-
GU
A
DE
T
RA
BA
JOS
P
R
CT
ICO
S D
E
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE NUTRICIN HUMANA
Propio de: __________________________________________
2015 I
Blgo. Hilver Charca Mamani
M.Sc. Dante Choquehuanca Panclas
-
P R E S E N T A C I N
La presente gua de prcticas del curso de Biologa Celular y
Molecular tiene por objeto lo
siguiente:
Ilustrar de manera prctica los temas vistos en clases
tericas.
Introducir al estudiante al manejo de equipos bsicos en el
laboratorio.
Brindar al estudiante una visin de las tcnicas elementales de
laboratorio.
Valorar la importancia de tomar datos cualitativos y
cuantitativos en la investigacin de los
problemas Biolgicos.
Las primeras dos prcticas brindan los conceptos bsicos que
servirn para que el estudiante
enfoque el resto de las prcticas, tomando en cuenta los
siguientes aspectos fundamentales:
Aplicar la base de la metodologa cientfica para comprender su
importancia, contenido y
procedimiento.
Conocer los fundamentos bsicos del microscopio compuesto.
Familiarizar al estudiante con el manejo adecuado del
microscopio, puesto que constituye el
equipo de laboratorio ms empleado durante las prcticas.
En las siguientes sesiones prcticas de laboratorio se dan a
conocer el fundamento de cada
experimento propuesto, ya que se ha observado en muchos casos
que el estudiante utiliza la gua
de laboratorio como una "receta", sin percibir el fenmeno ni
relacionarlo con lo estudiado en la
teora, particularmente en las prcticas que se refieren al
"reconocimiento de los compuestos
orgnicos de las clulas.
Los cuestionarios tienen la finalidad de complementar los
conocimientos obtenidos en las
prcticas de laboratorio, muchas preguntas son problemas para
resolver empleando los conceptos
de la qumica elemental, esto para ampliar de alguna manera la
visin que tiene el estudiante que
se est iniciando en las ciencias biolgicas. Otras preguntas se
refieren a la bsqueda de
informacin, para ello se sugieren textos citados en diversos
libros, en algunos casos se ha
mencionado literatura ms especializada, teniendo siempre en
cuenta la limitacin de los
conocimientos que tiene un alumno que est llevando un curso de
introduccin.
LOS AUTORES
-
INSTRUCCIONES GENERALES
El laboratorio de Biologa Celular es el lugar de trabajo para la
experimentacin y por lo tanto, se requieren
condiciones fundamentales como: disciplina, orden y limpieza; ya
que se trabaja con material biolgico en
los cuales pueden estar presentes microorganismos o productos
que son capaces de producir
enfermedades. En otras ocasiones, se utilizan reactivos
corrosivos que pueden causar dao a la piel o a su
ropa, por tales motivos la disciplina, el orden y la limpieza
ofrecen mayores posibilidades de xito en la
experimentacin.
El estudiante que realiza las prcticas del curso debe:
1. Habituarse a trabajos sistemticos implicando: seguridad,
orden, cuidado, rapidez, limpieza,
pulcritud y precisin.
2. Desarrollar la capacidad de resolver problemas de
laboratorio.
3. Familiarizarse con tcnicas de trabajos cientficos.
4. Juzgar el resultado de sus investigaciones en forma lgica,
como medio de obtener seguridad en las
conclusiones.
5. Formarse conscientemente para percibir el progreso y los
descubrimientos de las ciencias naturales
como medio de fortalecer la paz y el desarrollo de la
humanidad.
CONDUCTA EN EL LABORATORIO
1. El comportamiento del estudiante en el laboratorio es menos
formal que en el saln de clase, sin
embargo no se permite jugar, silbar, cantar, conversar, ingerir
alimentos, bebidas y fumar dentro
del laboratorio.
2. No molestar a sus compaeros para resolver alguna inquietud,
ms bien solicitar al profesor.
3. Leer cuidadosamente el procedimiento a seguir y analizar cada
uno de los pasos, antes de iniciar la
prctica.
4. Usar mandil o vestuario de laboratorio durante el desarrollo
de la prctica.
5. Llevar una franela por equipo para secar inmediatamente
cualquier salpicadura de sustancias que
se derramen.
6. Cerciorarse de tener el material completo para la
experimentacin, en caso de material biolgico
perecedero, llevarlo el da que se va a llevar a cabo la prctica,
previa indicacin del laboratorista.
7. Antes de usar los materiales y aparatos, deben limpiarse y
secarse con cuidado. Al finalizar la
prctica, deben entregarse limpios, secos y ordenados.
8. Llevar en forma individual un cuaderno de hojas blancas para
las anotaciones durante el desarrollo
de la prctica, una caja de colores para iluminar las
observaciones.
9. No jugar con el instrumental y aparatos usados en el
laboratorio, por que ciertos instrumentos no
estn esterilizados y los aparatos (como el microscopio) son
instrumentos delicados y de precisin.
10. Si no sabes utilizar algn aparato o instrumento, consulta
con el laboratorista o tu profesor.
11. Antes de abandonar el laboratorio el estudiante debe
dejar:
Los materiales y equipos bien recogidos y en orden.
Devolver los equipos y materiales.
Dejar la mesa de trabajo limpia tal como la encontr.
12. Despus de esto comunicar al profesor para la inspeccin
respectiva.
-
PRCTICA N 1
LA OBSERVACIN Y EL MTODO CIENTFICO
I. INTRODUCCIN
La ciencia es un conjunto de conocimientos obtenidos mediante un
mtodo de razonamientos
lgicos. La ciencia tiene un contenido y un procedimiento. El
contenido es la materia con la que trata, son
las generalizaciones que la comunidad cientfica reconoce como
vlidas, por ejemplo las leyes de Mendel, la
teora celular la ley de la gravedad, etc. El procedimiento es el
mtodo cientfico, mediante el cual se lleg
a las generalizaciones, y se basa en la experimentacin.
La lgica inductiva: Implica llegar a una conclusin probable
basndose en muchos hechos
particulares (de lo particular a lo general).
La lgica deductiva: Parte de una generalizacin para concluir en
hechos particulares.
Por el mtodo inductivo hemos llegado a una generalizacin, de
esta generalizacin se puede hacer
una prediccin.
De esta manera vemos que en la solucin del problema hay un juego
constante entre la lgica
inductiva y deductiva.
La hiptesis: Es la posible respuesta a un problema, no todos los
problemas presentan hiptesis
como por ejemplo la descripcin anatmica de un animal o de una
planta nuevas para la ciencia. Cuando
una hiptesis se demuestra que es verdadera, alcanza la categora
de teora. Si la teora a sido verificada
varias veces y tiene una amplia aplicacin en la ciencia, puede
convertirse en un principio o ley.
El mtodo cientfico: Es el conjunto de acciones planificadas y
dirigidas que se realizan
ordenadamente para obtener la informacin que permita comprender
un fenmeno de la naturaleza. Nos
ayuda a entender lo que observamos, sirve para probar si una
hiptesis es verdadera o falsa y consiste en
una secuencia de pasos lgicos.
La observacin: En este caso, nos conduce a observar
cientficamente o percibir, detectar, mirar
precisa y detenidamente. Cuando se observa cientficamente un
objeto o un fenmeno, se debe hacer con
objetividad y tratando de abarcar todas las dimensiones de lo
observado. Al observar lo hacemos con un
orden y en forma detallada. He ah la diferencia entre ver y
observar: se observa con disciplina y rigurosidad
y se ve con desorden.
Identificacin: Identificar es reconocer, encontrar o hallar lo
buscado. Para identificar lo buscado
debemos realizar dos grandes acciones a partir de la observacin:
describir y analizar.
Descripcin: Describir implica detectar y reunir la mayor
cantidad de caractersticas de lo
observado. Para describir usamos todos los sentidos: nuestra
vista, odo, gusto, olfato y tacto.
Anlisis: Cuando queremos descubrir an ms caractersticas de lo
observado recurrimos al
anlisis, que consiste en descomponer en muchas partes lo que se
est observando, para as conseguir
caractersticas ocultas o de ms difcil acceso. Analizar es
describir en profundidad y con mayor detalle lo
observado.
Resultados: Los resultados son el conjunto de datos cualitativos
(de descripcin) y/o cuantitativos
(matemticos) que se obtienen de un objeto o fenmeno observado.
Para obtener datos cuantitativos es
necesario realizar una medicin.
-
Informe de investigacin: Todo cientfico, una vez que realiza una
investigacin de observacin,
debe comunicar por escrito sus resultados en lo que se conoce
como informe de investigacin
comunicado cientfico. En l se presentan cada uno de los pasos
que realiz para conseguir sus
resultados. El anlisis de estos se respaldan y fundamentan con
una discusin y conclusin.
II. OBJETIVOS
1. Aplicar la metodologa cientfica a fin de despertar en el
estudiante que todo trabajo cientfico que
se haga debe de partir a travs de la observacin aplicativa.
2. Elaborar el informe final.
III. MATERIALES
Una hoja de espinaca
Un vaso de precipitado con agua
Una balanza de precisin
Una regla milimtrica
Un insecto
Una pinza
Un bistur
Una tijera
Otros materiales que vea por
conveniente usar el estudiante
IV. PROCEDIMIENTO
Con el uso de todos los sentidos y los materiales arriba
sealados entre otros, recolecte 30 observaciones
entre cualitativas(A) y cuantitativas(B) de una hoja de Espinaca
y 30 observaciones entre cualitativas(A) y
cuantitativas(B) de un insecto.
N OBSERVACIONES DE LA HOJA DE ESPINACA A/B
01
02
03
04
05
06
07
08
09
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
-
22
23
24
25
26
27
28
29
30
N OBSERVACIONES DEL INSECTO: ( ) A/B
01
02
03
04
05
06
07
08
09
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
-
INFORME FINAL
El informe final debe tener la siguiente estructura:
1. Titulo: Debe ser atractivo y sugerente y dar cuenta del
estudio que ha realizado. El ttulo del informe va
acompaado de la identificacin del grupo de trabajo (autores), el
cual incluye: Nombre de la universidad, la
Facultad, el curso, el nombre del profesor y autor.
2. Resumen: Debe contener introduccin, materiales y mtodos,
resultados, discusin y conclusin; no es necesario
explicarlos, debe ser breve y estar escrita en espaol y en ingls
(Abstract), y al final de cada una debe consignar
las Palabras Clave tambin en ambos idiomas segn corresponda.
3. Introduccin: Debe definir la importancia, antecedentes,
justificacin, hiptesis y el problema.
