Laporan Praktikum Penyakit Infeksius 1
Tanggal: Selasa, 3 Maret 2015 Kelompok: 7 (11.00-13.30) Ruangan:
RP. Kitwan 2
IDENTIFIKASI BAKTERI GRAM NEGATIF (Salmonella sp.) PADA SAMPEL
HATI AYAM
Kanti Rahmi FauziyahB04120125Sarah Minarni
TampubolonB04120126Noor Ihsan Anzary B.B04120127
DEPARTEMEN ILMU PENYAKIT HEWAN DAN KESEHATAN MASYARAKAT
VETERINERFAKULTAS KEDOKTERAN HEWANINSTITUT PERTANIAN BOGOR2015BAB
IPENDAHULUAN1.1 Latar BelakangHewan unggas atau khususnya ayam
merupakan hewan yang banyak digunakan sebagai sarana peternakan
dimasa kini. Omsetnya yang tinggi menjadikannya banyak digunakan
orang sebagai mata pencarian hidup. Tapi selain itu unggas merupkan
hewan yang mudah terjangkit penyakit khususnya penyakit oleh
bakteri. Beberapa penyakit pada unggas akibat bakteri contohnya
coryza, pullorum, kolera, sinusitis (CRD), ataupun colibacillocis.
Bakteri yang khusus menyerang pada hati unggas adalah Haemoproteus
sp. Bakteri ini sendri ini dapat menyebabkan malaria pada unggas
(Tabba 2007).Bakteri Gram negatif adalah bakteri yang tidak
mempertahankan zat warna kristal violet sewaktu proses pewarnaan
Gram sehingga akan berwarna merah bila diamati dengan mikroskop.
Disisi lain, bakteri gram-positif akan berwarna ungu. Perbedaan
keduanya didasarkan pada perbedaan struktur dinding sel yang
berbeda dan dapat dinyatakan oleh prosedur pewarnaan
Gram.Escherichia coli adalah bakteri Gram negatif yang merupakan
bagian dari mikroflora yang secara normal ada dalam saluran
pencernaan manusia dan hewan berdarah panas. Bakteri Salmonella sp.
adalah bakteri bentuk batang, gram negatif, hidup dalam saluran
pencernaan manusia maupun hewan. Salmonella sp. yang masuk bersama
makanan dan minuman yang tercemar akan menyebabkan demam enterik
(Jawezt et al 1995).1.2 TujuanTujuan dari praktikum ini adalah
untuk mengetahui dan mengidentifikasi jenis bakteri gram negatif
yang terdapat di hati ayam sehingga dapat mengetahui terapi untuk
menanggulanginya.
BAB IIBAHAN DAN METODE2.1 Alat dan BahanAlat yang digunakan
untuk identifikasi adalah ose, needle, mikroskop, api bunsen,
larutan kristal violet, larutan safranin, lugol, aquadest, larutan
pemucat, minyak emersi, xylol, kaca objek, dan kertas saring. Bahan
yang digunakan adalah sampel hati ayam, media agar Darah, media
agar miring, media agar TSIA, larutan gula (laktosa, manitol,
glukosa, sukrosa dan maltosa), urea, sitrat dan indol.2.2
Metode
BAB IIIHASIL DAN PEMBAHASAN3.1 HasilJenis uji/teknik
identifikasiHasil ujiGambarKeterangan
Pewarnaan gramGram negatif (-)Terlihat bakteri berwarna merah
berbentuk basil
Media Mac Conkey Agar (MCA)Tumbuh koloni bakteri bewarna merah
keunguan
Ukuran koloni besar, bentuk koloni tidak beratur, permukaan
koloni halus, aspek koloni mengkilat, tepi koloni bersemak, elevasi
timbul, bersifat tembus cahaya, pigmentasi berwarna bening/sama
dengan media
Media Blood Agar (BA)Tumbuh koloni berwarna putihUkuran koloni
sedang, bentuk koloni bulat, permukaan koloni halus, aspek koloni
mengkilat, tepi koloni rata, elevasi timbul, bersifat opaque,
pigmentasi berwarna putih
Uji OksidasePositifTerbentuk cincin berwarna ungu
Uji KIA/TSIAPositifTerdapat endapan H2S
Uji MotilitasPositifTerlihat pertumbuhan bakteri yang
menyebar
Uji IndolNegatifTidak terbentuk cincin merah muda setelah
direaksikan dengan pereaksi Erlich
Uji SitratPositifWarna media berubah dari hijau menjadi biru
Uji UreaPositifWarna media berubah dari kekuningan menjadi
pink
Uji Fermentasi KarbohidratFermentasiGas
a. Glukosa++Terjadi perubahan warna dari merah menjadi kuning;
terdapat gelembung gas.
