6

Increased transcripts of the dnaK locus genes in Methanosarcina mazei S-6 exposed to supraoptimal concentrations of ammonia

Embed Size (px)

Citation preview

��������� ��������� �� � � ���� ����� ����� � ������������

���� ��� ������ �� ��������� ������������� �� ������

������� ����� ���� ������� ���� ������ ���� ������ �� � ��� ��

� ���! "��#�! �� ������ ����$� ������� ������ ������� �� �������� ��������� ��� ������ � �� !���� "����� "�#� ��$ %&�� '�� (�) !���� �� �� ��� �� *������

+�,��-� '( .//&/�&%&�� 0!+� 1������� �� ������ ����� !������ ��� ��2������2� 3�� 3�������� 0������- �� ��� �)� 4-�2,-� ��� �)� �� �� ��� �� ��� ������ !������� !����� �� "�,��� *������ 3�� 0������- �� +�,��-� +�,��-� '(� 0!+

%��� �� &' ��� ('')* ������� (+ ��! ('')

��������

, � ������ �� ��������� ������������� �� ������ �� ���� ���#� ��� ������ ����� �� � � ���� ����� #�� � �������� �

������������ ���� ���� � ��� ������ ������� ��� �������� ������� � ����������� - �� � � ������������ �� ./�"�

#�� �������� &+ ���� ��� � � � ����� ��� ���#� � � � ��� ��� ����� ����� ���#� �������� �� � ��������� ����� ��� �

������ ������� #�� ������ 0 � � ��������� ���� � � ������ ����� 2 �� ����� ��� ���5 ��������� # ����� � �� �� � � ��1�����

����� ��..��)+ ���������� �� ��������� � (2����� ��� ���� �� � � ./�"� ������������� # � �� ���! � ��� � ���������

������ �� � � ������ ������ ��������� � � ��..��)+ ��������� , ��� ������ � �# � �� ������ �� ������ �� ��� � � ����

�������� ��� �� ���� ����

��-���6 ������ ������* ��� ���������* ���� ����� �����

�� ���� ����

��������� ��� ������� ����� ����� �� ������

� #����� ���� ��������� ����� ��� ����������� ���

� ��� � � ��� �����! #� ����� ������� ��� �� �

��������� �������� ��� ���� ��! 3(4� , ��� �����

�� �������� ��� ��������! ��� #���� �����������

��� �� # � � � � ��� �������� ��� ����������

��� � ������� �������� �� � � ��� ������� 5��� ��

� ����! �� ���������� �������� #������ ��� ���

��! �������� ��� �� � �� ����� ��������� �����

3(4� �� � ��� ����������� ��� ��������� ��! �� ��

���� �! � ������ �� ������� ��� �� � ����������

��� ���� ��� � � �� # � � ����� ��� � � ���#�

�� � � ��� ���������� ��� ��������� ��������

�� ! ������ 6���� "�� "�� �� 7�8� ��� � �� ���

�� ������ ����! ���� ���9�� ������ 3&0:4� ���� ��

� ��� �������� ��� ������� � ���������� ��� ����

6 ��� � ��;8 ��� "�� ��� ;��#� �� �� ���� ���������

3'�(24 # � ����� � ������ 6 ��� � ��;8 ������� �

������������ ���� ��� � �������<�� �! �� ��

������ � � � ��������� �� � � ������ 6 ��� � ��;8

� �&7����8 ����� ����� 3((4� �� �� ���� ���� � �

� �&7����8 ����� ����� ��� �����<�� � � � �����

2=):�(2') 9 ') 9 >()�22 ? ('') @�������� �� ������� ������������ �������� A���� �� �! ���� �� ������ ��B�

"11 � 2 = ) : � ( 2 ' ) 6 ' ) 8 2 2 & = + � :

$ "���������� ��� ��� ,���9@��C D( 6+(:8 E)E�(&(=*�������� � @��C D( 6+(:8 E)E�)''& �� �:+'2*�����C � ���!�F#���#��� ����

