FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD

“ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MEDICA”

SEMINARIO: FOSFATASA ALCALINA

ASIGNATURA : BIOQUIMICA CLINICA ISEMESTRE : IIIDOCENTE : Lic. TM Robert OchoaALUMNOS : Pacheco Quispe, Boris William Maccapa Roque, Yessica Roxana Joyo Huayta, Cindy Anabel Galdo Segura, Jerson Benjamín

CUSCO – PERU2012

Las fosfatasas alcalinas (FA) son un grupo de enzimas situadas en la membrana celular que intervienen a diferentes niveles en situación fisiológica: •Precipitación del fosfato cálcico en los huesos.

•Absorción de fosfatos por el intestino.

•Síntesis de proteínas hísticas e hidrólisis de los esteres fosfáticos del riñón y el hígado.

FOSFATASA ALCALINA

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En el suero humano existen las isoenzimas• Ósea.• Hepática. • Intestinal. • Placentaria. • Renal.• leucocitaria (fosfatasa alcalina

granulocítica).Será primordial localizar el origen de la hiperfosfatasemia para poder establecer el diagnóstico diferencial, ya que puede ser el primer hallazgo de patologías graves.

ISOENZIMA HEPÁTICA (I Y

II)

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•45% en adultos, 5% en niños y 60% en ancianos

•está inducida por una síntesis “de novo” en el hepatocito, vinculada al proceso hepatobiliar y su separación de la membrana celular del hepatocito por medio de una fosfolipasa D, produce el aumento en circulación. En los ductos biliares esta liberación es llevada a cabo por complejos macromoleculares (lipoproteína X), que se detectan por electroforesis de las isoenzimas en los casos de colestasis (fracción biliar).

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ISOENZIMA ÓSEA

•45% en adultos, 85% en niños y 30% en ancianos

•en condiciones normales, alcanza su mayor actividad en los niños en edad de crecimiento (llegando a triplicar los niveles del adulto) debido a que esta isoenzima se localiza en los osteoblastos (relacionados con la calcificación y formación de estructuras óseas).

ISOENZIMA INTESTINAL

•Se detecta en el suero de individuos con grupo sanguíneo O y B tras una comida grasa.

ISOENZIMA PLACENTARIA

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•el aumento que se produce al final del primer trimestre del embarazo, a expensas de la isoenzima placentaria, que en este período alcanza niveles máximos (aproximadamente el doble de los valores normales), manteniéndose durante todo el embarazo y decayendo a partir del parto, encontrándose los valores basales alrededor de un mes post-parto.

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Valores normales de fosfatasas alcalinas en nuestro medio

• 1 día < 600 (U/l)• 2-5 días < 553 (U/l)• 6 días-6 meses < 1.076 (U/l)• 7 meses-1 año < 1.107 (U/l)• 2-3 años < 673 (U/l)• 4-6 años < 644 (U/l)• 7-12 años < 720 (U/l)• 13-17 años

• Mujer < 448 (U/l)• Varón < 936 (U/l)

• 18 años• Mujer < 240 (U/l)• Varón < 270 (U/l)

El rango normal es de 44 a 147 UI/L (Unidades internacionales por litro).

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En adultos 40 a 140 U/L

En niños menores de

2 años

85-235 U/L

En niños entre 2 y 8

años

65-120 U/L

En niños entre 9 y

15 años

60- 300 U/L

En adolescentes

entre 16 y 21 años

30- 200 U/L

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ETIOLOGÍA:• Edad: Durante el período de crecimiento

las elevaciones deben considerarse normales hasta 3-4 veces por encima del valor de referencia. Este incremento es debido a la actividad osteoblástica en el hueso. En mayores de 60 años, elevaciones de la fracción ósea hasta el 30% pueden considerarse normales y se deben al proceso de involución ósea.

•Embarazo: Principalmente durante el tercer trimestre, la isoenzima responsable del aumento es de origen placentario.

•Hiperfosfatasemia benigna familiar: Aumento persistente de las FA en miembros de una misma familia en ausencia de patología o causa clara de hiperfosfatasemia. Es poco frecuente y de naturaleza hereditaria (autosómica dominante). El aumento puede ser ocasionado tanto por la fracción ósea como por la intestinal

FOSFATASA ALCALINA

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DIAGNÓSTICO: • Descartar las causas fisiológicas y las más evidentes del aumento• Repetiremos la determinación analítica pasadas 3 semanas. • Haremos hincapié en la historia clínica y la exploración física.

