신약개발연구

뇌졸중 치료제 IND 허가 획득

69

신약개발의 Process

후보물질 발굴 및 효력연구(Efficacy Study)

- In vitro experiment : enzyme assay, cell-based assay

- In vivo experiment : animal assay

안전성연구(Safety Study)

기준 및 시험방법, 안정성(Standardization & Stability Study)

임상시험 protocol 작성

임상시험용 의약품(IND: Investigational New Drug) 승인

임상시험 : Phase I, II, III

신약허가 (NDA : New Drug Approval) 승인

시판 후 임상 평가 : Phase IV

전임상연구

(Preclinical

Study)

임상연구

(Clinical

Study)

70

천연물 Library Screening

In vitro anti-oxidant Activity

In vitro Cell-based assay• AAPH-induced Red blood cell hemolysis • AAPH-induced cell death• Ischemia/reperfusion-induced cell death

후보물질 : YM

71

In vitro 효력연구

: Mouse brain homogenate

Protective effects of Korean traditional prescriptionsagainst AAPH-induced TBARS formation and increased protein degradation level in mouse brain homogenate(Means with same alphabets are significantly not different at p<0.05)

Fig.1. Change of reduced glutathione and oxidized glutathione ratio after AAPH treatment in Korean traditional prescriptions treated mouse brain homogenate (Means with same alphabets are not significantly different at p<0.05)

Fig.2.

CON AAPH YM

TB

AR

S (

nm

ol/m

g p

rote

in)

50

40

30

20

10

0

1500

1000

500

0

Pro

tein

de

gra

da

tion

leve

l (nm

ol/g

tiss

ue

)

TBARS

PD level

a

d

be

c

e

0.0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1.0

1.1

1.2

GS

H/G

SS

G r

ati

o

CON AAPH YM

a

b

c

72

In vivo Anti-oxidant Activity

: AAPH-treated mouse

Plasma total antioxidant status in AAPH treated mouse plasma.(Means with same alphabets are significantly not different at p<0.05)

Fig.3.

Rela

tive T

rolo

x c

on

cen

trati

on

(nm

ol/m

L p

lasm

a)

a

b

a

CON AAPH YM0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Plasma TBARS formation after AAPH treatment.(Means with same alphabets are significantly not different at p<0.05)

Fig.4.

TB

AR

S (

nm

ol/m

L p

lasm

a)

a

b

C

CON AAPH YM0

5

10

15

25

20

Protein degradation level after AAPH treatment.(Means with same alphabets are significantly not different at p<0.05)

Fig.5.

Pro

tein

deg

rad

ati

on

le

vel

(nm

ol/g

tis

su

e)

a

CON AAPH YM0

600

1000

1400

2000

1800

1600

1200

800

400

200

db

e

c d

Change of glutathione contents after AAPH treatment in mouse brain.(Means with same alphabets are significantly not different at p<0.05)

Fig.6.

Glu

tath

ion

e c

on

ten

ts

(ug

/mg

pro

tein

) a

b

a

0

5

10

15

20

CON AAPH YM

Effects of Korean traditional prescription on GSH/GSSG ratio in mouse liver and brain after AAPH treatment.(Means with same alphabets are significantly not different at p<0.05)

Fig.7.G

SH

/GS

SG

rati

o a

CON AAPH YM

Brain Liver

d

b e

a

d

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Brain Liver

73

In vivo neuro-protective effect

: 4VO ischemia model

Control Ischemia Ischemia + YM

74

In vivo neuro-protective effect

: 4VO ischemia model

Protective effects of herbal medicines 7 days after 10minutes ischemia by 4-vessel occlusion. Herbal medicines were administrated 300mg/kg at-1h, 1h, 1d, 2d, 3d, 4d, 5d, and 6d of ischemia. Results represent average normal-appearing CA1 pyramidal neuronal counts over a 1mm length of both left and right hemispheres. Results are shown mean±SEM. Data obtained for group were analyzed by Student’s t-testcompared between control and sample groups(*p<0.05, **p<0.01)

Fig.24. ATP concentration in coronal slice of rat brain 1day after 10 minutes ischemia. All data are presented as means±S.E.M.(n=5).Data obtained for group were analyzed by Student’st-test compared between control and sample groups(*p<0.05)

Fig.25.