@��� ���������! ������� (+& 6('')8 =)'0=:E

���� ������������������� ��� � �������� � ���

����� ��� �� ������ ���� ��� ��� ���� ��� ������

�� ����� ������ ��� � �� ����� ��� ��� � ������

������� � ����������� � ��� ��� � � ������� � ����

�� �! " � ��� � ����� � ����� ����������� ��� ������

����� � ���� ������� ���� �������� ���� ����� ��� ���

� � ���� �� �! ������ ��� �� � �� � � ���� �� ����

��� ����� �� ��� ���� �� ��� ������ ���� ���� ���

������� ���� �� ��������� � ������ �� ���� ����

���� �� �!�

��������� � � ������ ��� � ���� �� ����� ��

�� ����� �� �� ���� ��������� � ���� � ��������� ��

� ��� ��� ������� �� ��� ����� �#��#� ���� � �����

����� � ���� �� �� ���� �� �� ���� ���� � � ���� � ��

�������� � � � ������ ���� ����� �� ��� �$���� ������

���� �� ����� � � �� ��� ��#� %��� ����� �� ��

������� � � ��� �&� � � ��� ����������� �� � �� �

����� �� ��� ��'�� ��� ��� ��������� ��� � � ��

��� ������ � ������ ������� �������� � �#��#� (� ���

������������� ��� ��� ��������� ��� �& ��� ����

������ ����� � ��� )� �$�* ��� ������ &� ���

��� ���� �� � ��+����� ��������� �,����

(� �� � � !� �� ������� ��� ��� �� � ���� ������ ��

�� ��� ����� ���� �� ������� ������ ������ ���� -����� �

�� ��� ������ (� ������ ��� ��� ���������� � �� �

�� ����� � ������ ���� ������� ���� �� �� ����� �

����� � �� ���� ��� ����� ��� ��!� ���� � �� ���

������� � ��� ���� .��� ����� � ��� ������ �� �

� ����� ����� � ��� �/����� �� ����� � ������ �

���� �������� �� ��������� � ����� ��� ������ �����

��� ������ � ������� ����� �������� �� ����� � ���

������� �� ���� �������!�� � � �������� ���� ��� �

��� �+���� � ��� ��� � ��� �� ��� � �� �����

.�0 ��� � ��� �*������ � � ��� ���� � ��� ������

&���� �� ��� �� ������� ������� ���� ����� ������

��� ��� � ��������� ���

�� �������� �� ��� ��

���� ���� ��� ���� ��� ��� � ��� ����

�� ����� .�0 ��� �� �� �� �11��� � ����� � ������

��� �1 �� � ������ ����� �������� � ����� �� ��

�234 ��0��2� 4��� �� ��� ��� �������� � ������

������ ������� ������ ������ �� � ���������

56���� ��7 �� ��8��� ���� � ����� ���� ��� �� ���

����� ������ �*��� ��� ��� �� �����8�� �� .���� � ��

���� ������ � ����

�� � ��� � ��� ��� ������ �*��������� ����

������� ��� ��� � ������� ������ � ������� � ������

��� �*��� ��� ��� �� ��� ��������� � ��� ���������

����� ���� ���� ���������� �� ��� ������ ���� ���

��������� ��� ��� � ��������� � �� � 2 �� �� ���

�� ������� ������ � ������� � ������ � � �*��� ���

� ��� � �������� �� ��� �*� ������� �� ��� ������

� �� ��� � �������� � �� �234 � � �1� 01� � �,1

���� 9�� ��� � ��������� � �� �������� ��� ���

������� � ������ 0�� �� � ������ ������:�����

� �234� ��� ����������� ������ � � �� ��� � ��

����� .�0� ���� ��� -������ � ;&�4� ������ �

����� � 8��� � ��������� � � ������ �1 � � �<�

5 � �0 ��� 0�� �<� � ;�7� 4 ��� � �������� ��������

��� ���� � ���� � ��������� 5�2347 ������ ����

��� �������� � ��������� � � ;&�4�� ����� � �<� 51�0

�<� � ;�7�

���� � � �! ��� �� ��� � ���� "� ���

� ��� =;9 ��� �*������� �� � ��� �� ����� .�0

����� � �� ���� �������� �� � � �� ��, ������� �

������ �������� ���� ; ������ �� ����� ��� �������

�� ��� � �� ���� �������� �� � � �� ��,� ���� ���

� � � ��8���� �� ���� & �����'��� � ��� � �� ����

��� *��������������� �� ��� � � ��� �� ����� .�0

����� ����� ����� ���� ��� ��� 5����� �7� ��� ���

��� � ��������� �� ������� ��>�

