Az allergiás betegségek

diagnosztikájának in vitro

laboratóriumi módszerei

Sipka Sándor

http://rimm.dote.hu

a.) Hiperszenzitivitás

Kóros állapot, amiben olyan külső ingerek okoznak betegség-tünetet az érintett személyeknél, amik másoknál ezt nem hozzák létre.

b.) Allergia

Hiperszenzitivitási reakció, amit immunológiai mechanizmusok hoznak létre.

c.) Atopia

Olyan személyes vagy öröklött tendencia, ami fokozott IgE produkciót eredményez kis dózisú allergénekkel szemben, amik főként fehérjék, és amik kiváltják az asztma rhinoconjunctivitis vagy eczema/dermatitis tüneteit.

Az allergiás eredetű kórképek

a gyermekkori asthma bronchiale esetek túlnyomó többsége

a szezonális és nem szezonális allergiás nátha

a szezonális és ritkábban, egész éven át tartó allergiás conjunctivitis

az atópiás dermatitisek különböző megjelenési formái

az urticaria és az angioneuroticus oedema

az ételallergia bizonyos típusai

a rovarcsípés allergiák

egyes gyógyszerérzékenységek

az anaphylaxiás shock

neuroallergiás kórképek

extrinsic alveolitisek (részben)

Az allergiás megbetegedések klinikai beosztása

Légúti allergiás megbetegedések: rhinitisasthma bronchiale, stb.

Bőrgyógyászati allergiák: atopiás dermatitisurticariákekcémák stb.

Immunkomplex megbetegedések: IC depozícióarthus reakció (IC-PMN-proteáz, nekrózis)vasculitis allergica stb.

Táplálék allergiákA szem allergiás megbetegedéseiGyógyszerallergiák

Hypersensitivity

Allergic hypersensitivity (immunologic mechanism defined or

strongly suspected)

Nonallergic hypersensitivity (immunologic mechanism excluded)

IgE-mediated Not IgE-mediated

T cell:e.g.,contact dermatitis, celiac

Eosinophil:e.g., gastroenteropathy

IgG-mediated:e.g.allergic alveolitis

Other

Nonatopic Atopic

Insect sting

Helminths

Drugs

Other

Johansson et al.

Immunológiai reakciók

Az allergiás gyulladások típusai

I. típusú reakció: IgE mediált allergiás reakció

II. típusú reakció: IgG és IgM indukált citotoxikus reakció

III. típusú reakció: immunkomplexek által okozott szövetkárosodások

IV. típusú reakció: Th1 limfociták által kiváltott „késői típusú” gyulladás

I.típusú allergiás reakció: - IgE mediált reakció- „azonnali” (az allergénnel való találkozás után 4 órán belül jelentkező) reakció- hízósejtekből, basofil és eozinofil sejtekből, makrofágokból és trombocitákból felszabaduló

mediátorok okozzák a tüneteket

Meditárok: hízósejtek/bazofilok eozinofilok makrofágok trombocitákHisztamin, triptáz ECP proteázok szerotoninPGD2, LTC4 MBP PGD2, PGE2 hisztaminPAF szabad gyökök TxA2, LTB4 TxA2IL-1, IL-4, IL-5 LTC4, PAF LTC4, PAF szabad gyökökTNFalfa, IFNgamma IL-5 IL-1, TNF

szabad gyökökAllergének:

Gyógyszerek (penicillin, stb.)Inhalatív allergének: pollenek, (parlagfű /Ambrosia elatior/, üröm stb.)

állati szőrök (macska, kutya, stb. )házipor atkákgombák (penész, bőr stb)textil/gyapjú

Rovarok: háziméh, darázs stb. Nutritív allergének: tej, tojás, szója stb.

Anaphylaxia:

Életveszélyes állapot, amit ezen mediátorok hirtelen, nagy mennyiségű keringésbe, bőrbe, tüdőbe, gasztrointesztinális rendszerbe kerülése hoz létre. Két forma: a. -IgE mediált forma

b. -nem IgE (komplement, egyéb faktor)mediált

Laboratóriumi diagnosztika: •Szérum össz-IgE meghatározás (nefelometria, turbidimetria)•Allergén specifikus IgE (RAST, ELISA, FIA, dot-blot technika)•Aktivitás mérés: szérum triptáz•ECP szint mérés•Vérkép (eozinofila) vizsgálat•In vivo provokációs tesztek: bőrpróbák

II. típusú allergiás reakció:

Mechanizmus: IgM és IgG által kiváltott citolitikus és citotoxikus, szövetkárosító folyamatok

