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El término cultivo in vitro es un término muy genérico que se refiere más bien a la metodología usada que al propio objetivo de ese método. En sentido estricto, in vitro quiere decir "dentro de vidrio", es decir, el cultivo de plantas o de alguna de sus partes (pero también de células y tejidos animales) dentro de recipientes de vidrio en condiciones de ambiente controlado. Existen otros términos cuyo significado se solapa parcialmente con el significado de cultivo in vitro: Cultivo de tejidos vegetales: se refiere al cultivo in vitro de partes de la planta (tejidos o frecuentemente órganos) Micropropagación: se usa para referirse a la utilización de las técnicas de cultivo in vitro aplicadas a la propagación vegetativa de plantas. El cultivo en medio nutritivo, bajo condiciones estériles, de plantas, semillas, embriones, órganos, tejidos, células y protoplastos de plantas superiores (Pierik (1987) Cultivo in vitro de plantas superiores

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• El término cultivo in vitro es un término muy genérico que se refiere más bien a la metodología usada que al propio objetivo de ese método. En sentido estricto, in vitro quiere decir "dentro de vidrio", es decir, el cultivo de plantas o de alguna de sus partes (pero también de células y tejidos animales) dentro de recipientes de vidrio en condiciones de ambiente controlado.

• Existen otros términos cuyo significado se solapa parcialmente con el significado de cultivo in vitro:

• Cultivo de tejidos vegetales: se refiere al cultivo in vitro de partes de la planta (tejidos o frecuentemente órganos)

• Micropropagación: se usa para referirse a la utilización de las técnicas de cultivo in vitro aplicadas a la propagación vegetativa de plantas.

El cultivo en medio nutritivo, bajo condiciones estériles, de plantas, semillas, embriones, órganos, tejidos, células y protoplastos de plantas superiores (Pierik (1987)

Cultivo in vitro de plantas superiores

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Cámara de flujo• La esterilidad de la zona de trabajo se consigue porque se hace circular

a través del interior de la cámara una corriente de aire que previamente ha sido microfiltrada para eliminar toda partícula extraña.

• Según el grado de sofisticación de la cámara, puede disponer de elementos accesorios como son: fuente de luz, lámpara de esterilización por U.V., pilotos indicadores de funcionamiento diversos, contador de horas de funcionamiento, indicador de presión interior.

• Existen dos tipos de cámaras de flujo laminar según sea la forma en la que se hace circular el aire: cámaras de flujo horizontal y cámaras de flujo vertical. En las primeras el flujo se produce desde el fondo de la cámara hasta el frente, de forma que las partículas se mueven horizontalmente a la superficie de trabajo. En las segundas, el flujo se produce desde el techo hacia la superficie de trabajo de forma que las partículas se mueven perpendicularmente a ella.

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Esquema de una cámara de flujo laminar horizontal

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Una cámara de cultivo es un receptáculo diseñado para permitir el control de algunas variables del ambiente físico. Habitualmente se pueden controlar la temperatura, la iluminación y el fotoperíodo y en algunos casos, menos frecuentes, la humedad del aire y su composición.

Existen muchos modelos de cámaras de cultivo, en unos casos se trata de espacios reducidos, frecuentemente móviles, mientras que en otros casos son verdaderos recintos acondicionados para permitir el control del ambiente interior.

Cámaras de Cultivo

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Control de la temperatura

La temperatura de la cámara de cultivo viene afectada por:la temperatura ambiente de la sala donde se sitúe y el calor generado por las fuentes de luz de que dispone.El control de la temperatura a la que se desarrolla el cultivo in vitro se efectúa mediante un sistema de refrigeración-calefacción controlado a través de un termostato.

Para poder caracterizar adecuadamente el funcionamiento respecto de la temperatura de una cámara de cultivo conviene conocer:La homogeneidad de temperatura: es decir la variación de la temperatura en diferentes zonas de la cámara. Se puede aumentar la homogeneidad haciendo circular el aire dentro de la cámara mediante un sistema de ventilación

La estabilidad de la temperatura: es decir, una medida de la variación de la temperatura de la cámara de cultivo a lo largo del tiempo Todas las cámaras disponen de un programador que permite regular la temperatura a la que está la cámara en cada momento

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Control lumínico• La luz es uno de los factores principales que determinan el desarrollo de los

organismos autótrofos, en ello radica la importancia de controlar el factor luz en los cultivos in vitro.

