“Universidad Nacional Mayor de San Marcos”

Facultad de MedicinaEscuela Académico Profesional de

Tecnología Médica

Asignatura : BIOQUIMICA Y NUTRICION

Informe de Practica: Nº 1

Profesora:

Integrantes: Custodio Cuzcano, Dante Miguel 07010121 Rivas Merma, Arturo 14010136 Delgado Polo, SAmantha 15010181

2015

INTRODUCCIÓN

La fotocolorimetría o espectrofotometría es un método óptico de análisis que mide la cantidad de luz absorbida por una sustancia coloreada que  se basa en la medida de la intensidad y la longitud de onda de la radiación electromagnética que ha atravesado la materia o que ésta emite. El fundamento de la colorimetría se debe a la capacidad de las moléculas para absorber radiaciones. La absorción de luz en un compuesto coloreado puede variar debido: longitud de onda, concentración del compuesto, longitud de celda que contiene la muestra.La teoría ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo de cuantos de energía llamado fotones; la luz de una cierta longitud de onda está asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad definida de energía.La toría física se fundamenta en las leyes de Lambert y de Beer: La ley de Lambert dice: "Cuando un rayo de luz monocromático (de una única longitud de onda) pasa a través de un medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente al aumentar la longitud del medio absorbente: I = Io . e-k.l ".  La ley de Beer dice: "Cuando un rayo de luz monocromática pasa a través de un medio absorbente su intensidad disminuye exponencialmente a medida que aumenta la concentración: I = Io e- e . c ".  La unión de ambas leyes nos da la ley de Beer-Lambert: I = Io e- e . c. 1

OBJETIVOS En base a los resultados obtenidos:

Construye e interpreta una curva de calibración Determina la longitud de onda de máxima absorbancia para soluciones

coloreadas. Reconoce los 2 métodos para la determinación de la concentración de

una solución coloreada. Determina la concentración de una muestra problema haciendo uso de los

dos métodos.

PARTE EXPERIMENTAL

Prepararemos las baterías de tubos con solución stock: Permanganato de potasio (KMnO4) 10 mg% como veremos a continuación en el sgte. Cuadro:

Tubos N° 1 2 3 4ml KMnO4 (10 mg%) 0.5 1.0 1.5 2ml Agua destilada 4.5 4 3.5 3Concentración mg% 1 2 3 4A410 0.030 0.055 0.058 0.097A525 0.152 0.316 0.450 0.600A650 0.015 0.027 0.024 0.037Fc[] 6.578 6.329 6.666 6.666

Ahora según en la práctica el agua destilada es de capacidad solo para 5 ml.; de tal modo que en los tubos se vera de la sgt forma:

1 --- 4.5 ml 2 --- 4 ml 3 --- 3.5 ml 4 --- 3 ml

Ahora hallaremos la concentración de cada tubo en mg%:

Tubo 1: [ ]1 Ci.Vi Cf.Vf

10 (0.5) x (5)

X 1 ……… es la concentración en el tubo 1, así

hallaremos en los demás tubos.

Tubo 2: [ ]2 Ci.Vi Cf.Vf

10 (1) x (5)

X 2

Tubo 3: [ ]3 Ci.Vi Cf.Vf

10 (1.5) X (5)

X 3

Tubo 4: [ ]4 Ci.Vi Cf.Vf

10 (2) X (5)

X 4

Luego de realizado las mezclas llevaremos los tubos al espectrómetro para las lecturas correspondientes a 410 nm, 525 nm, 650 nm; lo cual no dio como resultado lo sgt,:

Continuaremos con la dilución de la muestra problema y posteriormente se

hará la lectura de la misma; a continuación tomamos 1 ml de la muestra problema eh iremos diluyendo con agua destilada hasta llegar al equilibro

A410 0.030 0.055 0.058 0.097

A525 0.152 0.316 0.450 0.600

A650 0.015 0.027 0.024 0.037

de la concentración, en nuestro caso se diluyo en 7 ml de agua; es decir la

dilución final fue de . Lo cual nos da como factor de dilución de 8.

La lectura de la dilución de la muestra problema fue de 0.373

RESULTADOS

Con los resultados de las lecturas construiremos una gráfica de absorbancia versus concentración de KMnO4 de las 3 longitudes de onda. Para luego de la gráfica hallar la longitud de onda óptima para el KMnOP4, de la cual fue la de la lectura a 525. (SE ADJUNTA HOJA MILIMETRADA DONDE SE REALIZO LA GRAFICA)

A continuación graficaremos el optimo representando la curva de

calibración. (SE ADJUNTA HOJA MILIMETRADA DONDE SE REALIZO LA GRAFICA)

Hallaremos el factor de calibración de las soluciones estándares, y luego el Fc promedio:

Fc [ ]1 1/0.152 6.578

Fc [ ]2 2/0.316 6.329

Fc [ ]3 3/0.450 6.666

Fc [ ]4 4/0.600 6.666

El factor de calibración promedio seria de la sgt. Manera:

Fc 6.578+6.329+6.666 6.666 6.559

4

En la gráfica hallaremos la concentración de la muestra problema de la sgt manera:

[MP] MP x Fd

2.48 x 8

19.84

Por el método analítico, multiplicaremos la absorbancia por el Fc promedio y el factor de dilución, para hallar la concentración de la muestra problema mediante este método:

[MP] AMP x Fc x Fd

0.373 x 6.559 x 8

19.57

DISCUSIÓN

Podemos observar que los resultados obtenidos por cada mesa son diferentes lo cual podría ser producto de un mal manejo de los instrumentos, como por ejemplo a la hora de pipetear, o también un mal cálculo al momento de emplear las formulas.

