CARA PEMERIKSAAN GRAM PREPARAT
I.
Pendahuluan Pemeriksaan gram preparat (mikrospkopik) merupakan
petunjuk awal dari identifikasi dalam upaya penentuan genus hingga
species bakteri dengan melihat bentuk, sifat gram, ada tidaknya:
flagel, spora, kapsul dan sebagainya. Dengan pewarnaan gram bakteri
akan menyerap warna tertentu yaitu kristal violet. Dengan penguatan
lugol, bakteri gram positif akan tetap mengikat warna ungu meskipun
ada penambahan alcohol dan fuchsin/safrain. Sedangkan bakteri gram
negative akan melepaskan warna ungu dengan adanya penambahan
alcohol 96% dan akan mengikat safrnin/fuchsin sehingga sel bakteri
berwarna merah.
II.
Tujuan Untuk mengetahui bentuk, sifat gram, ada tidaknya spora,
kapsul, dan sebagainya dari sel kuman.
III. BAHAN/SAMPEL/SPESIMEN Eksudat/pus, biakan bakteri
IV. MEDIA/REAGEN Urine Gentian violet Lugol/iodine Alkohol 96%
Safranin
V.
ALAT ALAT Objek gelas Lampu Bunsen Lidi kapas Pinset 1
-
Rak tabung Rak pewarnaan OSE (sengkelit) Tabung reaksi Spait
VI. CARA KERJA a. Membuat gram preparat Preparat langsung
Dipanaskan OSE dengan sudut 450 Objek glass dipanaskan untuk
menghilangkan lemak yang terdapat pada objek glass Ditulis kode
pada sudut objek glass Kode ditulis menghadap ke bawah Sampel
diambil menggunakan OSE Sampel digoreskan pada objek glass (jangan
terlalu tipis dan jangan terlalu tebal) Objek glass diletakkan
dengan posisi dimiringkan dan di diamkan sampai kering pada suhu
kamar
Gram preparat tidak langsung (preparat dalam biakan) Koloni
bakteri e. coli Objek gelas dibersihkan dengan tisu untuk
menghilangkan lemak yang terdapat pada objek gelas Ditetesi 1 tetes
aquades dengan menggunakan spait OSE dipanaskan, didinginkan sesaat
agar tidak membunuh bakteri saat pengambilan di dalam media OSE
diletakkan pada media yang kosong agar OSE tidak terlalu panas saat
pengambilan bakteri Koloni yang diambil menggunakan OSE dicampur
dengan aquadest yang telah ditetesi pada objek glass hingga merata
(tidak tebal dan tidak tipis). 2
-
Keringkan dalam suhu ruangan sampai kering dengan cara di
miringkan agar ada preparat bagian tebal dan tipis.
-
Setelah kering dilanjutkan dengan fiksasi.
Fiksasi Tujuan: Untuk membunuh kuman Untuk melekatkan hapusan di
kaca Agar tidak merubah struktur dan morfologi bakteri, Mengawetkan
sediaan (fiksasi yang benar dapat bertahan bertahun-tahun)
Cara Kerja Objek gelas yang berisi hapusan dihadapkan ke atas
Lewatkan di atas api bunsen hapusan bagian bawah sebanyak 3 kali
Diletakkan di rak pewarna (rak pewarna harus dekat dengan
keran)
b. Pengecatan Gram Tujuan: Agar sampel berwarna sehingga dapat
dengan mudah membedakan bakteri gram positif dan bakteri gram
negatif. Cara kerja: Gentian violet diteteskan pada hapusan
secukupnya Didiamkan selama 60 detik Dicuci dengan air mengalir
Ditambahkan lugol/iodine Didiamkan selama 60 detik Dicuci dengan
air mengalir Ditambahkan alcohol 96% Didiamkan selama 30 detik
Dicuci dengan air mengalir Ditambahkan dengan safranin 3
-
Didiamkan selama 60 detik Di cuci dengan air mengalir Diletakkan
dalam rak pengering Dikeringkan dalam suhu kamar
c. Pembacaan dan interpretasi hasil Setelah kering, di amati di
bawah mikroskop dengan pembesaran 10 x 100 menggunakan minyak
emersi
Hasil Preparat I Gram positif, coccus positif Preparat II Gram
negatif, coccus positif
4
PEMERIKSAAN KULTUR BAKTERIOLOGIK MIKROORGANISME UMUM (DARAH,
EKSUDAT/PUS, URINE & CAIRAN OTAK)
I.
PENDAHULUAN Dalam keadaan normal darah bersifat steril, tidak
dikenal adanya flora normal dalam darah. Ditemukan bakteri dalam
darah disebut bakterimia. Eksudat/pus didapat pada penderita adalah
tanda bahwa sudah ada infeksi oleh kuman tertentu pada penderita.