4. Objetivos: Debern ser claros y aplicables.
- Objetivo General
- Objetivos Especficos
5. Material y mtodo: En esta seccin se debe sealar claramente
los materiales y elementos que se usaron en el
trabajo y cmo se usaron, identificando adems el lugar de
estudio. Los materiales debern ser agrupados en:
Material biolgico, materiales de vidrio, reactivos, equipos y
otros. Debe contener el nombre o tcnica del mtodo
aplicado, se deben describir los procedimientos y el diseo
estadstico. Se pueden utilizar grficos o tablas.
6. Resultados: Deben ser presentados en forma clara y resumida,
de manera que los lectores recojan con facilidad los
datos. Es conveniente usar tablas, grficos y esquemas que
sintetizan y organizan la informacin.
7. Discusin: Estar centrada a la interpretacin de los datos en
el anlisis realizado. Explicar los resultados
obtenidos ampliando la informacin, expresando inferencias
adicionales de los hallazgos de la investigacin.
Relacionar y confrontar los resultados del trabajo con
investigaciones previas.
8. Conclusiones: Las conclusiones tienen relacin directa con el
trabajo realizado y da cuenta de los resultados
obtenidos. Deben ser claras y cortas, en relacin a la hiptesis
planteada. Deben estar referidas segn el nmero
de objetivos sealados, en caso de trabajos experimentales.
9. Recomendacin: Plantea el camino que pueda seguir la
investigacin para complementar el trabajo realizado.
Qu hara a futuro para profundizar o complementar este estudio
biolgico?
10. Referencia Bibliogrfica:
BIBLIOGRAFA - Estilo APA:
Libro: Autor, A. A. (ao) Ttulo de la obra. Lugar de publicacin:
Editor o casa publicadora.
Revista: Autor, A. A. (ao) Ttulo del artculo. Ttulo de la
revista. Volumen, pginas.
- Estilo VANCOUVER: Libros:
Apellidos, nombres. Ttulo. Ciudad de impresin: Editorial; ao de
publicacin. Revistas:
Apellidos, nombres. Ttulo del artculo. Nombre de la revista ao;
volumen (nmero del fascculo): nmero de pginas del artculo separado
por guin o raya.
WEB GRAFA Si se trata de un libro o artculo cientfico de una
revista, citar igual que en el ejemplo anterior, agregando
[revista
virtual o internet]. Al final de la cita, consignar: disponible
en lnea o se encuentra en o hallado en; y otras formas
similares.
-
TTULO
RESUMEN
ABSTRACT
INTRODUCCIN
-
MATERIAL Y MTODO
RESULTADOS Y DISCUSIN
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
REFERENCIA BIBLIOGRFICA
-
ANEXO 1
MTODO CIENTFICO
Lee con atencin
EL NAUFRAGIO
Imaginen que van con sus amigos de vacaciones en un barco, y
repentinamente en medio del Ocano el clima cambia, el mar entra en
picada e irremediablemente el barco se hunde. Con mucho esfuerzo
ustedes salvan la vida y logran llegar a tierra firme en una isla
desconocida, con solo la ropa que traen encima.
Decidan qu van a hacer para sobrevivir y argumenten las
razones de estas decisiones.
Les presentamos algunas preguntas para organizar sus ideas: 1.-
De qu se van a alimentar? 2.- Cmo se van a proteger de las
inclemencias del tiempo? 3.- Qu lquidos van a beber? 4.- Cmo se van
a proteger del ataque de depredadores? 5.- Cmo van a buscar
ayuda?
-
ANEXO 2
Lee con atencin
UNA HISTORIA DE AMOR Soy un chico solitario, sin mucha
experiencia en el amor y quiero compartir con ustedes esta pequea
historia. Un da estando en clases, escuch fuera del saln una
hermosa voz que me cautiv; pens que esa voz no poda pertenecer sino
a una linda chica y enseguida me propuse saber quin era ella.
Pasaba por los pasillos de la escuela y cerraba los ojos para
concentrarme e identificarla y un da mi sueo se cumpli, la conoc y
ella era la mujer de mi vida. Se lo cont a mis mejores amigos,
algunos de los cuales ya tenan experiencia en conquistar chicas y
recib muchos consejos de estos expertos: alguien me dijo que le
aventara pequeas piedras para llamar su atencin, otro me sugiri que
tena una amiga en el saln de ella y que me la poda presentar, uno
ms me dijo que mejor consiguiera su facebook y le escribiera
mensajes amorosos en su muro en forma annima y otro ms me dijo que
enviarle flores siempre daba un excelente resultado. Me tom tiempo
tomar la decisin y al final opt por las flores. Investigu cuales
eran las ms apropiadas para una chica como ella, el tipo, el color,
la cantidad, la presentacin y por supuesto la tarjeta, donde escrib
con mi mejor letra y sin faltas de ortografa, un hermoso mensaje y
por supuesto le deca mi nombre y el grupo.
El gran da lleg, ese da fui muy bien arreglado a la escuela y un
buen amigo mo se ofreci para entregarle las flores en mi nombre; yo
desde lejos observaba emocionado su reaccin y me dispuse a hacerme
presente en cuanto fuera oportuno. Vi que ella recibi las flores
con curiosidad, las tom en sus bellas manos, abri la
tarjeta y escribi algo en ella, devolvindosela a mi amigo con
una encantadora sonrisa, junto con las flores. Yo no saba qu haba
pasado, hasta que le su nota: Las flores son muy bellas, pero lo
son ms si no son arrancadas de su sitio de origen. Pertenezco a una
red social de proteccin a la vida y esto incluye no cortar flores
con fines de ornato Admito que no fue agradable lo que sucedi, pero
me dej una leccin que no olvidar jams. Ahora, despus de algunos aos
ya he adquirido experiencia en el amor y a ella la recuerdo an con
afecto.
-
ANEXO 3
Tomando en cuenta la
investigacin que realizaste sobre
el mtodo cientfico y este
esquema, identifica en la Historia
de Amor, los diferentes pasos del
mtodo cientfico que el
protagonista puso en juego, para
intentar conquistar a su amada
y con esa informacin
completa el cuadro que se
presenta.
Pasos del Mtodo Cientfico
Ideas del Texto
OBSERVACIN
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
HIPTESIS
EXPERIMENTACIN
VERIFICACIN DE LA HIPTESIS
CONCLUSIONES
-
ANEXO 4
En el siguiente cuadro, indica qu RAMAS DE LA BIOLOGA
participaran en la solucin de los problemas
planteados.
Caso
Rama(s) de la Biologa que intervienen para la
solucin 1.- En una empresa que elabora jugos y nctares se
present el problema de la presencia de un hongo dentro de las
botellas de una bebida refrescante, afectando con esto la calidad
del producto y ocasionando grandes prdidas econmicas.
2.-El oso panda se encuentra en peligro de extincin ya que son
presa de cacera para exhibirse como trofeos o por su piel, tambin
ha influido en su extincin, el que se alimentan de bamb y muchos
bosques de bambes han sido destruidos para convertirlos en campos
de cultivo. Actualmente existen aproximadamente slo 1,000
ejemplares en libertad y unos cuantos en algunos zoolgicos. El
problema es que como los pandas son tmidos, no se reproducen
fcilmente y otro problema es que son muy vulnerables cuando nacen.
http://www.esmas.com/ninos/reportajes/537744.html
3.- Influenza Humana (A H1N1) es un padecimiento respiratorio,
que se origina como una variante del virus de la influenza tipo A
que afect originalmente al cerdo. La pandemia de gripe A (H1N1),
que se detecto en 2009, en Mxico el 17 de marzo del mismo ao,
afortunadamente se logr controlar, concientizando a la ciudadana
sobre las medidas preventivas para evitar su contagio.
http://es.wikipedia.org/wiki/Pandemia_de_gripe_A_%28H1N1%29_de_2009
4.- Un equipo internacional de cientficos de la Universidad de
Newcastle (Inglaterra) ha resuelto el enigma del envejecimiento de
las clulas, lo que permitir buscar nuevas frmulas para prevenirlo.
Los cientficos, encabezados por el alemn Thomas von Zglinicki, han
descubierto el papel crucial que desempean en este proceso las
mitocondrias, los orgnulos encargados de suministrar la mayor parte
de la energa necesaria para la actividad celular. Cuando se
registra un deterioro en el ADN de una clula, sta enva una seal a
las mitocondrias para que generen molculas radicales libres que
llevan a la clula a autodestruirse o a dejar de dividirse, sealan.
La principal novedad del estudio es haber descubierto los procesos
especficos que regulan la reaccin celular ante el dao molecular que
subyace al proceso de envejecimiento, segn Kirkwood. Lo que hemos
hecho es una identificacin precisa del fallo. Ahora debemos
aprovechar ese conocimiento. Ello llevar tiempo, pero la buena
noticia es que hemos empezado, seal.
http://www.prensalatinalasvegas.com/2010-02/16-5443.htm
5.- La famosa planta decorativa llamada Diffembachia de la
variedad camila, que en apariencia es inofensiva, en realidad es
uno de los venenos y txicos ms poderosos de la naturaleza. La savia
que se concentra en el tallo y cerca del peciolo, ha sido usada
tradicionalmente por indgenas amaznicos para envenenar la punta de
sus dardos de caza. El simple contacto de la mano sobre los ojos
luego de su manipulacin, produce ceguera temporal. Puede causar la
muerte de un beb en poco menos de diez segundos y regularmente
asfixia en poco menos de veinte minutos a una persona adulta. Nunca
se debe manipular sin guantes de carnaza o caucho y en todo caso
con extrema precaucin.
http://foro.univision.com/univision/board/message?board.id=decoracion&message.id=228341
Imgenes tomadas de:
http://www.google.com.mx/search?q=oso+panda&rls=com.microsoft:es-419:%7Breferrer:source?%7D&ie=UTF-8&oe=UTF-
8&sourceid=ie7&rlz=1I7RNRN_es&redir_esc=&ei=zibMTsqQNYWvsQKiq53eDg
http://www.google.com.mx/search?q=DIFEMBACHIA&rls=com.microsoft:es-419:%7Breferrer:source?%7D&ie=UTF-8&oe=UTF-
8&sourceid=ie7&rlz=1I7RNRN_es&redir_esc=&ei=9SbMTuzhNoW3sQLu1vTqDg
Fuente:
Gua Didctica. Sur Sureste de la asignatura de Biologa I. Colegio
de Bachilleres. Mxico. RIEMS, marzo 2013.
