Bagaimana cara mempelajari sel?Sebagian besar sel berdiameter
antar 1 sampai 100m sehingga tidak mungkin dilihat dengan mata
telanjang.
Penemuan dan kajian awal tentang sel memperoleh kemajuan sejalan
dengan penemuan dan penyempurnaan mikroskop pada abad ketujuh
belas. Berbagai jenis mikroskop masih menjadi alat yang sangat
diperlukan dalamm mengkaji sel.Mikroskop yang pertama kali
digunakan oleh para saintis rainasans, dan juga merupakan mikroskop
yang dgunakan di laboratorium adalah mikroskop cahaya.
Cahaya-tampak dilewatkan melalui spesimen dan kemudian menembus
lensa kaca. Lensa ini merefraksi (membelokkan) cahaya sedemikian
rupa sehingga bayangan spesimen diperbesar sewaktu bayangan itu
diproyeksikan ke mata. Dua nilai penting sebuah mikroskop adalah
daya pembesarannya dan penguraiannya, atau resolusinya.
Cara Mempelajari SelPada prinsipnya ada dua cara mempelajari
sel, yaitu teknik analisis instrumental dan teknik analisis
sitologi dan sitokimia.1. Teknik analisis instrumentalSebagian
besar sel berdiameter antar 1 sampai 100m sehingga tidak mungkin
dilihat dengan mata telanjang. Oleh karena itu diperlukan suatu
alat yang mampu memperbesar obyek untuk mempelajari sel, berupa
mikroskop. Setiap mikroskop mempunyai kelebihan dan kekurangan
masing-masing. Misalnya, mikroskop elektron mampu mengenal bagian
sel sampai pada tingkatan molekul tetapi tidak dapat digunakan
untuk mempelajari sel hidup karena sel tesebut terlalu tebal. Untuk
mengatasi sifat sel yang tembus cahaya, dibutuhkan alat yang dapat
meningkatkan kontras. Menurut De Reberties, dkk (1975:82), sel
memiliki sifat tembus cahaya karena sel mengandung banyak air
sehingga ketika sel telah kering sifat kontrasnya meningkat.teknik
lain yang meningkatkan kontras adalah dengan pewarnaan. Masalahnya
adalah pewarnaan hanya dapat dilakukan pada sel mati. Untuk
meningkatkan sifat kontras pada sel hidup dapat digunakan mikroskop
fase kontras dan mikroskop interferensi (De Reberties, 1975). 2.
Teknik analisis sitologi dan sitokimiaTidak semua sel dapat
dianalisis dengan analisis sitologi atau sitokimia. Perlu analisis
tertentu dari sifat sel.a. Analisis sitologikTeknik ini termasuk
teknik analisis menggunakan instrumen, yaitu mikroskop. Untuk
eperluan tersebut dilakukan dengan dua cara, ialah, 1) pemeriksaan
sel hidup, dan 2) pemeriksaan pada sel yang dimatikan (Djohar,
1984).1). Pemeriksaan sel hidupDapat dilaukan dengan dua cara,
yaitu, 1) kultur sel, dan 2) microsurgery (pembedahan atau operasi
mikro).a) Kultur selDilakukan dengan cara menumbuhan sel pada media
tertentu. Cara ini memunginkan dapat diamati sel hidup dengan
memuaskan, karena disamping sederhana, juga kondisinya dapat
dikontrol.Kultur sel ini mula-mula dirintis oleh Carrel seja tahun
1912. Semula media untu melumpuhkan sel menggunakan serum darah dan
ekstrak embrio dalam salin, tetapi sekarang ini kebutuhan nutrisi
sel eukarioti telah diketahui, sehingga dapat dibuat media
sintetik.Kultur jaringan dibedakan menjadi tiga macam, yaitu kultur
primer, kultur sekunder, dan kultur yang dikenal dengan istilah
established cell lines. Kultur primer diperoleh langsung dari
jaringan hewan yang dipotong kecil-kecil dan dicampur dengan
tripsin. Kultur sekunder dapat diperoleh dengan memberikan
perlakuan tripsin pada kultur primer, dan diratakan pada media
segar. Sedangkan kultur established cell lines, sel telah
diadaptasikan untuk pertumbuhan sel in vitro dalamwaktu lama.b)
MicrosurgeryTeknik ini telah banya digunakan untuk studi sel.
Alat-alat yang digunakan dalam teknik ini antara lain, pipet miro,
jarum mikro, electrode mikro, micro thermocouple, dan lain-lainnya
ddengan bantuan mikroskop.2) Pemeriksaan sel yang
dimatikanSerangkaian teknik diperlukan untuk pemeriksaan sel yang
dimatikan, yaitu: fiksasi, embedding dan seksi,dan
pewarnaan.Fiksasi adalah suatu proses mematikanjaringan sehingga
sulit diperoleh keadaan sesuai pada saat hidupnya, dengan artifact
(penambahan ataupun pengurangan) seminimal mungkin. Kebanyakan
fiksatif berpengaruh terhadap protein sel. Oleh karena itu setiap
fiksatif memiliki gradien (daya tembus dan larut terhadap cairan
sel) tertentu.Macam-macam fiksatif (dalam Djohar, 1984):a) Osmium
tetrosidab) Freeze dyingc) Freeze substitution
b. Analisis sitokimiaTujuan utama sitokimia adalah untuk
mengidentifikasi dan lokalisasi komponen kimiawi sel, baik
kualitatif maupun kuantitatif. Sitokimia modern mengikuti tiga
metode pendekatan utama, yaitu pendekatan mikroskopik, biokimia,
dan mikrokimia.1) Metode fraksionasi selCara ini meliputi
homogenasi dan destruksi sel, melalui prosedur kimiawi atau
mekanik, diikuti dengan pemisahan fraksi seluler bergantung pada
massa, permukaan, dan gravitasi spesifik. Frasi sel selanjutnya
dianalisis dengan cara biokemik atau mikrokemik. Prinsip umum
fraksionasi sel adalah homogenasi sel dalam media cair, dan
biasanya digunakan media larutan sukrosa dengan berbagai variasi.
Dalam proses homogenasi, membrane sel dan dinding sel pecah, keluar
komponen subseluler. Homogenasi biasanya dilakukan pada suhu rendah
(0-4C). Larutan yang mengandung sel yang telah mengalami homogenasi
disebut homogenate. Hasil homogenasi selanjutnya
disentrifugasi.Sentrifugasi adalah usaha yang dilakukan untuk
memisahkan molekul terlarut dengan pelarutnya. Partikel terlarut
mengendap membentuk sedimen, sedangkan pelarutnya berada di bagian
atas membentuk bagian supernatan.2) Mikrokimia dan
ultramikrokimiaBanyak cara untuk analisis mikro dan
ultramikrokimia, antara lain dengan mikrokolorimetri,
mikrospektrofotometri, mikrofluorometri, dan mikromanometri.
Cara-cara tersebut memiliki sensitifitas tinggi sehingga dapat
digunakan untuk membedakan antara enzim dengan koenzim.3) Cara
pewarnaan sitokimia dan histokimia