?��� �� C� ��� � �� ����� .�0 ������ ����� ���� ��+����� ��� �

��� � ��������� �� �� ��� ������� ������ �� � ��� ������ ���

6���� �� 5�������� �*��7 � ��� �������� �� ���� �� ������ ����

� 5� ���� ����7� �1 5� ��� ����7� � � 5������ ����7 �<� � ;&�4�

���� ���������� �� ��� ��������� �� �� 5� ��' ���� �*��7�

�� #���� � ��� $ %��& ����"���' #� ��� �(� )�**+, �+*-�./�,1

�� ������� � �������

���� ���� ���� � ��� ����� ������� ������� ����

�� �����

�� ��� ������� ����� �� ������� ����� ��� ����

������� �� ���� ���������� �� ��� � �� ��� ��

����� �� ��� ����� ���� ��� ����� �� ����

���� ���� � � �� ��� �� ����� !�� ������ � ��

������ ��� ���� �� ������� ���� �� ��� �� ������

������������ ��� ����� ������� ������ ��� ���

����� �� ����� �� ��� ������� ���� ���� �����

������������� "#��� �$�

%�� ������� ����� ����� ��� ����� ��� ��

� ����� ���� �� ��� ���� ����& �� ������ '��(�

%�� �� � ��� ����� ��� �� ���� �� �������� ����

��� ��� ������� !) ������ ��� ����� ���������

�� ���� ����*����� �� +,-�� ��� ��� �������

��� ���� ����!���� ��� ����� ����� �� �����

������ �� ���� ����& �� �������

%�� ���� ������) "./��� ��$ ��� �������� !����

������ ����� �� ������� ��� ������������ ��

��� ������� � ��� � �� �� � �� ���� ��� �� ��� ���

�� ��� ����!����� ���� ���� �������� ������ ��

����� ��� ����� 0�1� ��� �������� �� ������ ���

������ �� ����� �� �� �� �� ��� ���� %�� ������

������) �������� � ���) ��� ������ � ������ ����

������� �������) ��������� �� ��� ������� �� ���

����!����� �����2 +�� 3�� � �4� �� "#��� �$� %��

� �� ��� ���� ��� ����&�� !���� ��� ���� ���

����� ��������� ��� ����� �� ��) ���� ���� ���

� ���� ���� ��� ���������

���� ���� �� ������� ����� ������� ���� �� ��

���������� �� �� �� � ����� ����� � �� � ��� !"

#������ !�����

1 ������ ������� �� ���� 0�1 ��� �!����� ��

����� �� ���� �� �� � �� ��� �� ����� �� +�

�� ��� ��� ������� ��� ����� �� ����� �� ����

�� �� ��� �� ����� �� 3� ��� �4� �� "#��� +� ��

����$�

%�� �� � 0�1 �������� �� ����� �� ���� �� ��

��� �� ����� "#��� +� �� ����$� !�� ��� ������ �� �����

�� ���� �� �� ��� �� ����� ��� �!��� ��� ��� ��

����� �� ����� ���� �� ���� ���� ��� �������

������������ �� � ��� �� ������

%�� �� � 0�1 �������� �������) !�� �������

�����) �� ����� �� ���� �� �� � �� ��� �� ����� ��

+� � 3� �� "#��� +� !���� ����$�

%�� �����$��� 0�1 �������� �� ����� �� ����

�� �� ��� �� ����� �� +� � 3� �� "#��� +� !����

#��� �� ���� �� �� � ��� 7�3 ������ ����� ����� ������� ���

���� �� �������� ����� �������������� ������� ���� ���

�� ���� �� �������� ����� �� ���� ���� ��� ������� �������

������ �� ����� "� ���$� ��� ���������� ���� 3��� � �� ��

��� ����*����� �� +,-� ���������� ����� �� ���� :��� ����

���������� �� �� � �� ��� "����� ��� ������ ������ �� �������)$�

%�� ������� ��� ���� ����!���� �� +,-� �� +�� 3�� � �4� ��

"���;����� ����$� �� ����� ��� ����� 0�1� ��� �������� ��

����)��� "��� #��� +$� ./��� �� "������� ����$ ��� ��������

*��� !���� �������� �� ������ ��� �� ��� ��� �� ��� ����!�����

����� �� �� 0�1 ����������

%�!�� �

������� ���� �!�� ��!����� ���� ����������� ���� �� ���� ��&

%���� ���� 8����� �� ! "��������$� <��� �� �� ����� ����� �� #��� + ����

���� +� "=9�,9$ �� ����

�� � 99 "+=��==�$ �� ����

�� � 34+ "��=�9�,$ !���� ����

��� 99 "44��94�$ !���� ����

�#����� �� ��������� �������� ��� ���������� �������� �� ��� ����� !�������� ��� ����� �� ��� :�� !��� �� ��� ���������� ���� ������ ��

