлению и содержа-нию. Стандарт являлся основополагающим документом, предъявляющим требования к показателям качества лекарственных средств в той или иной лекарственной форме.

С целью усиления контроля за качеством лекарственных средств при их регистрации, контроля воспроизводимости представля-емых методик по анализу лекарственных средств, а также в целях улучшения органи-зационно-методического руководства кон-трольно-аналитическими лабораториями страны, разработки основных нормативных правовых актов в области контроля качества

87


лекарственных средств с 1 сентября 1999 года в состав ГП «Республиканский центр экспертиз и испытаний в здравоохранении» вошла Республиканская контрольно-ана-литическая лаборатория, ранее входившая в состав УП «БелФармация» (заведующий лабораторией - кандидат фармацевтических наук Шеряков А.А.).

В целях обеспечения качества проведе-ния клинических испытаний лекарственных средств, обеспечения достоверности резуль-татов, защиты прав и здоровья испытуемых Министерством здравоохранения приказом от 13 августа 1999 года №254 «Об утвержде-нии правил проведения клинических испы-таний лекарственных средств» [14] утверж-дены Правила проведения клинических ис-пытаний лекарственных средств. На ГП «Ре-спубликанский центр экспертиз и испыта-ний в здравоохранении» возложен контроль за проведением клинических испытаний лекарственных средств. Главным инициа-тором данного документа был директор ГП «Республиканский центр экспертиз и испы-таний в здравоохранении» Г.В. Годовальни-ков. Правила разработаны с учетом действу-ющих требований Качественной клиниче-ской практики (GCP) Европейского Союза, Японии и Соединенных Штатов Америки, а также Австралии, северных стран и Всемир-ной организации здравоохранения, на осно-ве Руководства ICH (Международная кон-ференция по гармонизации США, Японии и Европейского Союза) по Качественной кли-нической практике.

В соответствии с Законом Республики Беларусь «О здравоохранении» 20 июня 2000 года Совет Министров Республики Беларусь принял постановление №921 «Об утвержде-нии Положения о государственной регистра-ции лекарственных средств и фармацевти-ческих субстанций и Положения о государ-ственной регистрации изделий медицинско-го назначения и медицинской техники» [15]. Данным постановлением определено, что организация и проведение комплекса работ по подготовке и экспертизе документов для проведения испытаний и регистрации лекар-ственных средств осуществляются Мини-стерством здравоохранения через уполномо-ченный им орган – государственное унитар-ное предприятие «Республиканский центр экспертиз и испытаний в здравоохранении». В Положении нашли отражение следующие основные вопросы, касающиеся регистра-ции лекарственных средств: лекарственные средства, подлежащие и неподлежащие ре-гистрации; определены важнейшие термины (государственная регистрация, лекарствен-ное средство, фармакопейная статья, реги-

страционное удостоверение, регистрацион-ный номер, государственный реестр лекар-ственных средств, клинические испытания, серьезные побочные реакции лекарственно-го средства); порядок государственной ре-гистрации лекарственных средств; порядок выдачи регистрационного удостоверения; порядок государственной перерегистрации лекарственных средств, ранее зарегистри-рованных в Республике Беларусь; порядок внесения изменений в документы на лекар-ственные средства, ранее зарегистрирован-ные в Республике Беларусь, не требующие оформления нового регистрационного удо-стоверения; основания для отказа в государ-ственной регистрации (перерегистрации) лекарственного средства; порядок внесения или исключения лекарственного средства из Государственного реестра лекарственных средств Республики Беларусь; утверждена форма регистрационного удостоверения.

Государственное предприятие «Респу-бликанский центр экспертиз и испытаний в здравоохранении» приказом от 25 января 2000 г. №25 «О внесении изменений и до-полнений в Устав Государственного пред-приятия «Республиканский центр экспертиз и испытаний в здравоохранении» было пре-образовано в Республиканское унитарное предприятие «Центр экспертиз и испыта-ний в здравоохранении» (УП «ЦЭИЗ») [16]. Преобразование было осуществлено в со-ответствии с изменившимся законодатель-ством Республики Беларусь и не коснулось основных функций предприятия. В связи с вышеизложенным в постановление №921 внесено изменение (постановление Совета Министров Республики Беларусь от 11 октя-бря 2001 г. №1476 «О внесении изменений и дополнений в постановление Совета Ми-нистров Республики Беларусь от 7 декабря 1998 г. №1870 и от 20 июня 2000 г. №921») [17]. Одновременно положение о регистра-ции лекарственных средств было дополнено нормами о выдаче Министерством здравоох-ранения разрешения на применение незаре-гистрированных лекарственных средств: для проведения научных исследований и клини-ческих испытаний; в случаях возникнове-ния эпидемий; для лечения ограниченного контингента больных; при условии вклю-чения незарегистрированных лекарствен-ных средств в Республиканский перечень основных лекарственных средств и изделий медицинского назначения в соответствии с рекомендациями Всемирной организации здравоохранения; лекарственных средств, поступающих в виде гуманитарной помо-щи. Постановлением Совета Министров Ре-спублики Беларусь №1476 дано поручение

88


Министерству здравоохранения разработать и утвердить Положение о порядке и услови-ях выдачи Министерством здравоохранения разрешений на применение в Республике Беларусь незарегистрированных лекар-ственных средств и изделий медицинского назначения и медицинской техники (поста-новление Министерства здравоохранения от 20 декабря 2002 года №73 «О разрешении на применение в Республике Беларусь незаре-гистрированных лекарственных средств, из-делий медицинского назначения и медицин-ской техники») [18].

В соответствии с постановлением Со-вета Министров Республики Беларусь от 20.06.2000 г. №921 разработано По-ложение о требованиях к документам на лекарственные средства и фармацевти-ческие субстанции, заявляемые на госу-дарственную регистрацию (перерегистра-цию), утвержденное постановлением Ми-нистерства здравоохранения Республики Беларусь от 8 января 2002 года №1 «Об утверждении Положения о требованиях к документам на лекарственные средства и фармацевтические субстанции, заявля-емые на государственную регистрацию (перерегистрацию)» [19]. Данное положе-ние было максимально гармонизировано с требованиями, существовавшими в стра-нах СНГ и Евросоюза. Как дополнение к постановлению Министерства здравоох-ранения №1 в целях усиления требований к качеству лекарственных средств, произ-водимых в Республике Беларусь, разрабо-тано и утверждено постановление Мини-стерства здравоохранения от 13 июня 2002 года №30 «О графическом оформлении упаковок лекарственных средств» [20].

Для обеспечения методического руко-водства и качественного уровня проведе-ния клинических испытаний лекарственных средств с учетом положений надлежащей клинической практики (постановление Ми-нистерства здравоохранения №254) в Ре-спублике Беларусь в ноябре 2003 г. при УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоох-ранении» была создана Республиканская клинико-фармакологическая лаборатория (заведующий лабораторией - кандидат меди-цинских наук Воронов Г.Г.). Одной из функ-ций лаборатории явился мониторинг фарма-кобезопасности и фармаконадзор в сфере об-ращения лекарственных средств, благодаря чему в 2006 г. Республика Беларусь получи-ла статус полноправного участника Между-народной программы мониторинга безопас-ности лекарственных средств под эгидой ВОЗ. Работа лаборатории затрагивает также вопросы экспертизы рекламы медицинской

тематики. В целях совершенствования правовых

и организационных основ государствен-ного регулирования в сфере обращения лекарственных средств, обеспечения насе-ления Республики Беларусь безопасными, эффективными и качественными лекар-ственными средствами 20 июля 2006 года в стране был принят Закон Республики Бела-русь №161-З «О лекарственных средствах» [21], которым впервые в нашей стране за-конодательно определена государственная регистрация лекарственных средств (ста-тья 8), государственный контроль за каче-ством лекарственных средств (статья 10), разработка лекарственных средств (статья 13), доклинические исследования и клини-ческие испытания лекарственных средств (статья 14-16).

Во исполнение Закона Республики Бе-ларусь «О лекарственных средствах» Ми-нистерством здравоохранения Республики Беларусь было принято четыре постановле-ния, направленные на обеспечение высокого уровня качества, безопасности и эффектив-ности лекарственных средств:

- постановление от 20 марта 2008 года №52 «Об утверждении Инструкции о поряд-ке представления информации о выявлен-ных побочных реакциях на лекарственные средства и контроля за побочными реакция-ми на лекарственные средства» [22];

- постановление от 28 марта 2008 года №55 «Об утверждении Положения о комите-те по этике» [23];

- постановление от 28 марта 2008 года №56 «Об утверждении технического кодекса установившейся практики» («Надлежащая лабораторная практика» ТКП 125-2008) [24];

- постановление от 18 февраля 2008 года №37 «Об утверждении технического кодекса установившейся практики» «Фармакопей-ные статьи. Порядок разработки и утвержде-ния» [25].

С целью разделения функций за контро-лем поступающих в обращение на террито-рию Республики Беларусь лекарственных средств и проведением апробации методов контроля лекарственных средств, представ-ленных на регистрацию (перерегистрацию), а также создания Государственной фарма-копеи Республики Беларусь (приказ Мини-стерства здравоохранения от 17 апреля 2006 г. №277 «О Государственной фармакопее Республики Беларусь») [26] и ее актуали-зации в дальнейшем, в 2006 г. была создана Лаборатория фармакопейного и фармацевти-ческого анализа (заведующий лабораторией - секретарь фармакопейного комитета Рафа-лович Л.И.). С созданием Лаборатории фар-

89


макопейного и фармацевтического анализа в 2006 году полностью сформирована струк-тура по регистрации лекарственных средств в нашей стране.

