Aspergilosis pulmonar crnica

Aspergilosis pulmonar crnicaAspergilosisSe han descrito alrededor de 19 especies de Aspergillus capaces de producir infeccin en el ser humano, pero la mayor parte de las infecciones se debe a:Aspergillus fumigatusAspergillus flavusAspergillus nigerAspergillus terrus

ASPERGILOSIS BRONCOPULMONAR ALRGICA (ABPA)Esta forma de aspergilosis es consecuencia de una reaccin de hipersensibilidad a los antgenos de Aspergillus sobretodo de A. Fumigatus, raramente A. niger y A. flavusSe observa en 1-2% de pacientes con asma persistente y en un 2 15% de pacientes con fibrosis qustica.

Descripcin de la enfermedadLa aspergilosis pulmonar crnica es una enfermedad lentamente progresiva y destructiva, generalmente de uno o ambos lbulos superiores y con formacin de cavidades lo que es su caracterstica radiolgica mas frecuente. Se define, de una forma arbitraria, que tiene que estar presente al menos durante 3 meses. Ocurre en pacientes mnimamente inmunocomprometidos o normales. Algunos pacientes tienen ndulos, se pueden confundir con cncer de pulmn que son PET positivos. Se suele confundir con tuberculosis pulmonar, por los que son fatiga, prdida de peso, dificultad respiratoria, tos productiva y hemoptisis.

Mycobacterium

Generalidades de la familia MycobacteriaceaeEstas bacterias tambin son conocidas como bacilos acido-alcohol resistentes Presentan alto contenido lipidico de su pared celular, que llega al 40% de su peso.Una vez teidos, los bacilos se muestran resistentes a la decoloracin con soluciones acidas; de ah el calificativo acidorresistentes.

6Se trata de grmenes muy ubicuos y en la familia se incluyen desde saprofitos del suelo, agua, hasta grmenes capaces de producir en la especie humana lesiones crnicas. Tales como lepra y tuberculosis. Las infecciones microbianas son intracelulares y provocan generalmente lesiones granulomatosas de crecimiento lento, las cuales son responsables de una importante destruccin tisular.

CLASIFICACIN

M. atpicasM. Patgenas obligadas

CLASIFICACIN

DIAGNOSTICO DE TBC POR METODOS TRADICIONALESPROCEDIMIENTO TECNICASTIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA EXAMEN DIRECTO Coloracin de KinyounColoracin de Ziehl-Neelsen 24 HORASDETECCION DE CRECIMIENTO Lowestein-JensenOgawa- Kudoh 20-25 DASIDENTIFICACIN DE LA ESPECIE Pbas bioqumicas tradicionales (Niacina, Catalasa, Reduccin de Nitratos etc) 50-55 DIASDIAGNOSTICO DE TBC POR METODOS TRADICIONALESPROCEDIMIENTO

TECNICAS

TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD Mtodo de las proporciones mltiples 60 DIASDIAGNOSTICO DE TBC PORPROCEDIMIENTOTECNICAS

TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRAEXAMEN DIRECTO

Coloracin Auramina/Rodamina 24 horasDETECCION DE CRECIMIENTO

BACTEC, 15 das

IDENTIFICACIN DE LA ESPECIE

BACTEC, Sondas de ADN, HPCL 18 das

DIAGNOSTICO DE TBC POR METODOSPROCEDIMIENTO

TECNICAS

TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD

BACTEC

30 das BACILOSCOPIA CON TINCIONES ACIDORRESISTENTESSe utilizan dos tipos de coloraciones para microorganismos acidorresistentes: Coloraciones con carbolfuscina:

Ziehl-Neelsen Kinyoun

Coloracin con fluorocromo: Auramina O, con o sin un segundo fluorocromo, la Rodamina.

COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN

COLORACIN A AURAMINA-RODAMINA

ZIEHL NEELSEN

Microscopio ptico. 800 1000

Bacilos de color rojo sobre fondo Azul y blanco.AURAMINA O

Microscopio de fluorescencia 200 400

Bacilos flourescentes amarillos Y brillantes sobre fondo oscuro

La Limitacin ms importante de la baciloscopa es su baja sensibilidad.Muy importante: Obtener buenas muestras Tiempo de observacin

CRITERIO BACTERIOLOGICO:

Baciloscopia:Sensibilidad de 60-80% Especificidad 98%

Para observar un bacilo al microscopio es necesario unos 10,000 bacilos por ml de esputo

CultivoGold standard para el diagnostico y seguimiento de la tuberculosis.Su mayor limitacin es el tiempo transcurrido entre la recepcin de la muestra y su informe, el cual es entre 4 8 semanas.Su costo es muy superior a la baciloscopia.

