AVANCES EN EL DIAGNOSTICO DE LA LEPTOSPIROSIS EN NICARGUA.

2001-2010.

Dr. Alberto Montoya P.

Director de Parasitología Médica y Zoonósis

Centro Nacional de Diagnóstico y Referencia

MINISTERIO DE SALUD

Diagnóstico por MAT

Técnica de Microaglutinación (MAT)

200119961995

Epidemia de Achuapa

Ventajas

� Técnica más estudiada (1910)

� Estándar de Oro

(Sueros pareados).

Desventajas

� Trabaja con células vivas.

� Peligro de contaminación

� Laboratorio especializados

� Técnica complicada

� Necesita crecimiento Bact. de 7 días.

� Análisis de poca muestras (130 x año)

� Resultados x Seroconversión

� Resultados tardíos (fines epidemiológicos )

Estandarización de técnica inmunoenzimática tipo

ELISA IgM para el diagnóstico temprano de

Leptospirosis Humana. Nicaragua, 2001.

� Evaluado el Antígeno

� Se diseño el Principio de técnica

ELISA INDIRECTO “TIPO SANDWICH”

�Estandarización de Técnica inmunoenzimáticaELISA IgM

C + C - C +Muestras Positivas

C -

Suero paciente

Antígeno

Conjugado

Sustrato

CUALIDADES DE LA TECNICA DE ELISA IgM

Para el Diagnóstico serológico de la Leptospirosis Humana

� Diagnóstico de calidad : (100% Sensibilidad y especificidad ≥≥≥≥ 99,6% con respecto

a MAT y LEPTO DIPSTICK en mas de 500 muestras estudiadas en dif. Zonas de Nic.).

� Bajo costo : (<US$0.18/muestra, kit comerciales >US$6.0/muestra).

� Diagnóstico Temprano : Determinar infección en fase aguda (ELISA IgM).

� Resultados a corto plazo y se pueden realizar de forma individual.

(2½ horas para procesar 90 muestras)

� Técnica sencilla

( Resultados con lectura visual y cuantitativa con lector de ELISA).

Laboratorio Regional Granada

Entrenamientos de técnicos de laboratorio para trabajar con el KIT LEPTO – CNDR/ MINSA

Laboratorio Regional León

Red de laboratorios centinelasVigilancia epidemiológica de la leptospirosis Humana

Guatemala

CENTROAMERICA

Honduras

El Salvador Nicaragua

Costa Rica

Panama

Océano Atlántico

Océano Pacífico

Centro de Ref. Nacional, (CNDR MINSA)

Lab. centinelas funcionando

N

E

S

W

Fuente: Lab. Referencia Leptospirosis. CNDR /MINSA, Nicaragua 2011.

Lab. Pendientes

0

2000

4000

6000

8000

10000

12000

14000

AÑOS

No

. m

ues

tras

an

aliz

adas

0

100

200

300

400

500

600

700

800

No

. casos p

ositivo

s

Analizadas 130 290 565 785 139 178 4260 4854 5877 6778 7558 12678 12.000

positivas 0 7 79 28 17 5 66 60 78 91 104 687 291

1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008

Muestras

Introducción del Kit. ELISA LEPTO IgM – CNDR/MINSA

VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA DE LEPTOSPIROSISAnálisis de muestras 1996- 2008

Fuente: datos Laboratorio del Leptospirosis, CNDR-MINSA, 1995-2008.

Diagnóstico por ELISA IgM

ELISA IgM anti-Leptospira

Actualidad2001

Ventajas

� Diagnóstico de calidad.

� Costo relativamente bajo

� Reduce el tiempo de espera de resultados

� Permite detectar casos agudos

� Mucho mas rápida que la MAT.

Desventajas

� No es accesible a todas la unidades de salud

� Costos de equipo y materiales

� Personal entrenado para realizarla

� No se puede realizar en condiciones de campo.

� Se requiere de condiciones básicas de laboratorio.

� La rapidez esta en dependencia del acceso a un laboratorio centinela y del regreso de los resultados a la unidad origen.

