Інструкція з експлуатації

2-MET плазма ELISA експрес-метод

REF BA E-8300

IVD

Уповноважений представник: ТОВ «НОВАМЕДЛАЙН», 01010, м. Київ, вул. Омеляновича-Павленка, буд. 19 А, оф. 1, тел. (044) 223-83-18, info@novamedline.com, www.novamedline.com

Введення

1.1. Призначення та принцип аналізу

Імуноферментний аналіз для кількісного визначення вільного метанефрину та вільного

Норметанефрину в плазмі

Споріднені продукти:

2-МЕТ Плазма РІА експрес метод

Метанефрин плазми ІФА експрес -метод Метанефрин плазми РІА експрес-метод

Норметанефрін плазми ІФА експрес-метод Норметанефрін плазми РІА експрес-метод

Як альтернатива, аналіз також може виконуватися автоматично за допомогою аналізатора ІФА,

такого як Gemini інструмент від Stratec Biomedical. Протокол Gemini доступний за запитом.

Метанфрін (метадреналін) і норметанефрин (норметрадреналін) спочатку екстрагують за

допомогою іонообмінної матриці з наступним процесом ацилювання.

Наступний конкурентний ELISA використовує формат мікропланшетів. Антиген зв'язаний з

твердою фазою мікропланшету. Ацильовані стандарти, контролі та зразки конкурують із твердою

фазою аналіту для фіксованого числа сайтів, що зв'язують антитіла. Після того як система

приходить до рівноваги, вільний антиген і вільні комплекси антиген-антитіла видаляються

шляхом промивання. Антитіло, зв'язане з твердою фазою, виявляється кон'югатом анти- кролика

IgG-пероксидази, використовуючи TMБ як субстрат. Реакція спостерігається при 450 нм.

Кількісне визначення невідомих зразків досягається шляхом порівняння їх абсорбції з еталонною

кривою, підготовленою з відомими стандартами.

Антитіла, що використовуються в цьому тестовому наборі, визнають лише біологічно

важливі L-форми метанефрину.

Комерційно доступний синтетичний норметанефрин або метанефрин завжди є сумішшю D- і

L-форм. Співвідношення між цими формами значно відрізняється від партії до партії. Це має

важливі наслідки, якщо синтетичні метанефрини використовуються для збагачення

природних зразків. Оскільки лише близько 50% синтетичних метанфринів - L-частина - будуть

виявлені за допомогою цього набору, збагачені зразки будуть недооцінені.

Тому повинні використовуватися натуральні зразки, що містять лише L-форму.

1.2 Клінічне застосування

Метанефрин і норметанефрин є метаболітами катехоламінів адреналіну та

норадреналіну, відповідно. Клітини, отримані з нейроендокринних пухлин (наприклад,

феохромоцитоми), є відомими продуцентами катехоламінів, які епізодично виділяються через

пухирці в кровотік. Але крім цього невелика частина катехоламінів метаболізується всередині

клітин до відповідних метаболітів катехоламінів, а саме метанефрину, норметанефрину та 3-

метокситираміну, які виділяються на низьких рівнях безперервно в кровотік.

Недавні дослідження та публікації показали, що кількісне визначення цих безплазмових

метанефрину та норманефріну є найбільш точним біохімічним маркером для клінічної

діагностики феохромоцитоми та спостереження за феохромоцитомою пацієнтів .

Терапевтичні наслідки ніколи не повинні ґрунтуватися на лабораторних результатах поодинці,

навіть якщо всі результати тесту є в угоді з пунктами пункту "Процедурні застереження, інструкції

та попередження". Будь-який лабораторний результат є лише частиною загальної клінічної

картини пацієнта.

Лише в тих випадках, коли лабораторні результати є прийнятними з урахуванням загальної

клінічної картини пацієнта, він може бути використаний для терапевтичних наслідків.

Сам результат тестування ніколи не повинен бути єдиним детермінантом для виявлення будь-

яких терапевтичних наслідків.

