IL-27 转染人食管鳞癌细胞抗肿瘤效应及其机理研究

河北医科大学第四医院 科研中心河北省肿瘤研究所

刘丽华

我国是食管癌的高发区，世界上约 50% 的食管癌发生在中国，到医院就诊的患者中95% 为中晚期。

尽管通过手术、化疗和放疗使食管癌的生存率 得 到 很 大 提 高 ， 平 均 5 年 生 存 率 仍 为10% 。

近年来，肿瘤生物治疗受到了人们的关注，并逐渐成为肿瘤的第四种治疗方法。

引 言引 言

IL-12 family members ： IL-12, IL-23 and IL-27 is primarily produced from activated antigen presenting cells (monocytes, macrophages and dendritic cells) whereas IL-35 is produced by regulatory T cells. These cytokines are all composed of two subunits, a helical subunit (IL-12p35 、 IL-23p19 、 IL-27p28 、 IL-35p35) and a soluble cytokine receptor-like subunit (IL-12p40 、 IL-23p40 、 IL-27EBI3 、 IL-35EBI3).

引言

本研究旨在探讨 IL-27 基因转染对人食管癌细胞在裸鼠体内的抗肿瘤效应及其对免疫功能的影响，探讨其抗肿瘤作用机制。

目 的目 的

细胞转染

逆转录病毒载体

(LXSN/IL-27) Ψ2

病毒 PA317polybrene

病毒 polybrene

Eca109

Eca109/IL-27

Ψ2/IL-27

PA317/IL-27

G418

G418

Eca109/LXSN

G418Lipofectamine

…………

方法

Eca109/IL-27 Eca109/LXSNEca109 细胞1×107 个细胞 / 只

皮下接种 腹腔接种

成瘤性、生存期肿瘤体积

建立动物模型

（ mm3 ）＝长径×短径2×1/2

方法

肿瘤组织

脾

RNART-PCR

T-bet, IL-12R2, TNF-, IL-1and IL-6

免疫组化NK

ELISAIFN-

NK 杀伤活性LDH

IL-27 对免疫调节作用研究 方法

Eca109/IL-27 细胞的培养上清中检测到 IL-27 ， 其 含 量 为 153.73±7.0pg/ml 。 而 在Eca109/LXSN 细胞和野生型 Eca109 细胞的培养上清中未检出 IL-27 。

结果

蛋白水平鉴定转染成功

Fig.1 Expression of IL-27 EBI3 and p28 gene in different cells dected by RT-PCR. M: DNA marker; A:Eca109/IL-27 cells; B: Eca109/LXSN

cells; C: Eca109 cells.

基因水平鉴定转染成功

EBI3 (706bp)

-actin500bp

M A B C M A B C

P28 (231bp)

500bp-

actin

结果 IL-27 基因表达

*

0

500

1000

1500

2000

2500

day

Tum

or v

olum

e(m

m3 ) Eca109

Eca109/LXSN

Eca109/IL-27

*

Fig.2 Tumor’s growth in nude mice inoculated subcutaneously with different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.01

IL-27 对肿瘤生长的影响

生存期

56±4day

54±3day

97±4day *

结果

Fig.3 Infiltration of NK cells in tumor tissues from nude mice after inoculation with different cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.05

Eca109/IL-27 Eca109/LXSN Eca109 12.6±1.2% * 8.4±0.9% 7.8±0.7%

IL-27 对移植瘤组织 NK 细胞浸润数量的影响结果

(

*

0

5

10

15

20

25

30

35

40 80 160Effector:Target

Spec

ific

lysi

s (%

)

Eca109

Eca109/LXSN

Eca109/IL-27

(

*

*

Fig.5 Cytotoxic activity of spleen cells from nude mice after inoculation different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.05

IL-27 对荷瘤裸鼠脾细胞免疫功能的影响结果

0

1000

2000

3000

0h 24h 48h

IFN-

γ (pg

/ml)

NSEca109Eca109/LXSNEca109/IL-27

*

Fig.4 IFN- production from spleen cells after inoculation different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.01

Fig.6 Gene expression in tumor tissues after inoculation different tumor cells detected by RT-PCR. A: Eca109; B: Eca109/LXSN; C: Eca109/IL-27

IL-27 对移植瘤组织中细胞因子表达的影响结果

本研究结果表明，接种 IL-27 转染细胞组裸鼠移植瘤生长缓慢、裸鼠生存期延长，移植瘤组织中仍有 IL-27 的表达，表明 IL-27 在裸鼠体内产生了抗肿瘤作用。

IL-27 受体高表达于 NK 细胞，因而我们进一步检测了移植瘤组织中 NK 细胞浸润的数量。结果表明，接种 IL-27 转染细胞组移植瘤组织间质中 NK 细胞浸润数量增高，效应分子 IFN- 产产增多，杀伤活性增强。说明 IL-27 不仅可以募集 NK 细胞而且能够增强其生物学效应。

讨 论讨 论讨论

研究结果显示接种 Eca109/IL-27 细胞组移植瘤组织中 T-bet 和 IL-12R2 基因的表达水平增高。 IL-27

增强 NK 细胞产生 IFN- 的分子基础是 IL-27 与受体结合后活化 STAT1 ，增加转录子 T-bet 表达，进而作用于靶基因促进 IL-12R2 和 IFN- 等的转录。因此我们在分子水平上证明 IL-27 能够促进 NK 细胞产生 IFN- 。

讨论

接种 Eca109/IL-27 细胞组移植瘤组织中 Thl 类细胞因子TNF- 、 IL-1 和 IL-6 基因的表达亦升高。 TNF- 在介导肿瘤细胞凋亡中起重要作用，在 Thl 型反应中具有重要辅助作用， IL-1 不仅对肿瘤细胞周期有阻滞作用，对 NK 细胞产生 IFN- 还起到促进作用，而 IL-6 在肿瘤基因治疗研究中的作用已经得到公认，这些细胞因子的表达都直接或间接与 IFN- 产生有关。

因而， IL-27 能够增强荷瘤裸鼠免疫功能而发挥抗肿瘤效应。

讨论