• Se realizará una historia clínica detallada, investigando especialmente:

Sospecha de gestación. Toma de medicamentos y/o tóxicos Presencia de fiebre. Astenia / anorexia, Dolores óseos (fracturas Oseas) Alteraciones digestivas (hepatopatías)/

respiratoria /genitourinarias (nefropatías, prostatismo), cardiacas.

Síntomas paraneoplásicos.

FOSFATASA ALCALINA

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En la segunda analítica sanguínea se debe incluir :

• Las isoenzimas de FA.• Hemograma.• Función hepática completa. • Función renal.

Una vez obtenidas las isoenzimas y conocida la función hepática, se actuará según el diagnóstico de sospecha: • Origen hepático: La FA procede en proporciones casi iguales del hígado y del hueso. Por esta razón, para determinar el origen hepático del aumento de FA se analizarán las enzimas GGT, GOT, GPT, bilirrubina y la 5-nucleotidasa.

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La 5-nucleotidasa se utiliza únicamente para confirmar que un nivel elevado de FA es de origen hepático, aunque ocasionalmente puede ser normal y no por ello podemos descartar que el origen de la FA sea hepático.

La GGT es un marcador muy sensible de enfermedad biliar, pero es muy poco especifica, permite determinar el origen hepático de una elevación de FA. Por otra parte, es una enzima que puede ser inducida por el consumo de alcohol y de fármacos.

Un aumento de FA no es especifica de coléstasis, y un incremento inferior a 3 veces el valor normal puede verse en casi cualquier tipo de enfermedad hepática: hepatitis vírica o alcohólica, cirrosis, hemocromatosis...Elevaciones superiores a 4 veces el valor normal se producen en pacientes con trastornos hepáticos colestáticos, tumores, o enf. Con recambio óseo acelerado (enf. Paget).

FOSFATASA ALCALINA

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Origen óseo: completar analítica sanguínea (calcio, fósforo, paratohormona, proteinograma). En orina determinaremos calcio, fósforo, hidroxiprolina, 1,25-dihidroxivitamina D3, proteínas (incluida la proteína de Bence-Jones), radiografía y/o gammagrafía ósea.

Si la sospecha es de origen diferente y/o no hallamos etiología hepática u ósea (causas más frecuentes de hiperfosfatasemia), deberemos pensar en otras causas (neoplásicas, etc.).

VARIABLES POR DROGAS:  AUMENTADO:• Acetaminofeno, cefotoxina, fluoresceína, sales de magnesio, sales de manganeso, allopurinol, ácido aminosalicílico, andrógenos, anticonvulsivantes, barbituratos, bromocriptina, captotril, carbamacepina, cefalosporina, ciclosporina, eritromicina, gentamicina, tetraciclina, ranitidina, verapramil, papaverina, penicilamina.

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DISMINUIDO:• Anticonceptivos orales, 17-ß-

estradiol, etinilestradiol, fluspirileno, prednisona, ß-propiolactona, tamoxifeno. Clofibrate, anticonceptivos orales.

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METODO CINETICO -APL COBAS• En presencia de iones de magnesio y de cinc, las

fosfatasas desdoblan el p-nitrofenilfosfato a fosfato y p-nitrofenol.

ALP

• p-nitrofenilfosfato + H2O fosfato + p-nitrofenol

• El p-nitrofenol liberado es directamente proporcional a la actividad catalítica de la ALP.

• Se determina midiendo el aumento de la absorbancia.

REACTIVOS - SOLUCIONES DE TRABAJO

R1: 2-amino-2-metil-1-propanol: 1,724 mol/L, pH 10,44 (30 °C); acetato de magnesio: 3,83 mmol/L;

sulfato de zinc: 0,766 mmol/L; ácido N-(2-hidroxietil) etelendiamino triacético: 3,83 mmol/L

R2: p-nitrofenilfosfato: 132,8 mmol/L, pH 8,44 (30 °C); conservantes

MEDIDAS DE PRECAUCIÓN Y ADVERTENCIAS

Para el uso diagnóstico in vitro.

Eliminar los residuos según las normas

locales vigentes.

R1 contiene 2-Amino-2-metil-1-propanol. Xi

OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS

• Emplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las muestras.

• Suero.• Plasma tratado con heparina de litio.

Definición del test en el analizador cobas c 311

• Tipo de medición Cinética A• Tiempo de reacción /10 / 13-31• Puntos de medición• Longitud de onda (sub/princ) 480/450 nm• Dirección de reacción Incremento• Unidades U/L (µkat/L)

• CONTROL DE CALIDAD; emplear el material de control indicado en la sección.

• Asimismo puede emplearse otro material de control apropiado.