2. Процедурні запобіжні заходи, керівництва, попередження та обмеження 2.1. Процедурні запобіжні заходи, керівництва та попередження (1) Цей комплект призначений тільки для професійного використання. Користувачі повинні мати глибоке розуміння цього протоколу для успішного використання цього набору. Тільки інструкція з тестування, що надається з набором, дійсна і повинна бути використана для пробігу аналізу. Надійна продуктивність буде досягнута лише шляхом суворого та ретельного дотримання вимог наданої інструкції. (2) Цей аналіз було підтверджено для певного виду зразка, як зазначено в Призначеному застосуванні (див.розділ 1). За будь-яке використання даного набору поза інструкцією несе відповідальність користувач, виробник не може нести відповідальність. (3) Реагенти цього комплекту, що містять людську сироватку або плазму, були протестовані та підтверджені негативними для ВІЛ-інфекції I / II, HBsAg та HCV за схваленими процедурами. Проте всі реагенти слід розглядати як потенційні біологічні небезпеки у використанні та для утилізації. (4) Необхідно дотримуватися принципів належної лабораторної практики (GLP). (5) Щоб зменшити вплив потенційно шкідливих речовин, одягайте лабораторні халати, одноразові захисні засоби, рукавички та захисні окуляри, де це необхідно. (6) Всі реактиви набору та зразки потрібно довести до кімнатної температури та змішати м'яко, але ретельно перед використанням. Уникайте повторного заморожування та відтавання реагентів та зразків. (7) Для розведення або відновлення використовують деіонізовану, дистильовану або ультра- чисту воду. (8) Мікропланшет містить відрізні смужки. Незастосовувані лунки повинні зберігатися при температурі від 2 ° С до 8 ° С у пакеті з герметичної фольги з осушувачем і використовиватися в тримачу передбаченому. Стріпи мікропланшета, які знімаються з тримача для використання , слід позначити відповідно, щоб уникнути будь-якого змішування. (9) Дублююче визначення вибірки настійно рекомендується для того, щоб бути в змозі визначити потенційні помилки прокапування. (10) Після початку випробування всі кроки повинні бути завершені без перерви. Переконайтеся, що необхідні реагенти, матеріали та прилади готуються в належний час. (11) Час інкубації впливає на результати. Всі лунки повинні оброблятися в тому ж порядку і інтервалі часу (12) Щоб уникнути перехресного забруднення реагентів, використовуйте нові одноразові наконечники піпетки для видачі кожного реагенту,зразку, стандарту і контролю. (13) Для кожного пробігу має бути встановлена стандартна крива. (14) Контроль повинен бути включений в кожний пробіг і бути знайденим в межах встановлених довірчих меж. Довірчі межі вказані в Звіті про забезпечення контролю якості. (15) Не змішуйте компоненти набору з різними номерами партії в рамках тесту і не використовуйте реагенти за межами терміну придатності, який показано на етикетках набору. (16) Уникайте контакту з стоп-розчином, що містить 0,25 М H2SO4. Це може спричинити подразнення шкіри та опіки. У випадку контакту з очима або шкірою, негайно змийте водою. (17)Субстрат ТМБ має подразнюючу дію на шкіру та слизову оболонку. У разі можливого контакту промийте очі з рясним об'ємом води і шкіру з милом і великою кількістю води. Промити забруднені об'єкти раніше їх повторного використання . (18) Для отримання інформації про небезпечні речовини, включені в набір, зверніться до Паспорта безпеки (SDS). Паспорт безпеки даних для даного продукту доступний безпосередньо на веб-сайті виробника або на сторінці по запиту. (19) Очікувані еталонні значення, наведені в цій інструкції, є лише показовими. Рекомендується кожній лабораторії встановити свої контрольні інтервали. (20) Результати, отримані в цьому тестовому наборі, не слід вважати єдиною причиною будь-яких терапевтичних наслідків (наприклад, медикаменти перед планованою операцією), але вони повинні співвідноситись з іншими діагностичними тестами та клінічними спостереженнями.