b. Maltosa++Terjadi perubahan warna dari merah menjadi kuning;
terdapat gelembung gas.
c. Manitol++Terjadi perubahan warna dari merah menjadi kuning;
terdapat gelembung gas.
d. Sukrosa--Tidak terjadi perubahan warna; tidak terdapat
gelembung gas.
e. Laktosa--Tidak terjadi perubahan warna; tidak terdapat
gelembung gas.
3.2 PembahasanPada praktikum ini dilakukan identifikasi bakteri
menggunakan bakteri dari sediaan hati ayam. Pertama, dilakukan
pembiakan bakteri pada Media Mac Conkey Agar (MCA) dan Blood Agar
(BA). Setelah dibiakkan pada MCA, ukuran koloni besar dengan bentuk
koloni tidak beratur, permukaan koloni halus, aspek koloni
mengkilat, tepi koloni bersemak, elevasi timbul, bersifat tembus
cahaya, pigmentasi berwarna bening/sama dengan media. Pada MCA
bakteri Gram positif dihambat pertumbuhannya dan bakteri Gram
negatif dibedakan berdasarkan kemampuan memfermentasikan laktosa.
Berdasarkan koloni bakteri yang bewarna sama dengan media dapat
dinyatakan bahwa bakteri tersebut termasuk bakteri laktosa negatif.
Bakteri yang tidak memfermentasikan laktosa biasanya bersifat
patogen. Beberapa contoh pertumbuhan koloni pada MCA tetapi warna
koloni sama dengan media atau laktosa negatif yaitu Salmonella,
Proteus dan Shigella (Lay Bibiana 1994). Selanjutnya untuk
mendapatkan isolat murni dilakukan pembiakan pada media agar
miring. Isolat murni tersebut diwarnai dengan pewarnaan Gram.
Dengan pewarnaan yang telah dilakukan didapatkan bahwa bakteri
berwarna merah berbentuk basil. Hal ini menunjukkan bahwa koloni
bakteri tersebut termasuk dalam bakteri Gram negatif. Uji oksidase
dilakukan untuk mengetahui apakah bakteri tersebut dapat
menguraikan enzim oksidase atau tidak, hasil positif ditandai
dengan adanya cincin bewarna ungu. Hasil yang didapatkan dari
pengujian tersebut adalah positif ditandai dengan terbentuknya
cincin berwarna ungu.Kemudian dilakukan uji KIA atau TSIA yang
digunakan untuk membedakan genus bakteri dalam famili
Enterobacteriaceae dan membedakan Enterobacteriaceae dengan bakteri
batang halus Gram negatif yang bersifat non-fermenter. Perbedaan
tersebut didasarkan atas perbedaan dalam fermentasi karbohidrat
danproduksi hidrogen sulfida oleh beberapa kelompok bakteri
intestinal (Cappucino 2001). Pada uji KIA menunjukkan bahwa
terdapat pembentukan H2S yang tersebar pada butt ditandai dengan
perubahan warna menjadi hitam. H2S berasal dari desulfurasi asam
amino yang mengandung gugus sulfur (sistein dan metionin).Pada uji
indol atau uji motilitas bertujuan untuk mengamati sifat motilitas
bakteri pada media indol yang semi solid serta melihat ada atau
tidaknya pembentukan indol jika diteteskan reagen Ehrlich. Pada uji
sampel bakteri ini hanya terjadi pertumbuhan sepanjang daerah
tusukan yang menandakan bahwa bakteri tersebut bersifat motil.