Nu

mb

er

of

un

da

ma

ge

d n

eu

ron

s

(ce

lls / m

m2

CA

1 la

ye

r)

100

50

0

200

150

300

250

350

Sham Control YM

*

Co

nte

nt

of

AT

P (

nM

/m g

pro

tein

)

4

2

0

10

8

16

14

18

Sham Control YM

*

12

*

75

In vivo neuro-protective effect

: MCAo ischemia model

0

5

10

15

20

25

30

35

Control 300mg/kg 1000mg/kg

Infa

rct

vo

lum

e(%

) **

YM 300 mg/kg

YM 1000 mg/kg

No treatemnt

76

YM의 기준 및 시험방법 연구

5-HMF

loganin

paeoniflorin

paeonol 5-HMF loganin

paeoniflorin paeonol

O

O O

OH

O

O

O

O

O

OO

O

O

O

O

H

H

OO

O

O

O

OO

O

H

O

O OH

OCH3

HO

77

시제품 생산

주성분

감미제

감미제

완충제

완충제

보존제

안정화제

착향제

용제

총량

Compouds

YM 연조엑스

과당

스테비오사이드

구연산

구연산나트륨

안식향산나트륨

에데트산나트륨

마스킹후레바 티-7415

정제수

30ml(1 vial)

(별규)

(약전)

(식첨)

(약전)

(약전)

(약전)

(약전)

(별규)

(약전)

Amount

(g)

8.33

6

0.03

0.06

0.03

0.03

0.15

적량

적량

그람

그람

그람

그람

그람

그람

그람

No.Process

NameIngradient & Solvent Remark

1 원료 칭량

주성분 : YM 연조엑스감미제 : 과당감미제 : 스테비오사이드완충제 : 구연산완충제 : 구연산나트륨보존제 : 안식향산나트륨안정화제 : 에데트산나트륨착향제 : 마스킹후레바

티-7415 적량용 제 : 정제수 적량

2 액의 조제 상 동

3 여 과 공정 2의 액

4 충 진 공정 3의 액30mL

갈색 바이알

5 밀 봉 공정 4의 반제품

6 포 장 공정 5의 반제품

밀봉한 갈색바이알 제품을

Case 밀폐용기포장

시제품의 조성 시제품 제조공정

78

지표물질 안정성 연구

실온조건(25±2, 60±5% RH), 24개월

Changes of paeoniflorin in Neomed during preservation for 24 months (unit : mg)

Standard 제조즉시 24개월 후

LOT No. 제조 즉시 3 개월후 6 개월후 9 개월후 12 개월후 18 개월후 24 개월후

YM3001 11.95 11.89 11.85 11.76 11.70 11.55 11.45

YM3002 11.93 11.87 11.83 11.75 11.68 11.53 11.38

YM3003 11.89 11.85 11.80 11.74 11.66 11.51 11.37

79

pH, 미생물한도, 보존제 안정성 시험

pH 시험 : pH 범위 3.0 ~ 5.0

미생물 한도 시험 : 1 mL 중 세균 1 x 103 개 이하, 진균 1 x 102개 이하

보존제 시험 : 안식향산나트륨의 양은 30 mg/Vial 이하

4.064.104.154.064.024.064.12YM3003

4.034.044.024.123.974.124.14YM3002

4.034.034.074.134.074.084.13YM3001

24 개월후18 개월후12 개월후9 개월후6 개월후3 개월후제조 즉시LOT No.