23 января 2007 года Министерство здра-воохранения Республики Беларусь получило официальное письмо из Европейского Сове-та:

«Страсбург, 23 января 2007 г.Уважаемый Министр В.И.Жарко!Благодарю Вас за письмо от 13 ноября с

просьбой о присвоении статуса Наблюдате-ля при Европейской Фармакопейной Комис-сии.

Процедура получения статуса к настоя-щему времени завершена, и я рад сообщить Вам, что Республике Беларусь был присвоен Статус Наблюдателя.

С уважением, Генеральный Секретарь Терри Дэвис».

Республика Беларусь становится 22-ым Официальным Наблюдателем при Европей-ской Фармакопейной Комиссии: Албания, Беларусь, Всемирная Организация Здраво-охранения, Грузия, Казахстан, Молдова, Рос-сийская Федерация, Украина; Алжир, Арген-тина, Австралия, Бразилия, Канада, Китай, Израиль, Мадагаскар, Малайзия, Марокко, Сенегал, Сирия, Тунис, США.

Членами же Европейской Фармакопей-ной Комиссии являются 37 стран: Австрия, Бельгия, Босния и Герцеговина, Болгария, Хорватия, Кипр, Республика Чехия, Дания, Эстония, Финляндия, Франция, Германия, Греция, Венгрия, Исландия, Ирландия, Ита-лия, Латвия, Литва, Люксембург, Мальта, Черногория, Голландия, Норвегия, Польша, Португалия, Румыния, Сербия, Словакия, Словения, Испания, Швеция, Швейцария, Македония, Турция, Великобритания и Ев-ропейский Союз.

В Беларуси в январе 2007 года Законом введен в действие первый том Государствен-ной фармакопеи Республики Беларусь [27], в декабре 2009 года – второй том [28], а в июне 2088 года – третий [29].

В 2007 году Советом Министров Респу-блики Беларусь начата работа по утвержде-нию перечня административных процедур, совершаемых министерствами и ведомства-ми в отношении юридических лиц и инди-видуальных предпринимателей. 31 октября 2007 г. принято постановление Совета Ми-нистров Республики Беларусь №1430 «Об утверждении перечня административных процедур, совершаемых Министерством здравоохранения и подчиненными ему госу-дарственными организациями в отношении юридических лиц и индивидуальных пред-принимателей» [30], в котором определено 6

процедур по регистрации (перерегистрации) лекарственных средств и фармацевтических субстанций, а также к каждой процедуре определен перечень представляемых доку-ментов и сроки совершения административ-ной процедуры. В рамках вышеуказанного постановления, а также в соответствии со статьей 54 Закона Республики Беларусь от 18 июня 1993 года «О здравоохранении» [2] и статьей 8 Закона Республики Беларусь от 20 июля 2006 года «О лекарственных сред-ствах» [21] Советом Министров Республики Беларусь принято постановление от 2 сен-тября 2008 года №1269 «Об утверждении Положения о государственной регистрации (перерегистрации) лекарственных средств и фармацевтических субстанций и Положения о государственной регистрации (перереги-страции) изделий медицинского назначения и медицинской техники» [31]. Данное поста-новление отменило ранее действующие по-становления Совета Министров Республики Беларусь №921 и №1476. В рамках поста-новления Совета Министров Республики Бе-ларусь №1269 Министерством здравоохра-нения принято постановление от 21 ноября 2008 года №199 «О требованиях к докумен-там на лекарственные средства, фармацевти-ческие субстанции, заявляемые на государ-ственную регистрацию (перерегистрацию), и признании утратившими силу некоторых нормативных правовых актов Министерства здравоохранения Республики Беларусь» и признаются утратившими силу постанов-ления Министерства здравоохранения от 08.01.2002 г. №1 «Об утверждении Поло-жения о требованиях к документам на ле-карственные средства и фармацевтические субстанции, заявляемые на государствен-ную регистрацию (перерегистрацию)» и от 15.08.2001 г. №56 «О перечнях подсластите-лей и синтетических красителей, допусти-мых в составе лекарственных средств» [32].

В соответствии с постановлением Со-вета Министров Республики Беларусь от 2 сентября 2008 года №1269 Министер-ством здравоохранения Республики Бела-русь приказом от 30 сентября 2008 г. №907 «Об утверждении состава и групп экспер-тов комиссии по лекарственным средствам Министерства здравоохранения Республи-ки Беларусь» Фармакологический и Фар-макопейный комитеты преобразованы в комиссию по лекарственным средствам (далее – Комиссия), утвержден состав Ко-миссии и состав группы экспертов [33]. Состав группы экспертов утвержден из 161 специалиста 25 экспертных групп. По-становлением Министерства здравоохра-нения Республики Беларусь от 31 октября

90

2008 г. №182 «Об утверждении Положения о комиссии по лекарственным средствам» утверждено Положение о комиссии по ле-карственным средствам [34].

В связи с принятием Закона Республики Беларусь от 28 октября 2008 года №433-З «Об основах административных процедур» [35], вступившего в силу с 12.05.2009 г., Правительством и Министерством здраво-охранения принимается ряд нормативных правовых актов в целях выполнения данного Закона:

- постановление Совета Министров Республики Беларусь от 9 февраля 2009 г. №171 «Об утверждении перечня админи-стративных процедур, совершаемых Респу-бликанским центром по оздоровлению и санитарно-курортному лечению населения в отношении юридических лиц и индивиду-альных предпринимателей, и о внесении из-менений и дополнений в постановление Со-вета Министров Республики Беларусь от 31 октября 2007 г. №1430» [36];

- постановление Совета Министров Ре-спублики Беларусь от 26 февраля 2009 г. №254 «О внесении изменений и дополне-ний в некоторые постановления Совета Ми-нистров Республики Беларусь по вопросам осуществления административных проце-дур в сфере здравоохранения» [37], которым внесены изменения в постановление Совета Министров Республики Беларусь от 2 сентя-бря 2008 г. №1269;

- постановление Министерства здраво-охранения Республики Беларусь №52 от 8 мая 2009 г. «О требованиях к документам на лекарственные средства, фармацевти-ческие субстанции, заявляемые на госу-дарственную регистрацию (перерегистра-цию), и документам, представляемым для внесения изменений в регистрационное досье на лекарственное средство (фарма-цевтическую субстанцию), ранее зареги-стрированное в Республике Беларусь, и о признании утратившим силу постановле-ния Министерства здравоохранения Респу-блики Беларусь от 21 ноября 2008 г. №199 [38].

И, наконец, на основании статьи Зако-на Республики Беларусь «О лекарственных средствах» №161-З от 20 июля 2006 года Министерством здравоохранения Республи-ки Беларусь принято постановление от 7 мая 2009 года №50 «О некоторых вопросах проведения клинических испытаний лекар-ственных средств», которым утвержден Тех-нический кодекс установившейся практики «Надлежащая клиническая практика» (ТКП 184-2009 (02040)) и перечень документов, представляемых для назначения клиниче-

ских испытаний лекарственных средств, и требований к этим документам. Данный до-кумент принят взамен ранее действующего приказа Министерства здравоохранения Ре-спублики Беларусь от 13 августа 1999 года №254 «Об утверждении правил проведения клинических испытаний лекарственных средств» [39]. Требования, изложенные в ТКП 184-2009 (02040), полностью гармо-низированы с Руководством по надлежа-щей клинической практике Международной конференции по гармонизации технических требований к регистрации фармацевтиче-ских продуктов, предназначенных для при-менения человеком.

Практическое применение Закона Ре-спублики Беларусь «О лекарственных средствах» №161-З от 20 июля 2006 года в течение 2007 года показало несовершен-ство некоторых его статей. В связи с чем уже в конце 2007 года была начата работа по внесению изменений в вышеуказанный Закон. 15 июня 2009 г за №27-З принят За-кон Республики Беларусь «О внесении из-менений и дополнений в некоторые Зако-ны Республики Беларусь по вопросам об-ращения лекарственных средств» [40]. Из-менения коснулись статьи 1 по основным терминам и их определениям; статьи 8 по государственной регистрации (перереги-страции) лекарственных средств; статьи 19 по реализации лекарственных средств; статьи 20 по оптовой реализации лекар-ственных средств; статьи 22 по хранению, транспортировке, изъятию из обращения и уничтожению лекарственных средств; ста-тьи 23 по ввозу и вывозу лекарственных средств. В Закон внесены дополнительно 3 статьи: статья 5-1 «Государственная фар-макопея Республики Беларусь», статья 5-2 «Качество лекарственных средств», статья 16-1 «Медицинское применение лекар-ственных средств».