(21) Реактиви набору мають розглядатися як небезпечні відходи та утилізуватися відповідно до національних правил. 2.2 Обмеження Будь-яке неправильне поводження із зразками або модифікація цього випробування може вплинути на результати. 2.2.1 Впливаючі речовини Зразки, що містять осадки або нитки фібрину або які є гемолітичними або ліпемічними, можуть призвести до неточних результатів. 2.2.2 Вплив ліків Будь ласка, зверніться до пункту "Збір та зберігання зразків". 2.2.3 Ефект високої дози-крюка У цьому тесті не було виявлено ефекту крюка. 3. Зберігання та стабільність Зберігайте нерозкриті реагенти при температурі від 2 до 8 ° С до закінчення терміну придатності. Не використовуйте компоненти після завершення терміну придатності, вказаного на етикетках набору. Після відкриття реагенти стабільні протягом 1 місяця при зберіганні при 2 - 8 ° C. Після того, як було відкрито багаторазовий пакет, слід ретельно закрити його з осушувачем знову. 4. Матеріали 4.1 Зміст комплекту FOILS Клейова фольга BA D-0090 - Готова до використання Вміст: клейова фольга в пакетах багаторазових Об'єм: 2 х 4 фольги ВА-Е-0030 WASH CONC 50X концентрат для миття буферу - концентрований 50х Вміст: буфер з неіонним миючим засобом і фізіологічний рН Об'єм: 2 x 20 мл / флакон, світло-фіолетовий ковпачок

BA E-0040 Conjugate ферментний кон’югат - Готовий до використання

Вміст: козячий анти-кроликовий імуноглобулін, кон'югований з пероксидазою

Об'єм: 2 x 12 мл / флакон, червоний ковпачок

BA E-0055 Substrate субстрат - Готовий до використання

Вміст: хромогенний субстрат, що містить тетраметілбензидін, буфер субстрату та водню

пероксид

Об'єм: 2 x 12 мл / флакон, чорний ковпачок

BA E-0080 Stop Soln стоп розчин - Готовий до використання

Вміст: 0,25 М сірчаної кислоти

Об'єм: 2 x 12 мл / флакон, світло-сірий ковпачок

Небезпеки

ідентифікації:

H290 Може бути корозійним до металів.

H314 Викликає сильні опіки шкіри та пошкодження очей.

BA E-0131 Стріпи мікропланшету метанефріну- Готові до використання

Вміст: 1 x 96 лунок (12x8)покритий антигеном попередньо мікропланшет в багаторазовому синім

пакеті з осушувачем

BA Е-0231 Норметанефрини стріпи мікропланшету - Готові до використання

Вміст: 1 x 96 лунок (12x8) покритий антигеном попередньо мікропланшет в багаторазовому жовтим

пакеті з осушувачем

BA E-8110 Mn As метанефрін антисерум - Готовий до використання

Вміст: Кроляче анти-метанефрін антитіло, синій колір

Об'єм: 1 х 6 мл / флакон, синій ковпачок

ВА Е-8210 NMN-AS Норметанефрин Антисироватка - Готовий до використання

Вміст: Кролик анти-Норметанефрин антитіло жовтого кольору

Об'єм: 1 x 6 мл / флакону, жовтий ковпачок

Стандарти та контролі - Готові до використання

Кат.№ компонент Колір/ковп Концентрація пг/мл

Концентрація пмоль/л Об’єм/флакон

mn nmn mn nmn

ВА Е 8301 Standart A білий 0 0 0 0 4 мл

ВА Е 8302 Standart B Світло-жовтий 36 72 183 393 4 мл

ВА Е 8303 Standart C помаранчовий 120 240 608 1310 4 мл

ВА Е 8304 Standart D Темно-синій 360 720 1825 3931 4 мл

ВА Е 8305 Standart E Світло-сірий 1200 2400 6084 13104 4 мл

ВА Е 8306 Standart F чорний 3600 7200 18252 39312 4 мл

ВА Е 8351 CONTROL 1 Світло-зелений Зверніть увагу на КЯ-звіт для очікуваного значення і прийнятного діапазону!