• Los aspectos relacionados con la luz que son importantes en los cultivos in vitro son:

• La cantidad de luz: LA IRRADIACIÓN . La irradiancia puede ser expresada en función de la energía por unidad de superficie W/m2

• La calidad de la luz: EL ESPECTRO Los tubos fluorescentes son las fuente de luz más usada en las cámaras de cultivo.

• La alternancia de los ciclos de luz con los de oscuridad: EL FOTOPERÍODO. Algunos fenómenos propios del desarrollo de las plantas (germinación, floración, tuberización,...) pueden ser activados por el número de horas diarias de luz que recibe la planta. De forma análoga, el número de horas de luz que recibe el explanto cultivado in vitro puede afectar a su desarrollo. En general, el mejor fotoperiodo in vivo será también el mejor fotoperiodo in vitro.

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Biotecnología Vegetal

• Cultivo in vitro de células, tejidos y órganos

micropropagación

mejoramiento de plantas

producción de compuestos de interés comercial

producción de metabolitos secundarios

producción de proteínas

producción de polímeros biodegradables

establecimiento de plantas transgénicas

plantas resistentes a virus

plantas con rutas metabólicas modificadas

plantas mejoradas en cuanto a composición de proteínas, aceites, etc.

fitorremediación

remoción de xenobióticos

remoción de metales pesados

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• Existen tres conceptos básicos que fundamentan el cultivo in vitro de células y tejidos vegetales:

- Totipotencialidad celular

- Desdiferenciación / Rediferenciación

- Balance de reguladores del crecimientovegetal: hormonas vegetales

Principales conceptos fisiológicos aplicables a los cultivos in vitro

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• La teoría de la totipotencialidad celular, enunciadapor Haberlandt a principios del siglo veinte, postula que toda célula vegetal individual es capaz de regenerar una planta entera a partir de un cultivo in vitro sin importar el grado de diferenciación alcanzado. Para ello se requieren condiciones específicas referidas al medio del cultivo, relaciones hormonales, temperatura, fotoperíodo, etc.

• La desdiferenciación consiste en la transformación y pérdida de las características de especialización de un tipo celular para dar lugar a células de tipo meristemático. El siguiente paso involucrado en la regeneración de una planta es la redifereciación de las células previamente desdiferenciadas.

• Todo proceso de diferenciación está regulado por el balance entre diferentes tipos de reguladores del crecimiento, fundamentalmente de auxinas y citocininas.

Fundamentos teóricos y prácticos del cultivo de tejidos vegetales

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El material vegetal con el que se inicia un cultivo in vitro puede ser cualquier célula, tejido u órgano de la planta (explanto).

Tejidos somáticos: de tallo, raíz, hoja, meristemos

Tejidos reproductores: anteras, polen, microesporas, óvulos, semillas Las condiciones de cultivo pueden pretender la proliferación desorganizada de las células del explanto hasta dar lugar a un callo o incluso a un cultivo de células cuando se separan éstas del callo.Si se elimina la pared celular de las celulas se obtiene un cultivo de protoplastos.

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Morfogénesis: puede llevar a la regeneración de la planta completa.La morfogénesis se produce a partir del explanto inicial mediante la formación de raíces y tallos en posición normal o en posición no normal (adventicias/os).Si la morfogénesis se produce después de la formación de un callo, entonces se habla de morfogénesis indirecta, mientras que si se produce directamente del explanto sin que este pase por una fase de callo, entonces se habla de morfogénesis directa.

Una situación particular surge cuando en el explanto se producen unas estructuras bipolares que presentan las propiedades morfológicas de los embriones zigóticos. Estas estructuras se denominan embriones somáticos. Según que estos embriones somáticos surjan directamente del explanto o bien de un callo se habla de embriogénesis directa o indirecta, respectivamente.