La concentracin mas baja de bacilos que se puede detectar por baciloscopia es de 500 por ml de muestra.QUE ESTAMOS HACIENDO??Cultivos en medio Solido: Loweistein Jensen

Ogawa Kudoh

MEDIOS DE CULTIVO

Lowestein-jensen.Kirchen.Middlebrook (7H9, 7H10 Y 7H11).Ogawa Kudoh. (OK).Stonebrink modificado por Giraldo (STG).

Cultivo por Kudoh en medio Ogawa

Crecimiento en Medio Ogawa

IDENTIFICACION DE LA ESPECIE.Crecimiento:Medio en el que crece. Tiempo que tarda en crecer, morfologa de la colonia, produccin de pigmentos con/sin luzPruebas bioqumicas:Prueba de la niacina, reduccin de nitratos, catalasa, tween 80.

ESTUDIO DE SENSIBILIDADMETODOS CONVENCIONALES.Crecimiento de la micobacteria en medios con el tuberculosttico correspondiente

Medios slidos: Mtodo de las proporciones (Resultado del estudio: 2-3 meses desde la recogida de la muestra)

DIAGNOSTICO DE TBC POR METODOS TRADICIONALESPROCEDIMIENTO TECNICASTIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA EXAMEN DIRECTO Coloracin de KinyounColoracin de Ziehl-Neelsen 24 HORASDETECCION DE CRECIMIENTO Lowestein-JensenOgawa- Kudoh 20-25 DASIDENTIFICACIN DE LA ESPECIE Pbas bioqumicas tradicionales (Niacina, Catalasa, Reduccin de Nitratos etc) 50-55 DIASDIAGNOSTICO DE TBC POR METODOS TRADICIONALESPROCEDIMIENTO

TECNICAS

TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD Mtodo de las proporciones mltiples 60 DIASDIAGNOSTICO DE TBC POR METODOS RECOMENDADOS POR EL CDCPROCEDIMIENTOTECNICAS

TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRAEXAMEN DIRECTO

Coloracin Auramina/Rodamina 24 horasDETECCION DE CRECIMIENTO

BACTEC, 15 das

IDENTIFICACIN DE LA ESPECIE

BACTEC, Sondas de ADN, HPCL 18 das

DIAGNOSTICO DE TBC POR METODOS RECOMENDADOS POR EL CDCPROCEDIMIENTO

TECNICAS

TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD

BACTEC

30 das Tcnicas microbiolgicas convencionalesVentajas de los cultivosSon mucho mas sensibles que la baciloscopia (detectan desde 500 bacilos/ml de muestra)Permiten la identificacin de las micobacterias.Permiten practicar los estudios de susceptibilidad in vitro a las drogas.Su negativizacin durante el tratamiento asegura la curacin del enfermo.Informe de CultivosInforme de baciloscopiaNegativo:Sin desarrollo luego de la inspeccin de la octava semana de incubacin.Positivo:1 19 colonias en el total de medios sembrados(+)20 100 colonias (++)Mas de 100 colonias(+++)Colonias incontablesDiagnstico de TBDR, TBMDR y XDRPBAS. RAPIDASPCR:2-3 dasMODS:7-10 dasGRIESS:3-4 semBACTEC:3 semBACTERIOFAGOS: 2 das (slo : R)

PBAS. LENTASMtodo de proporciones: >35 das.Nuevos mtodos de CultivoMedios de cultivo Lquidos: Radiomtricos ( BACTEC ): detecta automticamente crecimiento bacteriano, en caldo Milddlebrook 7H12 midiendo la cantidad de CO2 marcado con Carbono Radioactivo (14CO2)

PRUEBA MODSEs un mtodo de diagnstico rpido desarrollado en la Universidad Peruana Cayetano Heredia que permite tanto la deteccin como la realizacin de la prueba de susceptibilidad directa a drogas de primera lnea.Es tambin un mtodo rpido autorizado por la Norma Tcnica para la deteccin de resistencia a isonizacida y rifampicina4.

Prueba con MODS Se basa en tres principios, por un lado el Bk crece ms deprisa en un medio lquido que en uno slido; la tuberculosis crece en nudos o rollos caractersticos y esta formacin se puede observar microscpicamente en un medio lquido; y la capacidad para incorporar frmacos permite una prueba rpida y directa de la susceptibilidad a los frmacos a la vez que la deteccin del crecimiento bacteriano. Reporta un tiempo promedio de positividad del cultivo y de la prueba de susceptibilidad de siete das, teniendo adems una sensibilidad y especificidad de 97,8% y 99,6% respectivamente.Este mtodo, debido a su bajo costo y su rapidez para detectar TB-MDR, est en proceso de implementacin en el Per, se espera ver en dos aos el impacto de este mtodo en el sector pblico.Las principales limitaciones de este mtodo son la necesidad de un microscopio invertido y el entrenamiento para reconocer la formacin de cordones.

