jurnal biotek 2

5/19/2018 jurnal biotek 2

1/7

Fusi protoplas dan regenerasi hasil fusi ... 1

Jurnal Bioteknologi Pertanian, Vol. 9, No. 1, 2004, pp. 1-7

ABSTRACT

One of the problems in eggplant (Solanum melongena)production in ndonesia is bacterial !ilt caused b"Ralstonia

solanacearum. #he most effecti$e and efficient method of

controlling the disease is b" using resistant $arieties. %o!-

e$er, a source of resistant character is generall" found in the

!ild species such as S. torvum. &enetic traits from a different

species are difficult to be transferred con$entionall". One of

the methods of transferring a genetic character from diffe-

rent species is protoplas fusion. #his e'periment !as carried

out to stud" protoplast fusion and regeneration of somatic

h"brid of S. melongena and S. torvum. #he results sho!ed

that protoplast of S. melongena and S. torvum could be

isolated !ith protoplast densit" of 10 (ml. )rotoplast fusion*

induced b" )+& sho!ed that the higher the concentration of

)+&, and the longer the incubation period, the higher the

number of protoplast fused. t )+& concentration of 0

and incubation time of 20 minutes, the binner and multifusion

!ere /.7 and 11., respecti$e l". or protoplast regeneration

to produce microcallus, the best medium !as 3/) enriched

!ith 0.2 mg(l 2.4- 5 0. mg(l 6eatin 5 1 mg(l N. " the

treatment, the microcallus produced !as 2. urthermore,

3/) enriched !ith 0.1 mg(l 2.4- 5 2 mg(l ) could induce

the de$elopment of microcalli to calli. On the media, eight

calli !ere produced. 8hoot formation could be induced b"

appl"ing $itamin 3orrel :etmore 5 0.1 mg(l 5 2 mg(l

6eatin into 38 medium.

;Keyords< Solanum melongena! Solanum torvum, protoplast

fusion, in vitro regeneration=

ABSTRAK

8alah satu masalah dalam budi da"a terung (Solanum

melongena) di ndonesia adalah serangan pen"a>it la"u "ang

disebab>an olehRalstonia solanacearum . ?ara "ang paling

efe>tif dan efisien untu> menanggulangi pen"a>it tersebut

adalah dengan mengguna>an $arietas tahan. Namun, sumber

>etahanan pada umumn"a terdapat pada spesies liar seperti S.

torvum, sehingga pemindahan sifat tersebut >e dalam terung

(S. melongena) sulit dila>u>an secara >on$ensional. 8alah

satu cara untu> memindah>an sifat geneti> dari dua spesies

"ang berbeda adalah melalui fusi protoplas. alam penelitian

ini dipela@ari te>ni> fusi protoplas antara S. melongena

dengan S. torvum serta regenerasin"a sampai men@adi planlet.

solasi protoplas dapat menghasil>an densitas protoplas "angcu>up tinggi, "aitu 10 (ml. ndu>si fusi secara >imia dengan

*

)+& menun@u>>an bah!a ma>in tinggi >onsentrasi dan ma>in

lama !a>tu in>ubasi fusi, ma>in ban"a> sel "ang berfusi. )ada

>onsentrasi )+& 0 dan !a>tu in>ubasi 20 menit dapat

dihasil>an fusi biner dan multifusi masing-masing /,7 dan

11,. 3edia terbai> untu> meregenerasi>an protoplas men@adi

mi>ro>alus adalah 3/) "ang diper>a"a dengan 0,2 mg(l 2,4-

5 0, mg(l 6eatin 5 1 mg(l N. engan perla>uan tersebut,

mi>ro>alus "ang dihasil>an mencapai 2. 8elan@utn"a, 3/)

"ang diper>a"a dengan 0,1 mg(l 2,4- 5 2 mg(l ) dapat

merangsang pembentu>an mi>ro>alus men@adi >alus. engan

per la>uan ter sebut dapat dihasi l>an delapan >a lus . #unas

dapat terbentu> pada media dasar 38 "ang diper>a"a dengan

$itamin 3orel :etmore 5 0,1 mg(l 5 2 mg(l 6eatin.

;Kata kunci< Solanum melongena! Solanum torvum! fusi

protoplas, regenerasi in vitro=

PENDAHULUAN

#erung (Solanum melongena) merupa>an tanaman

sa"uran penting di ndonesia dan >ini men@adi salah

satu >omoditas e>spor. 3asalah "ang dihadapi dalam

budi da"a terung antara lain adalah serangan pen"a>it

la"u ba>teri "ang disebab>an oleh Ralstonia

solanacearum. i 8umatera, Aa!a, ali, Bombo>, dan

8ula!esi, pen"a>it tersebut dapat menga>ibat>an

>ehilangan hasil 1-9 C3achmud 19/D.