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• Micropropagación vegetal

• Regeneración de plantas(embriogénesis y organogénesis)

• Cultivo de meristemas

• Cultivo de suspensiones de células vegetales

• Cultivo de protoplastos

• Cultivo de anteras

• Cultivo de óvulos y embriones

Técnicasdel cultivode célulasy tejidosvegetales

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Compuestos inorgánicosMacronutrientes: NO4

- , PO43- , K+, Ca2+,

Mg2+, SO42-

Micronutrientes: Fe2+, Cu2+, Zn+, Mn2+, Mo2+, Co2+, I-

CarbohidratosSacarosa, glucosa, mio-inositol

VitaminasTiamina (B1)PiridoxinaAcido nicotínico (C)Biotina

AminoácidosGlicina

Reguladores del crecimientoAuxinasCitocininasGiberelinas

Soporte inerte (medios semisólidos)Agar (0,7 a 1%)Gelrite®

pH5,6 – 5,8

Esterilización1 atmósfera, 15 a 20 minutos en autoclave

Medios de cultivo: composición general

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• Grupos básicos de reguladores del crecimiento:

- Auxinas- Citoquininas- Giberelinas- Acido abscísico- Etileno

• Generalidades:

- Actúan a bajas concentraciones

- Interactúan unos con otros (los resultadosestán determinados por las concentracionesrelativas entre las diferentes fitohormonas).

- Los reguladores endógenos del crecimiento están presentes en la planta durante todosu ciclo de vida pero su concentración fluctúa. Su concentración relativa varía en funcióndel estado fisiológico de la planta y en cadauno de los órganos de ésta.

- Están involucrados en numerosos procesos fisiológicos.

Reguladoresdel crecimiento

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• Las auxinas fueron descubiertas entre 1933 y 1935 a partir de bioensayos realizados para caracterizar el mensajero responsable de la elongación y de la respuesta fototrópica del coleoptile de gramíneas.

- Alargamiento y división celular- Crecimiento de secciones de hojas, tallos y frutos - Formación de raíces adventícias-

Se sintetizan en las yemas, hojas jóvenes, frutos y en el embrión. La concentración endógena en la planta varía entre 0,001 y 0,1 mg/Kg.

• Su transporte es polar

• Auxinas sintéticas:

- Acido indol butírico (IBA)- Acido naftalen acético (ANA)- 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D)

N

OH

O

Acido indol acético (AIA)(auxina endógena)

Auxinas: estos compuestos se emplean básicamente como promotores de la proliferación celular y la inducción de la

morfogénesis

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• Fueron descubiertas en 1955 estudiando sustancias promotoras de la división celular in vitro.

• Están involucradas en variadas respuestas fisiológicas:

- Promoción de la división celular- Promoción de la organogénesis (relación

auxinas/citoquininas) - Retardo de la senescencia- Síntesis de clorofila y desarrollo de cloroplastos

• Citoquininas endógenas:

- Zeatina (Zea)- Isopenteniladenina (2iP)

• Citoquininas sintéticas:

- Kinetina (Kin)- Benziladenina (BAP)

• Se sintetizan en el embrión y las raíces; se encuentranen todos los tejidos. La concentración endógena en plantas varía entre 0,1 y 500 g/Kg.

• Su transporte es no polar.

Citoquininas: en combinación con las auxinas, determinan diferentes respuestas morfogenéticas

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Estructura química de las principales citoquininas

NH CH2 CH C

CH3

CH2OH

Zeatina

NH CH2 CH C

CH3

CH3

Isopenteniladenina(IP)

6-bencilaminopurina

N NH C

H

HN

N N

N

N

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•El ácido giberélico (GA3) fue la primera giberelina identificada. En la actualidad se conocen alrededor de 50 diferentes giberelinas.

• Algunos efectos mediados por las giberelinas son:

- Promoción del crecimiento en plantas de genotipos enanoso plantas bianuales

- Crecimiento de yemas latentes- Germinación de semillas en dormición- Floración- Movilización de reservas en la semilla.

• Se sintetizan en hojas jóvenes, yemas y en el embrión.

• Su transporte no es polar.

O

HCH3 H COOH

H

HO OH

CH3

C O

Acido giberélico (GA3)Las giberelinasse utilizan para favorecer el crecimiento y el alargamiento de los entrenudos de los brotes de novo

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• Iniciación

Elección y fitoacondicionamiento de la planta madreElección del explanto inicial y de la formulación

del medio de cultivoDesinfección superficial de los explantosEstablecimiento del cultivo in vitro

• Multiplicación

Multiplicación del material stock

• Enraizamiento

Enraizamiento de los brotes obtenidos in vitro

• Rusticación

Pasaje de las plantas crecidas in vitro a las condiciones de maceta o a campo

Micropropagaciónvegetal

Técnica alternativa para la multiplicación clonalde especies, consiste en cultivar, in vitro, cualquier parte de una planta en un medio de cultivo artificial, previamente esterilizado, y bajo condiciones ambientales controladas. Básicamente se trata de una multiplicación masiva de individuos que a través de su fragmentación y posterior desarrollo, permitirán la formación de plantas completas.Las plantas madres de las cuales se toman los primeros explantos (parte de la planta que se usa para la multiplicación), deben ser sanas y poseer características varietales conformes con la variedad elegida. En poco tiempo se obtendrá un elevado número de plantas sanas genéticamente iguales a la planta madre.

