Efek Sitotoksik Kurkumin Dalam Pigmen Retina Manusia

8/19/2019 Efek Sitotoksik Kurkumin Dalam Pigmen Retina Manusia

1/18

Efek sitotoksik Kurkumin dalam Pigmen retina Manusia

Sel epitel

Margrit Hollborn1 * , Rui Chen1 , Peter Wiedemann1 , ndreas Rei!henba!h" ,

ndreas #ringmann1 ,$eon Kohen1 , %

1 &epartemen 'phthalmolog( dan Rumah Sakit Mata , )niersitas $eip+ig ,

$eip+ig , erman , " Paul -le!hsig .nstitute of #rain Resear!h , )niersit( of

$eip+ig , $eip+ig ,

erman , % Helios Klinikum ue , ue , erman

abstrak

#a!kround / Kurkumin dari kun(it merupakan bahan dalam bubuk kari 0 Karenaantiinamasi n(a , antioksidan dan

efek anti kanker , kurkumin adalah obat (ang men2an2ikan untuk pengobatan

kanker dan pen(akit retina 0 Kami diselidiki

apakah !ur!umin mengubah kelangsungan hidup dan sifat 3siologis pigmen

epitel sel retina manusia 4 RPE 5 in itro 0

Metodologi 6 Kepala 7emuan / proliferasi Seluler diselidiki dengan immunoassa(

bromodeo8( 9 uridin , dan

kemotaksis diselidiki dengan u2i !hamber #o(den 0 :iabilitas sel ditentukan

dengan biru tripan penge!ualian 0

7arif apoptosis dan nekrosis ditentukan dengan fragmentasi &; E$.S 0 Ekspresi

gen ditentukan oleh realtime

PCR , dan sekresi :E= mM sedikit meningkat pada

kemotaksis dari sel 0 Cur!umin mengurangi ekspresi

dan sekresi :E


2/18

nekrosis 4 di atas 1= mM 5 dan tertunda apoptosis 4di atas 1 mM 5 0 Efek

sitotoksik kurkumin terlibat aktiasi

!aspase 9 % dan !alpain , kalsium sin(al intraseluler , permeabilitas mitokondria ,

stres oksidatif , peningkatan fosforilasi

p%@ MPK dan penurunan fosforilasi protein kt 0

Kesimpulan / &apat disimpulkan bah?a kurkumin pada konsentrasi di2elaskan

untuk men2adi efektif dalam pengobatan sel tumor dan

kematian menghambat neuron retina 4 , 1= mM 5 memiliki efek buruk pada sel9

sel RPE 0 Hal ini menun2ukkan bah?a , selama asupan

kurkumin sebagai terapi bersamaan kanker atau pengobatan pen(akit mata ,

fungsi retina harus dipantau

hati9hati 0

Kutipan / Hollborn M , Chen R , Wiedemann P , Rei!henba!h , #R.;


3/18

pigmen kuning kun(it dan bahan dalam kari

bubuk , memiliki se2arah pan2ang digunakan dalam pengobatan tradisional sia

untuk

berbagai gangguan 0 Kurkumin telah terbukti memilikiantiinamasi , antioksidan , dan efek antiproliferatif di