- klasszikus komplementreakció sejtlízissel- aktivált C3 aktiválja a PMN, Eo, makrofág/Mo sejteket- IgG kötődés effektor (K, trombocita, PMN, Eo, makrofág/Mo)

sejtekhez

Allergének: gyógyszerek: kinin, furosemid, aranysó, indomethacin, szulfonamidok, szalicilátok, kloramphenicol

Laboratóriumi diagnosztika:- komplement aktiválódás mérés- PMN, Eo, makrofág/Mo aktiválódás kimutatás- ADCC

III. típusú allergiás reakció:

Mechanizmus: immunkomplexek (IC) által okozott szövetkárosodások IC lerakódás a keringésben IC lerakódás a szövetekben

Allergének: Gyógyszerek: antibiotikumok, benzotiazin, hidantoinBaktériumok: Streptococcus, stb.Vírusok: hepatitis B, C, stb.

Laboratóriumi diagnosztika: IC mérés szérumbanKomplement faktor és aktivitás mérés szérumbanSzövettan, IC kimutatás mikroszkóposan

IV. típusú allergiás reakcióMechanizmus: Th1 limfociták citokinjei által kiváltott, „késői típusú” gyulladás, ami az allergén expozíció után 12-24 óra múlva alakul ki. Formái: Kontakt túlérzékenység:

Hapten-carrier komplex-Langerhans sejtek- Th1 sejtek, citokinek, egyéb mediá-torok (IC), Antigének:nikkel, perubalzsam, illóolajok, Hg vegyületek, festékek, gyógyszerek, kozmetikumok, stb. Tuberkulin típusú reakció:

Mononukleáris (limfocita-monocita) sejtinfiltrátum az antigén bejutás helyénAntigén: különböző baktérium fehérjék vagy kémiai anyagok (cirkórium, be-

rillium), A transzplantációs immunreakció hasonló mechanizmusúGranulomás reakció:

Makrofágokban, monocitákban megtapadó intracelluláris kórokozók (Mycobacterium, lepra, Listeria, stb.) vagy egyéb idegen anyagok (talkum, berillium, stb.) hozzák létre hosszú idő alatt: „óriássejtek” képződnek, miket epotheloid sejtek vesznek körülLaboratóriumi diagnosztika:

- hisztológia (mononukleáris sejtek kimutatása)- antigén indukált limfocita blasztos transzformáció és - citokin termelés mérés

KÉRDŐÍV (A leggyakoribb allergének a klinikai gyakorlatban)

Név: Munkahely:Beosztás:Város:Ország: Dátum: …………….

Szezonális inhalatív allergének Nem szezonális inhalatív allergének Étel allergének

allergén Előfordulása gyakoriság 1-X

allergén Előfordulás gyakoriság 1-Y

allergén Előfordulás gyakorisága 1-Z

Parlagfű Házipor atka (D. farinae)

Tojás

Pázsitfű Házipor atka(D. pteronyssinus)

Tej (kazein)

Feketeüröm Macskahám szőr Mogyoró

Rozs Kutyahám, -szőr Szójabab

Útifű Csirketoll Búzaliszt

Pitypang Kacsatoll Földimogyoró

Angolperje Libatoll Narancs

Csomós ebír Papagájtoll Paradicsom

Nyírfa Csótány Tőkehal

Szezonális inhalatív allergének Nem szezonális inhalatív allergének Étel allergének

allergén Előfordulása gyakoriság 1-X

allergén Előfordulás gyakoriság 1-Y

allergén Előfordulás gyakorisága 1-Z

Mogyoró Aspergillus Mandula

Fűz Cladosporium Sertéshús

Szil Fusarium Szezámmag

Rosznok Mucor Banán

Falgyom Penicillium Őszibarack

Vadsóska Hörcsöghám Zeller

Disznóparéj Lóhám Tonhal

Libatop egyebek Élesztőgomba

Éger Kagyló, rákfélék

Platán Borsó

Nyárfa Marhahús

Kukorica Rozsliszt

Egyebek Csirkehús

Kukorica

KÉRDŐÍV (folytatás)

Keresztreagáló allergének

Nyír alma, sárgarépa, burgonya, zeller, meggy, körte, mogyoró

Parlagfű sárgadinnye, görögdinnye, banán, uborka

Fekete üröm zeller, sárgarépa, mustár, ánizs

Tehéntej kecsketej, birkatej, marhahús

Földimogyoró dió, szója, zöldborsó, zöldbab, lencse

Lencse földimogyoró, szója

Legújabb irányzatok

I. Specifikus immunterápia alkalmazása, ahol lehetséges

II. Allergén „kerülés” megszervezése és megtanítása

III. A legkorábbi diagnózis felállítása és a kezelés megkezdése

IV. Az allergia epidemiológiai okainak kutatása világszerte (EK)

Az allergia diagnosztikájának fő módszerei

I.Típusú reakció: in vivo: kután Prick test in vitro: szérum össz-IgE

allergén specifikus IgEallergén specifikus IgG

(tej, tojás, szója, stb. csecsemőkorban)

hízósejt/bazofil aktivációs termék mérés(triptáz, hisztamin, leukotrién stb.)