2CFU/mL 적합2CFU/mL 적합3CFU/mL 적합3CFU/mL 적합4CFU/mL 적합3CFU/mL 적합1CFU/mL 적합진균

40CFU/mL 적합50CFU/mL 적합20CFU/mL 적합40CFU/mL 적합40CFU/mL 적합30CFU/mL 적합50CFU/mL 적합세균YM

3003

3CFU/mL 적합1CFU/mL 적합3CFU/mL 적합2CFU/mL 적합3CFU/mL 적합3CFU/mL 적합2CFU/mL 적합진균

50CFU/mL 적합30CFU/mL 적합50CFU/mL 적합30CFU/mL 적합20CFU/mL 적합20CFU/mL 적합30CFU/mL 적합세균YM

3002

3CFU/mL 적합4CFU/mL 적합2CFU/mL 적합4CFU/mL 적합2CFU/mL 적합2CFU/mL 적합4CFU/mL 적합진균

30CFU/mL 적합30CFU/mL 적합30CFU/mL 적합50CFU/mL 적합40CFU/mL 적합30CFU/mL 적합20CFU/mL 적합세균YM

3001

24 개월후18 개월후12 개월후9 개월후6 개월후3 개월후제조 즉시LOT No.

29.0629.1829.0929.1229.5429.5029.39YM3003

28.8729.2429.2729.6529.3929.4029.41YM3002

28.8629.3329.2929.5529.2229.5429,37YM3001

24 개월후18 개월후12 개월후9 개월후6 개월후3 개월후제조 즉시LOT No.

80

작용기전연구: Brain 조직의 Microarray 분석

Normal

Ischemia

Ischemia+ YM

81

82

83

84

85

86

설치류 단회투여 독성시험

시행기관 ChemOn (GLP)

시험동물 8 weak-old SD(Sprague-Dawley) rat (male and female)

시험방법

시험군 : 대조군, YM 2,000mg/kg, YM 5,000 mg/kg

관찰기간 : 2 주사망유무, 일반증상, 체중변화, 부검소견

1. 사망동물 – 없음

2. 일반증상 – 일시적인 체중증가 감소 관찰

3. 부검소견 – 이상 증후 없음

4. 최소 치사용량 (Minimal Lethal Dose)은 암수 모두에서 5,000mg/kg 이상

시험결과

87

시험결과

비설치류 단회투여 독성시험

시행기관 ChemOn (GLP)

시험동물 생후 5개월된 Beagle dog (male and female)

시험방법

시험군 : 500 mg/kg 군, 1000mg/kg 군, 2000 mg/kg 군

관찰기간 : 2 주사망유무, 일반증상, 체중변화, 부검소견

1. 사망동물 - 없음

2. 일반증상 - 1000mg/kg 이상의 용량에서 설사 및 구토

2000 mg/kg 이상의 용량에서 일시적인 체중증가 감소

3. 부검소견 - 정상

4. 최소 치사용량(Minimum lethal dose)는 암수 모두에서 2000mg/kg 이상

88

임상시험 Protocol 요약 I

제 목뇌졸중의 후유증 개선을 위한 네오메디액의 유효성과 안전성 평가를 위한 연구: 이중맹검, 무작위 배정, 위약 대조 임상시험

단계 및 디자인 Double blinded, randomized, placebo-controlled, phase 3 study

목 적뇌졸중(중풍) 후유증기 환자를 대상으로, YM을 주성분으로 하는 네오메디액의 치료효과를 확증하고, 안전성을 함께 평가하고자 한다.