-
PRCTICA N 2
CONOCIMIENTO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
I. INTRODUCCIN
Algunos seres vivos pueden observarse a simple vista. Sin
embargo, existen organismos tan
pequeos (alrededor de 0.1 mm) que a simple vista no los
percibimos, por lo que se recurre a instrumentos
pticos como la lupa o el microscopio ya sea para organismos
pequeos de menos de 0.1 mm o partes de
organismos; y adems, ayuda a superar esta limitacin.
El inventor del primer microscopio fue el holands Zacaras
Janssen en 1590. En el siglo XVII con el
aporte de A. Van Leewenhook (1673 1723). El nombre del
microscopio deriva de los vocablos griegos:
micros, pequeo y skopeo, examinar, y se debe a Jean Faber, quien
en 1624 aplic este trmino para
designar a un microscopio compuesto por un objetivo y un ocular,
aunque actualmente en la prctica se
designa tambin como microscopio simple, a las lupas o lunas de
aumento.
Entre los microscopios compuestos se tiene al microscopio ptico,
estereoscopio, de contraste de
fases, polarizado, de luz ultravioleta, ultramicroscopio,
microscopio electrnico de transferencia y barrido,
etc.
Esta vez nos ocuparemos del microscopio ptico.
II. OBJETIVOS
Identificar las partes y funcionamiento del microscopio ptico
compuesto.
Obtener la destreza para el manejo del microscopio, as como la
importancia de su uso.
Que el alumno sepa hacer preparados en fresco; fciles de ser
observados en el microscopio
compuesto.
III. MATERIALES
Microscopio compuesto
Lminas porta y cubre objetos
Pinzas
Estiletes
Tijeras
Goteros de agua destilada
Papel lente
Recorte de peridico
Hebras de lana y algodn.
IV. PROCEDIMIENTO
A.- RECONOCIMIENTO DEL MICROSCOPIO:
a) Sistema de soporte:
1. Pie o base del microscopio: Es un dispositivo metlico pesado
en forma de cuadrada o circular,
la funcin es dar estabilidad al microscopio y soporte a las dems
partes que lo integran.
2. Platina: es una placa cuadrada con un orificio en el centro
por donde pasa la luz, posee a su vez
un carro mvil con una pinza que sujeta la muestra permitiendo su
movilizacin para la
observacin.
3. Brazo: Es el soporte que va desde la base hasta el sistema
ptico, es el sostn.
b) Sistema ptico:
-
14
4. Oculares: Son lentes que se encuentran en el cabezal del
microscopio, separados por un
diafragma que permite el movimiento de estos para obtener una
imagen con mejor calidad y
comodidad de visin. En la parte exterior que sostiene el lente
encontramos una inscripcin
numrica de 10X o 16X que indica el aumento del ocular. La
denominacin de ocular se debe a
que el ojo del observador se coloca en este lente.
5. Objetivos: (secos dbiles: 5X y 10 X, seco fuerte 40 X e
inmersin 100X): es la parte ms
importante del microscopio, se conforman por varias lentes que
corrigen las aberraciones, se
encuentran en la parte baja del cabezal sujetos a un carrusel o
revolver que permite el cambio
de objetivo a otro. El aumento de cada objetivo se encuentra
inscrito en la parte exterior del
mismo que son los nmeros de mayor tamao 5X, 10X, 40X y 100X,
este ltimo solo se usa con
aceite de inmersin y se le reconoce por llevar una banda o lnea
negra cerca al borde inferior. A
estos lentes se les denomina objetivos porque se ubican cerca
del objeto a observar.
c) Sistema de Iluminacin:
6. Fuente luminosa: Es la luz proporcionada por un foco ubicado
en la base del microscopio, la cual
pasa a travs de la platina proporcionando iluminacin a la
muestra.
7. Condensador: Es un sistema de lentes con gran abertura; que
se encuentra entre la platina y la
fuente de iluminacin; pude subir o bajar dependiendo del
objetivo que se est utilizando.
8. Diafragma: Se encuentra situado debajo de la platina y
permite regular la cantidad de luz que
pasa por el condensador.
d) Sistema de ajuste:
9. Tornillo macromtrico o de enfoque rpido: Se utiliza para
conseguir un ajuste aproximado de
la imagen a observar.
10. Tornillo micromtrico o de ajuste fino: su desplazamiento es
mucho ms lento y permite
enfocar claramente nuestra imagen.
11. Tornillo carro mvil: Se utiliza para desplazar la lmina
portaobjetos sobre la platina hacia los
lados, hacia atrs y hacia delante.
Indique las partes correspondientes al microscopio
siguiente:
-
15
B. PREPARACIN DE LMINAS
a. Con la ayuda de la tijera corte una letra e de la hoja de
peridico.
b. Toma una lmina portaobjetos solo por los bordes y lmpialo
bien con un pedazo de papel lente.
c. Con el gotero vierte una gota de agua en el centro de la
lmina, luego coloque la letra e en la
gota de agua teniendo presente que quede en posicin de lectura,
ponga la laminilla
cubreobjetos sobre la muestra. De esta manera se ha preparado
una muestra hmeda, haga lo
mismo con una hebra de lana y algodn.
d. A continuacin las muestras sern utilizadas para la
visualizacin a travs del microscopio.
C. ENFOQUE Y USO DEL MICROSCOPIO
1. Coloque el microscopio sobre la mesa, de tal manera que el o
los lentes oculares queden frente
a usted; con mucho cuidado conecte el cable en el tomacorriente
de su respectiva mesa,
encienda el interruptor de la lmpara y gire la perilla de
intensidad en tal sentido que vea que la
lmpara de luz se encienda.
2. Con la ayuda del revolver coloque el lente de menor aumento
en posicin frontal al lente del
condensador ubicado al centro de la platina.
3. Observe a travs del ocular viendo que el campo visual este
iluminado y uniforme, antes de
colocar la muestra, abra y cierre el diafragma, cercirese que la
platina est descendida.
4. Coloque la lmina previamente preparada sobre la platina,
asegurndola con las pinzas y centre
con las mismas de tal manera que la muestra quede iluminada.
5. Observando a travs del ocular enfoque la muestra con la ayuda
del tornillo macromtrico. Este
tornillo permite el desplazamiento de la platina para la
observacin de la muestra en el campo
visual.
6. Proceda a afinar la focalizacin de la muestra con ayuda del
tornillo micromtrico.
7. Para amplificar la imagen, gire el revlver para ubicar el
siguiente objetivo en posicin, tenga
presente que los aumentos son graduales. El cambio de Objetivo o
de preparacin exige un
nuevo control del diafragma.
8. Esquematice lo observado:
Letra e Hebra de: ( )Lana; ( )algodn Otro:
..................................
Ejercicios
Mirando por el ocular, traslade la muestra hacia la izquierda o
hacia la derecha y observe hacia donde aparentemente se desplaza la
imagen.
-
16
Abra y cierre completamente el diafragma, observe qu ocurre con
el campo visual donde se encuentra
la imagen.
Cambie la distancia focal, girando el tornillo macromtrico,
observe que ocurre con la imagen
Cambie al objetivo de mayor aumento, describa las diferencias en
el campo visual.
D. CAMPO VISUAL DEL MICROSCOPIO
Se llama as al campo circular iluminado como una pantalla cuando
se observa a travs de los oculares
del microscopio.
E. AUMENTO QUE PROPORCIONA EL MICROSCOPIO
Para saber cunto de aumento posee un microscopio, basta
multiplicar el aumento dado por el ocular,
por el aumento del objetivo utilizado.
Ejemplo:
Si el ocular es de 16X; y el objetivo es de 40X, entonces
tendremos: 16 X 40 = 640 aumentos 640 X
F. PODER DE RESOLUCIN DEL MICROSCOPIO
En el microscopio ptico, as como en cualquier otro tipo de
microscopio, el poder de resolucin es la
capacidad del instrumento para dar imgenes distintas de puntos
situados muy cerca uno del otro en el
objeto; este poder depende de la longitud de onda y de la
apertura numrica del lente objetivo.
El lmite de resolucin de define como la distancia que debe
existir entre dos puntos muy prximos
entre si para que puedan ser discriminados como tales.
Frmula para encontrar el lmite de resolucin = (0.061 X Longitud
de Onda)
AN
El lmite de resolucin es la inversa del poder de resolucin, de
modo que cuanto mayor sea el poder de
resolucin, menor ser el lmite de resolucin.
-
17
G. CUIDADOS QUE SE DEBEN TENER CON EL MICROSCOPIO:
1. Mantenga el microscopio limpio y en lugar adecuado.
2. Transporte el microscopio, con la mano derecha agarrando al
brazo y la mano izquierda debajo
de la base, nunca por los tornillos macromtricos ni por la
platina.
3. Para focalizar la preparacin, mueva la platina siempre de
abajo hacia arriba.
4. No guarde reactivos voltiles en el mismo lugar donde se
guarda el microscopio.
5. No desmonte los lentes oculares ni los objetivos.
6. Para limpiar los oculares y objetivos use siempre el papel
lente, no use pauelos ni otro tipo de
papel (higinico o toalla).
REFERENCIA BIBLIOGRFICA
1. Bernis, M. 1998. Atlas de Microscopa. Mxico D.F. Segunda
edicin. Editorial Fernando Aldape Barrera. Pgs. 95-1072.
2. Coll, J. 2000. Experimentos con el microscopio. Mxico D.F.
Primera edicin. Ediciones Omega S.A. Pgs. 63-653.
3. De Robertis E, Hib J. y De Robertis. 2003. Biologa Celular y
Molecular. Duodcima Edicin. Editorial El Ateneo. Buenos Aires -
Argentina. 469 pp.
4. Karp G. Biologa Celular y Molecular: Conceptos y Experimentos
4 ed. Mxico: McGraw-Hill; 2005.
5. Lazo, F. 2012. Biologa Celular- Gua de trabajos prcticos de
Biologa Celular FCCBB-UNMSM. 6. Lpez, C. 1987.Microscopia en el
laboratorio. Xalapa. Facultad de Bioanlisis, U. V. Pgs. 10-214.
-
18
CUESTIONARIO:
1) Cul es la diferencia entre un microscopio simple y uno
compuesto?
2) Qu importancia tiene el uso del microscopio en la biologa
celular?
3) Encuentre el lmite de resolucin de los diferentes objetivos
del microscopio con el que est
trabajando, empleando luz con = 5 000 amstrong.
4) Enumere los diferentes tipos de microscopios.
