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Control de larvas de N. xanthographus con NEP, evaluación de campo

El control químico de N. xanthographus es difícil debido al extenso pe-ríodo de emergencia del adulto y los hábitos subterráneos de la larva la que queda fuera del alcance de los insecticidas convencionales, ya que éstos no pueden ser incorporados a la profundidad necesaria. Siendo también su uso restrictivo para la producción orgánica. Por lo anterior, el uso de nemátodos entomopatógenos (NEP) nativos surge como una alternativa viable para el control de estas plagas.

En Chile el uso de los nemátodos entomopatógenos (NEP), como es-trategia de control de larvas de insectos es poco conocida. A pesar de ello, nuestro país posee un alto potencial como fuente de NEP, debido a la am-plia variabilidad de condiciones edafoclimáticas, donde existen sectores con condiciones extremas; esta diversidad natural tiene como resultado un alto endemismo y microorganismos entomopatógenos adaptados a una amplia variedad de condiciones como, altas y bajas temperaturas, salinidad, alca-linidad, humedad, altitud etc., (Figura 3, Capítulo 3), lo que les otorga un interesante potencial como agentes biocontroladores. INIA ha colectado, de norte a sur, aislaciones de NEP, los cuales pueden ser masificados y aplicados en los cultivos para el control de plagas.

Los nemátodos, constituyen uno de los filum de invertebrados más importante, por su potencial como entomopatógenos, ya que son parásitos obligados de insectos, de allí su importancia como agentes de de control de plagas agrícolas Además son capaces de atacar a un amplio rango de insectos plaga, que habitan en el suelo en cultivos de importancia agrícola.

Nemátodos entomopatógenos para el control de

curculiónidos en vides

Paola luppichini B.*, andrés France i.** e irina urtubia H.**

INIA La Cruz *INIA Quilamapu**

4.

Manejo del Burrito de la vid y otros curculiónidos asociados a vides

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La efectividad del control con NEP ha sido comprobada ampliamente. La manera en que estos nemátodos ejercen el control es más parecida a la acción de un insecticida químico que al de uno biológico. Sin embargo, un insecto muerto por NEP es a su vez una nueva fuente de inóculo ampliando así su efectividad total en el tiempo. Otra de sus cualidades es que pueden ser multiplicados artificialmente a gran escala en medio líquido o sólido, pueden ser almacenados por largos períodos y ser aplicados por métodos convencio-nales. Poseen habilidad para buscar su hospedero y tienen compatibilidad con plaguicidas para persistir en el ambiente natural, y finalmente son inocuos para plantas y mamíferos.

En este contexto fueron realizados ensayos de laboratorio y campo de control de larvas de N. xanthographus, utilizando los NEP nativos de la colec-ción del INIA. Los principales resultados se muestran a continuación.

Selección de aislamientos de NEP sobre larvas de N. xanthographus

Para las pruebas de patogenicidad de los aislamientos de NEP fueron utilizadas larvas de N. xanthographus, obtenidas de las crianzas de laboratorio (22 ± 2 ºC y ±50% HR) (Foto 38). De los aislamientos de NEP, provenientes del Banco de Recursos Microbiológicos del INIA, fueron evaluados 72 con el fin de determinar la efectividad de control sobre larvas de esta especie de curculiónido. Se evaluó la mortalidad de las larvas a las 24 horas post inocu-lación y se extendió durante 10 días. Se consideraron larvas muertas, aquellas que no tenían respuesta (movimiento) frente al estímulo físico con un pincel (Foto 39). Las larvas muertas fueron llevadas a cámara húmeda para observar la aparición de nemátodos.