berbagai sistem sel 1," I 0 Selain itu, kurkumin memiliki antiirus

efek , menghambat proliferasi bakteri dan 2amur %9B I , dan

menginduksi immunosupression pada sub(ek dengan transplantasi gin2al I 0

Cur!umin diakui sebagai obat antikanker (ang men2an2ikan dan

di(akini bermanfaat sebagai terapi seiring berbagai

pen(akit (ang berhubungan dengan peradangan kronis dan sebagai ad2uant

imunosupresan 1,@,A I 0 Cur!umin mempengaruhi beberapa intraseluler

2alur sin(al dan memiliki kedua antioksidan dan

efek prooksidan dalam ketergantungan pada konsentrasi

sen(a?a 1=91% I 0 Menginduksi apoptosis sel kanker dengan

aktiasi pro!aspases dan pelepasan sitokrom ! dari

mitokondria 1F91B I 0 Kedua antioksidan dan kegiatan prooksidan

(ang terbukti terlibat dalam aktiitas antikanker kurkumin

1=91% I 0 ;amun, dapat diba(angkan bah?a efek sitotoksik

kurkumin 2uga berkepentingan sel non 9 berubah 0 Memang , ia memiliki

telah menemukan bah?a kurkumin dapat men(ebabkan toksisitas non 9 berubah

sel dalam kondisi tertentu A,1,1@ I 0

Peningkatan stres oksidatif berkontribusi terhadap patogenesis

berbagai pen(akit retina men(ilaukan termasuk retinopati diabetes ,

retinitis pigmentosa , dan degenerasi makula terkait usia 1A 9

"F I 0 ;utrisi antioksidan dapat menurunkan risiko pengembangan

degenerasi makula terkait usia ">9" I 0 berdasarkan

pada data (ang diperoleh pada he?an model retinopathies dan berbuda(a

sel9sel retina , telah men(arankan bah?a kurkumin bisa memiliki


4/18

manfaat potensial dalam menghambat perkembangan diabetes

retinopati , degenerasi makula terkait usia , dan retinitis

pigmentosa "@9%= I 0 Kurkumin diet mengurangi perubahan oksidatif

dan menghambat peningkatan interleukin 9 1J , tumor ne!rosis

P$oS ';E ???0plosone0org 1 Maret "=1% :olume @ .ssue % e>AB=%

fa!tor 4 7;- 5 9a , dan faktor pertumbuhan endotel askular 4 :E


5/18

4 atro3 geogra3s 5 , sedangkan keunggulan dari bentuk basah

neoaskularisasi Choroidal dan edema subretinal disebabkan oleh

hipoksia retina luar %,%@ I 0 :E6"=11 5 0 aringan diperoleh dengan ditulis

persetu2uan dari kerabat semua donor 0

bahan

Semua komponen kultur 2aringan dan solusi (ang dibeli

dari


6/18

Sistem 4 Minneapolis , M; 5 0 Para peptida ! 9 &E:& 9 CH' 4 aspglu 9

al 9 asp 5 dan ! 9 .E7& 9 CH' 4 ile 9 glu 9 thr 9 asp 5 berasal dari En+o

$ife S!ien!e 4 $o N rra!h , erman 5 0 P&1>=B=B , bis 9 4 o 9 aminopheno8( 5

etana 9 ; , ; , ;A , asam ;A 9 tetra 9 asetat ester a!eto8(meth(l

4 #apta 9M 5 , dan siklosporin berasal dari Calbio!hem 4 #ad

Soden , erman 5 0 Semua bahan lain dan agen (ang digunakan berasal dari

Sigma 9 ldri!h 4 7aufkir!hen , erman 5 , ke!uali din(atakan lain 0

Oat lipo3lik dilarutkan dalam dimetilsulfoksida D 3nal

pengen!eran dimetilsulfoksida digunakan dalam per!obaan adalah 1/1=== 0

Kurkumin dilarutkan dalam etanol 4 =," 5 0 berikut

antibodi (ang digunakan / penetral kelin!i 7;-a anti 9 manusia

4 b!am , Cambridge , .nggrisD "= mg 6 ml 5 , kelin!i anti 9


7/18

Sel RPE manusia diperoleh dari beberapa donor dalam ?aktu F@

2am kematian , dan siap dan berbuda(a sebagai berikut 0 setelah

menghapus itreous dan retina , sel9sel RPE (ang

mekanis dipanen , dipisahkan oleh pen!ernaan dengan =,=> tripsin

dan =,=" E&7 dan di!u!i dua kali dengan fosfat9buQer

saline 0 Sel9sel dihentikan di Ham lengkap - 9 1= media

mengandung 1= serum 2anin sapi , glutama8 .. , dan penisilin 6

streptomisin , dan dikultur dalam botol kultur 2aringan 4 udara 6 > C'" pada %uC 0 sel