5) Defina Brevemente:
Imagen real
................................................................................................................................................
Lente convergente
................................................................................................................................................
Imagen virtual
................................................................................................................................................
Longitud de onda
................................................................................................................................................
Lmite de resolucin
................................................................................................................................................
Poder de resolucin
................................................................................................................................................
-
19
PRCTICA N 3
RECONOCIMIENTO DE LOS COMPUESTOS ORGNICOS DE LAS CLULAS
INTRODUCCIN:
Los principales compuestos orgnicos que forman parte de la
estructura de
clulas, son responsables de las funciones del protoplasma y
entre ellos se tiene a los CARBOHIDRATOS,
PROTENAS, LPIDOS y CIDOS NUCLEICOS.
A. PRIMERA SESIN: CARBOHIDRATOS
I. INTRODUCCIN:
LOS CARBOHIDRATOS O GLCIDOS, llamados as porque muchos
contienen
adems del carbono; hidrgeno y oxgeno en la misma proporcin que
el agua, estn considerados
como una funcin mixta: alcohol-aldehdo o alcohol-cetona debido a
que contienen en su molcula un
grupo carbonilo (aldehdo o cetona) adicionado a varios grupos
alcohlicos o bien pueden originarlos
por hidrlisis.
Se presentan desde molculas muy simples como los es, hasta
aquellas gigantes macromolculas, como
los almidones y la celulosa, formando parte de los
constituyentes de la clula, libres o ligadas fsica o
qumicamente a protenas o grasas.
En algunos tejidos son menos del 1% del peso seco de la clula,
mientras que en otros estn en un 15%
(por ejemplo: el hgado). Sin embargo, los carbohidratos son los
compuestos orgnicos que ms
abundan en la naturaleza y se encuentran en las plantas en mayor
cantidad que en los animales. Estos
dos importantes hechos son fciles de explicar, ya que son las
plantas verdes las que sintetizan la
mayora de los carbohidratos durante el proceso de la
fotosntesis. Se clasifican en
OSAS: Son glcidos simples que no se descomponen por accin de
cidos o enzimas, por lo cual se les
llama; MONOSACARIDOS O AZCARES SIMPLES, pueden tener desde 3
hasta 10 tomos de carbono.
Ejemplos: el gliceraldehido CH2OH-CHO-CHO, la ribosa C5H10O5 y
la muy conocida glucosa C6H12O6, el
primer producto de la fotosntesis.
OSIDOS: Son glcidos hidrosolubles, es decir, se pueden
descomponer en dos o ms molculas de
monosacridos, por accin de cidos fuertes o enzimas. Son
HOLSIDOS, si se descomponen solamente
en monosacridos, y HETERSIDOS cuando se descomponen en
monosacridos y otros compuestos.
Entre los holsidos se encuentran algunos compuestos de
importancia biolgica:
a).- Los Oligosacridos: Que por hidrlisis dan 4,3 o 2
monosacridos, por ejemplo: un disacrido muy
conocido es la sacarosa o de la caa: C12H22O11.
b).- Los Polisacridos: Como el almidn y la celulosa
(C6H10O5)n
Desde el punto de vista fisiolgico los carbohidratos son los
primeros productos de la fotosntesis,
proporcionan energa para las actividades celulares mediante su
desintegracin en la respiracin y
adems intervienen como materiales esenciales en los procesos de
biosntesis, para la obtencin de las
grasas, cidos nucleicos y protenas.
-
20
II. OBJETIVOS:
1.- Conocer la composicin qumica de los carbohidratos.
2.- Identificar los azcares reconociendo su presencia en las
clulas.
III. MATERIALES: REACTIVOS Y MATERIAL DE ESTUDIO
1.- Gradilla con 9 tubos de ensayo. 1.- Sustancias de glucosa y
almidn.
2.- Mechero de alcohol, pinzas. 2.- Solucin de Benedict y
Lugol.
3.- Esptula, placas petri, frascos 3.- Muestras de Papa, Pan, ,
Maz,
Erlenmeyer. Gelatina, Arroz, Naranja, Manzana,
Pltano, Limn, Pazas, miel y Leche.
IV. PROCEDIMIENTOS:
1.- RECONOCIMIENTO DE LA GLUCOSA (azcares reductoras) POR LA
REACCIN DE BENEDICT
El reactivo de Benedict es un indicador para la glucosa. Para
saber si una sustancia la contiene, se coloca
la solucin a investigar en un tubo de ensayo y se aade el
reactivo de Benedict y agua destilada hasta
alcanzar aproximadamente los 1/4 de capacidad del tubo, luego se
calienta la mezcla hasta que hierva.
Si la mezcla contiene glucosa se producirn una serie de cambios
en el color de la solucin originalmente
azul hasta llegar a un tono final: verde amarillo, o rojo
anaranjado, segn la menor o mayor cantidad de
glucosa contenida en la sustancia problema.
1.- Toma 1 tubos de ensayo. A uno, agrgale agua destilada hasta
una cuarta parte del tubo, y 10 a 15
gotas de reactivo Benedict, luego
2.- Toma otro tubo de ensayo y agrgale una pizca de glucosa,
agua destilada hasta la cuarta parte del
tubo, mzclalo y agrgale 10 a 15 gotas del reactivo Benedict.
3.- Sujeta cada tubo con una pinza de papel, prende el mechero y
calienta la mezcla hasta ebullicin.
Observe.
Nota: Si toma color rojo ladrillo, la muestra contiene glucosa,
si se mantiene azul o verdoso, no
contiene glucosa.
PRECAUCIONES: No calientes fijamente el fondo del tubo, porque
el lquido puede salpicar, muvelo
rotativamente, calentando en la parte superficial, estando
pendiente en todo momento de lo que pueda
pasar en su interior. No dirijas nunca la boca del tubo hacia
algn compaero mientras estas calentando.
2.- INVESTIGA LA PRESENCIA DE GLUCOSA (azcares reductoras) EN
LAS CELULAS DE ALGUNOS
ALIMENTOS USANDO EL REACTIVO BENEDICT
1.- Usa 7 tubos de ensayo y en cada uno coloca una porcin de
cada una de las muestras que figuran en
el cuadro.
2.- Agrega agua destilada hasta la cuarta parte de cada tubo y
luego Aade a cada tubo la solucin de
reactivo Benedict 10 a 15 gotas.
-
21
3.- Con una pinza de papel coge un tubo, prende el mechero y
calienta la mezcla. Esto mismo has con el
resto de tubos con muestras. Completa el cuadro:
3.- RECONOCIMIENTO DEL ALMIDN POR MEDIO DEL LUGOL
El lugol (reactivo de yodo), es un indicador del almidn. Para
determinar si una sustancia lo contiene se
aade sobre la muestra o solucin problema unas gotas de este
indicador. Si contiene almidn la
muestra o solucin tomar un color azul oscuro; observndose tambin
un color azul dbil o verdoso si
la cantidad de almidn es pequea.
1.- Toma dos tubos de ensayo.
2.- A uno agrgale agua destilada hasta la cuarta parte del tubo,
ms gotas de lugol.
3.- Al otro agrgale una pizca de almidn y agua destilada la
cuarta parte del tubo, luego tapa el tubo
con tu dedo pulgar y agtalo hasta que el almidn se disuelva
homogneamente.
4.- Agrega ahora 4 gotas de lugol sobre la solucin. Compara los
colores Qu ocurre con el contenido
de cada uno de los tubos de ensayo?
.
.
4.- INVESTIGA LA PRESENCIA DE ALMIDN EN LAS CLULAS DE ALGUNOS
ALIMENTOS USANDO LUGOL
1.- Coloca una porcin pequea de cada uno de los alimentos que
figuran en el cuadro, en su respectivo
tubo de ensayo. Luego
2.- Aade agua destilada hasta la cuarta parte del tubo de
ensayo. Adems
3.- Agrgale a cada uno de los tubos 4 gotas de lugol y, por el
color resultante, determina si contiene o
no almidn. (si hasta aqu sus resultados son confusos, calintelo
solo hasta el punto de fusin).
Completa el cuadro:
ALIMENTO
PLTANO
LIMN
MANZANA
AZCAR
PAZAS
LECHE
MIEL
COLOR CON BENEDICT
CONTIENE GLUCOSA?
-
22
CUESTIONARIO PARA RESOLVER
1.- Qu materiales orgnicos investigados, contenan glucosa? Por
qu?
.
.
.
2.- Cules de los materiales orgnicos, contenan almidn? Por
qu?
.
.
3.- Explica: Qu razn existe para agregar reactivo Benedict, al
tubo con glucosa, sabiendo
anticipadamente que contiene este ?
.
.
.
CONCLUSIONES
1.- Los principales compuestos orgnicos de la materia viva son:
.
2.- Los carbohidratos estn formados por:.
ALIMENTO
PAPA
PAN
AZCAR
GELATINA
MAIZ
ARROZ
NARANJA
COLOR CON LUGOL
CONTIENE ALMIDN?
-
23
3.- Qumicamente los carbohidratos se consideran:.....
porque.
4.- Los monosacridos o es simples, son llamados as porque.
Ejemplo: Frmula
Frmula
Frmula
5.- LOS OSIDOS son carbohidratos hidrolizables porque...
6.- La sacarosa, frmula:....es un..
7.- El almidn y la celulosa, frmula:son..
8.- Desde el punto de vista fisiolgico los carbohidratos son
..
.....
.....
-
24
PRCTICA N 4
RECONOCIMIENTO DE LOS COMPUESTOS ORGNICOS DE LAS CLULAS
INTRODUCCIN:
Los principales compuestos orgnicos que forman parte de la
estructura de
clulas, son responsables de las funciones del protoplasma y
entre ellos se tiene a los CARBOHIDRATOS,
PROTENAS, LPIDOS y CIDOS NUCLEICOS.
B. SEGUNDA SESION: PROTENAS, LPIDOS Y VITAMINA C
I.- INTRODUCCIN:
LAS PROTENAS son macromolculas complejas constituidas por
polipptidos formados por
unidades qumicas llamadas aminocidos. Son compuestos orgnicos
complejos que se encuentran
como constituyentes esenciales de los seres vivos.
Su nombre proviene del vocablo proteus que significa de primer
orden, puesto que forma la
materia esencial de todo ser vivo: el protoplasma qumicamente
contiene aproximadamente un 52% de
carbono, 25% de oxgeno, 7% de hidrgeno y un 16% de nitrgeno. Con
frecuencia presentan tambin
azufre y fsforo, y a veces pequeas cantidades de metales pesados
como: hierro, cobre, manganeso,
etc.