Kuman tersebut dapat disolasi dari pus. Kegagalan dalam pembiakan
kuman dari bahan pus terutama karena pasien sudah minum
antibiotika. Pada orang sehat, urine semestinya steril. Apabila di
dalam urine ditemukan adanya mikroorganisme (kuman) yang jumlahya
100000/ml merupakan suatu indikasi bahwa orang tersebut mengalami
infeksi. Untuk mengetahui jenis kuman-kuman yang menginfeksi, dapat
dilakukan pemeriksaan urine kultur. Seperti halnya darah dan urine
dalam keadaan normal cairan otak bersifat steril. Bila terjadi
peradangan/terinfeksi, cairan otak dapat menjadi purulen disebut
Meningitis purulenta atau dapat juga menjadi serosa disebut
meningitis serosa.
II.
TUJUAN Untuk isolasi dan identifikasi jenis bakteri yang
terdapat dalam sampel
III.
BAHAN / SAMPEL / SPESIMEN Eksudat/pus
IV.
MEDIA/REAGEN 1. Blood agar 2. MC Conkey agar 3. Tio glicolate 4.
TSI, SIM, Simon Citrate 5. Media gula-gula 5
6. Reagen oksidase (Tetrametil phenylene diamonium diklorit) dan
katalase test
V.
ALAT-ALAT Inkubator Tabung reaksi Petri dish Ose / sengkelit
Pinset Bunsen Objek glass Sungkup lilin / anaerobic jar Pensil
kaca/
VI.
CARA KERJA 1. Makroskopis a. Diambil Petri dish yang berisi
koloni b. Diamati bentuk koloni.
2. Mikroskopis a. Api Bunsen dinyalakan b. Objek glass diambil
c. Kaca objek dipanaskan d. Di isi kode dengan pensil kaca e. Di
tetesi aquades 1 tetes f. OSE dipanaskan g. Biakan di ambil
menggunakan OSE h. Di oleskan pada kaca gelas dengan merata i.
Diletakkan dengan posisi miring j. Difiksasi k. Diwarnai dengan
pewarnaan gram 6
3. Uji Biokimia Khusus untuk kuman gram negative Cara Kerja:
Disusun gula-gula Dari kanan diurutkan glukosa, laktosa, manitol,
maltosa, sakarosa Dari kiri di sebelahnya disusun TSI, SIM, Simon
Citrat OSE dipanaskan, kemudian tusukkan pada TSI sampai di dasar
TSI, digesekkan pada dindingnya, kemudian OSE dikeluarkan dan
dipanaskan OSE dipanaskan, kemudian tusukkan pada SIM bagian TSI,
digesekkan pada dindingnya kemudian OSE dikeluarkan dan dipanaskan
OSE dipanaskan, gesekkan pada dinding Simon Citrat, kemudian OSE
dikeluarkan OSE dipanaskan, panaskan tabung reaksi wadah glukosa,
celupkan OSE, panaskan tabung reaksi dan tutup. OSE dipanaskan,
panaskan tabung reaksi wadah laktosa, celupkan OSE, panaskan tabung
reaksi dan tutup. OSE dipanaskan, panaskan tabung reaksi wadah
manitol, celupkan OSE, panaskan tabung reaksi dan tutup. OSE
dipanaskan, panaskan tabung reaksi wadah maltosa, celupkan OSE,
panaskan tabung reaksi dan tutup. OSE dipanaskan, panaskan tabung
reaksi wadah sakarosa, celupkan OSE, panaskan tabung reaksi dan
tutup. Dimasukkan ke Inkubator
4. Uji Katalase Cara Kerja Gelas objek diambil Ditetesi H2O2
Diambil koloni yang single dengan OSE 7
-
Diamati, jika ada gelembung berarti katalase positif
terjadi reaksi H2O2 H2O + O2
5. Uji Oksidase Cara kerja Teteskan aquades ke dalam tutup cawan
Petri Diletakkan reagen bentuk padat yang kecil-kecil Diaduk dengan
OSE Kertas saring dirobek Diletakkan diatas cawan Kuman diletakkan
diatas kertas dengan membuat garis Diamati Berubah warna ungu (+)
oksidase Tidak ada perubahan warna (-) oksidase
VII.
HASIL Hasil uji biokimia TSI SIM H2S2 : + (ada warna hitam) :
berwarna kuning dan ditemukan gas-gas
Gerak : + Simon Citrat : (-)
Gula-gula : - glukosa - lakstosa - manitol - maltose - sakaraosa
: adanya gelembug (+) : (-) : (+) : (+) : (+)
VIII.
Kesimpulan Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, dapat
disimpulkan bahwa: 8
-
Tes oksidase bertujuan untuk mengamati sampel yang dicurigai
mengandung bakteri psedumonas atau aeromonas, dimana menggunakan
media mac conkey dan reagen tertametil phenylee diamonium
diklorit
-
Tes katalase bertujuan mengamati sampel yang dicurigai
mengandung bakteri staphylococcus (untuk gram positif) dengan
menggunakan reagen hydrogen peroksida (H2O2).
-
Uji biokimia, tidak dilakukan jika menggunakan media mac conkey
karena media mac conkey hanya bisa ditumbuhi kuman gram
negatif.
9
PEMERIKSAAN UJI KEPEKAAN KUMAN TERHADAP ANTIBIOTIKA
I.
PENDAHULUAN Uji kepekaan kuman sering dilakukan untuk tindakan
pengobatan terhadap penderita yang mengalami infeksi kuman tertentu
(pathogen).