����� ��� �!� !����� ��� �����

�� % ��� � �� & '��( �����!�����" %���� �)� *�++,- �,+.�/0 +4�

������� �� ������ ���� ���� �������� �� ���� ���

���� � �� ��� � ����� �� ��� ��� ��� �� ����

������ � � ��� � ���� ��!���

��� ����������� "��� �������� �"�� "��� ��� ����

���!���� �� ��� ���� ��� ��#� � ��� ��������� "�� ����

� � �������� ������� �� ���� ���� ���

���� $!� �� ��� ��� � �� ��� ��#� � ���

���� ��������� � �� �� ����� ����������

�� �� ��� $��� ���%���� ���� �������������

���������� &'�� ��� � ���� ���� ���!�$�� $(

)��� /� *1�� � ������ � ����� ����� ���� ��� �� ����� ���� ��%��� �� �� ����� +�.� &��� ���� "��� �������� ��� ������

���� !���%���� �� ����!� "��� ��� �������� ��������� � ����� 2���� � ��� 3 ����� �� � ��� ���� ��!$���� �� /� .� � ��� ���

�� ����!� �������� ������ �� 2����� 4 � ��� 5 �������%��(� � � 2����� * ) ��� 6 �������%��(� ��� � ����� ��� ������������

2�� �������� �� � �����!���� ���� &�� !���� ����� � ��� �!� ������ ��"� ��� ��� ������� "��� ������!� $����� "��� ��� �/+ ��� �.+

����� "������ ��� $��� ����� ������(� ��� ���������� ������� $�� �($����#�� "��� ��� ��$�� �� ���� 2�� ����� ���� 2��

������ ���� 2$��� ����� ��� �� ����� 2$��� ������ �����$�� �� &�$�� �� &�� ��#�� � ��� ����� ��� ���� � ��� �($����#����

