“Purificación virtual de una proteína”

PRESENTA: MARTÍNEZ CASTAÑEDA FERNANDO

Para empezar…

Estable a T>50 °C pH entre 3.5 y 11

¿QUÉ ESPERARÍAMOS?

Como primer paso… PRECIPITACIÓN - Remoción contaminantes - Concentrar la muestra - Desnaturalizar proteínas

Tratamiento con calor

¿Qué condiciones

usar?

50 °C/15 min

A continuación…

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

- pH 6.0 - Gradiente de 0.0 a 0.5 M - Resina dietilaminoetilcelulosa (DEAE) Aniónico (+), proteínas pH>6 (-)

Cromatografía intercambio iónico

De las 20 que tenía…

Separación en función de su tamaño Elución en orden decreciente de PM

Filtración en gel

Finalmente…

Cromatografía de afinidad Anticuerpo monoclonal MC10C (Alta afinidad)

Elución con Tris/HCl 2mM pH 7.4

Y como resultado se tiene…

GRACIAS POR SU ATENCIÓN