4 мл

ВА Е 8352 CONTROL 2 Темно-червоний 4 мл

Конверсія: Метанфрін (пг / мл) х 5,07 = Метанефрін (пмоль / л)

Норметанефрин (пг / мл) х 5.46 = Норметанефрин (пмоль / л)

Вміст: Кислий буфер з стабілізатором, що не містить ртуті, збагачений певною кількістю

Метанефріну і Норметанефрину

ВА Е-8327 ADJUST BUFF Буфер налаштування - Готовий до використання

Вміст: Tріс-буфер

Об'єм: 1 x 10 мл / флакон, жовтий ковпачок

BA R-8313 Assay Buff буфер аналізу - готовий до використання

Вміст: 25% органічного розчинника

Об'єм: 1 x 30 мл / флакон, оранжевий ковпачок

BA R-8312 Acyl Ацилюючий концентрат - концентрований Вміст: ацилюючий реагент у ДМСО Об'єм: 1 х 1,5 мл / флакон, темно-сірий ковпачок Небезпеки ідентифікація: H302 Шкідливий при проковтуванні. BA R-8318 Extract- Plate екстракційний планшет - Готовий до використання Вміст: 1-х 96-лунковий планшет, попередньо покритий іонообмінником у закритому пакеті BA R-8325 Clean-conc Очищуючий концентрат 25х Вміст: буфер з ацетатом натрію Об'єм: 1 x 20 мл / флакон, коричневий ковпак BA R-8326 Elution Buff буфер елювання- Готовий до використання Вміст: 0,1 М гідроксид натрію, темно-фіолетовий колір Об'єм: 1 x 14 мл / флакон, темно-зелений ковпачок BA R-8828 Equa-Reag - Готовий до використання

Вміст: сироватка людини, негативна для ВІЛ-інфекції І / ІІ, HBsAg та ВГС Об'єм: 1 x 14 мл / флакон, білий ковпачок 4.2 Додаткові матеріали та обладнання, необхідні, але не передбачені в наборі - Калібровані точні піпетки для розподілу обсягів від 20 до 350 мкл; 3 мл - прилад для промивання мікропланшетів (ручне, напів-автоматизоване або автоматичне) - рідер ELISA, здатний зчитувати абсорбцію при 450 нм і, якщо можливо, 620 - 650 нм - шейкер мікропланшетів (амплітуда струшування 3 мм, приблизно 600 об / хв) - Абсорбуючий матеріал (паперовий рушник) - Вода (деіонізована, дистильована або ультра-чиста) - змішувач вихровий 5. Збір і зберігання зразків Лікарські засоби, такі як інгібітори зворотного захоплення серотоніну-норадреналіну, трициклічні антидепресанти, інгібітори МАО,антигіпертензивні препарати та L-DOPA можуть впливати на рівень метанефрину та нормаметранефрину. Людям, які приймають такі ліки, слід проконсультуватися з лікарем перед збором зразків. Симпатоміметичні засоби, спорт і куріння також можуть впливати на рівень метанефрину та норметанефрину. Необхідно уникати алкогольних та кофеїнових напоїв за день до дня, включаючи день збору зразків. EDTA- або гепарин-плазма Цільну кров треба зібрати у центрифужні пробірки (MonovetteTM або VacuetteTM), що містить EDTA або гепарин як антикоагулянт і центрифугувати (згідно з інструкціями виробника) відразу після забору. Гемолітичні та ліпемічні зразки не повинні використовуватися для аналізу. Зберігання: до 6 годин при 2-8 ° С, на більш тривалий термін (до 6 місяців) при -20 ° С. Необхідно уникати повторного заморожування та відтавання. 6. Процедура аналізу ELISA можна запустити, використовуючи інкубацію протягом ночі без струшування (протягом приблизно 24 годин) або як експрес версію з укороченими інтервалами інкубації антисироватки при струшуванні (результати в межах прибл. 6 годин). Дозвольте всім реагентам досягти кімнатної температури і ретельно перемішати шляхом легкої інверсії перед використанням. Пронумеруйте пластини екстракції та пластини мікропланшетів (стріпи мікропланшета, які знімаються з тримача для використання,слід маркувати відповідно, щоб уникнути будь-якого змішування). Рекомендовані дублюючі визначення. Зв'язування антитіл, ферментних кон'югатів та активність використовуваного ферменту є температурно залежними, значення поглинання може змінюватися, якщо термостат не використовується. Чим вище температура, тим вище значення поглинання буде. Значення поглинання також залежать від часу інкубації. Оптимальна температура під час проведення імуноферментного аналізу становить 20-25 ° С. 6.1 Приготування реагентів Промивний буфер Розвести 20 мл концентрату промивного буферу з водою (деіонізованою, дистильованою або ультра чистою) до кінцевого об'єму 1000 мл. Зберігання: 1 місяць при 2 - 8 ° С Очищуючий буфер Розвести 20 мл очищуючого концентрату водою (деіонізованою, дистильованою або ультра чистою) до кінцевого об'єму 500 мл Зберігання: 1 місяць при 2 - 8 ° С Розчин ацилювання Оскільки розчин ацилювання залишається стабільним не більше 3 хвилин, його не слід готувати