De los aislamientos de NEP evaluados, 63 mostraron tener algún grado de patogenicidad sobre las larvas de N. xanthographus, variando desde cinco a 90% de mortalidad (Figura 3). En nueve de los aislamientos no se observó patogenicidad (0%). Del total de aislamientos evaluados con cinco se obtuvo mortalidad del 60%, uno del 70% (QU N 21) y uno del 90% (QU N85) como se observa en la figura 10. Estas diferencias en cuanto a mortalidad podrían deberse a la respuesta de inmunidad que presentan los insectos en contra de la infección del nemátodo (Li et al., 2007), una vez que éstos han llegado al hemocele del huésped. Para contrarrestar las células bacterianas, el insecto

51

puede usar proteínas antibacteriales y/o fagocitosis, seguido de la formación de nódulos. Para inactivar a los nemátodos, los hemocitos de los insectos pueden encapsularlos y luego melanizarlos (Hazir et al. 2003; Kaya y Koppen-höffer 2004). Otra teoría para explicar la diferencia en la mortalidad de larvas es la hipótesis de la fase infectiva (Hominick y Reid 1990) que postula que una efectiva estrategia de sobrevivencia podría ser que la infectividad pueda ser sincronizada en el tiempo. De esta forma durante la emergencia desde un hospedero (Foto 40), algunos individuos (NEP) pueden ser inmediatamente infecciosos, mientras otros no lo son y estos últimos pueden ser no-infeccio-sos permanentemente o sólo por un tiempo.

En el estudio realizado con los aislamientos de la colección INIA, se logró seleccionar dos aislamientos que resultaron ser los más patogénicos para larvas de N. xanthographus, estos corresponden a QU N85 y QU N21 de las especie Steinernema unicornium (90%) especie nativa determinada por Edgington et. al. (2009) y S. feltiae (70%), respectivamente. Estos dos aisla-mientos QU N85 y QU N21 fueron los que mostraron el mejor potencial de control sobre las larvas de N. xanthographus, en todas las pruebas realizadas en laboratorio.

Foto 38. Larvas de N. xanthographus de crianza de laboratorio.

Foto 39. Larvas de N. xanthographus, sana (arriba) afectada por NEP (abajo).

nemátodos entomopatógenos para el control de curculiónidos en vides

P. L

uppi

chin

i

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chin

i

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Figura 10

Mortalidad de larvas de N. xanthographus inoculadas con juveniles infestantes de aislamientos de nemátodos entomopatógenos de la Colección INIA,

en condiciones de laboratorio.

Foto 40. Larva de N. xanthographus con NEP emergen desde cuerpo.

(%) M

orta

lidad

de

larv

as d

e N

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thog

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Aislamientos de NEPs (Colección INIA)TE

STIG

O

0

10

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100

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N4

N5

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N31

N32

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N50

N52

N55

N58

N59

N60

N62

N63

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N65

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N69

N71

N72

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N75

N76

N77

N78

N79

N84

N85

N86

N89

N90

N92

N95

N96

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N98

N99

N100

N101

N102

P. L

uppi

chin

i

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Dosis y tiempo letalComo parámetro de comparación de patogenicidad de los aislamientos

que alcanzaron el mayor porcentaje de mortalidad, se determinó Dosis Letal 50 y 90 (DL 50 y DL90) y Tiempo Letal 50 y 90 (TL50 y TL90), utilizando diferentes concentraciones de IJ (Infectivos juveniles o dauers).

Larvas de N. xanthographus fueron inoculadas con NEP en concentra-ciones de 0, 5, 10 20, 40, 80 y 160 IJ/larva, incubados en oscuridad a 15±2 ºC, evaluando diariamente la mortalidad hasta alcanzar el 100%.

Con los datos obtenidos, que se muestran en las figuras 11 y 12 y mediante análisis Probit se determinaron las dosis letales, para QU N85: LD 50 es de 12,8 dauers/ml, la LD 90 es de 152,5 dauers/ml. Para el aisla-miento QU N21 las dosis LD 50 y LD 90 fueron 3,17 y 106,8 dauers/ml, respectivamente.

Figura 11

Evaluación de mortalidad de larvas de N. xanthographus a diferentes concentraciones (dauers/ml) de los aislamientos de nemátodos entomopatógenos QU N85

Steinernema unicornium.

0

10

0 4 5 6 7 8 11 12 13 15 18 19

Días

0 5 10 20 40 80 160

20 22 25 26 27 28 29 33 34 35 36

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0

10

0 4 6 10 12 14 18 21 25 27 31 33 35 39 41 45 47 52 55 59 61

Días

0 5 10 20 40 80 160

20

30

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% d

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orta

lidad

50

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100

Figura 12

Evaluación de mortalidad de larvas de N. xanthographus a diferentes concentraciones (dauers/ml) de los aislamientos de nemátodos entomopatógenos QU N21

Steinernema feltiae.

