INGENIERIA GENETICA EXPOSICION

5/13/2018 INGENIERIA GENETICA EXPOSICION - slidepdf.com

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INGENIERÍAINGENIERÍAGENÉTICAGENÉTICA

Alumnos AlumnosManzanero VíctorManzanero Víctor

Perozo JuanPerozo JuanQuintero LuisQuintero LuisRivera MilagroRivera Milagro

Romero GenitzaRomero Genitza



ESQUEMAESQUEMA

TÉCNICA DE LA REACCIÓN EN CADENA DE LAPOLIMERASA (PCR)

DESCRIPCIÓN APLIC ACIONES

TÉCNICAS DE SECUENCIACIÓN DEL ADN

TIPOS APLIC ACIONES



TÉCNICA DE LA REACCIÓN EN CADENA DELA POLIMERASA (PCR)

La Reacción en Cadena de la Polimerasa(PCR:Polymerase Chain Reaction) es una técnica "invitro" que imita la habilidad natural de la célula de

duplicar el AD

N. Se trata de una técnica usada para crear un gran

número de copias de un segmento de ADN, queutiliza ciclos de desnaturalización, apareamiento concebadores y extensión por una ADN polimerasatermoresistente.



DESCRIPCIÓN

Para realizar la técnica se necesitan:1. Los 4 desoxirribonucleósidos-trifosfato (dNTP),

sutrato para polimerizar nuevo ADN.

1. 2 cebadores, iniciadores (primers), oligonucleótidosque son, cada uno, complementarios a una de las dos

hebras del ADN.



DESCRIPCIÓNDESCRIPCIÓN

3. Iones divalentes y monovalentes (cofactores de lapolimerasa)

4. Una solución tampón




5. ADN polimerasa o mezcla de distintas polimerasascon temperatura óptima alrededor de 70 °C

6. Termociclador




La reacción en cadena de la PCR se efectúa en 3

pasos generales: Desnaturalización, alineamiento ohibridación y elongación.






Conservación

Electroforesis en gel de agarosa

Refrigeración 4-15 °C




OptimizaciónProtocolos y procedimientos adecuados



APLICACIONES APLICACIONES

PCR

Investigación

MedicinaPaleontología, Antropología,Biológica y Ciencias Forenses

Agronomía y Diversidad



TÉCNICAS DE SECUENCIACIÓN DEL ADNTÉCNICAS DE SECUENCIACIÓN DEL ADN

La secuenciación de ADN es un conjuntode métodos y técnicas bioquímicas cuya finalidad esla determinación del orden delos nucleótidos (A, C, G y T) en

un oligonucleótido de AD

N.D

eterminar la secuenciade ADN es útil en el estudio de la investigación básicade los procesos biológicos fundamentales, así comoen campos aplicados, como la investigación forense.



TÉCNICAS DE SECUENCIACIÓN DEL ADN

Durante 30 años la mayor parte de la secuenciaciónde ADN se llevó a cabo con el método de terminaciónde la cadena desarrollado por Frederick Sanger ycolaboradores en 1975. Antes del desarrollo de

métodos rápidos de secuenciación del ADN aprincipios de los 70 por Sanger en Inglaterra; WalterGilbert y Allan Maxam en Harvard, utilizaban variosmétodos de laboratorio.

Gráfico de una secuencia de ADN

Obtenido por electroforesis capilar

(Electroferograma)



TIPOS

1. Secuenciación de Maxam1. Secuenciación de Maxam--GilbertGilbert



2. Método enzimático de Sanger.



3. Métodos de terminación de la cadena

P arte de un gel de secuenciación con marcaje radiactivo



TIPOS

Los fragmentos de ADN se pueden marcar utilizando radiactividad o fluorescencia en el cebador (1),

en la nueva cadena de ADN con dNTP marcado, o con un ddNTP marcado.



3.1. Secuenciación por terminador fluorescente

Electroforesis capilar.



4. Pirosecuenciación



5. Estrategias de secuenciación a gran escala

El ADN genómico se fragmenta en trozos al azar y se clonan en una biblioteca

bacteriana. El ADN de los clones bacterianos individuales se secuencia y la

secuencia se ensambla observando las regiones solapantes.



6. Nuevos métodos de secuenciación

6.1. Secuenciación de alto rendimiento

6.2. Amplificación clonal in vitro

6.3. Secuenciación paralelizada



APLIC ACIONES

Detección de mutaciones S

ecuenciación de AD

Ns fósiles Diagnóstico de enfermedades genéticas Identificación de especies y control de

cruces entre animales Proyecto genoma humano



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