임상시험용 의약품 네오메디액 (주성분: YM )

투여용량 및 방법

• 1군 시험약물 : 성상과 향 등이 동일한 갈색액 함유 바이알• 2군 시험약물 : YM 엑스8,330 밀리그람 함유/바이알• 투여방법 : 1일 3회 공복 시(식간) 복용

선정기준

1) 만 18세 이상 75세 이하

2) 뇌졸중(중풍)으로 진단 받은 환자 중 발병 30일이 지난 자로서, 후유증으로 인해 내과적 치료를

필요로 하는 자: MRS 점수가 3 이상

3) 본 임상시험에 자의로 참여를 결정하고 서면 동의한 경우

제외기준

1) 생약에 대한 알레르기 증상(발진, 발열, 가려움) 기왕력자

2) 심장 질환(심근경색, 협심증, 심부전증)이 있는 자

3) 전신감염증이 있는 자

4) 간기능 또는 신기능 장애가 있는 자: 혈중 GOT, GPT 또는 Creatinine치가 정상 상한치의 2배를

초과하는 경우

5) 다음의 기타 질환으로 본 연구에 참여가 어렵다고 연구자가 판단하는 경우

: 악성 종양, 중증의 대사성 질환, 신경/정신계 질환 등

6) 임산부 및 수유부

7) 복약 및 시험 참여 순응도가 좋지 않을 것으로 연구자가 판단하는 경우

시험대상질환 뇌졸중(중풍)

89

임상시험 Protocol 요약 II

피험자수• 시험군: 43례• 대조군: 43례선정ㆍ제외기준에 적합한 86명의 피험자를 대상으로 실시하고, 최종적으로는 68명 이상을 완료하여 분석한다.

시험기간 식품의약품안전전청의 임상시험계획 승인일로부터 6개월

시험방법

• 맹검법: 이중맹검

• 무작위 배정: 1군 ↔ 2군

• 스크리닝 : 2주

• 투약/관찰기 : 8주

병용약제 허용 여부

: 시험참여 전부터 지속적으로 투약 또는 시술된 다른 약제 및 시술은 모두 허용하되,

시험 기간 중 새로운 치료 목적의 약제 투여 또는 시술은 허용하지 않는다.

환자별 방문 횟수: 3회 (0주, 4주, 8주째)

평가방법

1. 안전성 평가

자ㆍ타각적 증상의 이상반응에 대하여 평가

활력징후, 임상실험실적 검사의 이상치 평가

2. 유효성 평가

(1) 주평가변수 : NIHSS(National Institute of Health Stoke Scale) 점수

(2) 부평가변수 :

① MRS(Modified Rankin Scale) 점수

② SS-QOL(Stroke Specific Quality of Life Scale) 점수

(3) 평가방법 : 각 변수의 기저치 대비 개선 여부를 확인하고, 개선 정도를 군간 비교한다(우위성 검정).

90

임상시험 Protocol 요약 III

동의서 취득

인구학적 조사/ 신체검사

활력징후

임상실험실적 검사

선정/제외기준 적합성 평가

NIHSS 평가

MRS 평가

SS-QOL 평가

시험약 처방

병용약물/이상반응 확인

Screening 및투약 개시

2차 방문 종료 방문 예정외 방문

-14 ~ 0 일 28 ± 5일 56 ± 10일 ~ 종료일＋2주일 정

항 목

91

식약청 IND (임상시험용의약품) 허가획득

2005. 11. 22. KBS1 우수성과 방영

• 뇌혈관질환 후유증개선

제 3상 임상시험허가 획득

신약개발연구

비만치료제 개발

- SK Chemical

구주제약 공동연구 -

93

Screening of Drug Candidate

in vitro assay

in vivo assay

Natural Product Library

Water extracts 70% EtoH extracts

Adipogenesis

Preadipocyte

ExtractInducer

Animal model

Genetic obesityModel :

Ob/ob, db/db

High fat diet-induced

Obesity model

AdipogenicGene Expression

Triglyceride Accumulation

94

In vitro screening : Cell-based assay

% r

ati

o

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

***

******

% r

ati

o

0

20

40

60

80

100

120

140

160

***

**

******

3T3-L1 pradipocyte에서의 중성지방 축적 억제 효과

95

Active compound의 순수분리 및 구조분석

ODS column chromatography

100% water → 20% MeOH

100% MeOH washing

Preparative TLC(CHCl3:MeOH=85:15)

Diaion HP-20 column chromatography

100% water → 100% MeOH

Sephadex LH-20 column chromatography

Water 100%

Fr.1 Fr.2 Fr.3Crystalization

THI 05 Water extracts

HFR-2 (MeOH Fr.)HFR-1(water Fr.)