II. TUJUAN Untuk mengetahui sensitivitas kuman tertentu terhadap
berbagai macam antibiotika Untuk menentukan antibiotika yang paling
efektif yang dapat digunakan pada pengobatan terhadap infeksi yang
disebabkan oleh kuman tertentu.
III. BAHAN/SAMPEL/SPESIMEN Sekret genital, urine, darah, sputum,
pus dan lain-lain.
IV. MEDIA/REAGEN Mueller Hinton Agar (ketebalan 4 mm) Garam
fisiologis Larutan hipoklorit 2 % Mueller Hinton Broth
V. ALAT-ALAT Incubator Tabung reaksi Petri dish OSE/Sengkelit
Pinset Bunsen/lampu spiritus Sungkup lilin/ anaerobic jar Jangka
sorong Lidi kapas steril Tabel Zone Diameter Intertive Standard
Label/pensil kaca
VI. CARA KERJA a. Pengujian terhadap mikroorganisme umum: 10
-
Disiapkan larutan standard kekeruhan Mc Farland 0,5 Persiapan
inokulum (suspense umum): dengan menggunakan ose, diambil 3-5
koloni kuman yng sama dan suspensikan ke dalam tabung yang berisi
larutan NaCl fisiologis steril 5 ml. Kemudian OSE dibakar dan OSE
diletakkan pada tempatnya.
-
Dibandingkan kekeruhan suspense kuman dengan standar kekeruhan
Mc Farland 0,5
-
Dengan lidi kapas steril, diambil suspense bakteri (inokulum),
kemudian kapas ditekan-tekan pada permukaan tabung untuk membuang
kelebihan suspense yang terserap kapas.
-
Lidi kapas dihapuskan di permukaan media MH secara merata,
kemudian tutup cawan petri dan di diamkan 3-5 menit (max 15
menit)
-
Cakram antibiotika diletakkan pada permukaan agar, dan sedikit
ditekan dengan pinset sampai melekat sempurna. Jarak antara cakram
satu dengan cakram lain minimal 15 mm. Cakram yang sudah
ditempelkan pada permukaan media agar, tidak boleh dipindahkan
ataupun digeser. Di diamkan 15 menit. Di inkubasi pada suhu 35-370C
selama 18-24 jam dalam posisi cawan terbalik. Untuk uji kepekaan
kuman golongan Streptococcus, Haemophylus dan Neisseria, digunakan
sungkup lilin/anaerobic jar (CO2 5-10%).
-
-
Diamati zone hambatan yang terbentuk dengan mengukur diameter
zone hambatan. Pengukuran dilakukan dengan mengunakan jangka
sorong.
-
Dicatat diameter zone hambatan hasil pengukuran kemudian
dibandingkan dengan Tabel Zone Diamater intertive standard.
VII. PEMBACAAN AN INTERPRETASI HASIL Hasil pengujian dikatakan
sensitive (S), intermediet (I) atau Resiste disesuaikan dengan
Tabel Zone Diameter Intertive Standard (NCCLS) 1. Uji
degradasi.
11
JAMUR
I.
PENDAHULUAN a. Pemeriksaan jamur - Preparat jamur / (KOH) jamur
- Kultur Jamur b. Preparat Jamur/KOH jamur - Mencari ada tidaknya
hipa, spora atau sel ragi. c. Kultur jamur - Pembiakkan jamur
dengan pembiakan dextrose. Jika tidak ada, dapat menggunakan mac
conkey. Tetapi kelemahannya bakteri akan lebih mudah tumbuh
daripada jamur.
II. Tujuan Untuk isolasi dan identifikasi jenis jamur yang
terdapat pada sampel.
III. Bahan/sampel Kerokan kulit,
IV. Media/Reagen KOH 10% untuk kulit dan selaput lender KOH 20%
untuk kuku dan rambut
V. Alat-alat Scalpel Lidi kapas OSE Cover geas Kaca gelas
VI. CARA KERJA 12
a. Kerokan kulit: Preparat diisi KOH Dikerok jamur pada kulit
dengan scalpel Kerokan kulit diletakkan pada preparat dan diaduk
Ditutup dengan cover gelas Diperiksa di bawah mikroskop
b. Kultur jamur dari swab vagina Diambil swab vagina Dioleskan
sekali pada media OSE dipanaskan OSE dioleskan pada media dengan
melewati media yang telah dioleskan swab vagina Di inkubasi selama
1-3 minggu
c. Dermatophita Dermatophita (jamur hitam-hitam) Identifikasi 1.
Mikroskopis Cara kerja: KOH ditetesi pada kaca objek OSE dipanaskan
Diambil jamur, caranya tancapkan dan congkel Fungsi KOH untuk
melisikan sampel Oleskan jamur pada kaca objek Ditutup dengan cover
gelas Usahakan agar tidak ada gelembung saat menutup dengan cover
gelas.
13
Mengetahui, Denpasar, 16 Juni 2010
Pembimbing Pratikum
Ketua Kelompok
I Made Birnawan, S.Si
Cahya Septia Sardiawan
14