eozinofil aktivációs termék mérés:(eozinofil kationos protein, ECP)

III.Típusú reakció: in vitro:allergén-IgG/IgM komplex kimutatás(ELISA, Ouchterlony)

IV.Típusú reakció: in vivo: epikután bőr teszt (kontakt allergén) in vitro: limfocita proliferációs teszt

(gyógyszerek)

Allergén specifikus IgE meghatározási módszerek

Típusaik: 1. Az allergén szerint: természetes allergén kivonat

rekombináns technikával előállított allergénallergén kivonat keverékek

2. Az anti-IgE kimutatás módszere szerint: RIAELISAFIAKLIA

Használhatósági kritériumok: szenzitivitásspecificitáspozitív prediktív értéknegatív prediktív érték

Megadott mértékegység: 1. kU/l 2. allergén specifikus IgE osztály: 0-6

SPECIFIKUS IgE POZITIVITÁSI OSZTÁLYOK

kU/l Allergén-spec. IgE osztály Értékelés

<0,36 0 hiány v. nem detektálható

0,36-0,71 1 alacsony

0,72-3,59 2 mérsékelt

3,6-17,99 3 magas

18-49,99 4 nagyon magas

50-99,9 5 nagyon magas

>100 6 nagyon magas

Problémák

1. Közös szénhidrát epitopok különböző allergéneken (keresztreakciók)

2. Nemzetközi standardok hiánya (Pharmacia Ca?)

3. Minden módszerre külön klinikai értékelés szükséges

4. Regióspecifikus allergén panellek hiánya

5. Különböző és nem teljesen átfedő nemzetközi külső kontroll rendszerek léteznek, ha működnek egyáltalán

Az allergiás beteg kivizsgálásának ajánlott folyamata

Allergológiai és Klinikai Szakmai Kollégium (KIASZK) ajánlása:

1. Az allergiára utaló tünetekkel jelentkező beteg kivizsgálását és kezelését csak azok az orvosok végezzék, akik allergológus és klinikai immunológus ráépített szakvizsgával rendelkeznek, vagy az alapszakvizsgájuk szerint belgyógyászok, gyerekgyógyászok, tüdőgyógyászok, bőrgyógyászok, szemészek vagy fül-orr-gégészek.

2. Az anamnézisre épülő első diagnosztikus beavatkozásnak a bőrpróba ajánlott.

3. Az in vitro laboratóriumi tesztek közül a diagnózis felállításához három módszer javasolt azokban az esetekben, melyekben a bőrpróba vagy nem kivitelezhető, vagy eredménytelen:

szérum össz IgE meghatározás, szérum allergén specifikus IgE meghatározás,

allergén indukált T sejt proliferáció mérés.

4. Az in vitro laboratóriumi tesztek végzésének indikációi: bőrbetegség fennállása, nincs megfelelő antigén a bőrteszthez, a bőrteszt eredménye és az anamnesztikus adat eltér egymástól, a bőrteszttel anaphylaxia provokálható, a specifikus immunterápia kezdetén és végén, a beteg fizikális és tudati állapota miatt a bőrteszt nem

kivitelezhető, csecsemőknél a korai szenzitizáció kimutatására (főleg tojás és tej vonatkozásában)! immunszupprimált állapotban, amikor a gyógyszer nem hagyható el, epidemiológiai sorozat méréseknél, minden esetben, mikor bőrteszt nem végezhető, az allergiás gyulladás súlyosságának kvantitatív jellemzésére.

A negatív specifikus IgE eredmény értéke:Nem valószínűsíti az atopiás mechanizmust (étel allergiák!)

Az allergénspecifikus IgG mérés értéke

A főleg tej, vagy néhány egyéb étel (tojás, szója) fehérje ellen képződött IgG nem atopiás, allergiás mechanizmusra utal.

A fokozott bélpermeabilitási állapot jelzője (csecsemőkorban, gyulladás stb.) de a specifikus IgE emelkedéséhez társulva előjele lehet gyermekekben a főleg tehéntejfehérje érzékenység elnyújtottabb, hosszabb fennállásának.

