Centrum prediktívnej diagnostiky nádorov mäkkých tkanív

UNIVERZITA KOMENSKÉHO V BRATISLAVE

Centrum prediktívnej diagnostiky nádorov mäkkých tkanív

Ústav patologickej anatómie, Lekárska fakulta UKOddelenie klinickej genetiky NOÚ

Zodpovedný riešiteľ: Prof. MUDr. Pavel Babál, CSc.


Podporujeme výskumné aktivity na Slovensku/ Projekt je spolufinancovaný zo zdrojov EÚ


o napriek úsiliu o včasnú a presnú diagnostiku, predstavujú nádory mäkkých tkanív na Slovensku komplexný diagnostický a terapeutický problém

o heterogenita primárnej lokalizácie sarkómovo široké spektrum histologických typovo relatívne vzácny výskyt a s tým súvisiaci obmedzený počet

klinických randomizovaných štúdiío liečba pokročilej a rezistentnej choroby




Ciele• etablovať metódy na diagnostiku nádorov mäkkých tkanív, s ohľadom na

aktuálne poznatky a zavádzanie nových diagnostických a prediktívnych terapeutických markerov a ich validácia vzhľadom na hodnotenie prognózy pacientov

• sústredenie diagnostiky pacientov s týmto typom nádorov umožní lepšie a efektívnejšie zapojenie nových metodologických postupov, aj s ohľadom na možnosti rýchlej reakcie vzhľadom na nové možnosti v oblasti protinádorovej liečby

• vytvorenie centra prediktívnej diagnostiky umožní efektívny výskum v oblasti diagnostiky nádorov mäkkých tkanív s ohľadom na posúdenie prognózy priebehu choroby

a liečby pacientov




Ciele• etablovať metódy na diagnostiku nádorov mäkkých tkanív, s ohľadom na

aktuálne poznatky a zavádzanie nových diagnostických a prediktívnych terapeutických markerov a ich validácia vzhľadom na hodnotenie prognózy pacientov

• sústredenie diagnostiky pacientov s týmto typom nádorov umožní lepšie a efektívnejšie zapojenie nových metodologických postupov, aj s ohľadom na možnosti rýchlej reakcie vzhľadom na nové možnosti v oblasti protinádorovej liečby

• vytvorenie centra prediktívnej diagnostiky umožní efektívny výskum v oblasti diagnostiky nádorov mäkkých tkanív s ohľadom na posúdenie prognózy priebehu choroby

a liečby pacientov




Cieleo etablovanie štandardného genetického a histologického vyšetrenia

s ohľadom na výskum známych a nových diagnostických a prediktívnych terapeutických markerov

o zavedenie štandardizovaných algoritmov genetickej a histologickej diagnostiky nádorov z mäkkých tkanív s ohľadom na nové perspektívne diagnostické a prediktívne terapeutické markery

o možností využitia nových nízko invazívnych metód molekulárnej diagnostiky – izolácie fragmentov nukleových kyselín nádorových buniek zo slín a plazmy,

resp. cirkulujúcich nádorových buniek.




1. zavedenie algoritmu korelácie morfologického, fenotypického (imunohistochemického) a genotypického (genetického) vyšetrovania

2. využívanie existujúcich genetických a histologických techník na Oddelení onkologickej genetiky v NOÚ a na Ústave patologickej anatómie LFUK

3. zavedenie metodiky arrayCGH a vyšetrenie prognosticky významných génov pomocou HRMA (K-ras, EGFR mutácie, c-Kit mutácie)

4. izoláciu mezenchýmových cirkulujúcich nádorových buniek a vyšetrenie 24 prognosticky významných génov asociovaných s metastázovaním nádorov, prostredníctvom qPCR resp. neskôr prostredníctvom navrhnutého chipu (aktín, PUM, TATAA, CD-44, CYP2D6, ERBB4, BIRC5, CK-19, EpCAM, BIRC5 (survivin), SATB1, E-cadherine, HDAC2, HER2/neu, Ki-67, KIF, MUC-1, mTOR, MYBL1, p53, uPA, uPAR, PAI1, VEGF)

5. imunohistochemické vyšetrenia proteínov prognosticky a prediktívne významných markerov zapojených do procesov apoptózy, proliferácie a angiogenézy v tkanive a proteínov zodpovedných

za vnútrobunkovú a medzibunkovú signalizáciu



o 170 kDa transmembránový glykoproteín, tyrozínkinázový R

o mutácie vedúce k zvýšenej expresii/aktivácii EGFR zistené v rôznych epitelových nádoroch (pľúca, hrubé črevo) – úloha onkogénu