60% 40% 20% MeOH 100%100% 90% 80%Water :

Fr. 6

Fr. 11,12,13 Fr. 14 Fr. 15Fr.1 Fr.2 Fr. 3,4,5

, 7, 8, 9, 10

Fr.1 Fr.2

Active compound

96

In vitro effect of Active Compound

0.00

50.00

100.00

150.00

200.00

250.00

300.00

350.00

400.00

0 25 50 100 200 300

preadipocyte Adipocyte

(treatment conc uM)

(%)

0.00

0.20

0.40

0.60

0.80

1.00

1.20

1.40

0 50 100 150 200

conc(uM)

fold

**

****

**

Triglyceride accumulation FABP expression

*

* *

97

In vivo 효력시험 I.

Weight change in ob/ob mouse

50

52

54

56

58

60

62

64

66

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30

day

weig

ht

(g)

Control

Sibutramine

SH21B

98

In vivo 효력시험 II

Db mouse에서의 지방조직 변화

b

abab

a

3

3.5

4

4.5

5

대조군 Orlistat Sibubramine SH21-B

지방

조직

(g

)

Control Sibutramine Orlistat SH21-B

99

In vivo 효력시험 III

High fat diet-induced obese mice

20.0

21.0

22.0

23.0

24.0

25.0

26.0

(g)

NORMAL CONTROL 40mg/kg 85mg/kg 185mg/kg

NORMAL CONTROL 40mg/kg 85mg/kg 185mg/kg

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30

0.35

(g)

Body Weight

Retro-peritoneal adipose tissue

NORMAL CONTROL 40mg/kg 85mg/kg 185mg/kg

NORMAL CONTROL 40mg/kg 85mg/kg 185mg/kg

Liver

Epididymal adipose tissue

0.00

0.20

0.40

0.60

0.80

1.00

1.20

1.40

(g)

0.50

0.60

0.70

(g)

a

bab

abaa

a

bb

aba

0.80

0.90

1.00bc

cab

a a

b

ab

a a

100

In vivo 효력시험 IV.

High fat diet-induced obese mice

ControlNormal

85 mg/kg40 mg/kg 185 mg/kg

Fig. 2. Effects of SH21B on epididymal adipose tissue of high fat diet-induced obese mice.

H&E staining of epididymal adipose tissue (bar: 30, X100).