раніше початку аналізу. Тому його підготовка описана в протоколі в главі 6.3, етапі 3 та главі 6.4, етап 3. Видалити після використання! Стріпи мікропланшету метанефрину та стріпи мікропланшету Норметанефрину У рідкісних випадках залишки блокуючого та стабілізуючого реагенту можна побачити у лунках як маленькі, білі крапки або лінії Ці залишки не впливають на якість продукту. 6.2 Підготовка зразків Процедура екстракції для метанефрину та норметанефрину однакова і повинна виконуватися тільки один раз Екстракція Наступна процедура екстракції може бути запущена з 200мкл або 250мкл зразків плазми. Процедура 250 мкл плазми виділена сірим курсивом і може бути використана у випадку вищих обсягів супернатанту для прокапування у наступному ІФА , є кращою. Процедура ELISA сама по собі не впливає на цей альтернативний протокол. 1. Прокапайте 20 мкл стандартів та контролів у відповідні лунки екстракційного планшету. Як альтернатива прокапайте 25 мкл стандартів та контролів в відповідні лунки Екстракційного планшету. 2. Додайте 20 мкл стандарту А до всіх лунок, що містять зразки плазми. Альтернативно, додайте 25 мкл стандарту А до всіх лунок, що містять зразки плазми. 3. Додайте 200 мкл вирівнюючого реагенту до лунок з стандартами та контролями. Альтернативно, додати 250 мкл вирівнюючого реагенту до лунок з стандартами та контролями. 4. Прокапайте 200 мкл зразків плазми до відповідних лунок. Альтернативно прокапайте 250мкл зразків плазми до відповідних лунок. 5. Інкубуйте планшет протягом 2 годин при кімнатній температурі (20-25 ° С) на шейкері (приблизно 600 об / хв). 6. Опорожнити планшет і осушити блот, натискаючи перевернутим планшетом на абсорбуючий матеріал. 7. Прокапати 250 мкл буфера аналізу у всі лунки. Інкубуйте планшет протягом 5 хв при кімнатній температурі (20 - 25 ° C) на шейкері (приблизно 600 об / хв). Потім опорожнити планшет та осушити блот, натискаючи перевернутим планшетом на абсорбуючий матеріал. 8. Промийте планшет 3 х, додаючи 350 мкл очищаючого буфера, видаляючи вміст і осушуючи блот кожного разу, натискаючи перевернутим планшетом на абсорбуючий матеріал. 9. Прокапайте 100 мкл буфера елювання у всі лунки. Альтернативно прокапайте 125 мкл буфера для елювання у всі лунки. Зверніть увагу: зміни кольору, викликані буфером елювання, можуть відрізнятися між стандартами та зразками. 10. Покрийте планшет з клейкою фольгою Інкубуйте 15 хвилин при кімнатній температурі (20 - 25 ° C) на шейкері (приблизно 600 об / хв).Видаліть фольгу. Не зливайте супернатант після цього! Наступні обсяги супернатанту необхідні для наступного ELISA: Метанфрін 50 мкл Норметанефрін 25 мкл 6.3 МЕТАНЕФРІН ІФА 1. Прокапати 25 мкл регулюючого буфера у всі лунки мікропланшету метанефрину. 2. Прокапати 50 мкл екстрагованих стандартів, контролів і зразків у відповідні лунки. Будь ласка, утримуйте екстракційний планшет під невеликим кутом, щоб полегшити цей етап прокапування. 3. Підготовка розчину ацилювання: Прокапати 80мкл концентрату ацилюючого реагенту (BA R-8312) до 3мл води (деіонізована, дистильована або ультра-чиста) і ретельно перемішати. 4. Прокапати 25мкл свіжоприготованого ацилюючого розчину у всі лунки.