С целью унификации проведения экс-пертных работ при регистрации лекар-ственных средств разработана Инструкция по проведению экспертизы, в которой от-ражаются требования к эксперту комиссии по лекарственным средствам, требования к оформлению и содержанию экспертно-го заключения, личная карточка эксперта, обязательство о соблюдении конфиденци-альности, форма экспертного заключения и перечень вопросов, подлежащих освеще-нию в экспертном заключении (приказ Ми-нистерства здравоохранения Республики Беларусь от 23.06.2009 г. №610 «Об утверж-дении Инструкции о проведении эксперти-зы документов регистрационного досье на лекарственное средство, фармацевтическую


91

субстанцию и документов, представляемых для внесения изменений в регистрацион-ное досье ранее зарегистрированного ле-карственного средства, фармацевтической субстанции» [41]. Приказом Министерства здравоохранения от 14.03.2011 г. №237 «О внесении изменений и дополнений в приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 23 июня 2009 г. №610» внесены изменения, устанавливающие требования к назначению клинических испытаний лекар-ственного средства, перечень наименований лекарственных форм, используемых при го-сударственной регистрации лекарственных средств, утверждающий критерии отнесения лекарственных средств к перечню лекар-ственных средств, реализуемых без рецепта врача [42].

В соответствии с поручением Прави-тельства Республики Беларусь разработан технический кодекс установившейся практи-ки (ТКП) «Принципы клинических испыта-ний лекарственных средств природного про-исхождения», который утверждается поста-новлением Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 29.12.2010 г. №181 «Об утверждении и введении в действие тех-нического нормативного акта» [43].

Министерством здравоохранения прика-зом от 04.01.2011 г. №3 «О внесении изме-нений и дополнений в приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 30 сентября 2008 г. №907» [44] внесены из-менения в качественный и количественный состав комиссии по лекарственным сред-ствам. В состав комиссии по лекарственным средствам входит 27 человек. Из них ученое звание, степень имеют: член-корреспондент НАН Беларуси, доктор медицинских наук, профессор - 1; доктор медицинских наук, профессор - 9; кандидат медицинских наук – 9 (из них 2 в настоящее время обучаются в докторантуре); кандидат фармацевтических наук - 3. При этом сформировано 25 групп экспертов, в состав которых вошли 222 спе-циалиста, из них ученое звание, степень имеют: член-корреспондент НАН Беларуси, доктор медицинских наук, профессор - 2; доктор химических наук, академик НАН Бе-ларуси – 1, доктор медицинских наук, про-фессор - 67; доктор медицинских наук, до-цент – 14, доктор фармацевтических наук, профессор – 3, доктор химических наук, профессор – 4, кандидат медицинских наук, доцент – 71; кандидат медицинских наук – 19, кандидат фармацевтических наук, доцент – 2, кандидат химических наук -1. Таким об-разом, 184 из 222 экспертов имеют ученое звание и степень.

В целях совершенствования процеду-

ры государственной регистрации лекар-ственных средств в Республике Беларусь Министерством здравоохранения разрабо-тан план мероприятий, который утвержден Министром здравоохранения В.И. Жарко 14.02.2011 г. В соответствии с указанным планом в целях применения международ-ных стандартов к практике регистрации ле-карственных средств в Республике Беларусь выполнены следующие работы:

01.04.2011 г. обеспечено проведение экспертизы клинико-фармакологического раздела регистрационных досье при перере-гистрации лекарственных средств в полном объеме штатными экспертами УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении».

Подготовлена стандартная операцион-ная процедура по выполнению экспертной оценки клинико-фармакологического разде-ла регистрационного досье с обязательным анализом показателей эффективности и без-опасности лекарственного средства.

С 01.01.2011 г выполняется разверну-тая экспертиза отчетов по испытаниям био-эквивалентности лекарственных средств по стандарту Всемирной организации здраво-охранения.

В Лаборатории фармакопейного и фар-мацевтического анализа разработана стан-дартная операционная процедура «Орга-низация и проведение работ по экспертизе регистрационных досье на лекарственные средства, фармацевтические субстанции с целью их регистрации (перерегистрации) и внесения изменений в регистрационные до-сье. Контроль качества экспертных заключе-ний» (утвержден СОП № 3/12-01 от 01.03.11 г.).

С отечественными производителями лекарственных средств и представителями концерна «Белбиофарм» проведены практи-ческие семинары по вопросам:

а) формирования регистрационного до-сье по европейскому формату (CTD-формат);

б) организации службы фармаконадзора и инспектирования системы фармаконадзо-ра на предприятиях (с участием представи-телей Международного общества по фарма-конадзору).

В рамках осуществления деятельности рабочей группы комиссии Таможенного Со-юза по обеспечению взаимопризнания реги-страционных удостоверений лекарственных средств, производимых отечественными производителями по требованиям Надлежа-щей производственной практики, подготов-лены и одобрены секретариатом Комиссии Таможенного Союза следующие документы:

а) по Надлежащей лабораторной практи-ке (требования к доклиническому изучению


92

лекарственных средств);б) по Надлежащей клинической практи-

ке (требования к проведению клинических испытаний лекарственных средств);

в) требования к упаковке и маркировке лекарственных средств;

г) требования к инструкции по медицин-скому применению лекарственных средств.

Необходимо отметить, что для продви-жения товаров в рамках Таможенного Союза (Республика Беларусь, Российская Федера-ция и Казахстан) при Комиссии Таможен-ного Союза создана рабочая группа по обе-спечению взаимопризнания регистрацион-ных удостоверений лекарственных средств, производимых отечественными производи-телями по требованиям Надлежащей про-изводственной практики. Как первый шаг в данном направлении следует рассматривать утверждение решением Комиссии Таможен-ного Союза от 18 июня 2010 г. №298 Плана мероприятий по взаимному признанию реги-страционных удостоверений на лекарствен-ные средства производителей государств - членов Таможенного Союза, произведенных в условиях Надлежащей производственной практики (GMP), предусматривающего гар-монизацию и унификацию всех основопола-гающих документов Республики Беларусь, Российской Федерации и Республики Казах-стан, регулирующих безопасность, эффек-тивность и качество лекарственных средств [45]. А именно, согласно плану должны быть разработаны единые для стран-участниц Та-моженного Союза:

правила надлежащей лабораторной практики (GLP);

правила надлежащей клинической прак-тики (GCP);

правила надлежащей производственной практики (GMP);

правила подтверждения соответствия производства лекарственных средств требо-ваниям GMP;

правила надлежащей дистрибьюторской практики (GDP);

правила надлежащей аптечной практики (GPP);

требования к инструкции для потребите-лей;

требования к маркировке;требования к регистрационному досье;правила мониторинга побочных реак-

ций;правила взаимного признания результа-

тов контроля качества;фармакопейные стандарты; информационная система, содержащая

информацию о зарегистрированных ле-карственных средствах, о некачественных,

фальсифицированных лекарственных сред-ствах, о результатах мониторинга побочных реакций лекарственных средств;

иные документы в случае необходимо-сти.

Указанный выше план находится в ста-дии реализации.

Решением Комиссии Таможенного Со-юза от 2 марта 2011 г. №564 одобрена Надле-жащая лабораторная практика Таможенного Союза [46].

Решением Комиссии Таможенного Со-юза от 2 марта 2011 г. №565 одобрена Надле-жащая клиническая практика Таможенного Союза [47].

Решением Комиссии Таможенного Со-юза от 19 мая 2011 г. №646 одобрены Требо-вания к маркировке лекарственных средств [48].

Решением Комиссии Таможенного Со-юза от 19 мая 2011 г. №647 одобрены Требо-вания к инструкции по медицинскому при-менению лекарственных средств [49].

У истоков создания нормативной право-вой базы по регистрации лекарственных средств и организации системы регистрации лекарственных средств в Беларуси стояли: Годовальников Г.В., Гашек Л.Е., Реутская Л.А., Тимошина В.В., Кевра М.К., Гаврилен-ко Л.Н., Полякова Л.В., Шамсутдинова Т.А, Шеряков А.А., Воронов Г.Г., Рождествен-ский Д.А., Рафалович Л.И., Авзина Т.Ф., Марченко С.И.

ВЫВОДЫ

1. Система регистрации лекарственных средств в Беларуси начала формироваться в 1991 году. С 1991 года и по настоящее время создана нормативная правовая база по реги-страции лекарственных средств, гармонизи-рованная с международными документами, создана структура по регистрации лекар-ственных средств с целью обеспечения насе-ления страны эффективными, безопасными и качественными лекарственными средства-ми.

2. Министерство здравоохранения Ре-спублики Беларусь реализует государствен-ную политику в сфере обращения лекар-ственных средств, в том числе по регистра-ции лекарственных средств, государствен-ному контролю за качеством лекарственных средств, контролю за побочными реакциями на лекарственные средства.

3. Комплекс работ по осуществлению ре-гистрации лекарственных средств осущест-вляется через созданное в 1997 году Респу-бликанское унитарное предприятие «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении».


93

SUMMARY

A.A. SheryakovTHE HISTORY OF REGISTRATION

OF MEDICINAL FACILITIES IN REPUBLIC OF BELARUS

In the article the historical data about shap-ing the system of registration of medicinal facil-ities in Republic of Belarus since 1991 till our days are given: the creation of regulation organ, the publication of normative legal acts and their realization.

Keywords: registration, medicinal facili-ties, historical data.


1. О создании фармакологической ко-миссии Минздрава БССР: приказ МЗ БССР от 3 июня 1991 г. №102.