ABSORBANCIAS

1 2 3 4 AbMP dMP [MP] grafica

[MP] analítica

M1 0,153 0,308 0,438 0,644 6,4 0,551 1/10 36 35,31M2 0,156 0,281 0,452 0,573 6,7 0,490 1/6 19,2 19,6M3 0,163 0,314 0,458 0,631 6,3 0,311 1/10 20 19,7M4 0,149 0,287 0,421 0,582 5,5 0,400 1/10 30 68M5 0,170 0,300 0,447 0,600 6,6 0,413 1/15 34,3M6 0,152 0,316 0,450 0,600 7,5 0,373 1/8 19,84 19,6M7 0,116 0,280 0,434 0,549 7,47 0,289 1/20 41 43,18

Vemos por ejemplo que no hay gran diferencia entre los resultados de las absorbancias de cada mesa, lo cual nos haría pensar que no existió problema alguno en cuanto al manejo de los instrumentos al momento de preparar la batería de tubos.

Si observamos los resultados de los vemos que la mesa 5 y la mesa 7

presentan valores que difieren de las demás mesas, también si observamos los resultados de la dilución vemos que la mesa 5 y 7 presentan valores que se alejan de las otras mesas, y tanto la mesa 1, 4, 5, 7 presentan como [MP] grafica y [MP] analítica valores altamente alejados de lo que se espera, por tanto se podría decir que hubo un mal análisis y un mal cálculo.Observamos también que las mesas 2, 3, 6 obtuvieron valores que sí serían los esperados. Tanto en la [MP] grafica como en la [MP] analítica

CONCLUSIONES

1.- Para ser exactos se utilizó el papel milimetrado para poder ajustar la recta de absorbancia.

2.- Al graficar en las 3 longitudes de onda se halló que la longitud de onda óptima es 525nm, concluyendo que los datos obtenidos experimentalmente se encuentran dentro de los datos teóricos.

3.- Los resultados de la concentración de la muestra problema mediante los métodos gráfico (19.84) y analítico (19.572) se muestran aproximados, lo que indica un proceso llevado a cabo de manera correcta.

Aquí los resultados finales de las demas mesas en el laboratorio como nos daremos cuenta en algunas mesas las lecturas no coinsidian ya sea por defecto en el momento de la dilucion o por mal manejo a la hora de hallar las concentracio

CUESTIONARIO

1. Hallar la longitud óptima de lecturaLongitud de onda óptima: 525 nm.

2. Mencione la concentración de la MP por ambos métodos (gráfico y analítico). ¿Por qué son diferentes? Explique

[MP] gráfico=19.84 [MP] analítico=19.572

Son diferentes porque el método gráfico interpola la absorbancia en la curva de calibración para multiplicarlo por el factor de dilución (2.48x8); en cambio en el método analítico se multiplica la absorbancia por el Fc promedio y el factor de dilución (0.373x6.559x8), empleando estos últimos datos más exactos; es decir que existe un margen de error mínimo que se da, el cual de no ser así y obtener como resultado un margen de error no mínimo sería una práctica equívoca.

3.- Hallar los %T cuando se conoce las absorbancias: A1 = 0.01 A2 = 0.1 Hallar la Absorbancia cuando se conoce el % T siguientes: 1% T, 10 %T.

A1 = 0,01 -> %T = 97,72 A2 = 0,1 -> %T = 79,43 1% T -> A = 2 10% T -> A = 1

4.- Una solución coloreada presenta una absorbancia de 0.450 en una cubeta de 2 cm. Hallar la absorbancia cuando la sustancia se ha diluido 4 veces y se lee en una cubeta de 1 cm.

A = E x L x C 0.450 = E x 2 x 1 0.225 = E

Cuando no nos determinan la concentración molar se tiene q tener en cuenta q el valor referencial es 1

A = 2 – Log % TLog%T = 2 - A

%T =

Para hallar la absorbancia diluida 4 veces se tiene q tener que la dilución final fue de 1/5. Entonces: A = E x L x C A = 0.225 x 1 x 1/5 A = 0.04

BILIOGRAFÍA

http://es.slideshare.net/juandavidlopeznorena/fotocolorimetria.

http://es.slideshare.net/noheding/fotocolorimetria-42075186.

http://roble.pntic.mec.es/~mbedmar/iesao/quimica/puntodel.htm.