Färgningsteori

Morfologisk cellbiologi, 6 hp, vt 2014Biomedicinska analytikerprogrammet inriktning

laboratoriemedicinCecilia Ottosson

Kapitel 6 i Cellular PathologyKapitel 7-9, 14 i Cellular pathology

Färger• Bensenderivater (aromatiska ringar)

• Kromofora (färgbärande) grupperex kinonringen ( ), azo (N=N), nitro (NO2)

• Kromogener (färgbildare)

• Auxokroma (hjälpande) grupperex amino (-NH3

+), hydroxyl (-O-), carboxyl (-COO-)

Färger• Färgindex

- CI nummer

• Struktur och kromofor- nitro-färger (10300-10999), azo-färger (11000-19999)

• Histologiska egenskaper- basiska färger- sura färger- neutrala färger- amfotära färger- leukofärger

Färger• Basiska (katjon) färger – kloridsalter

• Sura (anjon) färger – natriumsalter

• pH 3-9

• Primär färg

• Sekundär färg - kontrastfärgning

Färgningsmekanismer• Jonbindning

• Vätebindning

• van der Waal’s-krafter

• Kovalenta bindningar

• Hydrofoba bindningar

Faktorer som påverkar färgbindningen• pH

• Temperatur

• Koncentration

• Salter

• Tid

Färgmetoder• Direkt färgning

• Indirekt färgning

• Impregneringsfärgning

• Succedanfärgning

• Simultanfärgning

Färgmetoder• Progressiv färgning

• Regressiv färgning

• Differentiering

• Ortokromatisk färgning

• Metakromatisk färgning

• Polykromatisk färgning

Kärnfärgning• Färgning gjord med basiska färger

- ex metylenblått

• Färgning gjord med färger kombinerade eller följda av betmedel- ex hematoxylin

Färgning av cytoplasman• Färgning med sura färgämnen

- ex eosin, fast green

• Amfotära proteiner

Metallimpregneringar• Ag+ Ag0

• Argyrofil reaktion

• Argentaffin reaktion

• Guldtoning

• Sköljning i natriumtiosulfat

Avparaffinering, rehydrering och dehydrering

• Avparaffinering: Tissue clear, xylen

• Rehydrering: Alkohol – abs 95 % 70 %

• Färgning

• Dehydrering: Alkohol - 95 % abs

Montering• Förbättra optiken

• Hållbarhet

• Monteringsmedel – xylenbaserade, vattenbaserade

Färgmetoder• Rutinfärgning

- ex Hematoxylin och eosin (H&E)

• Specialfärgning- färgning av bindväv- färgning av kolhydrater- färgning av muciner- färgning av fettceller - färgning av nukleinsyror

- färgning av proteiner- färgning av enzymer- färgning av pigmenter- färgning av mikroorganismer- …

Hematoxylin och eosin• Översiktsfärg

• Rutinfärgning

Hematoxylin• oxidation till hematein

• oxidation via naturlig mognad (Ehrlichs) eller via tillsats av ox.medel (Mayers)

• betmedel positiv laddad molekyl

Hematoxylin• kärnan blålila/blåsvart

• Betmedel - Aluminiumsalter (hemalum)

- blåning- regressiv färgning- känsliga för starkt sura färglösningar

• Betmedel –Järnsalter (järnhematoxylin)

- överoxidering- ej blåning- används vid sura färglösningar

Eosin• eosin Y, eosin B

• pH 4-6

• cytoplasma – olika nyanser av rosa

Färgning av bindväv• Trikromfärgning

- differentiering av:kollagen – metylblåttmuskelceller - syrefuchsin röda blodkroppar - pikrinsyra

• Kollagen och muskel: Van Gieson

• Retikel: Gordon and Sweet

Färgning av kolhydrater• PAS (Periodic Acid Schiff)

- polysackarider

Färgning av muciner • Alcian blue

- sura muciner

Färgning av fettceller• Fixering

• Ej dehydrering fryssnittning

• Färgning efter snittning

• Oil Red - fettceller

Färgning av nukleinsyror• Feulgens teknik

- DNA

Färgning av proteiner• Kongo rött

- amyloid

Färgning av enzymer• ATPase färgning

- differentiering av muskelfibrer

Färgning av pigmenter• Artefaktspigmenter

• Exogena pigmenter

• Endogena pigmenter

• Perls reaktion (Prussian Blue)- hemosiderrin (järn)

Färgning av mikroorganismer• Ziehl-Neelsen

- syra-fasta organismer (tuberkulosbakterien)