2. О здравоохранении: Закон Респ. Бела-русь от 18 июня 1993 г., №2435-XII.

3. О Фармакологическом комитете Ми-нистерства здравоохранения Республики Бе-ларусь: приказ Министерства здравоохране-ния Респ. Беларусь от 15 ноября 1993 года, №262.

4. О создании Фармакопейного комитета Министерства здравоохранения Республики Беларусь: приказ Министерства здравоохра-нения Респ. Беларусь от 21 января 1994 года, №22.

5. Временное положение о порядке перерегистрации зарубежных лекарствен-ных средств: постановление Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 12 февраля 1994 г.

6. Временное положение о предъявляе-мых требованиях к нормативной докумен-тации по контролю качества лекарственных средств, представляемых зарубежными фир-мами для регистрации (перерегистрации) в Министерство здравоохранения Республи-ки Беларусь: постановление Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 12 июня 1996 г.

7. О создании государственного пред-приятия «Республиканский центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»: приказ Министерства здравоохранения Респ. Бела-русь от 15 октября 1997 г., № 250.

8. О Фармакологическом и Фармакопей-ном комитетах Министерства здравоохране-ния Республики Беларусь: приказ Министер-ства здравоохранения Респ. Беларусь от 18 марта 1998 г., №88.

9. О формировании базы данных о лекар-ственных средствах и изделиях медицинской техники, зарегистрированных в Республике Беларусь, и по вопросам лицензирования

фармацевтических видов деятельности: при-каз Министерства здравоохранения Респ. Беларусь от 8 мая 1998 г., №142.

10. О формировании и распространении реестров: приказ Министерства здравоохра-нения Респ. Беларусь от 23 января 1999 г., №83.

11. Об утверждении перечней учрежде-ний, на базе которых проводятся клиниче-ские испытания и лабораторные исследова-ния лекарственных средств: приказ Мини-стерства здравоохранения Респ. Беларусь от 27 августа 1998 г., №236.

12. О некоторых вопросах обращения на территории Республики Беларусь лекар-ственных средств, изделий медицинского назначения и медицинской техники: поста-новление Совета Министров Респ. Беларусь от 7 декабря 1998 г., №1870.

13. Фармакопейные статьи. Порядок раз-работки, согласования и утверждения: ГОСТ Республики Беларусь от 18 июня 1999 года.

14. Об утверждении правил проведе-ния клинических испытаний лекарственных средств: приказ Министерства здравоохра-нения Респ. Беларусь от 13 августа 1999 г., №254.

15. Об утверждении Положения о госу-дарственной регистрации лекарственных средств и фармацевтических субстанций и Положения о государственной регистрации изделий медицинского назначения и меди-цинской техники: пост. Совета Министров Респ. Беларусь от 20 июня 2000 г., №921.

16. О внесении изменений и дополне-ний в Устав Государственного предприятия «Республиканский центр экспертиз и испы-таний в здравоохранении: приказ Министер-ства здравоохранения Респ. Беларусь от 25 января 2000 г., №25.

17. О внесении изменений и дополнений в постановление Совета Министров Респу-блики Беларусь от 7 декабря 1998 г. №1870 и от 20 июня 2000 г. №921: пост. Совета Ми-нистров Республики Беларусь от 11 октября 2001 г., №1476.

18. О разрешении на применение в Ре-спублике Беларусь незарегистрированных лекарственных средств, изделий медицин-ского назначения и медицинской техники: пост. Министерства здравоохранения Респ. Беларусь от 20 декабря 2002 г., №73.

19. Об утверждении Положения о тре-бованиях к документам на лекарственные средства и фармацевтические субстанции, заявляемые на государственную регистра-цию (перерегистрацию): пост. Министер-ства здравоохранения Респ. Беларусь от 8 января 2002 г., №1.

20. О графическом оформлении упако-


94

вок лекарственных средств: пост. МЗ Респ. Беларусь от 13 июня 2002 г., №30.

21. О лекарственных средствах: Закон Республики Беларусь от 20 июля 2006 г., № 161-З (с изменениями и дополнениями от 15.06.2009 г.) // Национальный реестр пра-вовых актов Республики Беларусь, 2009 г., № 148, 2/1579.

22. Об утверждении Инструкции о по-рядке представления информации о выяв-ленных побочных реакциях на лекарствен-ные средства и контроля за побочными реак-циями на лекарственные средства: пост. Ми-нистерства здравоохранения Респ. Беларусь от 20 марта 2008 г., №52.

23. Об утверждении Положения о коми-тете по этике: пост. Министерства здравоох-ранения Респ. Беларусь от 28 марта 2008 г., №55.

24. Об утверждении технического кодек-са установившейся практики: пост. Мини-стерства здравоохранения Респ. Беларусь от 28 марта 2008 г., №56.

25. Об утверждении технического кодек-са установившейся практики «Фармакопей-ные статьи. Порядок разработки и утвержде-ния»: пост. Министерства здравоохранения Респ. Беларусь от 18 февраля 2008 г., №37.

26. О Государственной фармакопее Ре-спублики Беларусь: приказ Министерства здравоохранения Респ. Беларусь от 17 апре-ля 2006 г., №277.

27. Государственная фармакопея Респу-блики Беларусь. Т.1. Общие методы контро-ля качества лекарственных средств / Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении // Под общ. ред. Г.В. Годовальникова – Минск: Минский госуд. ПТК полиграфии. – 2006. – 656 с.

28. Государственная фармакопея Респу-блики Беларусь. В 3 т. Т.2. Контроль качества вспомогательных веществ и лекарственного растительного сырья / УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; под общ. ред. А.А. Шерякова. – Молодечно: «Типо-графия «Победа», 2008. – 472 с.

29. Государственная фармакопея Респу-блики Беларусь. В 3 т. Т.3. Контроль каче-ства фармацевтических субстанций / М-во здравоохранения Респ. Беларусь, УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; под общ. ред. А.А. Шерякова. – Молодечно: «Типография «Победа», 2009. – 728 с.

30. Об утверждении перечня админи-стративных процедур, совершаемых Мини-стерством здравоохранения и подчиненны-ми ему государственными организациями в отношении юридических лиц и индивиду-альных предпринимателей: пост. Министер-ства здравоохранения Респ. Беларусь от 31

октября 2007 г., №1430.31. Об утверждении Положения о госу-

дарственной регистрации (перерегистрации) лекарственных средств и фармацевтических субстанций и Положения о государственной регистрации (перерегистрации) изделий ме-дицинского назначения и медицинской тех-ники: пост. Министерства здравоохранения Респ. Беларусь от 2 сентября 2008 г., №1269.

32. О требованиях к документам на ле-карственные средства, фармацевтические субстанции, заявляемые на государственную регистрацию (перерегистрацию), и призна-нии утратившим силу некоторых норматив-ных правовых актов Министерства здраво-охранения Республики Беларусь: пост. Ми-нистерства здравоохранения Респ. Беларусь от 21 ноября 2008 г., №199.

33. Об утверждении состава и групп экс-пертов комиссии по лекарственным сред-ствам Министерства здравоохранения Ре-спублики Беларусь: приказ Министерства здравоохранения Респ. Беларусь от 30 сентя-бря 2008 г., №907.

34. Об утверждении Положения о комис-сии по лекарственным средствам: пост. Ми-нистерства здравоохранения Респ. Беларусь от 31 октября 2008 г., №182.

35. Об основах административных про-цедур: Закон Респ. Беларусь от 28 октября 2008 г., №433.

36. Об утверждении перечня администра-тивных процедур, совершаемых Республикан-ским центром по оздоровлению и санитарно-курортному лечению населения в отношении юридических лиц и индивидуальных пред-принимателей, и о внесении изменений и до-полнений в постановление Совета Министров Республики Беларусь от 31 октября 2007 г. №1430: пост. Совета Министров Респ. Бела-русь от 9 февраля 2009 г., №171.

37. О внесении изменений и дополне-ний в некоторые постановления Совета Ми-нистров Республики Беларусь по вопросам осуществления административных проце-дур в сфере здравоохранения: пост. Совета Министров Респ. Беларусь от 26 февраля 2009 г., №254.

38. О требованиях к документам на ле-карственные средства, фармацевтические субстанции, заявляемые на государственную регистрацию (перерегистрацию), и докумен-там, представляемым для внесения измене-ний в регистрационное досье на лекарствен-ное средство (фармацевтическую субстан-цию), ранее зарегистрированное в Республи-ке Беларусь, и о признании утратившим силу постановления Министерства здравоохране-ния Республики Беларусь от 21 ноября 2008 г. №199: пост. Министерства здравоохране-


95

ния Респ. Беларусь от 8 мая 2009 г., №52.39. О некоторых вопросах проведения

клинических испытаний лекарственных средств: пост. Министерства здравоохране-ния Респ. Беларусь от 7 мая 2009 г., №50.

40. О внесении изменений и дополне-ний в некоторые Законы Республики Бела-русь по вопросам обращения лекарственных средств: Закон Респ. Беларусь от 15 июня 2009 г., №27-З.

41. Об утверждении Инструкции о про-ведении экспертизы документов регистра-ционного досье на лекарственное средство, фармацевтическую субстанцию и докумен-тов, представляемых для внесения измене-ний в регистрационное досье ранее заре-гистрированного лекарственного средства, фармацевтической субстанции: приказ Ми-нистерства здравоохранения Респ. Беларусь от 23.06.2009 г., №610.