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FASE 0: PREPARACIÓN DE LA PLANTA MADRE

• Para poder establecer el cultivo en condiciones de asepsia, se deben obtener explantos con un nivel nutricional y un grado de desarrollo adecuado.

• Para obtener estos explantos es recomendable mantener a las plantas madre un período de tiempo que puede oscilar entre unas semanas o varios meses, en un invernadero, en que se va a intentar cultivar la planta en condiciones sanitarias óptimas y con un control de la nutrición, del fotoperíodo y de la irradiancia recibida

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FASE I: ESTABLECIMIENTO DEL CULTIVO EN CONDICIONES DE ASEPSIA

• Una vez escogida la planta madre, se extraerán los fragmentos a partir de los cuales se obtendrán los explantos.

• Antes de extraer los explantos se hará una desinfección de los fragmentos de planta madre para eliminar los contaminantes externos. Una vez desinfectado el material vegetal, se debe mantener en condiciones de asepsia.

• Ya en condiciones de asepsia (se trabajará en cabinas de flujo laminar) se extraerán los explantos del material vegetal y se pondrán en cultivo en un medio de iniciación dentro de un tubo de cultivo.

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FASE II: MULTIPLICACIÓN DE LOS BROTES

• Los nuevos brotes se deben subcultivar en un nuevo medio mediante divisiones y resiembras en tubos de cultivo u otros recipientes adecuados. Estas operaciones se realizan en la cámara de flujo laminar

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FASE III: ELECCIÓN DE UN MEDIO DE ENRAIZAMIENTO DE LOS EXPLANTOS

• Para enraizar los explantos se utilizan principalmente dos métodos:•

ENRAIZAMIENTO IN VITRO• Se transfieren los brotes obtenidos durante la fase de multiplicación a un medio libre

de reguladores de crecimiento o que solo contenga auxinas. Esta operación se realiza en la cámara de flujo laminar y como la fuente de energía para enraizar está en el medio de cultivo no es necesario que tengan las hojas muy bien desarrolladas para realizar la fotosíntesis.

• ENRAIZAMIENTO EX VITRO• Los explantos se deben transferir a un sustrato limpio, aunque no necesariamente

estéril, que puede ser una mezcla de turba con perlita o vermiculita.Con este método es necesario que el medio de enraizamiento esté libre de organismos patógenos y que los brotes tengan las hojas bien desarrolladas, ya que deben realizar fotosíntesis para que la planta tenga una fuente de energía para enraizar y desarrollarse.Los explantos deben de plantarse en contenedores cubiertos por un plástico, para mantener la humedad relativa elevada, y hacerlos enraizar en el laboratorio, o ponerlos en 'multipots' dentro de un invernadero en un área sombreada.

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FASE IV: ACLIMATACIÓN DE LOS EXPLANTOS ENRAIZADOS

• Tanto si los explantos fueron enraizados in vitro como ex vitro, están poco adaptados a crecer en un invernadero, ya que estos explantos han enraizado y crecido en ambientes con una humedad relativa muy elevada y generalmente tienen estomas perezosos para responder al descenso de la humedad relativa, demasiado lentos para para evitar la desecación del explanto. Por otra parte crecer en ambientes tan húmedos también suele implicar la falta de una cutícula cérea bien desarrollada.

• Los explantos deben ser aclimatados a las condiciones de humedad del invernadero disminuyendo progresivamente la humedad relativa e incrementando progresivamente la intensidad de luz.

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Explanto(disco de hoja)

Explanto(células vegetales)

REGENERACIÓN

Suspensión celular

Embriones somáticos

ENCAPSULACIÓN

GERMINACIÓN

GERMINACIÓN Semillaartificial

Callo

Propagación vegetativa por embriogénesis somática

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• Proliferación de yemas apicales o axilares

- Consiste en la multiplicación de plantas a partirde las yemas axilares preexistentes.Representa la aceleración in vitro del crecimientonatural de dichos meristemas.