5. Інкубуйте протягом 15 хв при кімнатній температурі (20-25 ° С) на шейкері (приблизно 600 об / хв). 6. Прокапайте 50 мкл антисироватки метанефрину у всі лунки. 7. Покрийте пластину клейкою фольгою, струшуйте протягом 1 хв при кімнатній температурі (20 - 25 ° С) на шейкері та інкубуйте 15 - 20 год. (Протягом ночі) при температурі від 2 до 8 ° С без струшування. Альтернативно інкубувати 2 рази при кімнатній температурі (20-25 ° С) на шейкері (приблизно 600 об / хв). 8. Зніміть фольгу. Видаліть або аспіруйте вміст лунок. Промийте планшет 4 x, додаючи 300 мкл промивного буфера, видаляючи вміст і осушуючи блот кожен раз, натискаючи перевернутою пластиною об абсорбуючий матеріал. 9. Прокапайте 100мкл ферментного кон'югату у всі лунки. 10. Інкубуйте протягом 30 хв при кімнатній температурі (20 - 25 ° С) на шейкері (приблизно 600 об / хв). 11. Видалити або аспірувати вміст лунок. Промийте планшет 4 x, додаючи 300 мкл промивного буфера, видаляючи вміст і осушуючи блот кожен раз, натискаючи перевернутою пластиною на абсорбуючий матеріал. 12.Прокапайте 100мкл субстрату у всі лунки та інкубуйте протягом 20-30 хвилин при кімнатній температурі (20-25 ° С) на шейкері (приблизно 600 об / хв). Уникати впливу прямих сонячних променів! 13. Додайте 100 мкл стоп-розчину до всіх лунок та вструсити мікропланшет, щоб забезпечити однорідність розподілу розчину. 14. Прочитайте абсорбцію розчину в лунках протягом 10 хвилин, використовуючи рідер для мікропланшетів, налаштований на 450 нм (при наявності рекомендується довжина хвилі від 620 нм до 650 нм). 6.4. Норманефрін ELISA 1. Прокапайте 25 мкл регулюючого буфера у всі лунки мікропланшету норметанефріну. 2. Прокапайте 25 мкл екстрагованих стандартів, контролів та зразків у відповідні лунки. Будь ласка, утримуйте екстракційний планшет під невеликим кутом, щоб полегшити цей етап прокапування. 3. Підготовка ацилюючого розчину : Прокапати 80мкл концентрату ациліруючого реагенту (BA R-8312) до 3мл води (деіонізована, дистильована або ультра-чиста) і ретельно перемішати. 4. Прокапати 25мкл свіжоприготованого ацилюючого розчину у всі лунки. 5. Інкубуйте протягом 15 хв при кімнатній температурі (20-25 ° С) на шейкері (приблизно 600 об / хв). 6. Прокапайте 50 мкл норметнефрину антисироватки в усі лунки. 7.Покрийте планшет клейкою фольгою, струшуйте протягом 1 хв при кімнатній температурі (20 - 25 ° С) на шейкері та інкубуйте 15 - 20 год. (Протягом ночі) при температурі від 2 до 8 ° С без струшування. Альтернативно інкубувати 2 рази при кімнатній температурі (20-25 ° С) на шейкері (приблизно 600 об / хв). 8. Зніміть фольгу. Видаліть або аспіруйте вміст лунок. Промийте планшет 4 x, додаючи 300 мкл Промивного буферу, видаляючи вміст і осушуючи блот кожен раз, натискаючи перевернутим планшетом на абсорбуючий матеріал. 9. Прокапайте 100мкл ферментного кон'югату у всі лунки. 10. Інкубуйте протягом 30 хв при кімнатній температурі (20 - 25 ° С) на шейкері (приблизно 600 об / хв). 11. Видалити або аспірувати вміст лунок. Промийте планшет 4 x, додаючи 300 мкл промивного буфера, видаляючи вміст і осушуючи блот кожен раз, натискаючи перевернутим планшетом у на абсорбуючий матеріал. 12. Прокапайте 100мкл субстрату у всі лунки та інкубуйте протягом 20-30 хвилин при кімнатній температурі (20-25 ° С) на шейкері (приблизно 600 об / хв). Уникати впливу прямих сонячних променів! 13. Додайте 100 мкл стоп-розчину до всіх лунок та струсіть мікропланшет, щоб забезпечити однорідність розподілу розчину. 14. Зчитайте абсорбцію розчину в лунках протягом 10 хвилин, використовуючи рідер для мікропланшетів, налаштований на 450 нм (при наявності рекомендується довжина хвилі від 620 нм до 650 нм).