42. О внесении изменений и дополнений в приказ Министерства здравоохранения Ре-спублики Беларусь от 23 июня 2009 г. №610: приказ Министерства здравоохранения Респ. Беларусь от 14.03.2011 г., №237.

43. Об утверждении и введении в дей-ствие технического нормативного акта: пост. Министерства здравоохранения Респ. Бела-русь от 29.12.2010 г., №181.

44. О внесении изменений и дополнений в приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 30 сентября 2008 г.

№907: приказ Министерства здравоохране-ния Респ. Беларусь от 04.01.2011 г., №3.

45. План мероприятий по взаимному признанию регистрационных удостоверений на лекарственные средства производителей государств – членов Таможенного Союза, произведенных в условиях Надлежащей производственной практики (GMP): решеие Комиссии Таможенного Союза от 18 июня 2010 г., №298.

46. Надлежащая лабораторная практика Таможенного союза: решение Комиссии Та-моженного Союза от 2 марта 2011 г., №564.

47. Надлежащая клиническая практика Таможенного союза: решение Комиссии Та-моженного Союза от 2 марта 2011 г., №565.

48. Требования к маркировке лекар-ственных средств: решение Комиссии Тамо-женного Союза от 19 мая 2011 г., №646.

49. Требования к инструкции по ме-дицинскому применению лекарственных средств: решение Комиссии Таможенного Союза от 19 мая 2011 г., №647.


220037, Республика Беларусь, г. Минск, пер. Товарищеский, 2а,РУП «Центр экспертиз и испытанийв здравоохранении».Шеряков А.А.



96


ДИСКУССИИ

В.А. Куликов

О РОЛИ ПРОВИЗОРА В ВАЛЕОЛОГИЧЕСКОМ ОБУЧЕНИИ И ВОСПИТАНИИ НАСЕЛЕНИЯ


В статье проанализированы и обобщены возможности участия специалистов – провизоров в валеологическом обучении и воспитании населения.

Ключевые слова: провизор, валеологическое обучение и воспитание населения.

Валеологическое обучение и воспитание населения составляет неотъемлемую часть здравоохранения и профилактической меди-цины и имеет большое народно-хозяйствен-ное значение [1]. Оно является составной частью культурно-просветительной работы среди населения страны с учетом современ-ных задач в области здравоохранения.

Валеологическое обучение и воспита-ние направлено на дальнейшее повышение уровня культуры, соответствующего ги-гиенического поведения, которые должны способствовать профилактике различных заболеваний, формированию здорового об-раза жизни, искоренению пьянства и алко-голизма, курения, наркомании, знахарства и др., воспитанию ответственного отношения личности к своему здоровью, коллектива и общества. Это связано с тем, что низкая са-нитарная культура - одна из главных причин заболеваемости и смертности населения, снижения его социальной активности. Вале-ологическое обучение и воспитание играют важную роль в жизни страны. Это профи-лактика заболеваний, особенно тех, которые в последние годы приобретают все большую опасность (сердечно – сосудистые заболева-ния, ВИЧ/СПИД, туберкулез и др.). В 1993 году ООН объявила туберкулез глобальной угрозой для всего человечества [2,3]. Эпиде-мия ВИЧ также носит глобальный характер. По данным ООН и ВОЗ, в 2009 году более 39 миллионов человек страдало от этой инфек-ции [4]. По данным ряда авторов [5], растет смертность от сердечной недостаточности. Только в США от этого заболевания страдает 5 миллионов человек. Инсульты и сердечная недостаточность стали главной причиной смертности и инвалидизации населения [6]. Считаясь одним из методов лечебной и про-филактической медицины, валеологическое обучение и воспитание является обязатель-ным разделом деятельности медицинских работников всех категорий. Для достижения

успеха в этой области необходима хорошая его организация и высококвалифицирован-ные пропагандисты.

Решение поставленной задачи возмож-но с привлечением врачей и специалистов с высшим фармацевтическим образовани-ем – провизоров. Этому способствуют зна-ния специалиста – провизора, полученные в результате изучения фундаментальных и профильных дисциплин, таких как физика, химия, математика, ботаника, фармакогно-зия, фармацевтической химия (химия ле-карственных средств), фармацевтическая технология, токсикологическая химия, био-химия. Изучая такие дисциплины, как био-логия, физиология с элементами анатомии, патофизиология, фармакология и др., прови-зор приобретает достаточный запас знаний для понимания вопросов, касающихся про-цессов фармакокинетики и фармакодинами-ки лекарственных средств. Таким образом, многопрофильный комплекс знаний позво-ляет специалисту-провизору быть экспертом по лекарственным средствам и химическим веществам, активно участвовать в популя-ризации медицинских и общегигиенических знаний по многим направлениям.

В настоящее время значительно расши-рилась номенклатура не только лекарствен-ных средств, но и изделий медицинской тех-ники, средств диагностики, профилактики, медико-санитарных материалов, что требует больших знаний в плане их применения и реализации.

При этом следует отметить, что лекар-ственные средства являются чужеродными веществами для организма человека и несут потенциальную опасность здоровью и жиз-ни при их бесконтрольном и неправильном приеме. Прием любого лекарственного сред-ства связан с риском, так как все лекарствен-ные средства обладают побочным эффектом [7].

Знания о лекарственных средствах так-

97


же позволяют провизору бороться с их зло-употреблением и бесконтрольным самолече-нием. Актуальность этого момента особенно важна при безрецептурном отпуске лекар-ственных средств, так как значительный процент стационарных больных находится в клиниках в связи с побочными действия-ми лекарственных средств или неправиль-ном обращении с ними [8,9]. Эта опасность особенно возросла в последнее время, когда значительное количество людей, минуя вра-ча, непосредственно обращаются в аптеку за лекарственными средствами. При этом следует отметить, что только врач может на-значить больному то или иное лекарствен-ное средство, учитывая не только его эффек-тивность и безопасность, но и особенности организма пациента и течение болезни [7,9]. Особую опасность несут лекарственные средства, когда данные об их эффективно-сти фальсифицированы, а побочные эффек-ты не все установлены во время испытаний или игнорируются, что приводит к трагиче-ским случаям. Так, в 1937 году в США был изготовлен «сульфаниламидный эликсир», в котором в качестве растворителя был ис-пользован этиленгликоль, обладающий вы-сокой токсичностью для организма людей и животных. В результате приема такого элик-сира 107 человек ушли из жизни. Вторая трагедия разразилась в 1960-1961 гг. и была связана с применением талидомида. Талидо-мид был синтезирован в ФРГ и принимал-ся как безопасное седативное и снотворное средство, в том числе и беременными жен-щинами. В 1960-1961 гг. в ряде европейских стран возникла вспышка фокомелии (тюле-ньи конечности), причиной которой явился талидомид. Было зарегистрировано рожде-ние 20 тысяч детей с врожденной аномали-ей развития конечностей и других органов. Эта трагедия заставила на правительствен-ном уровне взять под контроль внедрение новых лекарственных средств в практику и прекратить бесконтрольное применение их в медицине [7]. Следует помнить, что такие примеры не единичны. Риск использования лекарственных средств также выражается и в том, что населением не всегда соблюдают-ся условия хранения, время и способы при-ема, сроки годности лекарственных средств. Отмечены случаи одновременного при-ема лекарственных средств - антагонистов. Большую опасность представляет хранение лекарственных средств в местах, доступных для детей. Например, в Великобритании вре-менами проводятся кампании по сбору не-использованных лекарственных средств. В одном из городов численностью населения около 600000 было собрано 500000 твердых

единиц доз (таблетки, капсулы и т.д.), а в го-роде с населением 1 миллион – 1 миллион доз. Количество жидких форм было возвра-щено в объёме 450 л [7].

Самолечение можно оправдать в том случае, когда оно применяется для снятия болезненных ощущений, если не требует-ся установления точного диагноза, для об-легчения состояния при нетяжелом течении некоторых хронических заболеваний [7]. В документах ВОЗ подчеркивается, что само-лечение может быть использовано лишь при ограниченном числе незначительных недо-моганий [10]. При этом следует отметить, что в настоящее время в цивилизованных странах на вооружение принята концепция «ответственного самолечения», суть которой заключается в том, что главную ответствен-ность за своё здоровье должен нести каждый человек сам. Эта концепция является как бы противовесом бесконтрольного самолечения и основывается на тесном взаимодействии врача, провизора, фармацевта и пациента. В этом случае по консультации врача, прови-зора или фармацевта может осуществляться отпуск некоторых лекарственных средств без рецепта врача [10].

В процессе проводимой работы необхо-димо внедрять в сознание людей, что лекар-ственные средства не являются панацеей от различных заболеваний, не менее важным фактором является соблюдение здорового образа жизни.

Большой объем химических знаний по-зволяет провизору проводить работу по предупреждению пагубного влияния ток-сических веществ на организм человека. За годы химизации народного хозяйства эта опасность резко возросла, и здоровью насе-ления серьезно угрожает неконтролируемое употребление лекарственных средств, не-прерывно возрастающее применение быто-вых и промышленных химических веществ, средств защиты растений, различного рода удобрений и т.д. Процесс химизации на-родного хозяйства представляет серьезную угрозу и окружающей среде. Это в свою очередь делает необходимым усиление соот-ветствующей пропаганды среди населения страны. Информацию о грозящей опасности населению может и должен донести прови-зор.