- La tasa de multiplicación (t.m.) se calcula en base al número de brotes o vástagos obtenidos a partir de un explanto inicial, entre un repiquey el sucesivo. Esta tasa puede variar entre 2 y 20 brotes por mes, dependiendo de la especieen cuestión, entre otras variables.

- Por ejemplo, con una t.m. de 5/mes podrían obtenerse 10.000.000 plantas en un solo año, a partir de una única yema inicial.

- El cultivo de meristemas es un caso especialdel uso de esta técnica.

Propagaciónvegetativa a partir de yemaspreexistentes

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• Posibles vías morfogenéticas:

- Organogénesis

- Embriogénesis

• Diferencias entre las dos posibles vías:

- La organogénesis es de origen pluricelular. Un grupo o cluster de células del explanto inicial se desdiferenciainicialmente para luego rediferenciarse dando lugar a un órgano vegetal. No se obtienen por esta vía plantas completas.

- La embriogénesis se presupone de origen unicelular.Una célula del explanto se aísla y constituye el puntode partida para la obtención de un embrión somático.Se diferencian embriones o estructuras bipolaresque completan cada una de las etapas implicadasen la ontogenia de un embrión cigótico. El resultado es una planta completa.

Existen dos posibles vías morfogenéticasimplicadas en la diferenciación de novode brotes y/o plantas completas

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Semillas sintéticas de orquídea obtenidas por

encapsulación en alginato

Embriogénesis: Obtención de semillas artificiales

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Sistemas de micropropagación vegetalProliferación de tejidos desdiferenciados

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• Consideraciones generales:

- Callo: masa de células desdiferenciadasobtenidas a partir de un explanto cultivadoin vitro (disco de hoja, meristema,células en suspensión, etc.)

- Es posible regenerar brotes o vástagos a partirde estos callos.

- Las plantas diferenciadas puedenno ser uniformes, debido al posible desarrollo de variantes somaclonales. Esto debe tenerse en cuenta, especialmente cuando se trabaja en propagación clonal a gran escala.

Resulta posibleregenerar broteso yemas a partirde tejidosvegetalesdesdiferenciadosin vitro

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Sistemas de propagación vegetativa in vitro Regeneración directa e indirecta

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Sistemas de propagaciónvegetativain vitro

Propagación vegetativa in vitroRegeneración directa e indirecta

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Sistemas de micropropagación vegetalCultivo de meristemas

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• Posibilitan la micropropagación de diferentes especies vegetales.

• Constituyen el explanto ideal para liberar de patógenos in vitro a plantas infectadas por virus, hongos y/o bacterias.

• Son ampliamente utilizados como explantos para la criopreservación y conservación de germoplasma.

Los meristemasson grupos de células indiferenciadas que retienenla capacidad de dividirse durante todo el ciclo de vida de una planta

Los meristemas determinan el crecimiento de la planta y dan origen a sus diferentes órganos

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- El domo meristemático no está vascularizado(muchos patógenos se translocan por los tejidos de conducción).

- El número de partículas virales es menoren los meristemas que en otros tejidos (White, 1934).

- La velocidad de división celular a nivel del meristema es mayor que la velocidad de replicación de un virus.

- Las primeras plantas saneadas a partir del cultivode meristemas fueron obtenidas por Morel y Martinentre 1952 y 1957 a partir de cultivos de papa y Dahlia.

El cultivo de meristemasfacilita la eliminación de patógenos

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• Propagación vegetativa rápida y a gran escala

• Uniformidad seleccionada del material clonado

• Multiplicación de plantas recalcitrantesa las técnicas convencionales

• Reducción en el tiempo de multiplicacióny en el espacio requerido para tal fin

• Mayor control sobre la sanidad del material propagado

• Introducción rápida de nuevos cultivares

• Conservación de germoplasma

• Facilidades para el intercambio internacionalde material vegetal

Alcances de la micropropagaciónvegetal

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Sistemas de transferencia genéticaen plantas

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• Sistemas de transferencia de ADN basadosen vectores biológicos

- Sistemas basados en Agrobacterium tumefaciensy Agrobacterium rhizogenes.

- Sistemas basados en virus vegetales.

• Sistemas de transferencia directa de ADN

- Transferencia por biobalística.

- Transferencia mediada por cationes divalentes y/o electroporación

- Transferencia por microinyección.