SISTEMA BACTEC

BACTEC 960 MGIT

BACTEC MGIT 960 (Becton Dickinson Diagnostic Instrument System, Inc.) El mtodo de cultivo bacteriolgico automatizado permite obtener resultados de pruebas de susceptibilidad a drogas antituberculosas en un menor tiempo que el mtodo de las proporciones y a gran escala (permite 960 cultivos), sin embargo tiene un costo mucho ms alto. A diferencia del BACTEC 460, el BACTEC MGIT 960 presenta la ventaja considerable de ser un mtodo no radioactivo lo cual lo hace ms seguro para el personal de laboratorio.Este sistema automatizado usa MGIT, que contiene el medio de cultivo Middlebrook 7H9, detectando consumo de O2 mediante unos sensores fluoromtricos. Un aspecto relevante del medio MGIT es que los tubos poseen tapones tipo rosca, evitando el uso de agujas y jeringuillas. Los resultados se reportan como positivos o negativos y en unidades de crecimiento. La tasa de cultivos aislados por el BACTEC MGIT 960 es mejor que en el medio LJ (80-100% contra 59,7-87,2%).En relacin a la capacidad del BACTEC MGIT 960 para dar resultados de sensibilidad a drogas de primera lnea, se ha encontrado una sensibilidad de 100% para las cuatro drogas (isoniazida, rifampicina, etambutol y estreptomicina) y un rango de especificidad de 89,8% para estreptomicina hasta 100% para rifampicina; siendo el tiempo promedio para dichos resultados de 6,5 das27 (mtodo directo) y 9,9 das adicionales28 (mtodo indirecto).Sistema BACTECVentajas

*Ahorro de tiempo en la deteccin del crecimiento(15 a 20 das)*Mayor sensibilidad, tanto para el aislamiento del M. tuberculosis como de otras Micobacterias.*Posibilidad de identificar M. tuberculosis en 4 a 5 das y de realizar PSD a frmacos de primera lnea en 3 a 6 das.DesventajasNecesita utilizar radioistopos.Elevado costo del equipo, reactivo y mantenimiento.Uso de jeringas, lo que puede ocasionar contaminaciones cruzadas entre muestras as como formacin de aerosoles.Necesita permiso para manipulacin y almacenamiento del 14C. Comparison of Recoveries of Mycobacterium tuberculosis using the automated BACTEC MGIT 960 System, The BACTEC 460TB System, and Lowenstein-Jensen Medium 2000( )MEDIO

TODAS LAS MICOBACTERIASM. tuberculosisMNTBACTEC MGIT 960Tiempo

96.5%

13.2

96.4%100%

BACTEC 460

Tiempo93.0%

16.892.7%

100%

LJ

Tiempo80.7%

36.281.8%

50%

PCRREACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA

PCR

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR); este grupo de pruebas demoran 3-6 horas en procesar una muestra20. Ejemplos de estas pruebas son el Amplified M. tuberculosis Direct test (AMTD; GenProbe Inc.), el Amplicor MTB test (Roche) y el Cobas Amplicor (Roche). Todos ellos se encuentran aprobados por la FDA para deteccin de M. tuberculosis en muestras de esputo.71.6% respectivamente.

prueba GenotypeMDRTBPlusLa prueba GenotypeMDRTBPlus utiliza tiras reactivas de nitrocelulosa (tecnologa DNA Strip) que contienen regiones parciales de los genes rpoB, katG e inhA fijadas sobre ella. La prueba est basada en un PCR multiplex que genera mltiples productos de amplificacin (sondas) los cuales, mediante una hibridacin reversa, reconocen las mutaciones gnicas (en forma de bandas sobre la tira) ms frecuentes asociadas con la resistencia a isoniacida y rifampicina. Esta prueba es novedosa, til y rpida para la deteccin de la resistencia a drogas antituberculosas.

El Genotype MTBDRplusLa presencia de una o ms bandas MUT, la ausencia de una o ms bandas WT o la combinacin de ambas en cada zona de la droga, ser seal de la existencia de cepas resistentes a una droga o a ambasEn comparacin con el cultivo y prueba de susceptibilidad en MGIT-960 o mtodo de proporciones en medio slido (agar Middlebrook 7H11), esta prueba tuvo una sensibilidad y especificidad de 98,4% y 99,1% respectivamente, para detectar resistencia a rifampicina; y en el caso de resistencia a isoniazida, 91,4% y 99,7% de sensibilidad y especificidad respectivamente.Una consideracin importante es que los NAAT no pueden ser usados para monitorizar el tratamiento, debido a que pueden detectar bacterias no viables, lo cual sera un resultado falso positivo.