$���� �� 7$ ��� �������� � ��� ������

�� ����� � ��� � ���� ����������� ����� �!" #�$$%& '%$(')*/��

���� ����� ��� ��� � ��� �� ������� ������ ���

���� ������ �� ���� ����������� ����� ����� �����

����� �� ��� ��� �� ����� �� ������������ ��������

����� � ��� ������������ �� !������� �������� ����

��� ���� �"!# ��������� ���� ��� $%�& ����� ����

�������� ���� � �'� �� !(���� $���� ������� ��� ���

��������� ����� ������� � ������������ ����� )���

��� �� ���� *�+ ����� $���� &, ��� ���� ��� ������

���� ��� ���� ��� $%�& ������ �� �������� ����

����� ��� *�+� � ���� ����-��� �-����� ���� �����

�.��������� ���� ������� �� � �������� ���� ��� ��

���� ���� $%�&�

$�� �������� ������� ������������ ���� � �������

������� �� !(��� �� � �'�� ����� ������ ������ ����

��� ������� ��� ������ �� �� ���� *�+� ������� �

������ ��������� $��� ��� �������� �� ��� ���������

��-��� �� ��� ����������� ���� ��� ������ )���� �����,

����� ����� ����� ��� ����� ����������� �� � ���

�������� �� ��� ���������� �� ��� �������� �����

)/��� 0,� $���� ������� �� ��� ����������� ���� ���

�� ���� ���� ����� ����� ���� ������� �� �����

������� �� ���� ����� �&0�&�� ��� ���������� ������

���� & �'� �� !(��� ���� �������� ��� ����� �� ����

�.���� ��� ��� �� ���������� � ��� �� �������

�������� �� ����� ������ ��� ���� ������� ��-�����

������ %��� ������������ & �'� �� !(��� �������

��� �������� ����� �� ���� �������� �� �� �

������� ��������� �������� �� �� ����� ��-��� �� �.���

���� �� �������� 1���� �� �.������ �� & �'� ��

!(��� ��� 0 �� + ��� �������� �� �� �������� ��

��� �������� ����������� � ������ �.������ )���� &2

���,� �� �� �.������ �� � ������ ���� �� !(��� )�����

�������������� ����� ������ ���� ��� �����������

���� �� & �'�, �������� � ���������� �� ��� �����

�������

$�� ��������� � � ��� ��������� �� ��-��-�� ��

3� ��������� )�&� ��� ���������� �������,� 4������

�� ����� ��� �� ��� �������� �� ��� ���� ��� ����

����� ������ ����� �� �� ���� *�+� �� ��� ��������

��5�� ���� ��� ����� ���� � ���� �� ��� ������ ���

������ �� ���� ���������� �� ���� �� � �������

�&�� *��� � ���� ����� ������ ����������� ���� 3�

�� �� ������ ������ ���� ������ ��� ��� �����������

�� ��� ��������� ��������� 6��3 ��� $�� ������

�������� 6��3� 7��8 ��� 6��9 )��� ������ ��� ���

��� �������� �� ���� ��� ����� ��������-���, ���� ��

�� ���� � ��������� ��������� ������. �0� ����

����� �� ��������� ���� �� ���������� ��� �������� ����

����� ���� ������������ ������ ������� ���� �-������

���� ����� ��� ��������� ���� ����-���� $�� 3� ��� ��

������ ��� ��� ������������ ������� ��� ������� ��

��� ��������� ��������� ������. ��� ��� ���������

)���� � ��������� ��������� �������,� (���-��� 6��3

���� ����� �� �� ��������� ��� ��� 3� ��������� �� ��

� � ����� ���� ���������� ����������� ������� ���� ��

��� ��� ���� ��� 6��9 ��� 7��8 �:�� � ��� ��������

�� �������� ����� �� ������-��� ��� ������������

����� �� ������� �� ����� ��������� ����� ��� ��

�� � ������������ ��������� ���� �������� ��� ����

���� ����� ���������� �� ���� �� �������� �� ������

���������� ��� �����-��� ��� ����;� ������� �� ���-�-��

�� ��� ���� �� ������� /�� �.������ ��� ��� ��-�����

������������ )���� ������� �����������, �� ��� �����

��� ������ �� ����� ��������� �� ��-���� ����� ���

���������� ��� ����������� ������� ��-��� �� ����

������� ������� ��� ���� �����-� ����� �������

�����

�������������

1� ����� ������� 4� 6���� ��� ���� ��� ��������

�����������< $�� %���� ���� ��� %�������� 7�����

��� ���� /������� ��� ��������� ��� ��������� ������<

��� ��������� �� ��� 4����������� ���� ��� ���� ���

�=�������� ��� ���� �� ��� >���������� ?��� ��� ���

��� ����< ��� $���� @� 7������ ��� ���� ��������

���� %�@� ��� ��������� �� ��� 6����� !������ *���

���� "������� �������� ��� �� ��� 6����� 4 A$83

>������� $��� ���� ��� ��������� �� ���� �� 7����

B+�" 8"�48# ���� !C*8"6# �� 8��� �� %� ���

#�9�@�%�

���������

�&� D������ *�(� )&EE0, >������������ ������� �� ������������ �F

%������������� )/����� 9�7�� 8��,� ��� &2G+� �������

��� (���� !�� C����

�� #������ 4�3�� *�������� %� ��� #���������� � )&EE�, H�������

����� ����� �� ���������� �� ������� ��������� �� ���������

���������� #���� %��������� 4���������� :0� ��EG�+��

�0� #������ 4�3� ��� 1���������� >� )&E2�, *������-��� �� �����

�������� ������������ �������� �� ���-� ������� ����� %�����

����� &� B0GB+�

�:� #���������� � ��� #������ 4�3� )&EE, $����������� �������

��� ��������� �� ��-������ �����F ��� � ��� �� �������� #����

%��������� 4���������� 02� �+G�+:�

�� ����� � ��� � ���� ��� � � � ����� �!" #�$$%& '%$(')* 020

��� ����������� �� � ������ ���� ������ �� ��� ���������

����� ���� �� �! "�#�� �$���% �& ���'��' �� '�������

����� %%��'%� (���� ��%� ) )** +)*,��

�-� .��� ������ ��� ��� ���� �� ,! /$��� �& ���0 '���1% ��

��� '����������� ����0�� �& %��������������� �����1�%� ����

������1� ����� �- �2 �+�2 -�

�3� 4����11 �.� ���1���� �� ��� �� 5� �� 63! 7��������� �&

'����������%�% �� 8��� ��1����% � �''���� &��� ����% ���

���0 '���1% ��� 8��������� �����%� ���0 '���1 ��#���� �

%�9��� %1����� :��� 4� ��������1� ** ���+��,�

�6� �%��� 7�(� ��� ��'�� /� �� 66! 5''���� ���������� �&

��� '�#�'�' ���9�� ���� ���! �& �����������8��� '�����

�����% �� 0�����% 8��1�0�1% ��� ��'8�������%� 5881� ������

���1� ���������1� )6 �22+�2��

� � ������% ���� �� *! ����%% 8������% �� �;����� ������%'%< ��

��0����'����1 8��%8����0�� :���� ��0� "�#���1� )* , +3��

��2� ��������1�� ��5� �11� ���� ��� =�������� .�:� �� 63!