Cuadro 2

Tiempos letales 50 y 90 para dos aislamientos de NEP, QU N85 y QU N21.

Aislamiento NEP Dosis (dauers/ml) Tiempo letal (TL días)

TL50 TL90

5 51,45 99,49

10 44,37 78,29

QU N85 20 28,5 50,38

40 26,43 45,62

80 14,84 29,09

5 28,47 57,89

10 34,79 76,59

QU N21 20 30,28 57,38

40 26,76 56,49

80 11,98 46,59

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A partir del análisis de regresión se determinaron los tiempos letales, los cuales se resumen en el cuadro 2. Cabe destacar que en el caso del aisla-miento QU N85 las dosis letales son mayores que para QU N21 y los tiempos letales son menores para las concentraciones más efectivas.

Resultados de campoA partir de los resultados obtenidos en laboratorio se continuó reali-

zando pruebas de efectividad de los dos aislamientos de NEP, en condiciones de campo en un huerto de arándano (Foto 41), un viñedo y en macetas.

Ensayo en ArándanosFueron evaluaron cuatro de los aislamientos de NEP, considerados en

la primera etapa de selección como los más promisorios para el control de N. xanthographus: QU N85, QU N21, QU N23 y QU N37 todos del género Steinernema.

Foto 41. Vista general huerto arándanos.

En la figura 13 se muestra la mortalidad de las larvas de N. xanthographus recuperadas del campo, 15 días post inoculación. De los aislamientos aplicados, con QU N85 (S. unicornium) se obtuvo un 61,9% de mortalidad y un 52,9% con QU N21 (S. feltiae). Los otros dos aislamientos probados, QU N23 y QU N37, no superaron el 40 % de mortalidad de larvas. Los resultados de campo son consistentes con los obtenidos en laboratorio, donde se observó que QU N85 tiene mayor potencial de control sobre las larvas de N. xanthographus (90 % mortalidad) que QU N21, QU N23 y QU N37 (Figura 10).

nemátodos entomopatógenos para el control de curculiónidos en vides

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Figura 13

Mortalidad de larvas de N. xanthographus con inoculaciones de diferentes aislamientos de NEP, en aplicaciones de campo. Los Angeles 2011.

Ensayo en ParronalFueron evaluados 2 aislamientos de NEP QU N85 y QU N21 de las

especies Steinernema unicornium y S. feltiae, respectivamente. La aplicación se realizó a través de larvas de Galleria melonella inoculadas con los NEP, las cuales fueron ubicadas en cada planta en dos puntos únicos de inoculación (Fotos 42 y 43). Se utilizó larvas de N. xanthographus como centinelas (2 larvas/planta a 20 cm de la base de la planta y a 20 cm de profundidad) para evaluar la efectividad de los NEP. Estas larvas fueron colocadas en pequeñas bolsas de malla y sujetas con un alambre galvanizado (Foto 44).

En cuanto a la mortalidad de larvas de N. xanthographus utilizadas como centinelas evaluadas para diferentes tiempos post inoculación (1, 2, 3 y 4 semanas), se observó un 55% de mortalidad de larvas con el aislamiento QU N21 (S. feltiae) durante las semanas 1 y 2. Para las condiciones del en-sayo con el aislamiento QU N85 de la especie S. unicornium, se observó mor-talidad superior al 80% en las semanas 3 y 4 posteriores a la inoculación con NEP. En estas evaluaciones también se observó larvas parasitadas por hongos asociados al suelo (Figura 14).

0

20

Testigo

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% m

orta

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de

larv

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us

QU N85 QU N21

Tratamientos NEP

QU N23 QU N37

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En el recuento de larvas en terreno previo al ensayo fueron colectadas en promedio 2 larvas de N. xanthographus por calicata (Foto 45), que corres-ponde a un nivel ligero de infestación (Ripa y Luppichini 2010). Durante las evaluaciones semanales se realizaron 3 calicatas por tratamiento, obteniendo un promedio de 6,8 larvas/calicata.