7. Розрахунок результатів

Діапазон вимірювання (ІФА протягом ночі)

Метанефрін норметанефрін

15,1-3600 пг/мл 22,8 -7 200 пг/мл

Стандартна крива отримується шляхом нанесення показників абсорбції (обчислюють середню абсорбцію) стандартів (лінійна, вісь y) проти відповідних стандартних концентрацій (логарифмічна, осі x). Використовуйте нелінійну регресію для кривої відповідності (наприклад, сплайн, 4-параметр, акіма). Цей аналіз є конкурентним аналізом. Це означає, що значення OГ зменшуються із зростанням концентрації аналіту. Значення OГ, знайдені нижче стандартної кривої, відповідають високим значенням концентрації аналіту в зразку і повинні бути повідомлені як позитивні. Концентрації зразків та контролів можна читати безпосередньо зі стандартної кривої. Зразки, виявлені при концентраціях, що перевищують найвищий стандарт (стандарт F), повинні бути розбавлені відповідно до включеного вирівнюючого реагенту і повинні бути повторно проаналізовані. Конверсія Метанфрін (пг / мл) х 5,07 = Метанефрін (пмоль / л) Норметанефрин (пг / мл) х 5.46 = Норметанефрин (пмоль / л) Очікувані референтні значення Настійно рекомендується, щоб кожна лабораторія визначала власні контрольні значення. Очікувані контрольні значення, наведені нижче, базуються на дослідженнях порівняння методів з LC-MS / MS (1) з зразками крові, взятими в сидячому положенні.

Метанефрин Норметанефрин

< 65 пг/мл <196 пг/мл

Для інтерпретації результатів слід розглянути сіру зону. Ця сіра зона не залежить від використаної методики і відображається у незначному посередньому збільшенні метанефрину та норметанефрину до 4-кратного верхнього порогового значення (Eisenhofer et al., 2003). Приблизно 20% пухлин зустрічаються в цій сірій зоні, особливо у випадку спадкового синдрому, випадкових пухлин, а в спорадичних випадках феохромоцитоми діаметром менше 1 см. У випадку результату в сірій зоні рекомендується зібрати новий зразок разом з анамнезом, що стосується особливостей впливу, наприклад, ліків та віку пацієнта. 7.1 Контроль якості Рекомендується використовувати зразки контролю відповідно до національних правил. Використовуйте контролі як нормального, так і на патологічного рівнів. Набір або інший комерційний контроль повинен відповідати встановленим межам довіри. Довірчі межі контролів набору вказані в Звіті про забезпечення контролю якості. 7.2 Типові стандартні криві Приклади, не використовуйте для розрахунку!