LOS LPIDOS son un grupo heterogneo de sustancias orgnicas
originadas en la clula viva,
compuestas qumicamente por carbono, hidrgeno y oxgeno.
Insolubles o escasamente solubles en
agua, se diluyen en algunos disolventes orgnicos como el
alcohol, ter o la bencina. Se clasifican en:
grasas neutras, cidos grasos, fosfolpidos, esteroides y
vitaminas liposolubles.
Las grasas neutras son las ms abundantes en la naturaleza,
contienen solamente C, H y O. Se
dividen en grasas, aceites y ceras, Los lpidos neutros, slidos a
temperatura ambiente, son las grasas y
ceras, mientras que los lquidos son los aceites. Tanto grasas
como aceites se presentan en vegetales y
animales. Las ceras se encuentran en la cutcula de algunos
frutos (manzana por ejemplo), hojas y
ptalos de algunas flores, y en forma ms abundante en los panales
de las abejas.
Los cidos Grasos Saturados principales, presentes en las grasas
animales, son el cido
palmtico CH3(CH2)14COOH y el cido esterico: CH3(CH)16COOH que
tambin se presentan
en: mohos, bacterias y algunas plantas.
Los Fosfolpidos constituyen una gran variedad de lpidos que
adems de C,H y O contienen
fsforo y en muchos casos tambin nitrgeno, los ms conocidos son
la Lecitina y la cefalina. Las
primeras se encuentran en diferentes tejidos: hgado, cerebro,
yema del huevo, verduras, etc. La
cefalina en el tejido muscular y nervioso de los animales.
Los esteroides son compuestos liposolubles que tienen una
estructura particular relacionada
con el colesterol. Los esteroides ejercen profundos efectos
fisiolgicos, an a pequeas concentraciones
en el organismo animal. No solamente regulan la funcin y el
desarrollo sexual, sino que tienen gran
influencia sobre numerosos aspectos del metabolismo. La vitamina
D, los cidos biliares, las hormonas
-
25
esteroides de la corteza suprarrenal, las hormonas sexuales,
etc., son derivados o modificaciones de la
estructura esteroide.
Las vitaminas liposolubles llamadas as por ser solubles en los
aceites, son las vitaminas A, D, E y
K.
La vitamina A se presenta en diversas formas, se encuentra como
provitaminas A en los
carotenos pigmentos anaranjados de la zanahoria, yema de huevo y
tambin en el hgado de los peces,
como el bacalao y tiburn. Su carencia origina una condicin
ceguera llamada xeroftalmia o ceguera
nocturna (incapacidad para ver los objetos a la luz difusa o en
la penumbra); adems de un retardo en el
crecimiento, deterioro de las clulas epiteliales y una mayor
susceptibilidad a las infecciones.
La vitamina D existe en diversos estados qumicos, se encuentra
en la leche, el aceite del hgado
de bacalao y de otros peces. Se sintetiza en la piel bajo los
efectos de los rayos ultravioletas de la luz
solar. Se sabe que estimula de alguna manera la absorcin de los
iones de calcio en el tracto intestinal,
adems su carencia implica el raquitismo, deformacin de los
huesos del esqueleto.
La vitamina E existe tambin en diversos estados, es sintetizado
por algunos vegetales y
microorganismos. Se conoce que ejerce ms funciones importantes,
disminuye la accin oxidativa de
algunas sustancias, por lo cual se le llama tambin antioxidante;
interviene en el proceso respiratorio
celular, y est relacionado con el metabolismo de los cidos
nucleicos en los animales superiores. Su
carencia ocasiona esterilidad en algunos animales, pero no se ha
probado este efecto en el hombre.
La vitamina K fue descubierta en 1930 como un factor
antihemorrgico, de all su nombre (del
ingls koazulations). Es esencial para la sntesis de la
PROTROMBINA en el hgado uno de los
constituyentes primordiales de la coagulacin sangunea. Tambin
hay indicios de que sirve como
componente activo en el proceso respiratorio terminal. Se
encuentra en los vegetales verdes en forma
de vitamina k1. La irregularidad en la coagulacin de la sangre
es sntoma de su deficiencia, cosa muy
rara en los mamferos. Sin embargo en los seres humanos puede
ocasionarse por la accin de los
antibiticos.
II. OBJETIVOS:
1.- Conocer la composicin qumica de las protenas, lpidos y
vitamina C.
2.- Determinar su presencia en las clulas, mediante reacciones
de reconocimiento.
3.- Conocer los efectos fisiolgicos de las vitaminas
liposolubles.
III. MATERIALES REACTIVOS
1. Gradilla con 8 tubos de ensayo. 1. Reactivo Biuret y
Fenolftaleina.
2. Pinza de papel para tubo. 2. Acido muritico.
3. Mechero de alcohol. 3. Materiales de estudio: Clara y yema
de
4. Esptula y gotero. Huevo, Leche, jugo de soya, queso,
carne,
5. Agua destilada. Limn, Naranja, man, aceite, mantequilla.
-
26
1.- RECONOCIMIENTO DE LAS PROTENAS
Las protenas se reconocen fcilmente porque se coagulan cuando se
las somete a la accin de un cido,
alcohol o al calor. Tambin se pueden identificar si se hacen
reaccionar con el reactivo Biuret, cuyo
color azul claro, se vuelve violeta por su contacto.
1.- Toma 2 tubos de ensayo.
2.- A uno agrgale agua destilada hasta la cuarta parte del tubo
y aade adems 5 gotas del reactivo
Biuret.
3.- Al otro tubo coloca un poco de gelatina sin sabor y agrgale
agua destilada hasta la cuarta parte del
tubo, adems aade 5 gotas de reactivo Biuret.
4.- Prende el mechero, sujeta cada tubo por separado con una
pinza de papel, calienta y observa la
coloracin. Qu sucede?
.......................................................................................................................
El alimento que contiene protenas se pone de color rojo.
Ahora comprueba que alimentos contienen protenas usando el
procedimiento anterior (de la prctica
del reconocimiento de la glucosa).
ALIMENTO
CLARA DE
HUEVO
LECHE
YEMA DE HUEVO
JUGO DE
SOYA
QUESO
CARNE
COLOR CON BIURET
CONTIENE PROTENA?
2.- RECONOCIMIENTO DE LOS LPIDOS
Los lpidos se identifican por el brillo lustroso que dejan sobre
la superficie que
se han aplicado; de manera semejante tambin por dejar una mancha
traslcida sobre el papel. Adems
se reconocen mediante la reaccin con el Sudan III, reactivo con
el cual dan una coloracin anaranjada.
Tambin se puede detectar la presencia de los cidos grasos,
cuando neutralizan soluciones dbilmente
bsicas coloreadas de violeta por la fenolftaleina, a las cuales
vuelven incoloras.
1.- Unta una pequea gota de aceite en la superficie de una hoja
de papel. Observa y describe lo que
sucede: ......
....
2.- Sobre otro papel, frota la superficie con el limn,
aplastndolo ligeramente. Repitiendo el mismo
procedimiento con la naranja, man y la mantequilla. En los casos
de la naranja y limn frota la
-
27
cscara. Observa las manchas son semejantes producida en
experiencia anterior? Por
qu?.........................................................................................................................................................
......................................................................
..........................................................................................
3.- RECONOCIMIENTO DE ACIDOS LIBRES EN EL ACEITE
1.- Empleando un tubo de ensayo limpio, coloca en su interior,
agua de cao hasta la cuarta parte del
tubo.
2.- Aade unas tres gotas de solucin de hidrxido de sodio al
0.5%, agita hasta mezclar bien.
3.- Vierta sobre la disolucin anterior, dos gotas de solucin
alcohlica de fenolftaleina
Qu
sucede?...........................................................................................................................................
4.- Coloca ahora en el interior del tubo unos 5 ml. De aceite,
luego agita para emulsionar.
5.-Qu sucede con el color anterior? Por
qu?..........................................................................................
.......................................................................................................................................................................
4.- DETERMINACIN DE LA VITAMINA C:
1.- Colocar 3 ml. de jugo de limn en un tubo de ensayo.
2.- Aadir 5 gotas de azul de metileno y calintalo en bao mara
durante 7 minutos.
3.- Controlar con un termmetro la temperatura que no debe
exceder los 50C.
Los resultados se encuentran en el cambio de color lo que
determina la presencia de vitamina C en el
limn.
Esquematice el proceso:
-
28
PREGUNTAS PARA RESOLVER
1. Qu materiales orgnicos investigados contienen abundantes
protena? ...........................................
..................
2. En qu parte de los materiales investigados se detecto la
presencia de lpidos?
................................................................................
..................
3.Qu indica aquellos casos donde no da positiva la prueba de
biuret y da positiva la prueba de
Ninhidrina?.....................................................................................................................................................
..................
4. Qu sucede con nuestro organismo por falta de vitamina A?
................................................................
..................
5. Cmo produce el organismo la vitamina D?
...........................................................................................
..................
6. Cul es la accin fisiolgica de la vitamina D?
.........................................................................................
..................
7. Qu funcin realiza la vitamina E?
........................................................................................................
..................
8. Qu funcin desempea la vitamina k?
..................................................................................................
..................
9. Las protenas se encuentran formando parte de todas las
estructuras de un ser vivo? Por qu?
........................................................................................................................................................................
..................
10. Qu funcin desempeas los lpidos en el organismo?
.........................................................................
..................
CONCLUSIONES
1. Las protenas forman .......
..................
2. Qumicamente las protenas estn formadas por .....
... y contienen aproximadamente ...
..................
3. Los lpidos solamente contienen ...
..................
pero un grupo de ellos, los fosfolpidos tienen adems ..
..................
4. Las vitaminas y los esteroides ejercen
..................
-
29
PRCTICA N 5
OBSERVACIN DE CLULAS PROCARIOTAS
I. INTRODUCCIN
La clasificacin de los seres vivos considera tres Dominios:
ARCHAEA, PROKARYOTAE y EUKARYOTAE,
cada una con sus correspondientes subdivisiones. El Dominioe
Prokaryotae est constituido por clulas
de organizacin bacteriana con un cromosoma nico, sin membrana
nuclear alojado en un sistema o en
colonias. Las bacterias tienen una distribucin en la naturaleza
mucho ms amplia que cualquier otro
organismo. No obstante, su talla diminuta y aparente simple
estructura, estn adaptadas a una amplia
variedad de ambientes. La unidad fundamental es una simple clula
que es visible al microscopio.