8trategi pengendalian pen"a>it la"u ba>teri dapat

dila>u>an melalui berbagai cara, "aitu secara biologis,

me>anis, >imia!i, dan penggunaan $arietas tahan.

)engendalian secara biologis dan te>ni> budi da"a

baru dila>u>an dalam s>ala percobaan, sedang>an

pengendalian secara >imia!i relatif mahal. )engendali-

an dengan mengguna>an $arietas tahan, dalam @ang>a

pan@ang merupa>an cara pengendalian "ang paling

efe>tif dan efisien, namun >etersediaan $arietas tahanmasih sangat terbatas.

Fusi protoplas dan regenerasi hasil fusi antaraSolanum melongena

dan Solanum torvum

Protoplast fusion and regeneration of somatic hy"rids of

8olanum melongena and 8olanum tor$um

li %usni , >a 3aris>a , dan %obir1 1 2

#Balai Besar Peneli tian dan Pengem"angan Biotek nologi dan Sum"erda ya $enetik Pertanian!

Jalan %entara Pela&ar 'o. ! Bogor #*###! +ndonesia,Balai Penelitian %anaman Rempah dan -"at! Jalan %entara Pela&ar 'o. ! Bogor #*###! +ndonesia


2/7

2 li usni et al.

Entu> mendapat>an $arietas tahan diperlu>an

>eragaman geneti> "ang luas. 8umber resistensi dari

S. melongena ditemu>an pada $arietas lo>al, seperti

$arietas ope> C:instead dan elman 192D. Namun,

sifat resisten tersebut sering hilang bila $arietastersebut dibudida"a>an di daerah lain. Fesistensi

terhadap pen"a>it la"u ban"a> ditemu>an pada

spesies liar, antara lain pada S. glandiforum, S.

sanitongsei, S. mammosum, dan S. torvum C8upriadi

19/*G 8ihacha>r et al. 1994D.

3emasu>>an sifat tahan dari spesies liar >e dalam

spesies budi da"a melalui hibridisasi >on$ensional

sering mengalami >egagalan a>ibat in>ompatibilitas

atau dihasil>an hibrida "ang steril. Entu> mengatasi

masalah tersebut, penggabungan sifat dari dua

spesies "ang berbeda sering dila>u>an melalui >ultur

protoplas. ari penelitian "ang telah dila>u>an, >ultur

protoplas dapat menghasil>an >eragaman "ang tinggi,

bai> dalam sifat-sifat morfologi maupun resistensi

terhadap Phytophthora infestans danlternaria

solanii C#a>ebe et al. 1971D. )enelitian lain melapor>an

bah!a dari >ultur protoplas telah diperoleh >lon->lon

"ang tahan terhadap herbisida C+$ans dan 8harp 19/*D

danR. solanacearum C%usni et al. 200D.

8elain mening>at>an >eragaman geneti>, >ultur

protoplas @uga dapat diguna>an untu> fusi protoplas.

engan fusi protoplas, sifat-sifat geneti> dari spesies

atau genus "ang berbeda dapat digabung>an C3ilamet al. 199G :ara dan &limileus 199D. Entu> meng-

indu>si ter@adin"a fusi dapat dila>u>an secara >imia

atau listri> C)ur!ito 1999D. usi protoplas melalui cara

>imia pada umumn"a mengguna>anpolyethylene

glicol C)+&D >arena )+& dapat berperan sebagai

pengindu>si fusi antara dua protoplas. 3ole>ul %O-

?% C?%-O-?% D mempun"ai polaritas "ang cenderung2

2

bersifat negatif >emudian mampu membentu> i>atan

nitrogen dengan >elompo> polaritas positif dari

substansi membran. engan demi>ian, )+& dapat

bertinda> sebagai mole>ul pengi>at antara dua per-

mu>aan protoplas sehingga ter@adi fusi Cao dan

3icha"lu> 197D.

usi protoplas dapat dila>u>an dengan meng-

gabung>an total genom dari suatu $arietas dengan

$arietas lain "ang berbeda spesies atau genusn"a

C:attimena 1999D. eberapa peneliti men"ata>an

bah!a >eberhasilan memperoleh tanaman hasi l fusi

sangat sulit >arena tahapan pe>er@aan "ang dilalui

cu>up pan@ang dan membutuh>an >etelitian dan >e-

bersihan "ang sangat tinggi untu> setiap tahap. ari

berbagai penelitian fusi protoplas telah diperoleh

beberapa hibrida somati>, antara lain S. tu"erosumdengan/. pimpinellifolium C#an 19/7D, S. khasianum

dengan S. aculestissima C8tatmann et al. 1994D, S.

khasianum dengan S. laciniatum C8ihacha>r et al.