8. Характеристики аналізу (ELISA протягом ночі)

Аналітична чутливість метанефрин норметанефрин

Межа виявлення (пг/мл)

14,9 17,9

Межа кількісного визначення (пг/мл)

15,1 22,8

Аналітична специфічність (перехресна реактивність)

речовина Перехресна реактивність (%)

метанефрін норметанефрін

Дериватизований метанефрін

100 0,72

Дериватизований норметанефрін

0,05 100

3- метоксітирамін < 0.01 6,5*

адреналін < 0.01 < 0.01

норадреналін < 0.01 < 0.01

допамін < 0.01 < 0.01

Ванілілминдальна кислота

< 0.01 < 0.01

Гомованілінова кислота < 0.01 < 0.01

L-DOPA < 0.01 < 0.01 L-тирозін < 0.01 < 0.01 Тирамін < 0.01 < 0.01

норметанефрін < 0.01 < 0.01

ацетамінофен < 0.01 < 0.01

*концентрація норметанефрину не впливає на 3-метокситирамін при нормальних концентраціях 3- метокситираміну. Лише дуже високі концентрації 3-метокситираміну, які зустрічаються в рідкісних випадках виключно в пухлинах, що виділяють допамін, можуть викликати хибні позитивні результати.

Точність

В аналізі Між аналізами

зразок середнє(пг/мл) CV

(%) зразок середнє(пг/мл) CV

(%) метанефрін 1 66,3 11,4 метанефрін 1 67,8 17,6

2 122 13,5 2 134 12,7

3 308 10,6 3 319 11,0

4 783 9,2 4 847 7,5

норметанефрін 1 149 9,5 норметанефрін

1 156 10,6

2 282 9,1 2 287 5,0

3 734 8,2 3 769 5,1

4 1956 10,5 4 1949 5,9

Линійність Серійне розведення до

Середнє (%) Діапазон (%)

метанефрін 1:64 107 101-124

норметанефрін 1:64 98 92-102

відновлення Середнє (%) Діапазон (%)

метанефрін 88 80-99

норметанефрін 109 105-114

відновлення метанефрін y=0.91x + 1.8; r2 = 0.96; n = 46

норметанефрін y=0.93x + 13; r2 = 0.99; n = 48

ЛІТЕРАТУРА (1) De Jong et al. Plasma free metanephrine measurement using automated online solid phase extraction

HPLC-Tandem mass spectrometry. Clin Chem, 53(9): 1684-1693 (2007) (2) Eisenhofer et al. Laboratory evaluation of pheochromocytoma and paraganglioma. Clin Chem, 60:1486- 1499 (2014) (3) Eisenhofer et al. Plasma metadrenalines: Do they provide useful information about sympatho-adrenal function and catecholamine metabolism? Clin Sci (Lond),88:533-542 (1995) (4) Berkel et al. Diagnosis of endocrine disease: Biochemical diagnosis of phaeochromocytoma and

paraganglioma. Eur J Endocrinol, 170: R109-R119 (5) Manz et al. Development of enantioselective immunoassays for free plasma metanephrines. Ann.N.Y.Acad.Sci., 1018:582-587 (2004) (6) De Jong et al. Dietary Influences on Plasma and Urinary Metanephrines: Implications for Diagnosis of

Catecholamine-Producing Tumors. J Clin Endocrinol Metab, 94(8):2841-2849 (2009) (7) Deutschbein et al. Influences of Various Confounding Variable and Storage Conditions on

Metanephrine and Normetanephrine Levels in Plasma. Clin Endocrinol, 72(2):153-160 (2010) (8) Eisenhofer et al. Biochemical Diagnosis of Pheochromocytoma: How to Distinguish True- from False-

Positive Test Results. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 88(6):2656-2666 (2003)

Умовні позначення:

Температура зберігання

Виробник

Містить достатньо для <N> випробувань

Дата закінчення строка дії

LOT Код партії

IVD Тільки для диагностики в лабораторних умовах!

Звертайтесь до інструкції по

CONT зміст

Маркіровка

експлуатації