II. OBJETIVOS
1.-Evidenciar la presencia de cianobacterias en plantas
acuticas
2.-Evidenciar la presencia de alguna de las enzimas presentes en
las bacterias
III. MATERIALES
1.-Lminas porta y cubreobjetos 2.-Palitos mondadientes
3.-Violeta de genciana 4.-Aceite de inmersin
5.-Lugol 6.-Microscopio compuesto
7.-Fucsina bsica 8.-Alcohol acetona
9.- Mechero
Muestra Biolgica:
10.-Nostoc sp. (colonias esfricas) 11.- Bacterias de sarro
dental
IV. PROCEDIMIENTO
A. CIANOBACTERIAS O ALGAS VERDEAZULES: Uno de los organismos
unicelulares representantes de las clulas procariotas ms primitivos
son las
Cianobacterias o Algas verdeazules, estas algas viven en
simbiosis con la Azolla sp. (Planta acutica
flotante) a las que se les encuentra en zonas someras del lago y
lagunas. Para observar estas algas basta
coger las hojitas de Azolla sp. o directamente las colonias de
Nostoc sp.. Estas colonias de Nostoc sp.
vienen a ser organismos pluricelulares filamentosos con
heterocistos, se encuentran libres o incluidos en
una matriz gelatinosa, forman colonias esfricas sobre rocas
sumergidas en el agua. Con ayuda de un
estereoscopio, estiletes y pinzas, siga los siguientes
pasos:
1. Colecte la muestra biolgica Nostoc sp. Colonias macroscpicas
incluidas en una matriz de
consistencia gelatinosa de 1 a 2 cm de dimetro, trasladar a un
frasco de vidrio, rotular el lugar
de coleccin, fecha y hora para su transporte.
2. En el laboratorio observar las colonias a simple vista
teniendo en consideracin color, forma,
lustre, borde, tamao de colonias y cubierta gelatinosa.
3. Con ayuda del estilete reviente estas colonias y recoja su
contenido en un portaobjetos.
4. Observe en el microscopio y encontrar cianobacterias, que
tienen una forma caracterstica.
5. Esquematice en el crculo correspondiente.
-
30
B. MUESTRAS DE SARRO DENTAL
1. Usando el palito mondadientes obtenga una muestra de sarro
dental.
2. Sobre la lmina portaobjetos extienda la muestra con
movimiento circular (frotis).
3. Fija la muestra al medio ambiente durante 5 minutos.
4. Agregue una gota de violeta de genciana y dejar un
minuto.
5. Lave con agua corriente.
6. Agregue una gota de lugol por un minuto.
7. Decolore con alcohol acetona.
8. Agregue una gota de fucsina bsica, dejar un minuto.
9. Lave con agua corriente.
10. Secar al medio ambiente.
11. Enfocar la muestra.
12. Ponga una gota de aceite de inmersin.
13. Observar al microscopio y esquematizar en el crculo
correspondiente.
.
.
ALGA VERDEAZUL o CIANOBACTERIA BACTERIAS DEL SARRO DENTAL
Aumento______ X Aumento____X
C. Modificacin de Hucher para el Mtodo de Tincin de Gram:
1. Fijar el frotis con calor.
2. Cubrir con cristal violeta por 1 minuto.
3. Lavar con agua. No secar.
4. Cubrir con yodo de Gram por 1 minuto.
5. Lavar con agua. No secar.
6. Decolorar por 10 a 30 segundos.
Agitacin suave en acetona (30 ml) y alcohol (70 ml).
7. Lavar con agua. No secar.
8. Cubrir por 10 a 30 segundos con Safranina.
9. (Solucin al 2.5 % en alcohol al 95 %).
10. Lavar con agua y Permitir que seque.
-
31
V. CUESTIONARIO
1. Mencione la clasificacin de las bacterias de acuerdo a su
tincin.
2. En el siguiente esquema, identifique las morfologas bsicas de
procariotas:
3. En los siguientes esquemas, identifique los componentes de
una bacteria:
REFERENCIA BIBLIOGRFICA:
1. De Robertis y De Robertis. 2003. Biologa Celular y Molecular.
Duodcima Edicin. Editorial El
Ateneo. Buenos Aires - Argentina. 469 pp.
2. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs.
42-472.
3. Margulis, L. 2000. El origen de la clula. Barcelona; Mxico.
Segunda edicin. Editorial Revert.
Pgs. 23-293.
4. Recursos de Microbiologa. Dpto. Inmunologa, Microbiologa y
Parasitologa. Universidad del
Pas Vasco. Disponible en:
http://www.testak.org/microbiologia.
-
32
PRCTICA N 6
OBSERVACIN DE CLULAS EUCARIOTAS
I. INTRODUCCIN
El Dominio Eukaryotae est constituido por clulas de organizacin
nucleada con ms de un
cromosoma, cromatina en histonas, membrana nuclear y divisin
mittica, unicelulares o pluricelulares.
La caracterstica primaria de las clulas eucariticas es el ncleo
con sus cromosomas. El citoplasma que
rodea al ncleo, limitado a su vez por la membrana, incluye una
variedad de organelos, teniendo cada
clase su propia organizacin estructural y funcin o funciones
particulares en la clula. Adems de los
organelos membranosos, como el retculo endoplsmatico, al aparato
de Golgi, las mitocondrias, los
lisosomas, los cloroplastos (en las clulas fotosintticas) y
otros, tambin hay ribosomas, centriolos,
microfilamentos, microtbulos y una multitud de protenas
suspendidas en la porcin citoslica del
citoplasma.
II. OBJETIVOS
1.- Preparar y observar clulas Eucariticas
III. MATERIALES:
1.- Microscopio compuesto 2.- Laminas porta y cubreobjetos
3.- Pinza, gotero, estilete, tijeras 4.- Hisopos estriles
5.- Palitos mondadientes 6.- Mechero bunsen
7.- Agua de estanque o de acuario
IV. PROCEDIMIENTO:
A. ORGANISMOS UNICELULARES EUCARITICOS 1. Toma con el gotero una
pequea cantidad de agua de estanque o bien raspar las paredes de
un
acuario con un portaobjetos.
2. Deposita una pequea gota en la parte central de un
portaobjetos limpio y seco.
3. Coloca sobre la gota el cubreobjetos.
4. Coloca en la platina del microscopio la preparacin con la
muestra y observa.
5. Realizar los esquemas correspondientes, sealando las
estructuras visibles.
...................................
..................................
..................................
..................................
..................................
..................................
ORGANISMOS UNICELULARES ORGANISMOS UNICELULARES Aumento______ X
Aumento____X
-
33
B. OBSERVACIN DE MOHOS (HONGOS PLURICELULARES)
1. Coloca algunas hifas sobre un portaobjetos (desprender el
moho del pan y verduras mediante
un estilete, con movimientos suaves para no destruirlo). 2.
Colocar una gota de solucin de azul de metileno por 2 minutos. 3.
Escurrir el colorante con cuidado y colocar un cubre objetos sobre
las hifas. 4. Realizar los esquemas correspondientes, sealando las
estructuras visibles.
HONGOS PLURICELULARES
Aumento______ X
C. OBSERVACIN DE CLULAS EPIDRMICAS DE LA MUCOSA BUCAL
1. Con un hisopo estril, raspa suavemente la cara interna de tu
mejilla, deposita lo raspado en el centro de un portaobjetos limpio
y seco.
2. Procede a teirlo, agregndole 1 gotas de azul de metileno a la
muestra, dejando actuar al colorante durante 2 minutos.
3. Cubre la muestra con su respectivo cubreobjetos. 4. Coloca tu
preparacin en la platina del microscopio, obsrvalo a menor aumento,
busca una
zona donde se encuentran clulas bien teidas y la observacin ser
ntida. 5. A continuacin realiza un grfico de tu observacin, dibuja
solamente una o dos clulas de la
muestra sealando con flechas sus partes fundamentales.
Muestra coloreada con azul de Metileno
Aumento_____X
-
34
D. OBSERVACIN DE CLULAS EPITELIALES DEL CATFILO DE CEBOLLA
1. Extraiga un pequeo fragmento de la epidermis interna del
catafilo de cebolla.
2. Utilizando las lminas porta y cubreobjetos, monte la
preparacin, coloreando con solucin de
lugol.
3. Observe con los diferentes objetivos.
4. Esquematice la imagen y describa.
Muestra coloreada con lugol
Aumento_____X
E. OBSERVACIN DE CLULAS DEL POLEN
1. Colocar unas partculas de polen sobre un portaobjetos.
2. Agregar una gota de agua y coloca el cubreobjetos sin dejar
burbujas de aire.
3. Observar la morfologa al microscopio con el objetivo de menor
aumento.
Muestra de clulas del polen
Aumento_____X
F. OBSERVACIN DE CLULAS ESPERMTICAS
1. Esta muestra preferentemente deber estar lista pocos minutos
antes de la realizacin de la
prctica, para observar la movilidad de los espermatozoides.
-
35
2. Una vez que se tiene la muestra, colocar una pequea gota en
el centro de un portaobjetos,
agregar una gota de azul de metileno y cubrirla con un
cubreobjetos.
3. Observar la muestra al mejor aumento de observacin.
Esquematice lo observado.
Muestra de espermatozoides
Aumento_____X
G. OBSERVACIN DE CLULAS SANGUNEAS HUMANAS
1. Toma de Muestra:
Toma de Muestra de sangre capilar:
- Ubicar el dedo anular de la mano izquierda. En el lado externo
del dedo, donde la sensibilidad
es menor que en la punta. (No extraer sangre del dedo ndice o el
pulgar, o un dedo infectado).
- Limpiar el sitio escogido: Usar un pedazo de algodn humedecido
en etanol, despus pasar un
pedazo de algodn seco para retirar los residuos de etanol.
- Punzar el dedo con la lanceta estril, con firmeza y rapidez.
No debe usarse agujas, ni alfileres.
- Limpiar la primera gota de sangre con un pedazo de algodn
seco.
- Con la mano derecha tomar un portaobjetos, sostenindolo por
los bordes. Con la mano
izquierda oprimir el dedo para extraer una gota de sangre de
buen tamao.
- Precauciones: El procedimiento ha de realizarse solo en lugar
desinfectado. Lavarse las manos
antes y despus del procedimiento, utilizar los equipos de
proteccin personal y en caso
necesario colocarse la mascarilla para reducir al mnimo la
infeccin y/o contaminacin.
- Este procedimiento ha de ser realizado por el docente.