101

작용기전연구 : 지방조직의 Microarray 분석

102

Gene Title Biological Process 0mg

/kg100mg/kg 200mg/kg

caspase 4, apoptosis 0.10 0.44 1.23

Bcl2-like 2 외 2종 apoptosis 0.19 0.93 1.15

kinesin family member 9 외 1종 cell adhesion 0.19 0.71 1.15

lymphotoxin A cell cycle 0.15 0.81 1.52

interleukin 1 receptor accessory

proteinChemokine 0.13 0.71 0.87

chemokine (C-C motif) ligand chemokine 0.19 0.93 1.62

troponin I, cardiac development 0.13 0.54 0.54

ribulose-5-phosphate -3-

epimerasemetabolism 0.16 1.23 1.07

apurinic/apyrimidinic

endonuclease 1metabolism 0.15 0.76 0.54

deoxyribonuclease II beta metabolism 0.15 0.62 1.32

peroxisome biogenesis factor16 metabolism 0.08 0.81 0.81

phosphoglycerate kinase 2 metabolism 0.18 0.50 0.87

3-hydroxybutyrate

dehydrogenasemetabolism 0.16 0.50 0.57

acetoacetyl-CoA synthetase metabolism 0.16 0.93 0.87

Gene Title Biological Process 0mg

/kg100mg/kg 200mg/kg

myocyte enhancer factor 2Cregulation of

transcription0.19 0.93 0.93

homeo box, msh-like 2 외 3종regulation of

transcription0.13 0.6 0.57

thyroid transcription factor 1 외 5

종

regulation of

transcription0.18 0.7 0.66

GTP binding protein, alpha o 외 2

종signal transduction 0.16 0.9 1.23

Eph receptor A7 signal transduction 0.19 0.57 0.44

inositol polyphosphate-

4phosphatasesignal transduction 0.08 0.8 0.7

karyopherin beta 3 외 3종 transport 0.18 0.71 0.81

solute carrier family 4 외 2종 transport 0.14 0.4 1.15

potassium voltage-gated channel

외 2종transport 0.12 0.81 0.93

ataxin 2 binding protein 1 외 12종 0.19 1.07 1.6

작용기전연구 : 지방조직의 Microarray 분석

103

Gene Title Biological Process 0mg/kg 100mg/kg 200mg/kg

EGL nine homolog 3 apoptosis 13.00 1.52 1.07

keratin complex 1 외 1종 cell adhesion 10.56 1.07 1.41

crystallin, beta A4 development 6.06 1.41 1.41

stearoyl-Coenzyme A desaturase 2

외 2종lipid metabolism 8.00 1.15 1.41

carbonic anhydrase 4 metabolism 7.46 1.41 1.74

cathepsin S 외 4종 protein metabolism 12.13 1.74 1.23

tyrosine kinase, non-receptor protein metabolism 6.06 1.07 0.93

BTB and CNC homology 2 외 2종 regulation of transcription 6.06 1.15 1.00

early growth response 2 regulation of transcription 8.57 2.46 1.00

vomeronasal 1 receptor, B3 signal transduction 13.00 1.41 0.81

heart alpha-kinase signal transduction 5.28 1.62 1.07

GABA-B receptor, 1 외 3종 signal transduction 6.96 2.46 1.23

sprouty protein with EVH-1 domain 2 signal transduction 10.56 1.00 2.00

rabphilin 3A transport 13.93 1.32 1.07

solute carrier organic anion transporter family transport 10.56 1.23 1.15

albumin 1 외 4종 transport 5.66 1.07 0.87

myelin and lymphocyte protein 외 12종 9.85 1.00 1.52

작용기전연구 : 지방조직의 Microarray 분석

104

Cell adhesion

CadherinsIntegrin

Selectins

Fat accumulation

Interleukin 4

TNF receptor

Cox-2

Prostaglandin synthesisWnt signal

wnt 5bdsh

MAP signal

Gi protein

MEKK, CREB1FABP, Scd2, apolipoproteinCa2+ signal

IP3 phosphatase

IP3 receptor

Cell cycle

BUNs

Cyclin E

지방증가 유전자의 억제 및 지방분해 유전자의 활성화

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시험결과

단회 투여 독성 시험

시험제목 SH21B의 랫드를 이용한 단회 경구투여 독성시험

시험기관 주식회사 켐온 전임상연구센터

시험방법시험물질 2,000mg/kg 및 5,000 mg/kg 투여군과 부형제 투여 대조군을 설정하여

2주간의 사망률, 일반 증상 변화, 체중변화 및 부검소견을 관찰

1. 사망 동물 – 투여 후 2일째 암컷 2,000mg/kg 및 5,000mg/kg 투여군에서 각각 1례씩 관찰

2. 일반 증상 변화 – 입주변 오염, 설사 및 적색 유루

3. 체중 변화 – 사망동물에서 투여 후 1일째 급격한 체중의 감소가 관찰되고 나머지 일부 동물에서도투여 후 1일 및 3일째까지 체중감소가 관찰되었으나 투여 후 7일째 부터는 모두정상적인 증가를 보였다.

