EFECTO DE CAMBIOS DE TEMPERATURA SOBRE LA ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL ARN DE ARENAVIRUS:

IMPLICANCIAS EN LA REGULACION DE LA TRANSCRIPCION

GUTSON, DANIEL¹; MARCH, AGUSTIN¹; COMBINA, MAXIMILIANO¹; BENAVIDEZ, DANIELA¹; RABINOVICH, ROBERTO²

FUDEPANFUDEPAN CNRS

=

Imaginemos un caballo redondo y de masa despreciable

¿Los virus replican a 37ºC?

• Cambio de huésped

• Distintos órganos

• Ciclos circadianos u hormonales

• Febrícula o fiebre inducida por la infección

Cómo afecta a la infección el cambio de temperatura

• Metabolismo de las células de la respuesta inmune

• Actividad enzimática

• Fluidez de membranas

• Interacción entre proteínas

• ¿¿Estructura secundaria del RNA??

• ¿¿Regulación de la trascripción??

Estructura de arenavirus

• Virus envueltos

• RNA bisegmentado (S-L), ambisense.

• S: 2 genes => 3 productos génicos: NP, G1 y G2

• L: 2 genes => L (pol), Z (reguladora)

ARENAVRUS

Característica de los arenavirus

• Causan infección persistente en el roedor e infección aguda en humanos.

• Comienzo: fiebre, mialgia, anormalidades en células hematopoyéticas, anorexia, dolor epigástrico. El virus replica en bazo, médula ósea y otros órganos linfohematopoyéticos, hígado y pulmón.

FHA: síntomas clínicos

•3-4 días: postración, vómitos. Indicadores de daño vascular: enrojecimiento de la conjuntiva, petequias e hipotensión. Temblor en manos, hemorragia en mucosas. Síntomas neurológicos.

•10-13 días: mejoramiento

•30% de muertes en pacientes sin tratamiento

•Laboratorio: leucopenia, trombocitopenia, proteinuria.

• MFold, más un conjunto de scripts desarrollados ad-hoc para el análisis de los resultados e invocación masiva en modo ‘batch’, se determinó a distintas temperaturas (33º ó 42ºC) la estructura secundaria de los segmentos L y S del virus Junín determinando los nucleótidos apareados, el ss score, ∆G asociado al plegamiento y estructuras secundarias características.

Materiales y Métodos

Segmento S ∆G asociado al plegamiento

-1050

-1000

-950

-900

-850

-800

-750

-700

33º 34º 35º 36º 37º 38º 39º 40º 41º 42º

Temp

dG

Energía total de Junín S

Antigenómico

Segmento S nt apareados en la zona intergénica

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

33º 34º 35º 36º 37º 38º 39º 40º 41º 42º

Temp

Nuc

leót

idos

A

pare

ados Región

Intergénica S

Antigenómico

Segmento S tendencia a estar no apareado

0

0,05

0,1

0,15

0,2

0,25

0,3

0,35

0,4

33º 34º 35º 36º 37º 38º 39º 40º 41º 42º

Temp

SS-s

core

Extr Complem

Intergenic

Intergenic -Complem

Total

Total Complem

Segmento L

-2100

-1900

-1700

-1500

-1300

-1100

-900

-70033º 34º 35º 36º 37º 38º 39º 40º 41º 42º

Temp

dG

Energía total de Junín S

Antigenómico

Segmento L zona intergénica

40

45

50

55

60

65

70

Temp

paired n

uc

Región Intergénica

Antigenómico

Segmento L ss score

0

0,05

0,1

0,15

0,2

0,25

0,3

0,35

0,4

0,45

33º 34º 35º 36º 37º 38º 39º 40º 41º 42º

Temp

SS-s

core

ExtrComplem

Intergenic

Intergenic -Complem

Total

TotalComplem

>glicoproteínas

> Lectura completa

>Lectura completa

> antigenómico

Los resultados predicen que

con el aumento de temperatura aumentaría la síntesis de

genomas completos y la síntesis de glicoproteinas

a temperaturas menores predominaria la sintesis de

nucleoproteina, caracterìstica de algunos modelos de infecciòn persistente del virus Junín

Otros Arenavirus

• Comportamiento semejante respecto de los extremos

• Estos resultados ponen de manifiesto la necesidad de considerar las variaciones de temperatura, incluyendo el estado febril, en la regulación de la trascripción viral.

• La realización de determinaciones in vitro a distintas temperaturas sería conveniente para evaluar la importancia de los cambios en la estructura del RNA, sus posibles consecuencias en la enfermedad y en el establecimiento de la infección persistente en los huéspedes naturales.

Conclusión

• Comportamiento semejante respecto de los extremos y zona intergénica

• Cepa vacunal Candid 1: difiere en su comportamiento en la zona intergénica

Otros Arenavirus

¿Se extienden estas conclusiones a otros virus?

Píenselo Rabinovich, Píenselo