Upload
deo
View
34
Download
0
Embed Size (px)
DESCRIPTION
Histologické zpracování trepanobiopsií na Ústavu patologie FN Olomouc. Bártová M., Vodičková L., Novotná D., Faltýnková A. Bioptické zpracování trepanobiopsií. Proč se provádí? U pacientů s chorobami krvetvorby nádorového původu nenádorového původu. - PowerPoint PPT Presentation
Citation preview
Histologické zpracování trepanobiopsií na Ústavu patologie FN Olomouc
Bártová M., Vodičková L., Novotná D., Faltýnková A.
Bioptické zpracování trepanobiopsií
Proč se provádí?
U pacientů s chorobami krvetvorby
nádorového původu
nenádorového původu
Odběr materiálu, jeho fixace a odvápnění
Materiál se odebírá z lopatky kosti kyčelní
Hned po odběru se materiál vkládá do fixačního roztoku
Používáme Lőwyho roztok, který tkáň současně fixuje a odvápňuje
Příprava Lőwyho roztoku
Postup přípravy:20g chloridu rtuťnatého rozpustíme v 60ml vařící destilované vody. Přidáme 100ml 40% formaldehydu, 50ml kyseliny octové ledové a zbývající destilovanou voduLőwyho roztok skladujeme při 4°CRoztok je toxický – pozor při manipulaci!
Formaldehyd 40% 100ml
HgCl2 20g
Kyselina octová ledová 50ml
Destilovaná voda 850ml
Použití Lőwyho roztoku
1. Materiál se vkládá do tohoto roztoku již při odběru na oddělení
2. Je nutné, aby byl uveden přesný čas vložení tkáně do Lőwyho roztoku
3. Doba fixace a odvápnění se pohybuje mezi 20-24 hodinami
Další zpracování trepanobiopsií
Po 20-24 hodinách se vzorek tkáně zpracovává stejně jako jiný bioptický materiálV konečné fázi zpracování získáme parafinový blokNásleduje krájení řezů silných 2-3Rutinně u nás zhotovujeme 7 preparátů z každého vzorku a barvíme metodami:
Hematoxylin-eosinPAS reakcePerlsova metodaGiemsaGőmoryUnna-PapenheimNaftol-ASD-chloracetátesteráza
Barvení hematoxylin-eosin
Základní barvení pro orientaci ve tkáni
Výsledek: jádra – tmavě modře
cytoplazma – růžově červené
Používáme Weigertův železitý hematoxylin
HE 100×
HE 200×
PAS reakce
PAS reakcí se dobře zvýrazní megakaryocyty, jejichž cytoplazma se barví červenofialově.
PAS 400×
Průkaz železitého pigmentu
Perlsovou metodou
Umožňuje zhodnocení přítomnosti pigmentu – hemosiderinu – ve stromálních makrofázích a někdy v erytroblastech
Výsledek: železo – modře buněčné pozadí – v růžovém tónu
Fe 200×
Fe 400×
Giemsovo barvení
Dobře vykresluje buněčné struktury
Identifikuje mastocyty
Výsledek: eosinofilní složky – v různých odstínech růžové až
červené
bazofilní složky – v různých odstínech světle modré, až tmavě modré
Giemsa 100×
Giemsa 200×
Metoda Gőmory – impregnační metoda
Znázorňuje síť retikulárních vláken stromatu a umožňuje tak posoudit kvantitu retikulárních vláken
Za některých patologických stavů, například u myeloproliferativních onemocnění, dochází k výraznému zmnožení retikulárních vláken, někdy i kolagenních vláken až do obrazu dřeňové fibrózy = zvazivovatění
Výsledek: retikulární vlákna – černě jádra – červeně
Gömory 320×
Gömory 400×
Metoda Unna-Papenheim
Výsledek: cytoplazma plazmocytů – růžově červeně erytroblasty (hnízda erytropoézy) – růžově
červeně
Elias 640×
Průkaz naftol-ASD-chloracetátesterázy
U této metody je důležité barvící roztoky připravovat vždy čerstvé, těsně před použitímDůležité je pH roztoků, pokud neodpovídá požadované hodnotě pH 6.3, musí se upravitTato metoda je velice citlivá a je nutné dodržovat přesný postupDobarvení metylzelení
Výsledek: bílá krevní řada a mastocyty – červeně ostatní buněčné elementy – zeleně
CLAE 40×
CLAE 100×
CLAE 200×
Aplikace imunohistochemických metod
Výsledek imuno metod je po fixaci a odvápnění v Lőwyho roztoku velmi dobrý
Využití zejména u lymfoproliferativních chorob
Nejčastěji prokazované antigeny:
CD20; CD3; CD5; CD23; CD68; CD10; CD138; Bcl-2
Kappa, lambda – lehké řetězce imunoglobulinů, IgA, IgG, IgM
MPO-myeloperoxidáza – prokazuje bílou krevní řadu
Děkuji za pozornost