bagian % sampai > digunakan 0 Sifat epitel sel9sel RPE

se!ara rutin diidenti3kasi oleh imunohistokimia menggunakan

monoklonal antibodi E1 4 mengenali sebagian besar 2enis asam

ku keratin 5 dan E% 4 mengenali sebagian besar tipe dasar .. keratin 5 ,

baik dari Chemi!on 0 )ntuk mengu2i +at , dekat 9terimpit

7abel 1 0 Pasangan primer digunakan untuk eksperimen PCR 0 s , akal 0 seperti ,

anti 9sense 0

AR%A 5 mplikon 4 bp 5

C7# s 7

;M==F%FB sebagai 777C


8/18

CSP@ s C7CC


9/18

kemotaksis

Kemotaksis ditentukan dengan dimodi3kasi #o(den ruang

assa( 0 Suspensi sel RPE 4 1== ml , >B01=> sel 6 ml D media

mengandung =,> serum 5 (ang unggulan ke pol(eth(lene terephthalate

3lter 4diameter B,F mm , ukuran pori @ mm D #e!ton

= mM 5 , masing9masing, selama B

2am 0 7ingkat :E di media kultur ditentukan dengan E$.S 0 itu

konsentrasi kurkumin 4dalam mM 5 diberikan dalam bar 0 Kontrol kendaraan

dibuat dengan etanol 4 =," 5 0 &ata berarti B SEM %9B independen

eksperimen dilakukan dalam rangkap tiga dengan menggunakan sel dari donor

(ang berbeda 0 Perbedaan signi3kan s kontrol tidak diobati / * P , =,=> D ** P ,

=,=1 0 penting

Perbedaan s P&


10/18

&i!kinson , Heidelberg , erman 5 dilapisi dengan 3bronektin 4 >= mg 6

ml 5 dan gelatin 4 =,> mg 6 ml 5 0 &alam 1B 2am setelah pen(emaian , sel9sel

melekat pada 3lter dan membentuk monola(er semi!onuent 0

Setelah medium diubah men2adi medium tanpa

aditif dalam sumur atas dan medium (ang mengandung P&


11/18

dan tanpa adan(a kurkumin pada konsentrasi (ang berbeda 0

Kontrol kendaraan dibuat dengan etanol 4 =," 5 0 Sel9sel (ang

diunggulkan di %B01=% sel per sumur di piring AB 9 baik, dan dikultur

sampai !onuen!( ter!apai 0 Setelah mengubah media kultur ,

sel9sel prelabeled dengan #rd) selama 1B 2am dan kemudian diinkubasi

dengan atau tanpa kehadiran kurkumin dalam -91=6=0> 2anin sapi

serum untuk B dan "F 2am , masing9masing0 ;e!rosis ditentukan oleh

menganalisis fragmen &; #rd) 9label dalam kultur sel bebas

supernatan , dan apoptosis ditentukan dengan menggunakan

lisat sitoplasma sel 0

Mekanisme kurkumin 9indu!ed fragmentasi &;

media kultur ditentukan setelah B 2am stimulasi

D ** P , =,=1D *** P , =,==1 0 Perbedaan signi3kan s kontrol P& , ;;P , =,=1 0

doi / 1=01%162ournal0pone0==>AB=%0g==%

Pengaruh Kurkumin dalam RPE

P$oS ';E ???0plosone0org F Maret "=1% :olume @ .ssue % e>AB=%

buda(a dengan kurkumin 4 >= mM 5 dalam ketiadaan dan kehadiran

agen berikut/ ! 9 &E:& 9 CH' 4 1== mM 5 , ! 9 .E7& 9 CH'

4 1== mM 5 , P&1>=B=B 4 1== mM 5 , #apta 9M 4 1== mM 5 , dithiothreitol

4 % mM 5 , siklosporin 4 1 mM 5 , dan penetralan anti 9


12/18

7;-a antibodi 4 "= mg 6 ml 5 0

mR; Ekspresi

Ekspresi gen :E mM

masing9masing5 dan 1= ml 1= ml iU S#R Hi2au S)PERM. 4 #ioRad 5 di

olume akhir "= ml 0 Kondisi berikut digunakan / a?al

denaturasi dan en+im aktiasi 4 satu siklus di A>uC selama % menit 5 D

denaturasi , ampli3kasi dan kuanti3kasi , F> siklus pada A>uC

selama %= s , >@uC selama "= s , dan "uC selama F> s 0 Hal ini diikuti oleh

analisis kura leleh 4 @1 siklus 5 untuk menentukan produk


13/18

spesi3sitas mana suhu se!ara bertahap meningkat

4 =0>uC6!(!le 5 dari >>uC ke A>uC 0 Sampel (ang diperkuat

dianalisis dengan standar elektroforesis agarosa gel 0 mR;