199D, S. melongena dengan S. aethopicum C8ihacha>r

199/D, S. khasianum dengan S. mammosum C)ri"anto

199*D, serta S. tu"erosum 1 dengan S. stenotomumC)ur!ito 1999D. :alaupun penelitian fusi protoplas

telah ban"a> dila>u>an, )ur!ito C1999D men"ata>an

bah!a metode fusi protoplas "ang dapat berla>u

umum pada genus Solanumbelum ada, terutama

antara S. melongena dengan S. torvum "ang sering

mengalami >egagalan dalam regenerasi membentu>

hibrida baru. )enelitian ini bertu@uan untu> mendapat-

>an hibrida somati> hasil fusi protoplas antara S.

melongena c$. ourga dengan S. torvum.

BAHAN DAN ET!DE

Persiapan e"splan

)enelitian dila>sana>an di laboratorium >ultur in vitro,

alai esar )enelitian dan )engembangan iote>no-

logi dan 8umberda"a &eneti> )ertanian C iogenD,

ogor. +>splan "ang diguna>an adalah S. melongena

c$. ourga "ang berasal dari laboratorium0orphoge1

nese 2egetale 34perimentale,Paris Sud 5niversity,

)erancis serta S. torvum "ang tahan berasal dari

>ole>si iogen, ogor. S. melongena termasu>terung "ang rentan terhadap pen"a>it la"u.

enih dari >edua spesies tersebut disteril>an dalam

al>ohol 70, >emudian dalam 0,0 %g?l dan 0

2

cloro' masing-masing selama menit. 8etelah itu

benih dicuci dengan a>uades. enih "ang telah di-

sterilisasi di>ecambah>an dalam media 38 5 20 g(l

su>rosa dan 7 g(l agar. 3edia tersebut disteril>an

dalam auto>laf dengan suhu 121 ? selama 20 menit.

o

8etelah ber>ecambah, benih disub>ultur pada media

baru dan diin>ubasi pada suhu 2-27 ?, dengan

o

pen"inaran 1.000 lu' selama 12 @am tiap hari. 8atu bulan

setelah peng>ulturan, daunn"a diguna>an sebagai

sumber protoplas.

Persiapan larutan en#i$

+n6im "ang diguna>an adalah en6im 8ellulase Ono6u>a

F8 0, Cml(lDG 0, C3($D macero6"me F-10 CHa>ult

%onssa ?o.DG 0,0 C3($D 3+8G dan 9,1 C3($D

manitol. 8en"a!a tersebut dilarut>an dalam ?):

C8ihacha>r 199/D dan p% diatur ,-,* serta di-

sterilisasi dengan filter u>uran 0,22 Im. Barutan

tersebut >emudian dimasu>>an >e dalam ca!an petriberdiameter cm, masing-masing -* ml setiap ca!an.


3/7

Fusi protoplas dan regenerasi hasil fusi ...

%solasi protoplas

)ermu>aan bagian ba!ah daun S. melongena dan S.

torvum digores dengan pisau secara merata dengan

@ara> antaririsan 2- cm. aun "ang telah diiris di-

tempat>an dalam ca!an petri "ang berisi larutanen6im, >emudian diin>ubasi dalam >amar gelap pada

suhu 27 ? selama 1* @am. Entu> membantu melepas-

o

>an protoplas, ca!an petri digo"ang selama 0 deti>

sehingga diperoleh larutan protoplas.

Barutan protoplas S. melongena dan S. torvum

disaring dengan metalic sieveberu>uran 100 Im,

>emudian disentrifugasi dengan >ecepatan 1./00 rpm

selama menit sampai dihasil>an pelet. 8elan@utn"a

larutan en6im dipisah>an dan protoplas dilarut>an

dalam 21 su>rosa dan disentrifugasi >embali selama

10 menit. )rotoplas murni >emudian diambil meng-guna>an pipet dan disentrifugasi >embali. 8elan@ut-

n"a, protoplas dilarut>an dalam 0, 3 manitol 5 0, m3

?a?l dan disentrifugasi selama menit sampai ter-

2

bentu> pelet protoplas. >hirn"a protoplas dicuci

dan densitasn"a diu>ur.