Dengan adanya flagella menyebabkan terjadinya motilitas pada
bakteri tersebut.Uji berikutnya yaitu uji sitrat yang merupakan
media padat berbentuk agar miring yang berwarna hijau. Jika terjadi
perubahan warna pada media agar yang hijau menjadi warna biru maka
bakteri tersebut menggunakan sitrat sebagai satu-satunya sumber
karbon dan energi. Perubahan warna media dari hijau menjadi biru
disebabkan oleh peningkatan pH media di atas 7,6 karena adanya
ammonia yang dihasilkan yang berasal dari monoammonium phosphate
yang terdapat pada media (Duncan 2005). Berdasarkan hasil uji
sitrat yang dilakukan didapatkan bahwa warna media agar berubah
menjadi biru. Terdapat contoh bakteri yang bersifat sitrat positif
yaitu Salmonella sp.Pada uji urea hasil yang positif ditandai
dengan perubahan warna pada media yang kekuningan menjadi merah
muda. Contoh bakteri yang menghasilkan urease yang mampu
menghidrolisa urea adalah Proteus sp. Beberapa mikroorganisme mampu
menghasilkan enzim urease yang menguraikan mikromolekul urea
((NH2)2CO) menjadi karbondioksida (CO2) dan ammonia (NH3). Ammonia
yang dihasilkan akan meningkatkan pH media sampai di atas 6,8
sehingga akan terjadi perubahan media dari merah pudar menjadi
merah. Urea menjadi ammonium dan sehingga menyebabkan pH media
menjadi basa dan akan mengubah indicator merah fenol menjadi merah
mudah (Brown 2001). Pada uji urea ini dinyatakan bahwa sampel
bakteri positif menghasilkan urease yang mampu menghidrolisa
urea.Kemudian terdapat uji fermentasi karbohidrat, media ini
bersifat cair yang berisi pepton, karbohidrat, merah fenol
(indikator) dan berwarna merah jingga sebelum diinokulasi.
Karbohidrat yang dipakai untuk uji ini yaitu glukosa, maltosa,
manitol, laktosa, dan sukrosa. Pada uji ini yang menunjukkan hasil
positif yaitu pada media glukosa, maltosa, dan manitol. Terlihat
dari perubahan warna dari merah jingga menjadi kekuningan dan
terdapat gelembung gas pada tabung Durham. Perubahan pada warna
media terjadi karena bakteri yang diinokulasikan dapat
memfermentasi karbohidrat dan menghasilkan asam yang menyebabkan
penurunan pH. Berdasarkan pengujian yang telah dilakukan maka dapat
diketahui bahwa bakteri yang telah diisolasi dari hati ayam adalah
Salmonella sp. Hal ini dapat diketahui dari hasil positif pengujian
sitrat, terbentuknya H2S yang tersebar pada butt dengan pengujian
KIA serta pertumbuhan koloni pada MCA dengan warna koloni sama
seperti media.
BAB IVKESIMPULAN 4.1 KesimpulanBerdasarkan uji identifikasi
bakteri dapat dinyatakan bahwa sampel hati ayam bakteri Salmonella
sp. Identifikasi bakteri ini dilakukan dengan serangkaian uji
diantaranya uji oksidase, uji TSIA, uji indol, uji urea, uji sitrat
dan uji fermentasi karbohidrat.DAFTAR PUSTAKABrown A. 2001. Benson:
Microbiological Applications Lab Manual 8th Ed. New York: The
McGraw-Hill CompaniesCappuccino JG and Sherman N. 2001.
Microbiology: A Laboratory Manual. New York: Addison-Wesley
Publishing Company.Duncan F. 2005. MCB 1000L Applied Microbiology
Laboratory Manual 4th Ed. New York: The McGraw-Hill
Companies.Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA, Brooks GF, Butel JS,
Ornston LN. 1995. Mikrobiologi Kedokteran. 20th Edition. San
Francisco (USA): University of California.Lay W Bibiana. 1994.
Analisa Mikroba di Laboratorium. Edisi I. Jakarta: PT.Raja Grafindo
Persada.Tabba. 2007. Penyakit Ayam dan Penanggulangannya.
Yogyakarta: Kanisius