ekspresi dinormalisasi ke tingkat ekspresi C7# 0 itu

perubahan dalam ekspresi mR; dihitung sesuai dengan

Metode ""&&C7 4 C7 , siklus threshold 5 , dengan &C7 X C7target

gene"C7a!tb dan &&C7 X &C7treatment"&C7!ontrol 0

E$.S

Sel9sel dikultur pada %B01=% sel per sumur di piring AB9baik

4 1== ml medium kultur per sumur 5 0 Pada !onuen!( dari , A= , (ang

sel dikultur dalam medium bebas serum selama 1B 2am 0 Selan2utn(a ,

medium kultur berubah , dan sel9sel dirangsang

dengan P&@= 5 selama 1> menit 0 Kultur pra9pera?atan dengan

S#"=%>@= selama %= menit 0 Sebuah kontrol positif HSP= dibuat oleh

inkubasi dari sel9sel di F"uC 4 ?ater bath 5 selama 1 2am 4 setelah pen(egelan


14/18

dari buda(a piring dengan para3lm 5 diikuti dengan inkubasi pada

%uC selama % 2am , sebagaimana telah di2elaskan sebelumn(a F I 0

Kendaraan kontrol

dibuat dengan etanol 4 =," 5 0 Setelah pengobatan buda(a ,media telah dihapus , sel9sel di!u!i dua kali dengan

pre!hilled phosphate9buQered saline 4 pH ,F , .nitrogen , Paisle( ,

.nggris 5 , dan monola(er itu tergores ke 1>= ml pen(angga lisis

4 Mamalia Sel $isis 9 1 Kit , Sigma 5 0 7otal lisat sel (ang

disentrifugasi pada 1=,===B g selama 1= menit , dan supernatan (ang

dianalisis dengan immunoblots 0 umlah (ang sama protein 4 %= mg 5

dipisahkan oleh 1= S&S 9 poliakrilamida gel elektroforesis 0

.mmunoblots diperiksa dengan antibodi primer dan sekunder ,

dan band immunorea!tie diisualisasikan menggunakan > 9

bromo 9 F 9 kloro 9 % 9 fosfat indol(l 6 nitro biru tetra+olium 0

AB=%

statistika

)ntuk setiap tes, setidakn(a % per!obaan independen dilakukan

dalam rangkap tiga dengan menggunakan sel dari donor (ang berbeda 0 &ata

din(atakan sebagai berarti B SEM , signi3kansi statistik 4 Mann 9

Whitne( ) test5 diterima di P , =,=> 0


15/18

hasil

Ekspresi dan Sekresi Sitokin

Kami ditentukan apakah kurkumin dapat menghambat ekspresi

dan sekresi sitokin angiogenik dalam RPE manusia berbuda(a

sel 0 Seperti ditun2ukkan dalam


16/18

Proliferasi dan Chemota8is

Kami mengukur proliferasi dan kemotaksis sel berbuda(a

dalam ketiadaan dan kehadiran P& mM menurunkan tingkat proliferasi 0 itu

efek penghambatan kurkumin dosis tinggi terhadap proliferasi sel

ditemukan setelah kedua "F 2am 4 D

** P , =,=1 0

doi / 1=01%162ournal0pone0==>AB=%0g==>

= mM 5 0 7he kurkumin 9indu!ed fragmentasi &; terhambat dalam


17/18

Kehadiran agen berikut / !aspase 9 % inhibitor ! 9 &E:& 9 CH'

4 &E:& D 1== mM 5 , (ang !alpain inhibitor P&1>=B=B 4 P& D 1== mM 5 , (ang

!ellpermeable

kalsium !helator #apta 9M 4 1== mM 5 , +at pereduksidithiothreitol 4 &77 , % mM 5 , dan siklosporin 4 CS , 1 mM 5 , masing9masing0

7he kurkumin 9indu!ed fragmentasi &; tidak dihambat oleh

!aspase 9 @ inhibitor ! 9 .E7& 9 CH' 4 .E7& D 1== mM 5 dan penetral anti 9

7;-a antibodi 4 "= mg 6 ml 5 , masing9masing0 &ata berarti B SEM %9>

per!obaan independen dilakukan dalam rangkap tiga dengan menggunakan sel9

sel dari

donor (ang berbeda 0 Perbedaan signi3kan s kontrol tidak diobati / * P , =,=> 0

Perbedaan signi3kan s kurkumin kontrol / ;P , =,=> 0

doi / 1=01%162ournal0pone0==>AB=%0g==B

Pengaruh Kurkumin dalam RPE

P$oS ';E ???0plosone0org B Maret "=1% :olume @ .ssue % e>AB=%

tidak mengubah kemotaksis sel RPE di ba?ah kontrol dan

P& 5 !hemota8is ba?ah kontrol

kondisi 4


18/18

1== mM 4= I 0

Meskipun triamsinolon 2uga sedikit menurun kelangsungan hidup

sel pada konsentrasi (ang lebih tinggi , efek ini tidak signi3kan

4

Documents

Efek Sitotoksik Kurkumin Dalam Pigmen Retina Manusia