• CÁLCULO• Factor de conversión: U/L x 0,0167 =

µkat/L

INTERFERENCIAS• Ictericia: aprox. 1.026 µmol/L o bien 60 mg/dL). • Hemólisis: aprox. 124 µmol/L ó 200 mg/dL).• Lipemia :): Sin interferencia significativa hasta un

índice L de 2.000. • En casos muy raros pueden obtenerse resultados

falsos (gammapatía )

MÉTODO COLORIMÉTRICO

• La fosfatasa alcalina desdobla al fenilfosfato de sodio en medio alcalino tamponado con aminometil propanol (AMP). El fenol liberado se determina por reacción con 4-amino-antipirina y ferricianuro como agente oxidante. El color desarrollado es directamente proporcional a la actividad enzimática y se mide a 520 nm.

CONDICIONES DE REACCIÓN

ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCIÓN FINALEl color de la reacción es estable durante 30 minutos por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.

CÁLCULOS DE LOS RESULTADOS VALORES DE REFERENCIA

• Adultos: 68 - 240 UI/l• Niños: 100 - 400 UI/l

• isoenzimas ósea se encuentra aumentada en la niñez

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

patologias

VARIABLES POR ENFERMEDAD

Fosfatasa alcalina elevada

•Colitis ulcerosa

•Tirotoxicosis

•Hipoparatiroidismo

•Mal absorción intestinal (déficit de vitamina D)

•Infarto agudo de miocardio

•Infarto pulmonar

•Osteodistrofia renal.

• Acromegalia.

•Enfermedades hepáticas que cursen con algún grado de obstrucción biliar, hepatitis virales agudas crónicas, tóxicas o autoinmunes; cirrosis, cirrosis biliar primaria,etc.

•Enfermedades renales (raquitismo renal)

VARIABLES POR ENFERMEDAD

• Hipotiroidismo• Escorbuto Cretinismo• Acondroplastia.• Déficit calórico proteico• Deficiencia de Mg.• Enfermedad de Wilson.• Hipofosfatasia familiar.

Fosfatasa alcalina disminuida

Fosfatasa alcalina disminuida

HipotiroidismoEscorbuto CretinismoAcondroplastia.Déficit calórico proteicoDeficiencia de Mg.Enfermedad de Wilson.Hipofosfatasia familiar.

FOSFATASA ALCALINA• Hepáticas:

FOSFATASA ALCALINA

• Neoplásicas: Algunos tumores pueden producir isoenzimas tumorales: pulmonar, testicular (seminoma), ovárico (tumores mucinosos y mesonéfricos), prostático, laríngeo, pancreático, colon/recto, gástrico y linfoma intestinal-

• Fosfatasa alcalina granulocitaria:

• Neoplásicas: Algunos tumores pueden producir isoenzimas tumorales: pulmonar, testicular (seminoma), ovárico (tumores mucinosos y mesonéfricos), prostático, laríngeo, pancreático, colon/recto, gástrico y linfoma intestinal-

• Fosfatasa alcalina granulocitaria

Aplasia medular

La aplasia medular es la desaparición de las células encargadas en la médula ósea de la producción de la sangre. A consecuencia aparecerá una disminución de los hematíes (glóbulos rojos), de los leucocitos (glóbulos blancos) y de las plaquetas en la sangre periférica.

Mielofibrosis idiopatica

La mielofibrosis idiopática es una enfermedad hematológica rara, caracterizada por fibrosis (proliferación del tejido conectivo fibroso) de la médula ósea, esplenomegalia (bazo anormalmente grande) y anemia (disminución de los hematíes o glóbulos rojos circulantes) con hematíes en forma de lágrima.

Policitemia Vera

•Es una enfermedad crónica caracterizada por un anormal crecimiento de la cantidad de células sanguineas, en la mayoría de los casos globulos rojos, producidos por la médula ósea.

• La PV forma parte de un grupo de trastornos conocidos como enfermedades mieloproliferativas.

tricoleucemia

•La tricoleucemia es una neoplasia linfoide caracterizada por citopenia, esplenomegalia y proliferación de unas células típicas (con proyecciones citoplásmicas características) en sangre y médula ósea.

•Las células malignas son casi siempre B son raras las variantes T. Las células se tiñen para fosfatasa ácida tartrato – resistente. Entre las complicaciones se encuentran la vasculitis y las infecciones.

BIBLIOGRAFIA

• http://www.wiener-lab.com.ar• http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/• www.sribd.com.net• KRUPP, Marcus. “Manual de Diagnostico Clínico y de

Laboratorio. Octava Edición. Edit. El Manual Moderno,S.A. de C.V. México – 1985