В этой связи необходимо обратить вни-мание на проблему токсикомании и наркома-нии. Употребление наркотических средств представляет грозную опасность, подоб-но эпидемиям инфекционных заболеваний (чумы и др.), опустошавших в свое время целые страны. Данный процесс усугубляет-ся в настоящее время тем, что наркомания

98


стремительно распространяется практиче-ски по всем странам и континентам планеты. Чаще всего потребителями наркотических веществ или их суррогатов становятся мо-лодые люди. Даже однократный прием нар-котических средств может быть причиной этого заболевания. По данным Управления ООН по наркотикам и преступности число наркоманов за 2005 год стало больше на 15 миллионов человек, а в 2007 году количество лиц, употребивших наркотики хотя бы один раз в жизни, соответствовало 175 - 250 мил-лионам человек [11,12]. В конце 2009 года число зарегистрированных лиц, употребля-ющих наркотические и токсикоманические вещества в Беларуси достигло 11412 человек [11]. Мировой доход от продажи наркоти-ков достиг 320 миллиардов долларов США за год, превысив ВВП почти 90 стран мира [12]. Согласно данным наркологической службы Министерства здравоохранения Ре-спублики Беларусь в период с 2000 – 2007 гг. число потребителей наркотиков выросло на 91,4% [13]. В Российской Федерации с 1998 по 2004 гг. показатель учтенной распростра-ненности наркомании возрос в 15 раз [14]. Специалист – провизор, как человек, непо-средственно имеющий дело с наркотиче-скими средствами, обязан пропагандой зна-ний о негативном исходе этого заболевания предупреждать людей от рокового увлечения наркотиками.

Важным участком борьбы за сохране-ние здоровья населения следует выделить проблему курения. В мире насчитывается 1,5 миллиарда курильщиков, из которых 5,5 миллиона каждый год уходят из жизни от за-болеваний, связанных с табакокурением. В Беларуси курят почти 57,9% мужчин и 11,7% женщин в возрасте от 25 до 64 лет [15].

Курение напрямую связано с целым ря-дом заболеваний: ишемической болезнью сердца, онкологическими заболеваниями пи-щеварительного тракта, полости рта и др. В первую очередь это объясняется многочис-ленными вредными для здоровья вещества-ми, содержащимися в табачном дыме, таки-ми как никотин, канцерогены, углерода (II) оксид, синильная кислота, ядовитые смолы и др. [16,17]. Опасность курения состоит и в том, что оно наносит вред не только самому курильщику, но и окружающим его людям. По данным Американского агентства по за-щите окружающей среды вторичный дым отнесен к группе канцерогенных веществ, вызывающих онкозаболевания легких у не-курящих людей. Ежегодно только в США пассивное курение является причиной более 50 тысяч летальных исходов, сотням тысяч детей, страдающих астмой, пассивное куре-

ние ухудшает их состояние. Сотни тысяч лю-дей погибают от пассивного курения [15,17]. Установлено, что дети курящих родителей чаще болеют респираторными инфекцион-ными заболеваниями легких, чем дети не-курящих родителей, у них ниже уровень ин-теллектуального развития, например, низкая успеваемость по математике [16].

Не менее грозной опасностью является пьянство. В Республике Беларусь заболевае-мость алкоголизмом в период с 1980 – 2005 гг. возросла на 33,7%, заболеваемость ал-когольными психозами – в 3,5 раза, число пациентов, пролечившихся стационарно по поводу алкоголизма – на 43%, общая смерт-ность выросла на 32%, уровень острых алко-гольных отравлений – в 2,3 раза [18,19]. Ряд авторов [14] отмечают вероятность того, что в России имеется более 10 миллионов лиц, зависимых от алкоголя. Поэтому пропаган-да знаний о вреде алкоголя при реализации спиртосодержащих лекарственных средств является важным фактором в деле профи-лактики пьянства как социального явления.

Знания о лекарственных растениях по-зволяют проводить пропаганду знаний по вопросам рациональной заготовки лекар-ственного растительного сырья, правил его сушки, условий хранения, оптимальной эксплуатации дикорастущих растений. Это вызвано тем, что в последние десятилетия значительно возросло значение лекарствен-ных средств, получаемых из лекарственного растительного сырья, поскольку они обла-дают высокой биологической активностью, малой токсичностью и доступностью. Одно-временно с этим возросли задачи по охране природы, в частности, растительного мира. Поэтому рациональная заготовка позволяет обеспечить получение сырья высокого каче-ства, гарантировать сохранение и возобнов-ление природных ресурсов лекарственных растений. Информировать население о том, чтобы при заготовке лекарственных расте-ний не собирались похожие, которые могут представлять опасность здоровью и жизни. Обращать внимание на растения, занесен-ные в Красную книгу.

Пропаганда знаний о лекарственных рас-тениях будет способствовать формированию у населения экологической культуры, береж-ного отношения к окружающей среде, осоз-нанию необходимости ее охраны, особенно в условиях, когда хищнически вырубаются леса на планете, загрязняются реки, моря, океаны, уничтожаются различные виды рас-тений и животных.

Таким образом, валеологическое обу-чение и воспитание, проводимое специали-стом - провизором, позволит формировать у

99


населения высокий уровень культуры, соот-ветствующее гигиеническое поведение, ко-торые будут способствовать профилактике различных заболеваний и формировать здо-ровый образ жизни.

SUMMARY

V.A. KulikovABOUT THE ROLE

OF A PHARMACEUTIST IN THE VALEOLOGICAL TRAINING AND

EDUCAТION OF THE POPULATIONPossibilities of participation of pharma-

ceutists in the valeological training and educa-tion of the population have been analysied and generelized in the article.

Keywords: pharmaceutist, valeological training and education of the population.


1. О здравоохранении: Закон Республики Беларусь, 20 июня 2008 г., № 363- 3.

2. Отчет о состоянии здравоохранения в мире 1996: борьба с болезнями - содействие развитию. Отчет генерального директора ВОЗ. - Женева. – 1996. – С.181.

3. Стаханов, В.А. Российский медицин-ский журнал. – 2009. - № 1. - С.3.

4. Русских, О.Е. Туберкулез, сочетанный с ВИЧ – инфекцией, в исправительных уч-реждениях Удмурдской республики / О.Е. Русских, В.А. Стаханов // Российский меди-цинский журнал. – 2009. – №1. - С. 9 – 10.

5. Айрин, Г. Парадигма подавления сим-патической системы при хронической сер-дечной недостаточности / Г. Айрин, Дж. М. Атанасиос, Г. Хараламбос // Международ-ный медицинский журнал. – М.: – 2000. – №3. – С. 213 – 216.

6. Инсульт можно предупредить. Между-народный медицинский журнал. – 2001. № 3. – С. 219 – 220.

7. Лоуренс, Д.Р. Клиническая фармако-логия в 2- х т. Том 1 / Д.Р. Лоуренс, П.Н. Бе-нитт. – М.: Медицина, 1993. – 640 с.

8. Скворцова, О.Н. О вреде самолечения / О.Н. Скворцова // Новая аптека. - 2002. – № 3. – С. 58-59.

9. Шухов, В.С. Проблема безопасного самолечения / В.С. Шухов // Международ-ный медицинский журнал. – 2000. - № 3. – С. 265 – 268.

10. Сулейманов, С.Ш. Ответственное са-молечение: Россия в начале пути / С.Ш. Сулей-манов // Новая аптека – 2010. - №10. – С.7-10.

11. Виницкая, А.Г. Некоторые эпидеми-ологические параметры наркологической ситуации в Беларуси / А.Г. Виницкая, Ю.Е. Разводовский, В.В. Лелевич // Вопросы ор-ганизации и информатизации здравоохране-ния. – М.: – 2010, № 4. – С. 20-24.

12. Без наркотиков. Электронный ре-сурс: Режим доступа: www. nodruq, ru. Дата доступа. 15.05. 2011.

13. Разводовский, Ю.Е. Динамика и структура смертности потребителей нарко-тиков в Республике Беларусь / Ю.Е. Разводо-вский, А.Г. Виницкая, В.В. Лелевич // Меди-цинские новости. – 2011. – №1. – С. 41-43.

14. Дмитриева, Т.Б. О наркологической ситуации в России к началу ХХI века и воз-можностях медицинских служб по её улуч-шению / Т.Б. Дмитриева, А.Л. Игонин // Рос-сийский медицинский журнал. – М.: – 2007, № 6. - С. 3-6.

15. Сидоренко, Г.И. Современные аспек-ты борьбы с табакокурением: исчерпаны ли все возможности / Г.И. Сидоренко, А.В. Фролов // Кардиология. – Минск: 2010. – № 11. – С. 91-93.

16. Лоуренс, Д.Р. Клиническая фармако-логия в 2-х т. Том 2 / Д.Р. Лоуренс, П.Н. Бе-нитт. – М.: Медицина, 1993. - С. 672.

17. Эйтан, И. Страдает ли население от пассивного курения? / И. Эйтан. Н. Гитель-ман // Международный медицинский жур-нал. – 1998. - № 9-10. – С. 879 – 883.