Fusi protoplas

)rotoplas S. melongena dan S. torvum "ang telah

dimurni>an seperti tersebut di atas masing-masing

diencer>an dengan larutan pencuci sehingga densitas-

n"a men@adi 5 ' 10 protoplas(ml. 8elan@utn"a

4

suspensi protoplas dicampur dalam tabung rea>si

dengan perbandingan $olume "ang sama dan di-

resuspensi sampai homogen. 8etelah homogen,

suspensi protoplas diambil dengan pipet seban"a>

*00-/00 l >emudian dimasu>>an >e dalam ca!an petri

berdiameter cm dan dibiar>an selama menit sehing-

ga protoplas mengendap. 8elan@utn"a di se>eliling

suspensi protoplas ditambah>an 100 l larutan )+&

dengan >onsentrasi 0 atau 0 sebagai perla>uan

selama 10 dan 20 deti> untu> mengindu>si ter@adin"a

fusi. Barutan )+& >emudian dibuang dan protoplasdibersih>an dengan larutan pencuci. 8etelah itu di-

la>u>an penghitungan secara mi>ros>opis terhadap

protoplas "ang mengalami fusi. )rotoplas "ang telah

difusi>an di>ultur dalam media perla>uan untu>

memacu pertumbuhann"a.

Kultur protoplas hasil fusi

3edia "ang diguna>an adalah media dasar 3/) dan

V3, masing-masing diper>a"a dengan 0,2 mg(l 2,4-

5 0, mg(l 6eatin 5 0,1 mg(l N dengan p% ,/.

3edia tersebut disterilisasi dengan filter u>uran 0,22m. 3asing-masing medium dipipet dan dimasu>>an

>e dalam ca!an petri "ang berisi protoplas "ang telah

difusi, masing-masing * ml setiap ca!an. ultur di-

pelihara dalam ruangan tanpa atau dengan pen"inaran

1.000 lu' pada suhu 27 ? sampai terbentu> >oloni sel

o

atau mi>ro>alus. )engamatan dila>u>an terhadap @um-lah >oloni sel dan mi>ro>alus "ang dihasil>an.

Pengen&eran suspensi '"oloni( sel

Entu> mendorong mi>ro>alus membentu> >alus,

suspensi sel diencer>an dengan media dasar "ang

sama C3/) dan V3D, tetapi 6at pengatur tumbuh-

n"a diganti dengan 0,1 mg(l 2,4- 5 2 mg(l ). oloni

atau mi>ro>alus dari setiap ca!an petri dibagi men@adi

tiga >emudian setiap bagian dimasu>>an >e dalam

ca!an petri baru "ang telah berisi media pengenceran

masing-masing * ml. ultur disimpan >embali tanpacaha"a dalam in>ubator bersuhu 27 ?. )arameter "ang

o

diamati meliputi @umlah >alus "ang dihasil>an dari

setiap perla>uan.

Regenerasi tunas

alus "ang dihasil>an dari setiap perla>uan dipindah-

>an >e dalam media padat 38 5 $itamin 3orell 5 0,1

mg(l dan >onsentrasi 6eatin sebagai perla>uan C2,

4, dan * mg(lD. )arameter "ang diamati pada tahap ini

adalah >eberhasilan regenerasi >alus membentu>

tunas. #unas "ang dihasil>an dipindah>an >e dalammedia dasar "ang sama, "aitu 38 5 $itamin 3orell

CpadatD tanpa mengguna>an 6at pengatur tumbuh

untu> indu>si a>ar.

HAS%L DAN PEBAHASAN

%solasi protoplas

)enggunaan metode 8ihacha>r C199/D dengan >om-

posisi en6im 0, 8el lulase Ono6u>a F8 5 0,

macero6"me F-10 5 0,0 3+8 dan 9,1 manitol

dalam larutan dapat mengisolasi protoplas dengan

densitas "ang tinggi, bai> pada S. melongena maupun

S. torvum. )urifi>asi dila>u>an dengan larutan su>rosa

21 dan sentrifugasi 1./00 rpm selama 10 menit untu>

mendapat>an protoplas "ang murni dan $iabel. om-

binasi en6im dan cara purifi>asi sepert i ini dapat

diguna>an untu> isolasi protoplas pada beberapa

tanaman, sepertirtemisia sphaerocephala CJin'u

dan en@ia 199*D,Piper nigrum C%usni et al. 1997D, S.

melongena C8ihacha>r 199/G %usni et al. 200D, dan S.

torvum C8ihacha>r 199/D.

%asil penelitian menun@u>>an bah!a S. torvumdapat menghasil>an protoplas "ang lebih ban"a>


4/7

4 li usni et al.

dibanding>an S. melongena. %al ini ber>aitan dengan

>eadaan fisiologis e>splan selama >ultur, di mana

bia>an S. torvum mengalami etiolasi sehingga daun-

n"a lebih luna> dibanding>an S. melongena. )roto-

plas "ang dihasil>an dari >edua @enis Solanum sangatbai> dan mempun"ai $iabilitas "ang tinggi, ditun@u>-

>an oleh penampa>an protoplas "ang berbentu> bulat

sempurna setelah pemurnian C&ambar 1D. Aumlah

protoplas S. torvum adalah /,/ ' 10 dan S. melongena

*

,2 ' 10 protoplas(ml.

