Upload
internet
View
102
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Extensive Association of Functionally and Cytotopically Related mRNAs with Puf Family RNA-Binding Proteins in Yeast
André P. Gerber, Daniel Herschlag, Patrick O .BrowPlos Biology - March 2004
Introdução
Dinâmica celular: síntese e localização das macromoléculas
Fatores de transcrição: regulam o início da transcrição ao se ligar a seqüências de DNA próximas aos
genes que serão regulados
E a regulação Pós -transcrição?
RNA-binding proteins - RPBs participam dos processos pós transcrição .
Há centenas de RPBs em genomas de eucariotos; mas poucos possuem o RNA alvo identificado.
Pumilio -Fem-3-binding factor (Puf) : RPB citoplasmática de Saccharomyces cerevisae
Puf: proteínas que apresentam seqüências repetitivas de domínios Pumilio
Saccharomyces cerevisae : 5 proteínas Puf. Puf1 a Puf5 que podem apresentar de 6 a 8 seqüências repetitivas.
Identificação de mRNAs associados com RBPs específicas
As proteinas A-tagged Puf foram capturadas com Ig-G Sepharos e separadas por clivagem com TEV protease
Os RNAs associados à proteinas foram isolados Duas amostras foram utilizadas na análise: RNA total
e RNA isolado por afinidade ao PUF e foi preparado o cDNA
Cópias c DNA foram titulados por fluorescência e DNA microarrays de levedura
Figura 1
Seleção dos alvos das PUFs :
Seleção das seqüências enriquecidas com fatores correspondentes aos isolados por afinidade que estavam pelo menos a dois desvios padrões acima da outras seqüências.
Diferentes mRNA = diferentes Pufs A identificação das PUFs e seus alvos confirmaram as
funções das interações RNA - proteina A lista de RNAs alvos também não foi alterada após
análise estatística
Definição dos RNAs alvos das PUFs
Em S. cerevisiae : apenas 2 mRNA foram identificados para as proteínas PUF.
Puf3 : COX mRNA 3’-UTR (in vitro)
Puf5p : regulam negativamente a expressão de genes repórteres, substituindo o HO de endonucleases
Alterações nos genes PUFs de Saccharomyces cerevisiae
PUF4 e PUF5: diminuição da longevidade,
PUF1: supressor de mutação em microtúbulos
PUF2 null: aumento de resistência a cycloheximide e paramomycin
PUFs ausentes: células viáveis
Puf1p e Puf2p
18 % dos genes codificam proteínas associadas à membrana em Sc
A maior parte dos Pufps 1 e 2 associam- se a mRNAs para proteínas associadas à membrana
Proteínas associadas à membrana: funções de transporte transmembrana e transporte vesicular de protínas.
Puf3p Puf1p e Puf2p
Está associado à produtos gênicos mitocondrias.
80% biossíntese de proteínas que apresenta função estruturais em ribossomos.
Entre 22 Pufps associadas a mRNAs transcritos de mitocondrias ; 17 estão envolvidos na respiração e 12 na translocação mitocondrial.
Puf4p
Associa-se a mRNA envolvidos na síntese , processamento e maturação dos ribossomos - nucléolo
Puf5p
Puf5p : Liga-se a frações de mRNA que codificam proteínas que participam da modificação covalente de histonas.
Puf5p: Liga-se a frações que codificam proteínas envolvidas na regulação da mitose.
Conclusões
A ligação das RBPs ( Pufp) a mRNA permite maior flexibilidade regulatória que o operon.
As RBPs demonstraram a possibilidade de se regular especificamente o local, a tradução e a sobrevivência do RNAm.
Muitos dos RNAs que ligam -se a RBPs codificam proteínas que são ativas em locais celulares específicos, que formam complexos e participam de vias celulares.