Az allergén specifikus in vitro módszerek egyéb formái

Bazofil aktivációs tesztek:hisztamin felszabadulás mérésleukotrién felszabadulás mérésCD63 expresszió mérés

Limfocita aktivációs tesztek:T sejt proliferációs vizsgálatokcitokin termelési vizsgálatok

nitroblueterazólium (NBT) teszt,gyógyszer allergiákban leukocita migrációs teszt

Kvantitatív PCR-IL-4 mérés

„Chip” technika rekombináns allergénekkel

Az in vitro diagnosztika legaktuálisabb feladata:

a tojás és tej irányú szenzitizáltság kimutatása a legkorábbi időszakban

még csecsemőkorban.

Táplálkozási allergének egy évesnél Táplálkozási allergének egy évesnél fiatalabb korú gyermekekben fiatalabb korú gyermekekben

Betegek száma 361 100%  

Pozitivitás 18 5%  

 Allergének előfordulása

(%)

tojásfehérje (f1) 44.8    

tehéntej (f2) 20.7    

mogyoró (f17) 13.8    

búzaliszt (f4) 6.9    

földimogyoró (f13) 6.9    

Táplálék allergénekTáplálék allergének 1-6 1-6 éves korú éves korú gyermekekbengyermekekben

Betegek száma 818 100,0%

Pozitivitás 141 17.2%

  Allergének előfordulása (%)

tojásfehérje (f1) 34.2  

tehéntej (f2) 21.0  

búzaliszt (f4) 3.1  

földieper (f44) 2.9  

földimogyoró (f13) 2.5  

kivi (f84) 2.5  

őszibarack (f95) 2.3  

szójabab (f14) 1.9  

mogyoró (f17) 1.6  

paradicsom (f25) 1.4  

dinnye (f87) 0.8  

dió (f16) 0.6  

kókusz (36) 0.6  

mandula (f20) 0.6  

narancs (f33) 0.2  

tőkehal (f3) 0.2  

LégútiLégúti allergallergénekének 1 évesnél fiatalabb 1 évesnél fiatalabb korú gyermekekben korú gyermekekben

Betegek száma 66  

Pozitivitás 3  

  Allergének előfordulása

libatoll (e70) 2/3    

csirketoll (e85) 1/3    

tehénszőr (e4) 1/3    

macska hámszövet (e1) 1/3    

lószőr (e3) 1/3    

Légúti allergének 34 monospecifikus IgE pozitív 1-6 éves Légúti allergének 34 monospecifikus IgE pozitív 1-6 éves korú gyermekekben (a 818-ból)korú gyermekekben (a 818-ból)

Betegek 818 100% Allergének Esetek száma

%

Negatív betegek 704 86.1

Allergiás betegek 114 13.9 Egy allergén pozitivitás

34

Tehénszőr (e4) 10 29.4

Alternaria alternata gomba (m6)

7 20.6

Dermatophagoides pt. Gomba (d1)

6 17.6

házipor (h1) 4 11.9

cockroach (i6) 3 8.8

Dermatophagoides far. gomba (d2)

2 5.9

csirketoll(e85) 1 2.9

aspergillus fumigatus gomba(m3)

1 2.9

Több allergén pozitivitás

80

Allergének előfordulása (%)

Dermatophagoides pteronyssinus gomba (d1) 15.4   disznóparéj (w14) 0.9

Dermatophagoides fariane gomba (d2) 15.1   juhar (t1) 0.9

házipor (h1) 14.5   libatop (w10) 0.9

tehénszőr (e4) 8.8   tölgy (t7) 0.9

csirketoll (e85) 7.7   borjúpázsit (g1) 0.6

parlagfű (w1) 5.7   cladosproium herbarum (m2) 0.6

lószőr (e3) 4.0   lándzsás útifű (w9) 0.6

Alternaria alternata gomba (m6) 3.7   nyír (t3) 0.6

libatoll (e70) 2.8   réti perje (g8) 0.6

pulykatoll (e89) 2.6   rozs (g12) 0.6

macska hámszövet (e1) 2.3   angolperje (g5) 0.3

fenyércirok (g10) 2.0   feketeüröm (w6) 0.3

aranyvessző (w12) 1.7   kacsatoll (e86) 0.3

csótány (i6) 1.4   kodaköles (g17) 0.3

aspergillus fumigatus gomba (m3) 1.1   penicillium notatum gomba (m1) 0.3

ballagófű (w11) 1.1   réti komócsin (g6) 0.3

Kutya hámszövet(e2) 1.1   selyemperje (g13) 0.3

Légúti allergénekLégúti allergének 80 multispecifikus IgE pozitív 80 multispecifikus IgE pozitív 1-6 1-6 éves éves korúkorú (a 818-ból) (a 818-ból) gyermekekbengyermekekben

DE OEC III. sz. Belgyógyászati Klinika

Regionális Immunológiai Laboratórium