Toma de Muestra por puncin venosa - Mtodo de la jeringa:
- El donante de muestra debe estar sentado junto a una mesa con
el brazo extendido.
- Aplicar la ligadura por encima del punto ubicado para la
extraccin de la sangre (en ete caso
por encima del codo).
- Pedir al donante que habr y cierre la mano varias veces para
favorecer la dilatacin de las
venas.
- Desinfectar la piel con una pieza de algodn embebido en etanol
al 70%.
- Realizar una puncin en ngulo agudo con el bisel de la aguja
hacia arriba. Cuando la sangre
fluye en cantidad suficiente, la ligadura ser retirada antes que
la aguja sea extrada.
- El sitio de la puncin ser comprimido durante algunos segundos
con algodn empapado en
alcohol.
-
36
- Precauciones: El procedimiento ha de realizarse solo en lugar
desinfectado. Lavarse las manos
antes y despus del procedimiento, utilizar los equipos de
proteccin personal y en caso
necesario colocarse la mascarilla para reducir al mnimo la
infeccin y/o contaminacin.
- Este procedimiento ha de ser realizado por el docente.
2. Preparacin de Muestra:
Frotis: Consiste en extender la muestra por deslizamiento,
utilizando para ello dos lminas porta
objetos.
- Recoger una gota de sangre sobre una cara del portaobjeto
cerca del extremo de ste.
- Sostener el portaobjeto con una mano y con la otra mano
colocar el borde del 2do portaobjeto
exactamente frente a la gota de la sangre y extender la muestra
a manera de una fina pelcula.
3. Tincin de Wright:
- Cubrir la extensin de sangre con unas gotas de colorante
Wright. Contar las gotas.
- Dejar actuar en reposo durante 1 2 minutos. No pasarse del
tiempo.
- Agregar sobre el colorante el mismo nmero de gotas de solucin
amortiguada tamponada y
mezclar rpidamente, que puede ser hecho soplando suavemente.
Debe formarse una capa
plateada.
- Dejar reposar la mezcla por 10 minutos.
- Lavar con agua en forma suave, empezando por el borde de la
lmina inclinada.
- Dejar secar a temperatura ambiente.
- Observar al microscopio.
- La tincin Wright permite la identificacin de clulas sanguneas,
motivo por el cual, es
aplicado para realizar hemogramas. Cuando ha sido realizado
correctamente, se pueden
observar:
Los eritrocitos se observan de color: Naranja
Los ncleos de leucocitos de color: Prpura
Los grnulos basfilos de color: Prpura azulado.
Los grnulos neutrfilos de color: Rojo lila.
Los grnulos eosinfilos de color: Rojo naranja
4. Observacin al microscopio:
Observe al mejor aumento e identifique las clulas sanguneas.
Esquematice lo observado.
...................................
..................................
..................................
..................................
..................................
..................................
CLULAS SANGUNEAS CLULAS SANGUNEAS Aumento______ X
Aumento____X
-
37
V. CUESTIONARIO:
1. Qu analoga estructural existe entre los espermatozoides y los
protozoarios?
2. Qu es el azul de metileno y cules son sus aplicaciones?
3. Qu es el lugol y cules son sus aplicaciones?
4. Cul es el fundamento de la tincin Wright y cul es su
utilidad?
5. Mencione los reinos en las que se subdivide el Dominio
Eucariota, indicando el sistema en el que
se basa:
REFERENCIA BIBLIOGRFICA:
5. De Robertis y De Robertis. 2003. Biologa Celular y Molecular.
Duodcima Edicin. Editorial El
Ateneo. Buenos Aires - Argentina. 469 p.
6. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs.
42-472.
7. Margulis, L. 2000. El origen de la clula. Barcelona; Mxico.
Segunda edicin. Editorial Revert.
Pgs. 23-293.
8. Manual de Procedimientos de laboratorio. 1999. Instituto
Nacional de Salud MINSA. Lima
Per. Editora Amarilys. 524 p.
-
38
PRCTICA N 7
DIFUSIN, SMOSIS Y DILISIS
I. INTRODUCCIN:
La Difusin es un fenmeno mediante el cual las molculas de varios
fluidos situados en un mismo
recinto, debido a su movimiento continuo, tienden a formar una
mezcla homognea. La Osmosis, es la
difusin de un lquido a travs de una membrana semipermeable que
separa dos disoluciones que
poseen concentraciones diferentes. En la smosis el flujo de
molculas del disolvente es el de la
disolucin de menor concentracin (hipotnica) a la de mayor
(hipertnica) y tienden a igualarlas (es
decir hacerlas isotnicas). En los organismos vivientes, la
presencia de membranas celulares, vasos,
sistema circulatorio, etc. Condicionan la presencia de fenmenos
osmticos, ya que estas estructuras
son permeables al agua pero no a todos los solutos. Los procesos
de smosis intervienen de modo
decisivo en la regulacin del equilibrio hdrico del organismo. La
Dilisis, Se basa en la propiedad de los
coloides de que no difunden a travs de membranas y consiste en
separar un coloide de un cristaloide
que se encuentran juntos; los ltimos difunden de un medio a otro
hacia los disolventes (agua) mientras
que los primeros permanecen en la solucin. Tixotropa, Es la
propiedad de pasar de un estado rgido a
otro no tan rgido por accin mecnica.
PRIMERA SESIN: OSMOMETRO Y SMOSIS EN DIFERENTES MEMBRANAS
II. OBJETIVOS:
1.- Observar las caractersticas del proceso de difusin.
2.- Construir un osmmetro.
3.- Verificar el proceso de smosis en diferentes membranas.
III. MATERIALES:
1. Microscopios, 2. Vasos de precipitacin, 3. Embudos de
vidrio,
4. Tubos de ensayo, 5. Probetas, 6. Pipetas
7. Mechero de alcohol 8. Soporte universal 9. Matraces y
Corchos.
Reactivos: Lugol, azul de metileno, glucosa, EDTA, parafina.
Tejidos: Filamentos de Spirogira, Tejido (sangre de una
persona).
Materiales que debe traer el alumno: Vejiga de cerdo, frascos de
boca ancha, calculadora, ligas, azcar,
almidn, huevos, zanahoria.
-
39
IV. PROCEDIMIENTO:
A. DETERMINACIN DE LA VELOCIDAD DE DIFUSIN:
La velocidad de difusin es exponencial, lo cual puede
verificarse experimentalmente.
1.- Llenar agua en 5 tubos de ensayo de la siguiente forma: 2,
6, 10, 14 y 18 ml.
2.- A cada tubo agregar una gota de tinta china.
3.- En cada caso cronometrar el tiempo que tarda el colorante en
difundirse hasta teir
homogneamente el agua.
4.-Con los datos de volumen y tiempo realizar la regresin
exponencial correspondiente, en las abscisas
va el tiempo y en las ordenadas el volumen.
Esquematiza el proceso:
ESQUEMATIZA EL EXPERIMENTO:
ESQUEMATIZA LA REGRESIN EXPONENCIAL:
B. EXPERIMENTAR EL FENOMENO DE SMOSIS A TRAVES DE LA CONSTRUCCIN
DE UN OSMMETRO:
1.- Preparar una solucin 0,1 molar de glucosa (registrar el peso
de glucosa empleada),
2.- Verificar los materiales que constituyen el osmmetro que
son: un Matraz erlenmeyer, un embudo
de vidrio, vejiga de cerdo inflada y seca, soporte universal con
pinzas y agua destilada.
-
40
3.- Colocar agua destilada hasta la mitad en el matraz
erlenmeyer.
4.- Colocar la vejiga de cerdo en la boca del embudo y el
excedente pegarlo a la pared externa de dicho
embudo y ajustarlo con una liguilla percatndose de que no haya
espacio alguno entre la vejiga y el
embudo.
5.- Colocar en forma invertida el embudo preparado en las pinzas
del soporte universal.
6.- Llenar el embudo por el pico con una pipeta pasteur, un
volumen registrado de la solucin
preparada de glucosa, hasta la mitad del embudo nivelando as el
agua de la cubeta.
7.- Al cabo de un tiempo medir la altura de la solucin en el
embudo invertido.
8.- Esquematizar lo observado:
ESQUEMATIZA EL INICIO DEL EXPERIMENTO
ESQUEMATIZA EL FINAL DEL EXPERIMENTO
C. EXPERIMENTAR LA OSMOSIS EN ZANAHORIA
1.- Toma una papa y realzale un orificio un la parte
superior.
2.- En el orificio o hueco hecho coloca un poco de sacarosa.
3.- Cirralo con una tapa de corcho o jebe traspasado por un tubo
de vidrio.
4.- Sllalo con parafina los espacios entre el corcho y la
zanahoria. Luego
5.- Introduce la zanahoria en un vaso de precipitado con
agua.
6.- Observa peridicamente el tubo de vidrio.
Dentro del tubo asciende una columna de agua azucarada Qu
indica?.............................................
.............................................................................
De dnde sali el
agua?...................................................................................................................
Por qu crees que colocamos
azcar?.............................................................................................
-
41
7.- Esquematiza lo observado:
ESQUEMATIZA EL INICIO DEL EXPERIMENTO ESQUEMATIZA EL FINAL DEL
EXPERIMENTO
D. EXPERIMENTAR LA SMOSIS EN HUEVO
La membrana de la cscara de huevo permite el paso de agua hacia
el interior, pero no pueden
atravesar hacia el exterior las molculas de protenas presentes
en el interior.
1.- Cuidadosamente romper un trozo de la cscara en uno de los
extremos, de un huevo
preferentemente en el lado de la cmara de aire, sin daar la
membrana interior.
2.- Luego introducir el huevo en un recipiente conteniendo agua
destilada.
3.- Despus de un tiempo corto el agua ingresa al interior del
huevo en tal cantidad que la membrana se
rompe. Qu indica
esto?.............................................................................................................
....
4.- Esquematiza lo observado:
ESQUEMATIZA EL PREPARADO DEL
EXPERIMENTO
ESQUEMATIZA EL FINAL DEL EXPERIMENTO
-
42
SEGUNDA SESIN: SMOSIS EN CLULAS VEGETALES Y ANIMALES
E. EXPERIMENTA LA PLASMLISIS Y TURGENCIA EN CLULAS
VEGETALES:
PLASMLISIS:
Cuando en el medio externo hay mayor concentracin de soluto
(solucin hipertnica) que dentro del
organismo, este tiende a perder agua para tratar de equilibrar
las concentraciones, por tanto se
"arruga" (plasmlisis).