Al evaluar la mortalidad por NEP de las larvas de N. xanthographus presentes naturalmente en el suelo (Figura 15), se observó superior al 50% de mortalidad por NEP de las larvas recuperadas desde el tratamiento con el aislamiento QU N85 (Foto 46) hasta la semana 3 post inoculación. En el

Foto 42. Puntos únicos de inoculación en cada planta.

Foto 43. Aplicación de larvas de G. melonella inoculadas con los NEP,

Foto 44. Bolsa de malla con un alambre galvanizado con larva centinela.

P. L

uppi

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i

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N. O

livar

es

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tratamiento con QU N21 se observó efecto sobre larvas (Foto 47) durante las dos primeras semanas post aplicación, con un promedio de 58% de mor-talidad asociada a los NEP. Al igual que en las otras evaluaciones se observó mortalidad de larvas por hongos asociados al suelo.

Figura 14

Mortalidad de larvas centinelas de N. xanthographus, con dos aislamientos de NEP. San Felipe, 2011.

Figura 15

Mortalidad de larvas de N. xanthographus, provenientes de la infestación natural, con dos aislamientos de NEP. San Felipe, 2011.

Semana 1

% m

orta

lidad

de

larv

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e N

. xan

thog

raph

us

Semanas post inoculación con NEP

Semana 2 Semana 3

QU N21 QU N85

0

20

40

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80

100

0

20

40

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Semana 1

% m

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de

larv

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elas

N. x

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ogra

phus

Semanas post inoculación

Semana 2

Testigo

Semana 3 Semana 4

QU N21 QU N85

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Fotos 45. Realización de calicata y extracción de larvas de N. xanthographus de la infestación natural.

Fotos 46. Larva de N. xanthographus muerta por NEP aislamiento QU N85.

Foto 47. Larva de N. xanthographus muerta por aislamiento NEP QU N21.

P. L

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Manejo del Burrito de la vid y otros curculiónidos asociados a vides

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Ensayo en ViñedoEn este ensayo se utilizó la misma metodología del ensayo descrito en

los párrafos anteriores, donde La aplicación de los NEP se realizó a través de larvas de Galleria melonella inoculadas, las cuales fueron ubicadas en dos puntos únicos.

En la figura 16, se muestran los resultados de la evaluación de la mor-talidad de las larvas centinelas, se observó un promedio cercano al 60% en promedio para los dos aislamientos evaluados, en el viñedo ubicado en Casablanca.

Figura 16

Mortalidad de larvas centinelas de N. xanthographus,con dos aislamientos de NEP. Casablanca, 2012.

Fueron realizadas siete evaluaciones post inoculación con los NEP, me-diante 5 calicatas por tratamiento. Al evaluar la mortalidad por NEP de estas larvas de la infestación natural del viñedo, el aislamiento QU N85 mostró una mortalidad que varió entre el 50 y 66% de las larvas hasta los 33 días post inoculación para las condiciones del ensayo. Desde el día 43 post inoculación la mortalidad fue disminuyendo desde el 28% hasta un 12,5% a los 71 DDI.

0

20

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22 33 43

Días después de la inoculación (DDI) con NEP

Testigo

50 61 71

QU N21 QU N85

61

Con el aislamiento QU N21 la mortalidad de las larvas varió desde el 22% a los 12 DDI hasta valores cercanos al 50% en la evaluación a los 43 DDI (Figura 17). Se observa claramente que ambos aislamientos tienen efecto so-bre las larvas de N. xanthographus, destacándose que QU N85 tiene un mejor comportamiento sobre la mortalidad de las larvas de N. xanthographus, tanto a nivel de laboratorio como de campo.

Figura 17

Mortalidad de larvas de N. xanthographus, provenientes de la infestación natural, con dos aislamientos de NEP. Casablanca, 2012.

0

20

40

60

80

100

12

% m

orta

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de

larv

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22 33 43

Días después de la inoculación (DDI) con NEP

Testigo

50 61 71

QU N21 QU N85

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