4. 부검소견 – 사망 동물의 경우 위내 시험물질의 저류가 관찰되었다. 그외 다른 이상소견은 관찰되지 않았다.

5. 반수치사량(LD50) – 암컷 8,710mg/kg 이상, 수컷 5,000mg/kg 이상

동물종 8주령의 암수컷 SD(Sprague-Dawley) 랫드

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단회 투여 독성 시험

시험제목 SH21B의 Beagle dog을 이용한 단회 경구투여 독성시험

시험기관 주식회사 켐온 전임상연구센터

시험방법

시험물질 150, 300 및 600 mg/kg의 용량으로 암수 각각 2마리의 beagle dog에

투여하고 2주간의 사망률, 일반증상, 체중변화 및 부검소견을 관찰

(다만, 수컷의 600mg/kg 투여군에서는 1마리만 투여)

동물종 5개월의 암수컷 Beagle dog

시험결과

1. 사망 동물 – 관찰되지 않음

2. 일반 증상 변화 – 수컷의 600mg/kg 투여군과 암컷의 300 및 600mg/kg 투여군에서 투여 후3시간 또는 4시간째에 관찰된 구토와 투여 후 1일째부터 5일째까지 관찰된식욕부진(사료 남김)

3. 체중 변화 – 모든 시험물질 투여군에서 투여 후 3일째까지 일시적인 체중의 증가억제 또는 감소가관찰되었고 암컷의 600mg/kg 투여군에서는 부검시까지도 증가 억제된 경향이 있었다.

4. 부검소견 – 이상소견은 관찰되지 않았다.

5. 최소치사량(LD50) – 600mg/kg 이상

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13주 반복 투여 독성 시험

시험제목 SH21B의 랫드를 이용한 13주간 반복 경구투여 독성시험

시험기관 주식회사 켐온 전임상연구센터

관찰 및검사항목

증상관찰, 체중측정, 사료섭취량 및 물섭취량 측정, 요검사, 안검사, 혈액학적검사,

혈액생화학적검사, 부검소견관찰, 장기중량측정, 조직병리학적인 검사

동물종 8주령의 암수컷 SD(Sprague-Dawley) 랫드

투여량 0, 120, 300, 750 mg/kg

시험결과

1. 사망 동물 – 없음2. 체중 변화 – 수컷 750mg/kg 투여 2주째부터 낮아짐, 120mg/kg 투여 10주째부터 낮아짐

암컷 750mg/kg 투여 5주째부터 낮아짐3. 사료 섭취량 – 750mg/kg 투여군에서 암수 모두 적게 섭취4. 물섭취량 – 유의한 변화 없음5. 안검사, 요검사 – 특이한 변화 없음6. 혈액학적인 검사 – 암수컷 750mg/kg 투여군에서 헤마토크리트치 감소7. 혈액생화학적인 검사 – 750mg/kg 투여군에서 중성지방이 유의하게 낮아짐8. 장기중량 - 암수컷 모두 750mg/kg 투여군에서 폐의 절대 및 상대중량이 증가9. 부검소견 – 수컷 300mg/kg 투여군에서 폐의 부분적인 암적색조(반점)이 대조군에 비하여 증가10. 무해 용량 – 120mg/kg

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Pilot Scale Production

Raw Materials : THI05 + Others

7배양의 30%에탄올 수용액으로 80에서 3시간 추출 2회 실시

SH21-A

실온추출

생약 총량의 1.5배가 될 때까지 농축

부틸알콜 3306kg

층 분리

수용액층

실온추출

층 분리

부틸알콜 층

농축잔사

감압 농축 3회 분할 실시

수용액층

SH21-B

부틸알콜 층

30분 교반, 2시간 정체

30분 교반, 2시간 정체

부틸알콜 3306kg

감압농축

정제수 200kg

정제수 200kg

건조

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SH21-B 200 mg/tablet

Trial Product (by SK chemical)