1.- Colocar en el portaobjetos unos filamentos de Spirogira con
su propia agua, poner el cubreobjetos y
observar a 10X del objetivo.
2.- Sin mover los filamentos de Spirogira de la platina sacar el
agua con papel absorbente, luego
3.- Aadir solucin hipertnica de cloruro de sodio.
4.- Observar la plasmlisis y esquematiza en el crculo
correspondiente.
TURGENCIA:
Cuando en el medio externo hay menor concentracin de soluto
(solucin hipotnica) que dentro del
organismo, este absorbe agua para tratar de equilibrar el
gradiente de concentraciones, por tanto se
"hincha" (turgencia).
1.- Sin mover los filamentos de Spirogira de la platina extraer
el agua salada con el papel absorbente,
2.- Aadir agua destilada gota a gota
3.- Observar la turgencia.
4.- Esquematizar en el crculo correspondiente:
NORMAL (sol. Isotnica) PLASMOLISIS (Sol Hipertonica) TURGENCIA
(S.Hipotnica)
Aumento_____X Aumento____X Aumento______X
F. EXPERIMENTA LA HEMLISIS Y CRENACIN EN GLOBULOS ROJOS
CRENACIN:
La crenacin ocurre cuando los glbulos rojos se encuentran en una
solucin hipertnica, pierden agua
para tratar de equilibrar el gradiente de concentracin con el
medio externo.
-
43
1.- En un portaobjetos hacer un frotis de sangre (con
anticoagulante EDTA).
2.- Aadir solucin hipertnica de cloruro de sodio y cubrir con el
cubreobjetos.
3.- observar la crenacin y esquematizar en el crculo
correspondiente.
HEMLISIS:
La hemlisis ocurre cuando los glbulos rojos se encuentran en un
medio hipotnico, absorbiendo agua
hasta llegar a romperse.
1.- Sin mover la muestra anterior aadir agua destilada para que
entre por capilaridad y por el otro lado
del cubreobjetos, sacar al mismo tiempo el agua salada. En la
hemlisis los glbulos rojos se hinchan
y se hacen ms transparentes.
2.- Observar la hemlisis.
3.- Esquematizar en el crculo correspondiente:
NORMAL (Sol. Isotnica) CRENACIN (Sol. Hipertnica) HEMLISIS (Sol.
Hipotnica)
Aumento______X Aumento_____X Aumento____X
CUESTIONARIO:
1.- Qu son los sueros
fisiolgicos?....................................................................................................
.
2.- Para hacer experimentos, cuantos tipos hay y cules
son?............................................................
.
-
44
PRACTICA N 7
ORGANELOS CELULARES
I. INTRODUCCIN:
La teora celular surge del siglo XIX. Sostiene que todas las
plantas y animales estn formados por
clulas, cada clula puede existir en ausencia de otras, y una
clula surge solamente de otra clula.
Todas las clulas tienen una membrana plasmtica que controla la
entrada y salida de materia, una
mquina metablica que convierte la materia prima en las
sustancias que necesitan y un conjunto de
genes que dirigen la sntesis de nuevos compuestos celulares.
En el siglo XIX desapareci el vitalismo, esta corriente
argumentaba que las actividades celulares eran,
en alguna manera, independientes de las leyes de la fsica y de
la qumica. En la actualidad, se sostiene
que los procesos biolgicos implican transformaciones qumicas,
totalmente comprensibles y
duplicables en el laboratorio.
Las clulas se pueden dividir en procariontes y eucariontes, segn
la ausencia o presencia de una
envoltura (carioteca) que rodea el material gentico
respectivamente.
Los procariontes, que no tienen ncleo verdadero, son los ms
simples y pequeos de los tipos de
clulas e incluyen a las Eubacterias (bacterias) y las Arqueas.
Las nicas estructuras celulares que
aparecen en estos dos grupos, son los ribosomas y un cuerpo
nuclear formado por una o ms molculas
de ADN de doble cadena.
Por otro lado, los eucariontes tienen todos los elementos de los
procariontes y otros diferenciales; solo
los ribosomas y la membrana plasmtica son similares a las
estructuras de las bacterias (y solo en
ribosomas con las arqueas). En las clulas se observan diversas
organelas de forma y tamao variado,
que se encuentran en forma constante.
Los constituyentes subcelulares son compartimientos
independientes que se encuentran en relacin con
el citosol, medio interno que les provee de los substratos
necesarios que se acumulan selectivamente
para transformarse en productos que sern utilizados por la clula
eucaritica en sus actividades
celulares.
Los lisosomas son organelos cuya funcin es la digestin celular;
contiene alrededor de 50 enzimas
hidrolticas capaces de digerir protenas, lpidos, carbohidratos y
nucletidos. Una de sus caractersticas
es el polimorfismo; los primeros tienen un dimetro aproximado de
0.4 u, unimembranosos; los
secundarios resultan de la asociacin de los primeros con las
vacuolas conteniendo el material
fagocitado, aumentando sus dimenciones; los autolisosomas
constituyen un caso excepcional, ya que
dirigen partes celulares.
Las mitocondrias, son organelos granulares o filamentosos,
formados por dos membranas y dos
compartimientos, que constituyen enzimas y coenzimas que
trabajan de manera integrada para
producir energa. Son considerados como verdaderos sistemas
traductores de energa, en las cuales
ingresa acetil-coenzima A proveniente de la degradacin de
nutrientes, requiriendo adems como
materia prima ADP, fosfato y oxgeno; produciendo la salida de
ATP, H2O y CO2.
-
45
Estas transformaciones se llevan a cabo en tres pasos: El ciclo
de Krebs, que extrae electrones de los
metabolitos; la cadena respiratoria, que captura y transfiere
electrones, por una serie de
transportadores y un sistema fosforilante, estrechamente unido a
la cadena respiratoria, que origina
molculas de ATP.
II. OBJETIVOS:
1.-Reconocimiento de lisosomas y mitocondrias en el citoplasma
de protistas y epitelio bucal. Plastos.
III. MATERIALES:
1.-Microscopio compuesto 2.-Lminas porta y cubreobjetos
3.-Solucin de azul de metileno 4.-Solucin de lugol
5.-Estiletes 6.-Pinzas
7.-Solucin rojo neutro 1/20,000 8.-Bistur
9.-Solucin verde janus 1/10,000 10.-Clulas de la mucosa
bucal
11.-Goteros 12.-Zanahoria
13.-Papa 14.-Espirogira
15.-Aj 16.-Cultivo de protistas
17.-Agua estancada 18.-Hojas de elodea
19.-Harina de frejol, maz y arroz. 20.-Filamento de
Spirogira
IV. PROCEDIMIENTO:
A.- OBSERVACIN DE LISOSOMAS EN PROTISTAS
1.-Previamente se ha incubado amebas y/o paramecios provenientes
de un cultivo o agua estancada en
la solucin de rojo neutro por 5 a 10 minutos.
2.-Ponga una gota de la incubacin en el portaobjetos, coloque la
laminilla cubreobjetos y observe a 10X
y 40X.
3.-Localice en el citoplasma grnulos teidos de rojo.
4.-Realice y describa el esquema respectivo.
.........
.........
.........
.........
......... Lisosomas en protistas. Aumento_____X
-
46
B.- OBSERVACIN DE MITOCONDRIAS EN EPITELIO BUCAL
1.-Prepare un frotis de epitelio bucal y deje secar al medio
ambiente durante 5 minutos.
2.-Agregue una gota de verde janus y deje con el colorante 5
minutos.
3.-Coloque el cubreobjetos y elimine el exceso de colorante.
4.-Observe al microscopio y describa la forma y nmero de
mitocondrias en la clula.
.........
.........
.........
.........
......... Mitocondrias en ep. bucal Aumento_____X
C.- OBSERVACIN DE MITOCONDRIAS EN PROTISTAS
Obtenga una muestra de protistas y proceda de la siguiente
manera:
1.-Aada al cultivo 2 ml de Verde Janus, espere de 10 a 15
minutos.
2.-Ponga una gota de la muestra en la lamina portaobjetos y
cbrala con el cubreobjetos.
3.-Observe a 10X y 40X Esquematice y describa.
.........
.........
.........
.........
......... Mitocondrias en protistas Aumento_____X
-
47
D.- OBSERVACIN DEL NMERO Y TAMAO DE CLOROPLASTOS
1.-Coja una hoja de elodea y coloque en un portaobjetos, en la
que previamente se ha colocado una
gota de agua.
2.-Realice el mismo procedimiento con un filamento de
Spirogira.
3.-Cubrir cada preparado con el portaobjetos.
4.-Examine cada uno de los preparados.
5.-Identifique los cloroplastos en cada una de las muestras.
.........
.........
.........
.........
......... Cloroplastos en Elodea Aumento_____X
.........
.........
.........
.........
......... Cloroplastos en Spirogira Aumento_____X
E.- OBSERVACIN DE CROMOPLASTOS Y LEUCOPLASTOS
CROMOPLASTOS: Realice un corte transversal muy fino de
zanahoria, Aj, y coloque el corte en un
portaobjetos, en el que previamente se ha colocado una gota de
agua.
Examine el preparado e identifique a los cromoplastos y luego a
los pigmentos que contienen en su
interior.
-
48
LEUCOPLASTOS:
EN PAPA: Realice un aspado con ayuda de un bistur y depostelo en
un portaobjetos en el que
previamente se ha colocado una gota de agua. Hacer un segundo
raspado y colocar en otro porta
objetos al que se la adiciona una gota de lugol. Coloque en cada
preparado un cubreobjetos. Reconocer
con el objetivo de 40X, los leucoplastos que son estructuras de
forma elipsoidal. Los grnulos de
almidn se pueden reconocer fcilmente por colorearse con
lugol
EN HARINA DE FREJOL, MAIZ Y ARROZ
Coloque una gota de agua en tres laminas portaobjetos y luego
agregue una pizca de los diferentes tipos
de harina en cada una. Cubrir con laminillas cubreobjetos cada
preparado. Reconoce con el objetivo de
40X los tipos de leucoplastos que puedan adoptar diferentes
formas.
-
49
.........
.........
.........
.........
.........
.........
.........
.........
.........
.........
.........
.........
.........
.........
.........
V.-CUESTIONARIO
1.-Por qu al hacer un raspado de la cara interna de la mejilla
se obtienen algunas
clulas?...........................................................................................................................................................
........................................................................................................................................................................
2.-Defina:
Procarionte,
.
-
50
Eucarionte,.
.
Lisoso