>�$�������1 ��������� �& ���� %���? �@� ��� �#������� %���%%

����1��% ��� ����'�1����� �& ���1������% �� ����������� ����

4� ��������1� �- )-+*)�

���� ������� 5�4��� ��� :��9� �� ������� /� �� -! ����%%

����%< �� ����������� �0��0��9� ����%% * �)*+�*,�

��)� :1����% �� ������� 5�4��� ��� :��9� �� ������� /�

�� �! "�� �������1 ��� ��� ���� �1�%���< ������A�����

��� �#8��%%��� �� ��� '��������� �������������� ������

4� ��1� ���1� )�2 � �+)2��

��*� :��9� �� ������� /� :1����% �� ��� ������� 5�4���

�� �! 5������1 ���� < ����%���8���� �� �9� ��$����� '��8���

1���� %����% �& �������������� ����� ��� ��'8���%�� 9���

��� ��� ���� 4� ��������1� �33 �,,+��2�

��,� 5���1���?� 7� ��� 5����� �� � �� *! 5�������� ����%���� �&

'����� �� ��$����� �''���� 1���%< �$��� �& ��'8��������

(���� ��%� )6 3)3+3*��

���� �8���� B�>� ��� ����1 B��� �� 6-! 5''���� ��#���� �� 8���

��1����% �& '����������� ��������� �%�� 5881� ��������1� 3

*�6+*-*�

��-� ����� >��� ��� ��� ��5� �� 63! /$���% �& ��1���' '���

��%��' 8� ��� �#���� �& ���9�� �� ��� '��8��1�� �&

�������������� ����� ��-� 5881� /�0����� ��������1� �*

�- +�322�

��3� ��9��% ��� �� �! B��9�� �& �������������� %88� �% %���1�

��11%� 7�< 5������� 5 ��������� �����1 ����� .�"� �1���

5��� ��9��% ��� �������� ��4� >�%���'� �� ��� .1��%���

'��� /��� /�%�! 88� -�+-)� :�1� �8���� ������ �������

��� ���%% �1���0��9 =C�

��6� 5�%���1 .��� ����� �� ���%��� ��/� ����� >�>� �����

'�� 4�B� �'��� 4�5� ��� �����1 � �/�%�! �� �! :������

�������1% �� ��1���1�� ���1��� 4��� (�1� ��� ���% =�9

C��?�

�� � :��9� �� ������� /� B������� �� >���� :��� ��� ����

���� 5�4��� �� -! 7���������� �& &������ >=5 �� �� ������

����� ������ �& ��� �������� �������������� ����� 9������

�$��� �� ����%���8���� �& ��D����� ����%� 4� ��1� ���1� )-) �)+

)2�

�)2� ����� �� ������� 5�4��� 5����� �� � ��� :��9� ��

������� /� �� 3! �����%���? ��%8��%� �� ��������������

����� ��-� :���� ��������1� *� ��-+�)��

�)�� :��9� �� ������� /� ��� ������� 5�4��� �� �! "����

%���8���� �& ��� �������1 ���� ��'�1�� �� ��������������

����� ��-� 4� ��������1� �33 -233+-26)�

�))� ��11���% >��� ���� ��� ��� �� (�1�� (�4� ��� .��?

5��� �� *! 5"��������� 8��������%832 ��'81�# ��%%��������

��;����% � ��� ��� 5"� ����1%�%� =����� *-� --,+---�

�)*� ������ 4� ��� ����1 .��� �� 3! :��8�������%%�%��� 8������

&�1����� :���� @8��� ������� ���1� 3 ,�+�)�

�),� ���� 4� ��� ����'� �� �� �! ��1� �& ���� %���? 8���

���� >�� �� �%'���� ���8���� �& ����������� ���� 4� �������

��1� �3* ,,2,+,,�2�

�� ����� �� �� � ���� ����������� ������� �� !�""#$ %#"&%'(*6,