EGFR EGFR

gene transcription

PROLIFERATION

PI3K

PKC

NFkB

AKT

Bad

CELL SURVIVAL

Ras

Raf

MEK

MAPK JNKs

mTORS2448

S473

cielená terapia:- cetuximab (chimerická monoklonálna protilátka)- erlotinib, gefitinib(inhibítory tyrozínkinázovej aktivity)



o rastový faktoro vaskulogenéza,

angiogenézao zvýšená expresia v

nádoroch podporuje ich rast a metastázovanie

VEGFVEGFR

PI3K

AKT

cell survival

Ras

MAPK

VEGF

cell migration

PKC

cellproliferation

ANGIOGENESIS

FAK PLC

↑ Ca++

NOS

NO

cellproliferation

• cielená terapia:bevacizumab, ranibizumab(chimerická monoklonálna protilátka)lapatinib, sunitinib, sorafenib

axitinib, pazopanib(inhibítory tyrozínkinázovej aktivity)



o terapia:

NSAID

celecoxib - ↑ KVS NÚL

COX-2 proinflammatory cytokines

COX-2

ROSROS

ROS

DNA repair E damage

DNA damage

mutations in cancer related genes

carcinogenesis

VEGF

tumor progression

angiogenesis

caspases

cell

survival

• cyklooxygenáza 2, 70 kD indukovateľný enzým

• syntéza PG v mieste zápalu• karcinogenéza???, zvýšená

expresia zistená v rôznych nádoroch (hrubé črevo)



o karcinoembryonálny antigén, glykoproteín bunkovej membrány zapojený do procesu bunkovej adhézie

o zvýšená expresia v rôznych epitel. nádoroch (HČ, tumor marker)

o metastázovanie

CEA

Tu cell

CEA

C

CEA

NK cell

anti-CEA Ab

complement

anti-CEA Ab

Complement-mediated cytotoxicity

Antibody-directed cellular cytotoxicity

cielená terapia (imunoterapia)?



IHC genetika IHC

dg.myo

Dmyo

g myoDmyo

gPAX/FKHR EGFR CEA VEGF COX-2 AKT mTOR

eRMS - - - - - - +++ 90% + >50% X - ++ 60%

aRMS + + + + - ++ 95% +/- + >50% 70% +/- +/-

• DIAGNOSTIKA • RMS vs. ne-RMS – myogenin, myoD1 – vysoko špecifické a senzitívne• odlíšenie podtypov RMS – PAX/FKHR, EGFR? (10/12 eRMS, 1/3 aRMS)

Rabdomyosarkómy

PROGNÓZAaRMS/eRMS resp. PAX/FKHR + / - VEGF - angiogenézy, rastu a metastatického potenciálu EGFR, p-Akt, p-mTOR - proliferácie a antiapoptotickej aktivityNOVÁ CIELENÁ LIEČBAvysoká expresia VEGF (+++ >50% buniek u 15/15 RMS) EGFR (++-+++ >50% buniek u 5/12 eRMS) + absencia aktivačnej mutácie K-RASiné: blokáda Akt/mTOR dráhy, COX-2





P = 0.12(> 0.05)

# ‡ #‡

# r = 0.86‡ r = 0.75

PPIA, 114 bp

PPIA, 212 bp

P = 0.53(> 0.05)

# ‡#

‡

# r = 0.95‡ r = 0.76

PPIA, 316 bp, x1

# r = - 0.95‡ r = 0.27

****

*** P < 0.0001* P < 0.05 ‡#

‡#

PPIA, 523 bp, x4

*** ****** P < 0.001** P < 0.01* P < 0.05

# ‡#‡

# r = - 0.86‡ r = - 0.31

PPIA, 577 bp, x4

P = 0.11(> 0.05)

# ‡‡ #

# r = 0.68‡ r = 0.97

Source of cDNA

Results – Amplification of different PPIA fragments

M 1 2 3 4 5 6

M 1 2 3 4 5 6

M 1 2 3 4 5 6

M 1 2 3 4 5 6

M 1 2 3 4 5 6



Documents

Centrum prediktívnej diagnostiky nádorov mäkkých tkanív