Estandarización de Kit de aglutinación con partículas de Látex para el Dxtemprano de leptospirosis en condiciones de campo.

Controles Análisis de Muestras

C (-) C (+) M (-) M (-) M (+)

1 2 3 4 5

FUNDAMENTO

Reacción:Ag + Ac

Antígeno:Proteínas de Cepas

locales y Referencia

fijados a perlas de latex.

Control

positivo

Control

Negativo

Muestra

positiva

RESULTADOS DE “LATEX LEPTO –

CNDR/MINSA”

Diagnóstico por Látex Lepto

Prueba Rápida Látex Lepto

Actualidad2008

Ventajas

� Diagnóstico de calidad.

� Costo sumamente bajo

� Resultado Inmediato

� Permite detectar casos agudos

� Útil en zonas de difícil acceso

� No requiere energía eléctrica ni personal especializado

� Agiliza las acciones de control epidemiológico

� Posee una cobertura nacional

Desventajas

� Todavía presenta alguna reacciones con IgG anti-leptospira con títulos muy altos.

� Cierta subjetividad

� Se requiere confirmación de los casos.

� Mediante ELISA y/o MAT.

� Se debe mantener un estricto control de calidad.

Impacto de nuevas técnicas dx

� Incremento de la vigilancia y detección temprana de focos.

Año 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009

Analizadas 130 290 565 785 139 178 4260 4854 5877 6778 7558 12678 20750 26400

Positivas 0 7 79 28 17 5 66 60 78 91 104 682 291 91

MAT ELISA

LL

MAT ELISA

LL

MAT ELISA LL

DIAGNOSTICO SEROLOGICO DE LA LEPTOSPIROSIS

PACIENTE FEBRIL (MUESTRA DE SANGRE)

PRUEBA RAPIDA - LATEX-LEPTO CNDR/MINSA

TAMIZAJE LABORATORIOS MUNICIPALES

ELISA IgM - KIT LEPTO – CNDR/MINSA

LABORATORIOS DE SILAIS

PRUEBA MICROAGLUTINACION TEST (MAT)

CONFIRMATORIA CNDR - MANAGUA

Impacto del uso de Látex Lepto

� Cobertura Nacional.

1996 Managua, MAT

2010. 16 SILAIS y 145

municipios en todo el

País. Latex Lepto

2007. 13 SILAIS del

País. ELISA

Muchas Gracias!

� Toma de muestras:

En Bovinos En porcinos Orina de porcinos

II. Estudios de Leptospirosis en animales

Fuente: Lab. Leptospirosis, CNDR-MINSA, Nicaragua/2004.

ELISA IgM para diagnóstico en humanos.

ELISA IgG para el diagnóstico de Leptospirosis

En Bovinos, Equinos, Porcinos y Caninos.

ANALISIS DE LEPTOSPIROSIS EN MUESTRAS DE DIFERENTES ESPECIES

MAT: Técnica confirmatoria para Dx en Humanos, Bovinos, Suinos y Caninos.

DISTRIBUCION DE SEROVARES DE LEPTOSPIRASNICARAGUA 1995-2010

SEROVARES DE

LEPTOSPIRA

Fuente: Lab. Leptospira - CNDRMINSA

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13

16

Departamentos de Nicaragua

1- Managua

2- León

3- Chinandega

4- Masaya

5- Granada

6- Carazo

7- Rivas

8- Chontales

9- Boaco

10- Matagalpa

11- Estelí

12- Jinotega

13- Madriz

14- Nueva Segovia

15- Río Sn Juan

16- RAAS

17- RAAN

15

6

Serjroe

Canicola

AustralisLouisianaIcterohaemorrhagiae

BataviaeManhaoShermaniHebdomadisTarassoviGrippotyphosa

PanamaBallum

PomonaPyrogenesRanarumAutumnalis

Factor de riesgo importante de infección de Leptospiras: Animales dentro de las viviendas !!!

En Nicaragua los animales domésticos, son uno de los principales

transmisores de Leptospiras, principalmente en época lluviosa.

III. Estudios de Leptospiras en ambiente

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