*

Fusi protoplas

8ebelum dila>u>an fusi antara S. melongena dan S.

torvum! densitas protoplas diencer>an men@adi 10 (ml,

4

bai> protoplas S. melongena maupun S. torvum.

)engenceran dila>u>an dengan cara menambah>anmedia pencuci pada protoplas "ang telah dimurni>an.

ndu>si fusi dila>u>an dengan larutan fusogen )+&

pada campuran protoplas S. melongena dan S. torvum

dengan perbandingan $olume "ang sama. eber-

hasilan fusi dan regenerasi sangat ditentu>an oleh

>onsentrasi )+& dan lama in>ubasi dalam larutan )+&.

%asil fusi antara S. melongena dan S. torvum meng-

guna>an 100 l )+& dengan >onsentrasi 0 dan 0

selama 10 @am 20 menit dapat dilihat pada &ambar 2.

Aenis fusi "ang dihasil>an berupa fusi antara dua

protoplas atau fusi biner ("inner fusion) dan lebih dari

dua protoplas atau multifusi (multifusion) C&ambar 2D.

onsentrasi )+& tinggi C0D lebih ban"a> meng-

)a$*ar +, solasi dan fusi protoplas Solanum melongena CsmD, S. torvum CstD, fusi biner CbfD, dan multifusi CmfD.

Fig. 1.+solat ion and protoplas t fusion o f 8olanum melongena (sm), 8. tor$um (st)! "inner fusion ("f)! and multifusion (mf).

hasil>an protoplas "ang mela>u>an fusi, bai> fusi

biner maupun multifusi. 3a>in lama !a>tu in>ubasi

dalam larutan )+&, ma>in ban"a> pula protoplas "ang

)a$*ar -, )engaruh >onsentrasi )+& dan !a>tu in>ubasi

terhadap >eberhasilan fusi antara Solanum melongena dan S.

torvum.Fig. 2.3ffect of P3$ concentrat ion and time of incu"ation

on protoplast fusion of 8olanum melongena and 8. tor$um.

2

4

*

/

10

12

010 20

:a>tu in>ubasi CmenitD

%ime of incu"ation (min)

,2

4 ,94 ,1

,*

7 ,

/ ,7

7 ,*

11,

Binner fusion, )+& 0

Binner fusion, )+& 0

0ultifusion, )+& 0

0ultifusion, )+& 0

14

1*

Aumlah protoplas"ang berfusi

'um"er of protoplas

fus ion


5/7

Fusi protoplas dan regenerasi hasil fusi ...

mengalami fusi. )ada >onsentrasi )+& 0, protoplas

"ang mengalami fusi biner seban"a> 4,9 pada

perla>uan in>ubasi 10 menit dan /,7 untu> in>ubasi 20

menit, sedang>an untu> multifusi adalah ,* untu>

in>ubasi 10 menit dan 11, untu> in>ubasi 20 menit.)ada >onsentrasi )+& 0, protoplas "ang mengalami

fusi biner seban"a> ,2 untu> in>ubasi 10 menit dan

7, untu> in>ubasi 20 menit, sedang>an untu>

multifusi seban"a> 4,1 untu> in>ubasi 10 menit dan 7,*

untu> in>ubasi 20 menit.

Kultur protoplas hasil fusi dan pengen&eran

suspensi sel

)rotoplas "ang telah difusi>an dibersih>an dengan

larutan pencuci C0, 3 manitol 5 0, m3 ?a?1 D untu>2

menghilang>an pengaruh )+& agar protoplas tida>

rusa>. arena >onsentrasi )+& dan lama in>ubasi

sangat berpengaruh terhadap >eberhasilan regenerasi

protoplas, !a>tu in>ubasi "ang terlalu lama dalam

larutan )+& dapat mengganggu >eseimbangan te>an-

an osmoti> di luar dan di dalam protoplas sehingga

protoplas men@adi pecah C8ur"o!inoto 1990D.