Sistemas de transformacióngenéticaen plantas

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Potencial económico de los metabolitossecundarios

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El metabolismo secundario regulamuchas de las relacionesde la planta con el medio circundante

Concepto general

• La producción de metabolitos secundarios está estrechamente relacionada con el proceso de desarrollo de la planta.

- Generalmente no está asociada al crecimiento.- Depende de condiciones determinadas de control hormonal. - Es paralela al desarrollo de tejidos especializados y órganos

(raíces, tallos, hojas y glándulas).- La biosíntesis y acumulación suele estar fuertemente

compartimentalizada a nivel intracelular, celular, de tejidosy de órganos.

• Los metabolitos secundarios se producen ante situacionesde estrés o enfermedad.

- Factores bióticos- Factores abióticos

Cultivode tejidos y metabolismo secundario

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- Insecticidas

- Saborizantes

- Colorantes

Las plantascomo fuentede metabolitos secundarios de interés comercial • Potencial

- 75 % de las nuevas estructuras químicas descubiertas provienen de las plantas.

- Sólo se tiene buen conocimiento de 5.000 de las 250.000-300.000 especies vegetalesque se creen existentes en el planeta.

- 25 % de los medicamentos de las industrias farmacéuticas son de origen vegetal.

- 75 % de la población mundial utiliza la medicina tradicional que consiste principalmente en el uso de extractos provenientes de plantas.

- Medicinas

- Herbicidas

- Proteasas

- Fragancias

- Antimicrobianos

- Enzimas

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Algunas de las medicinas más importantes o sus precursores derivados de plantas y sus ventas en el 2002

Nombre Tipo Origen Uso terapéutico Alcaloides: ventas proyectadas para el 2002: 4045 millones US$ Hiosciamina, escopolamina

Alcaloides del tropano Solanaceas Anticolinérgicos

Camptotecina Alcaloide indólico Camptotheca acuminata

Antineoplásico

Capsaicina Alcaloide fenilalquilamino Capsicum spp. Analgésico local Codeína, morfina Alcaloide opiáceo Papaver somniferum Analgésico Colchicina Alcaloide isoquinolinico Colchicum autumnale Antigota Galantamina Alcaloide isoquinolinico Leucojum aestivum Inhibidor coliesterasa Pilocarpina Alcaloide imidazólico Pilocarpus jaborandi Colinérgico Nicotina Alcaloide pirrolidínico Nicotiana spp. Terapia antitabaco Quinina Alcaloide quinolínico Cinchona spp. Antimalárico Quinidina Alcaloide quinolínico Cinchona spp. Cardiotónico Reserpina Alcaloide indólico Rauwfolia serpentina Antihipertensivo, psicotrópico Vinblastina, vincristina

Alcaloide indólico Catharanthus roseus Antineoplásico

Yohimbina Alcaloide indólico Apocynaceae, Rubiaceae

Afrodisíaco

Terpenos y esteroides: ventas proyectadas para el 2002: 12400 millones US$ Artemisinina Lactona sesquiterpénica Artemisia annua Antimalárico Diosgenina, Esteroides Dioscorea spp. Hormonas esteroidales Taxol Diterpenos Taxus brevifolia Glicósidos: ventas proyectadas para el 2002: 9230 millones US$ Digoxina, digitoxina Glicósidos esteroidales Digitalis spp. Cardiotónico Sennósidos A y B Antracenos Cassia angustifolia Laxante Otros: ventas proyectadas para el 2002: 5014 millones US$ Ipecac Mezcla de alcaloides de

ipecacuana Cephaelis ipecacuanha

Emético

Podophyllotoxina Lignanos Podophyllum peltatum Antineoplásico

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Producciónde metabolitos secundariospor cultivo in vitrode células y órganos vegetales: ¿por qué?

- Independizarse de factores externos tales como:cambios de temperatura, sequías, plagas,variabilidad de la producción, factores políticosy sociales, etc.

- Evitar la extinción de especies vegetales.

- Disponer de condiciones controladas en el procesode producción y extracción.

- Posibilitar el mejoramiento vegetal en tiemposmas cortos.

- Hacer viable la producción de compuestos complejos con uno o más C quirales en forma máseconómica respecto de la síntesis química

- Posibilitar la obtención de nuevos compuestosno presentes en la planta madre.

- Establecer procesos de biotransformación sólorealizables por enzimas provenientes de plantas.