18. Разводовский, Ю.Е. Алкогольные проблемы в Беларуси / Ю.Е. Разводовский // Медицина. – 2005. – № 3. – С.23-26.

19. Разводовский, Ю.Е. Заболеваемость алкоголизмом в Беларуси и России / Ю.Е. Разводовский // Здравоохранение. – 2008. – № 10. - С.26-29.


210023, Республика Беларусь. г. Витебск, пр. Фрунзе,27,Витебский государственный медицинский университет,кафедра фармацевтический химии с курсом ФПК и ПК,тел. раб.: 8 ( 0212) 37-00-06.Куликов В.А.


100


ИНФОРМАЦИЯ УП «ЦЕНТР ЭКСПЕРТИЗ И ИСПЫТАНИЙ В ЗДРАВООХРАНЕНИИ»

БЕЗОПАСНОСТЬ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

Совместное применение инсулинсодержащих лекарственных средств с пиоглитазоном повышает риск развития сердечной недостаточности

PhVWP (рабочая группа по фармаконад-зору) Европейской Комиссии по лекарствен-ным средствам пересмотрела рекомендации по совместному применению инсулинсодер-жащих лекарственных средств с пиоглита-зоном. Данный пересмотр основан на дан-ных клинических испытаний, проведенных на пациентах с сахарным диабетом II типа, которые получали инъекции инсулина и ти-азолидиндионы, в том числе и пиоглитазон, а также другие антидиабетические лекар-ственные средства.

Рабочая группа по фармаконадзору Ев-ропейской Комиссии по лекарственным средствам считает, что информацию о по-вышенном риске развития сердечной недо-статочности при совместном применении лекарственных средств с международным непатентованным наименованием инсулин и пиоглитазон необходимо отнести ко всей группе данных лекарственных средств. Ис-следование, проведенное в Евросоюзе, вы-явило, что инструкции по медицинскому применению более 200 зарегистрированных лекарственных средств не содержат данной информации и методов по уменьшению.

Инсулин – гормон пептидной природы, образуется в бета-клетках островков Лангер-ганса поджелудочной железы. Оказывает мно-гогранное влияние на обмен практически во всех тканях. Основное действие инсулина за-ключается в снижении концентрации глюкозы в крови. Инсулин увеличивает проницаемость плазматических мембран для глюкозы, акти-вирует ключевые ферменты гликолиза, сти-мулирует образование в печени и мышцах из глюкозы гликогена, усиливает синтез жиров и белков. Кроме того, инсулин подавляет актив-ность ферментов, расщепляющих гликоген и жиры. То есть, помимо анаболического дей-ствия, инсулин обладает также и антикатабо-лическим эффектом.

Нарушение секреции инсулина вслед-ствие деструкции бета-клеток – абсолютная недостаточность инсулина – является клю-чевым звеном патогенеза сахарного диабе-та I типа. Нарушение действия инсулина на ткани – относительная инсулиновая недоста-

точность – имеет важное значение в разви-тии сахарного диабета II типа.

Пиоглитазон - пероральное гипогликеми-ческое средство, производное тиазолидиндио-нового ряда, приводящее к снижению уровня сахара в крови. Снижает инсулинорезистент-ность в периферических тканях и в печени. Уменьшение инсулинорезистентности под действием пиоглитазона приводит к сниже-нию концентрации глюкозы в крови, сниже-нию уровня инсулина в плазме и гликирован-ного гемоглобина, HbA1c. Используется в тера-пии диабета II типа как средство монотерапии, так и в сочетании с другими средствами. В ре-зультате у пациента повышается чувствитель-ность к инсулину в печени и периферических тканях, повышается инсулинзависимый рас-ход глюкозы, уменьшается вывод глюкозы из печени, снижаются уровни глюкозы, инсулина и гликированного гемоглобина в кровотоке.

В результате проведенного анализа дан-ных было принято решение дополнить раз-дел «Предостережения и особые указания» инструкции по медицинскому применению всех инсулинсодержащих лекарственных средств следующей информацией:

– случаи развития сердечной недоста-точности были получены при совместном применении инсулина и тиазолидиндионов, особенно у пациентов с факторами риска развития сердечной недостаточности. Это следует иметь в виду при назначении данной комбинации;

– если вышеуказанная комбинация на-значается, необходимо своевременно выяв-лять признаки и симптомы сердечной недо-статочности, повышение веса, отёки. При-менение пиоглитазона необходимо прекра-тить при ухудшении симптомов со стороны сердечной системы.

Инструкцию по медицинскому примене-нию необходимо дополнить следующей ин-формацией:

Раздел «Предостережения и особые указания»

Совместное применение инсулина с пиоглитазоном

Были получены сообщения о развитии

101


сердечной недостаточности при совмест-ном применении инсулинсодержащих лекар-ственных средств с пиоглитазоном, особенно у пациентов с факторами риска развития сер-дечной недостаточности. Это следует иметь в виду при назначении данной комбинации. При применении данной комбинации необ-ходимо своевременно выявлять признаки и симптомы сердечной недостаточности, по-вышение веса, отёки. Применение пиоглита-зона необходимо прекратить при ухудшении симптомов со стороны сердечной системы.


1. Monthly Report. Pharmacovigilance Working Party (PhVWP) January 2011 plenary meeting 27 January 2011 EMA/СHMP/PhVWP 51040/2011 Patient Health Protection. The way of access: www.ema.europa.eu

2. Insulin Products and Risk of Cardiac Fail-ure with Concomitant Use of Pioglitazone. Final SmPC wording agreed by the PhVWP in February 2011. The way of access: www.ema.europa.eu

Топирамат (topiramate) – применение во время беременности повышает риск развития врождённых дефектов лицевого черепа у плода

FDA проинформировало специалистов и пациентов о повышенном риске разви-тия врождённых дефектов лицевого черепа (расщелины губы/нёба - «заячьей губы»/ «волчьей пасти») у плода, если матери во время беременности принимали топирамат (topiramate).

Топирамат – это противоэпилептическое лекарственное средство для лечения разных типов судорог при эпилепсии, как в виде мо-нотерапии, так и в комплексной терапии, а также для профилактики приступов мигрени у взрослых.

Данные североамериканского регистра беременностей и противоэпилептических лекарственных средств показали повышен-ный риск развития врождённых дефектов лицевого черепа у плода («заячьей губы»/ «волчьей пасти») при монотерапии топира-матом во время первого триместра беремен-ности. Расщелина губы/нёба – патология, ко-торая возникает у ребенка в утробе матери. Причем, эти деформации могут встречаться как отдельно, так и вместе. Лечение данных деформаций только хирургическое. Рас-пространенность данного дефекта у плода составляла 1,4%, если беременная женщи-на принимала топирамат; 0,38-0,55% - дру-гие противоэпилептические лекарственные средства; 0,07% - не принимала другие про-

тивоэпилептические лекарственные сред-ства и не был установлен диагноз эпилепсии. По данным Британского регистра беремен-ностей, при эпилепсии была также отмечена повышенная распространённость вышеука-занных врождённых пороков развития среди новорожденных, матери которых принимали топирамат (3,2%), что в 16 раз выше базис-ного популяционного риска (0,2%).

Необходимо тщательно оценивать со-отношение риск/польза при назначении то-пирамата женщинам детородного возраста. Назначение топирамата при беременности обосновано лишь в том случае, если потен-циальная польза применения лекарствен-ного средства превышает возможный риск для плода. Если топирамат принимается во время беременности или беременность на-ступила на фоне применения лекарственные средства , важно информировать женщину о потенциальной опасности для плода.

Дополнительные рекомендации для специалистов:Вы должны информировать женщин

детородного возраста о повышенном ри-ске развития расщелины губы/нёба у плода, если женщина принимала топирамат в пер-вом триместре беременности.Вы должны оценить соотношение

риск/польза применения топирамата женщи-нами детородного возраста, в особенности, если данная фармакотерапия не направлена на предотвращение травм у беременной жен-щины и ее смерти. Должны быть рассмотрены альтернативные лекарственные средства с бо-лее низким риском развития дефектов лицево-го черепа и других неблагоприятных исходов. Специалисты должны обсуждать относитель-ные риски и пользу альтернативного лечения.Если принято решение назначить то-

пирамат женщине детородного возраста, ко-торая не планирует беременность, специали-сту следует рекомендовать данной женщине использовать эффективные контрацептивные лекарственные средства. Следует иметь в виду потенциальное уменьшение воздействия гор-монов и возможное снижение терапевтиче-ской эффективности контрацептивных лекар-ственных средств (эстроген-содержащих) при совместном применении с топираматом.