)enggunaan media 3/) dan V3 dengan pe-

nambahan 0,2 mg(l 2,4- 5 0, mg(l 6eatin 5 1 mg(l

N dapat mendorong pertumbuhan dan per>em-

bangan protoplas tanaman terung hasil fusi C8ihacha>r

et al. 19/9D, tanaman >entang C)ur!ito 1999D, danterung bu>an fusi C%usni et al. 200D. )rotoplas han"a

dapat membentu> dinding sel bila berfusi dengan )+&

0, bai> pada media 3/) maupun V3, sedang-

>an protoplas "ang berfusi dengan )+& 0 tida>

dapat membentu> dinding sel C#abel 1D. %al ini >arena

>onsentrasi )+& 0 sudah bersifat to>si> bagi

protoplas sehingga protoplas men@adi pecah, atau

>arena sifat )+& "ang dapat mengi>at mole>ul air

sehingga protoplas berada dalam >eadaan terce>am

air "ang men"ebab>an metabolisme sel tida> sempur-

na. )ur!ito C1999D men"ata>an bah!a >onsentrasi

)+& "ang terlalu tinggi dan !a>tu in>ubasi "ang

terlalu lama dapat menghambat pertumbuhan dan

per>embangan protoplas.

#abel 1 @uga memperlihat>an bah!a protoplas hasil

fusi dengan )+& 0 pada media 3/) dapat mem-

bentu> dinding sel paling tinggi, "aitu 2,17 dengan

sel "ang membelah 2*,. )ada media V3, 17

protoplas dapat membentu> dinding sel dan 12,

dapat mela>u>an pembelahan sel.

ila dilihat dari pertumbuhan dan per>embangan

protoplas membentu> >oloni sel, media dasar 3/)

memberi>an hasil "ang lebih bai> daripada media V3C#abel 2D. )ada media 3/), diperoleh empat >oloni sel

dari setiap ca!an petri, sedang>an media dasar V3

han"a menghasil>an dua >oloni. eberhasilan pem-

bentu>an >oloni sel "ang lebih bai> pada media dasar

3/) diduga >arena >andungan >omposisi $itamin-

n"a "ang lebih >a"a dibanding V3.

)engenceran >oloni sel dengan media baru di-

la>u>an untu> mendorong pertumbuhan dan per-

>embangan protoplas >e tahap beri>utn"a "aitu

pembentu>an mi>ro>alus dan >alus. %al "ang sama

dilapor>an oleh 8ihacha>r et al. C19/9D, bah!a peng-

gunaan media "ang sama dalam pengenceran >oloni

sel dapat mendorong pertumbuhan dan per>embang-

an >oloni sel membentu> mi>ro>alus. )engenceran

dila>u>an dengan cara membagi >oloni sel dalam

setiap ca!an petri men@adi tiga >emudian dipindah>an

>e dalam ca!an petri "ang baru. 8elan@utn"a dila>u-

>an penambahan media baru dengan @enis media dasar

"ang sama C3/) dan V3D, tetapi 6at pengatur tum-

buh "ang diguna>an diganti dengan 0,1 mg(l 2,4- 5

2 mg(l ). oloni sel dapat tumbuh dan ber>embangmen@adi mi>ro>alus setelah dila>u>an pengenceran.

Ta*el +, Pengaruh "onsentrasi PE) terhadap "e $a$pu.

an protoplas hasil fusi antara Solanum melongena dan

S. torvum $e$*entu" dinding dan pe$*elahan sel pada

satu $inggu setelah "ultur,

%a"le #. 3ffect of P3$ concentration on protoplast of 8olanum

melongena and 8. tor$um to cell all regeneration and cell

division.

ndu>si fusi )+&3edia )rotoplas dengan 8el

Fus ion induct iondasar dinding sel membelah

CDBa sa l 6el l all 6ell division

medium CD CD

0 3/) 2,17 2*,

V3 17 12,

0 3/) 0 0

V3

0 0

Ta*el -, Pengaruh $edia dasar terhadap "e$a$puan

protoplas hasil fusi antara Sol anum melon gena dan S.

torvum $e$*entu" "oloni sel pada / $inggu setelah

"ultur,

%a"le ,. 3ffect of "asal medium on the groth and develop1

ment of protoplast of 8olanum melongena and 8. tor$um to

produce cell colonies! 7 eek a fte r P3$ applic ation.

ndu>si fusi )+&3edia Fata-rata @umlah

Fus ion induct iondasar >oloni sel(* ml media

CDBa sa l 'um"er of

medium cell colony8* ml medium

0 3/) 4

V3 2

0 3/) 0V3 0


6/7

* li usni et al.

3i>ro>alus dapat terlihat dengan >asat mata pada 2

minggu setelah pengenceran dan sema>in @elas mem-

bentu> >alus pada 4 minggu setelah pengenceran

dengan !arna putih >e>uningan C&ambar D.