Дополнительная информация для па-циентов:Если вы принимаете топирамат во

время беременности, существует высокий риск развития расщелины губы/нёба («зая-чьей губы/волчьей пасти» у плода). Данные пороки развития формируются на ранних сроках беременности, когда многие женщи-ны даже не знают, что они беременны. По этой причине женщина детородного возрас-

102


та должна информировать специалиста, что она планирует беременность.Женщины детородного возраста, ко-

торые не планируют беременность, при при-менении топирамата должны использовать эффективные контрацептивные лекарствен-ные средства.До начала терапии топираматом Вам

следует информировать врача, если плани-руете беременность или уже беременны. Специалист может принять решение о на-значении другого противоэпилептического лекарственного средства.Немедленно сообщите врачу, если на

фоне приёма топирамата Вы забеременели. Вы и ваш врач должны принять решение о дальнейшем применении данного лекар-ственного средства.Без консультации врача применение

топирамата не должно быть прекращено, даже если Вы беременная женщина. Немед-ленная остановка применения топирамата может вызвать серьезные проблемы. Без назначения адекватной противоэпилептиче-ской терапии можно причинить вред Вам и развивающемуся плоду.Топирамат проникает в грудное мо-

локо, но его влияние на развитие ребёнка остаётся неизвестным. Вы должны посове-товаться со своим врачом о лучшем способе кормления вашего ребенка, если Вы прини-маете топирамат.

В раздел инструкции по медицинско-му применению «Предостережения и осо-бые указания» вносится следующая ин-формация:

Эмбриотоксичность– Применение топирамата во время

беременности может вызвать повреждение плода. Данные регистров беременностей показывают, что при внутриутробном воз-действии топирамата на плод повышается риск развития расщелины губы/нёба. Когда несколько видов беременных животных по-лучали топирамат в клинически значимых дозах, у потомства были отмечены структур-ные пороки развития, включая черепно-ли-цевые дефекты, а также снижение веса.

– Оценить риск/пользу применения топирамата у женщин детородного возрас-та, особенно если фармакотерапия данным лекарственным средством не направлена на постоянное предотвращение травм у бере-менной женщины и ее смерти. Применение данного лекарственного средства оправда-но лишь в том случае, если потенциальная польза от применения превышает возмож-ный риск для плода.

Раздел «Беременность»Применение топирамата во время бе-

ременности может вызвать повреждение плода. Данные регистров беременностей показывают, что при внутриутробном воз-действии топирамата на плод повышается риск развития расщелины губы/нёба. Когда несколько видов беременных животных по-лучали топирамат в клинически значимых дозах, у потомства были отмечены струк-турные пороки развития, включая черепно-лицевые дефекты, а также снижение веса. Применять топирамат во время беремен-ности следует только, если потенциальная польза применения превышает риск для плода. Если данное лекарственное средство принимают во время беременности или па-циентка забеременела, принимая топирамат, женщину необходимо проинформировать о возможном вреде для плода.

Данные североамериканского регистра беременностей и противоэпилептических ле-карственных средств показывают повышен-ный риск развития расщелины губы/нёба у плода при монотерапии топираматом во время первого триместра беременности. Распростра-ненность данного дефекта у плода составляла 1,4%, если беременная женщина принимала топирамат; 0,38-0,55% - другие противоэпи-лептические лекарственные средства; 0,07% - не принимала другие противоэпилептические лекарственные средства и не был установлен диагноз эпилепсии.


1. FDA Safety Topamax (topiramate): Label Change – Risk for Development of Cleft Lip and/or Cleft Palate in Newborns 04.03.2011. The way of access: www.fda.gov

2. FDA Drugs Drug Safety Communication: Risk of oral clefts in children born to mother taking Topamax (topiramate) 04.03.2011. The way of access: www.fda.gov

3. FDA News&Events Risk of oral birth defects in children born to mother taking topiramate 04.03.2011. The way of access: www.fda.gov

4. FDA Prescribing information, Topamax 04.03.2011. The way of access: www.fda.gov

4. FDA Safety Topamax (topiramate) tablets and sprinkle capsules. Detailed view: Safety Labeling Changes Approved by FDA center for drug evaluation and research (CDER) March 2011. The way of access: www.fda.gov

Информацию подготовила главный специалист А.М. Кучко

РКФЛ УП “Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»


103

ВНИМАНИЮ АВТОРОВ!

Журнал «Вестник фармации» является рецензируемым изданием, включенным в ут-вержденный Высшей аттестационной комиссией Перечень научных изданий Республики Беларусь для опубликования результатов диссертационных исследований по фармацевтиче-ской отрасли науки. Журнал печатает полноразмерные оригинальные статьи, обзоры, крат-кие сообщения, рекомендации практическим работникам аптек.

Рукописи статей рецензируются независимыми экспертами. Специалисты, осуществля-ющие рецензирование, назначаются редакционной коллегией журнала.

Научные статьи аспирантов последнего года обучения при условии их полного соответ-ствия требованиям, предъявляемым редакцией, публикуются вне очереди. Редакция не взи-мает плату за опубликование научных статей, в том числе и при внеочередной публикации статей аспирантов, докторантов, соискателей.

Объем научной статьи должен составлять не менее 0,35 авторского листа (14 000 печат-ных знаков, включая пробелы между словами, знаки препинания, цифры и др.).

Полноразмерная статья должна состоять из следующих разделов: – Название статьи, которое должно отражать основную идею выполненного исследо-

вания, быть по возможности кратким, содержать ключевые слова, позволяющие индексиро-вать данную статью.

– Аннотация на русском языке (100-150 слов), которая должна ясно излагать содержание статьи и быть пригодной для опубликования в аннотациях к журналам отдельно от статьи.

– Ключевые слова.– Введение, в котором должен быть дан краткий обзор литературы по данной проблеме,

указаны не решенные ранее вопросы, сформулирована и обоснована цель работы и, если не-обходимо, указана ее связь с важными научными и практическими направлениями. Во вве-дении следует избегать специфических понятий и терминов. Содержание введения должно быть понятным также и неспециалистам в соответствующей области.

– Материалы и методы, где приводится описание методики, аппаратуры, объектов ис-следования и подробно освещается содержание исследований, проведенных автором.

– Результаты и обсуждение. Полученные результаты должны быть обсуждены с точки зрения их научной новизны и сопоставлены с соответствующими известными данными.

– Заключение, в котором в сжатом виде должны быть сформулированы основные полу-ченные результаты с указанием их новизны, возможностей применения, четко сформулиро-ваны выводы.

– Аннотация на английском языке, содержащая фамилию и инициалы автора (авторов) статьи, ее название, ключевые слова.

– Литература. Обязательными являются ссылки на работы других авторов. При этом должны присутствовать ссылки на публикации последних лет, включая зарубежные публи-кации в данной области.

На отдельной странице следует указать:- фамилии и инициалы авторов, их место работы, занимаемые должности; - почтовый, электронный адрес и телефон того автора, с кем следует вести редакцион-

ную переписку; - контактную информацию (почтовый, электронный адрес и номера телефонов), которую

авторы разрешают опубликовать вместе со статьей в разделе «Адрес для корреспонденции».Статья должна быть тщательно отредактирована и выверена автором. Статьи принима-

ются только с визой руководителя и при наличии экспертного заключения о возможности опубликования материалов в печати и других средствах массовой информации.

В статье должна использоваться система единиц СИ. Желательно использовать обще-принятые сокращения.

За правильность приведенных данных ответственность несут авторы. Направление в ре-дакцию работ, ранее опубликованных в других изданиях, не допускается.

Правила оформления статьи для публикации в журнале «Вестник фармации»:

1. Материалы в редакцию представляются на бумажном носителе в 2-х экземплярах и в электронном виде. Текст должен быть набран в Microsoft Word.

2. Формат страниц А4. Поля по периметру 20 мм. Страницы не нумеруются.3. Основная часть статьи может делиться на подразделы (с разъяснительными заголовками). 4. Таблицы и рисунки должны быть пронумерованы в соответствии с порядком цити-


104

рования в тексте. В названиях таблиц и рисунков не должно быть сокращений. Размер та-блицы, по возможности, не должен превышать одной страницы. Рисунки и подписи на них должны быть четкими и хорошо читаемыми (шрифт Times New Roman, 10-12 пт.). На рисун-ках и диаграммах запрещается использовать жирный шрифт и курсив.

5. Список использованной литературы оформляется в соответствии с ГОСТом 7.1-2003. Ссылки нумеруются согласно порядку цитирования в тексте. Порядковые номера ссылок в тексте должны быть написаны внутри квадратных скобок (например, [1]).

6. Статья оформляется следующим образом:– Инициалы, фамилии авторов - шрифт Times New Roman, 11 пт, жирный;– название статьи – шрифт Times New Roman, 12 пт, жирный, прописными буквами;– учреждение - шрифт Times New Roman, 12 пт;– названия разделов статьи - шрифт Times New Roman, 12 пт, прописными буквами, кур-

сив, по центру строки;– текст статьи - шрифт Times New Roman, 12 пт;– межстрочный интервал – одинарный;– красная строка – 1,25 см.

Пример оформления таблицы:

Таблица 1 – Технологические свойства таблеточных смесей

Примечание: * -

Пример оформления рисунка:

Рисунок 1 – Влияние давления прессования на распадаемость таблеток

Редакция оставляет за собой право сокращать и редактировать статьи.

ПРИ НАРУШЕНИИ УКАЗАННЫХ ПРАВИЛ СТАТЬИ НЕ РАССМАТРИВАЮТСЯ.

РЕДАКЦИЯ НЕ НЕСЕТ ОТВЕТСТВЕННОСТИ ЗА СОДЕРЖАНИЕ РЕКЛАМНЫХ МАТЕРИАЛОВ.


Documents

№3 (53) 2011ших принципов государственной политики ... на рынке эффективных, безопасных и каче- ... в 2010 году