Aumlah mi>ro>alus dan >alus "ang dihasil>an setelahpengenceran lebih ban"a> pada media 3/) daripada

media V3, "aitu 2 mi>ro>alus( ca!an petri pada

media 3/) dibanding 7 mi>ro>alus( ca!an petri

pada media V3. emi>ian @uga haln"a untu> pem-

bentu>an >alus, media 3/) dapat mendorong per-

tumbuhan dan per>embangan >oloni sel membentu>

>alus.

Regenerasi tunas

alus "ang dihasil>an setelah pengenceran dipindah-

>an >e media regenerasi CpadatD untu> mendorong

pembentu>an tunas. 3edia dasar "ang diguna>an

adalah 38 5 $itamin 3orell 5 0,1 mg(l dengan

penambahan 6eatin 2, 4, dan * mg(l sebagai perla>uan.

ari delapan >alus "ang dihasil>an, han"a >alus "ang

dipindah>an pada media regenerasi dengan penam-

bahan 6eatin 2 mg(l "ang dapat membentu> tunas

setelah 29 hari dalam media regenerasi. Fata-rata@umlah tunas "ang dihasil>an seban"a> tunas.

%asil "ang sama dilapor>an oleh %usni et al. C200D

pada regenerasi tunas protoplas terung, di mana pada

>onsentrasi 6eatin "ang rendah C1 dan 2 mg(lD, >alus

dapat beregenerasi men@adi tunas. 8etelah dia>lima-

tisasi di rumah >aca, lebar dan bentu> daun dari tunas

"ang dihasil>an berbeda dengan >edua tetuan"a

C&ambar 4D. )ri"anto C199*D dan )ur!ito C1999D @uga

melapor>an adan"a perbedaan penampilan fenotipi>

hibrida hasil fusi protoplas. #unas-tunas tersebut

>emudian dipindah>an pada media 38 tanpa pem-

)a$*ar /, Fegenerasi tunas dan a>limatisasi hibrida somati> antara Solanum melongena dan S. torvumG a K >alus embriogeni>,

b K ini siasi tunas, c K penampa>an daun hibrid a dengan >edua tetuan "a setela h a>limat isasi, d K pla nle t "a ng dia>limatisasi.

Fig. 4.Regeneration and accl imati9ation of somatic hy"r id of 8olanum melongena and 8. tor$um: a ; em"ryogenic callus!

" ; shoot formation! c ; shape of leaf! d ; acclimati9ation.

)a$*ar 0, #ahapan pertumbuhan dan per>embangan proto-

plas hasi l fusi antara Solanum melongena dan S. torvum

men@adi >alusG a K pembelahan sel, b K >oloni sel, c K

mi>ro>alus, d K >alus.

Fig. 3. $roth and development of protoplast of Solanum

melongena and 8. tor$um to callus: a ; cell division! " ; cell

colony! c ; microcallus! d ; callus.


7/7

Fusi protoplas dan regenerasi hasil fusi ... 7

berian 6at pengatur tumbuh untu> indu>si a>ar mem-

bentu> planlet. )lanlet "ang dihas il>an >emudian

dia>limatisasi di rumah >aca untu> pengamatan se-

lan@utn"a.

KES%PULAN

)rotoplas Solanum melongena dan S. torvum dapat

diisolasi dengan densitas "ang tinggi C10 (mlD dengan

*

larutan >ombinasi en6im 0, 8ellulase Ono6u>a F8 5

0, macero6"me F-10 5 0,0 3+8 dan 9,1 manitol

selama 1* @am dalam >eadaan gelap. Entu> meng-

indu>si ter@adin"a fusi "ang tida> menghambat

$iabilitas protoplas dapat dila>u>an dengan larutan

)+& 0. Aenis fusi "ang dihasil>an berupa fusi dua

protoplas atau lebih.3edia dasar 3/) dapat mendorong pertumbuhan

dan per>embangan protoplas membentu> >oloni sel

dengan penambahan 0,2 mg(l 2,4- 5 0, mg(l 6eatin 5

1 mg(l N. )enambahan 0,1 mg(l 2,4- 5 2 mg(l )

dalam media pengenceran dapat mendorong per-

tumbuhan >oloni sel membentu> mi>ro>alus dan >alus.

alus dapat beregenerasi membentu> tunas pada

media 38 5 $itamin 3orel 5 0,1 mg(l 5 2 mg(l

6eatin. #erdapat perbedaan fenotipi> daun hibrida

"ang dihasil>an dibanding>an dengan >edua tetuan"a

(S. melongena dan S. torvum).

DAFTAR PUSTAKA

+$ans, .. and :.F. 8harp. 19/*. 8omaclonal and gameto-

clonal. p. 97-12.+n .. ian, :.F. 8harp, V.). mmirato,

and H. Hamada C+dsD. %and oo> of )lant ?ell ?ulture 1.

3c 3illan )ubl. ?o. Ne! Hor>.

%usni, ., 1. 3aris>a, dan 3. osmiatin. 1997. ultur proto-

plas hasil fusi antara lada budi da"a dengan lada liar. Aurnal

)enelitian #anaman ndustri 11CD< 199-207.

%usni, ., . 3aris>a, &.. :attimena, dan . )ur!ito. 200.

eragaman geneti> tanaman terung hasil >ultur protoplas.

Aurnal iote>nologi )ertanian /C2D< 2-9.

ao, .N. and 3.F. 3icha"lu>. 197. Nutritional reLuire-

ments for gro!th of 2icia ha&astana cells and protoplasts

at $er" lo! population densit" in liLuid media. )lanta 12*shop. )?F, Bos anos, Baguna, )hilippines. 1* pp.

3ilam, 8., B.. )a"ne, and &.F. 3ac>a". 199. #he integra-

tion of protoplast fusion-deri$ed material into a potato

breeding programme< a re$ie! o f p rogress and proble ms.

+uph"tica /< 41-4.

)ri"anto, . 199*. 8tudi fusi protoplast S. khasianum ?lar>e

dengan S. mammosum B. isertasi )ascasar@ana, nstitut

)ertanian ogor.

)ur!ito, . 1999. usi protoplas intra dan interspesies pada

tanaman >entang. isertasi )ascasar@ana, nstitut )ertani-

an ogor.Jin'u, M. and A. en@ia. 199*. ?allus formation from protoplasts

of rtemisia sphaerocephale rasch and some factors

influencing protoplast di$ision. )lant ?ell, #issue and

Organ ?ulture 44< 129-14.

8ihacha>r, ., F. %aicour, 3.%. ?haput, +. arrientos, &.

creu', B. Fossignol, and V. 8ou$anna$ong. 19/9. 8omatic

h"brid plants produced b" electrofusion bet!een Solanum

melongena B. and S. torvum 8.:. #heor. ppl. &enet. 77< l-*.

8ihacha>r, ., 3.?. auna", 1. 8erraf, 3.%. ?haput, 1. 3ussio,

F. %aicour, B. Fossignol, and &. ucreu'. 1994. 8omatic

h"bridi6ation of eggplant (Solanum melongena B.) !ith its

close and !ild relati$es. p. 2-27/. +n H.).8. a@a@ C+d.D.

8omatic %"bridi6ation in ?rop mpro$ement 1. iotechno-

log" in griculture and orestr" Vol. 27. 8pringer-Verlag

erlin %eidelberg.

8ihacha>r, ., . 8erraf, 3.%. ?haput, . 3ussio, B. Fossignol,

and &. ucreu'. 199. Fegeneration of plants from proto-

plasts of S. khasianum ?.. ar> and S. laciniatum it.

iotechnolog" in griculture de )rotoplastes. 3orpho-

genese Vegetale +'perimentale, at. *0, Eni$ersite )aris

8ud. 1* pp.

8ihacha>r, . 199/. )rotocole disolement et de culture de

protoplastes. 3orphogenese Vegetale +'perimentale, at.

*0, Eni$ersite )aris 8ud. 1* pp.

8upriadi. 19/*. )enanggulangan pen"a>it la"u ba>teri Solanum

khasianum dengan batang ba!ah "ang tahan. )rosiding

8eminar )embudida"aan #anaman Obat. Eni$ersitas Aenderal8oedirman, )ur!o>erto, Aa!a #engah. hlm. 12-127.

8ur"o!inoto, 3. 1990. )emuliaan #anaman secara +n 2itro.

)etun@u> laboratorium. )E iote>. Eni$ersitas &ad@ah

3ada, Hog"a>arta. 21 hlm.

8tatmann, 3., +. &ericc>, and &. :en6el. 1994. nterspecific

somatic h"brids bet!een S. khasianum and S. aculeatissimum

prod uced b" e lec trofusion. )lant ?el l Fep. 1< 19-19*.

#a>ebe, ., &. Babib, and &. 3alchers. 1971. Fegeneration of

!hole plants from isolated mesoph"ll protoplas of tobacco.

Natur!issenschaften /< 1/-20.

#an, 3.3.?. 19/7. 8omatic %"bridi6ation and ?"bridi6ation

in 8ome 8olanaceae. cademisch )roefschrift. Vri@e Eni-

$ersiteit te msterdam.

:ara, 8. and . &limileus. 199. #he potential of somatic

h"bridi6ation in crop breeding. +uph"tica /< 217-2.

:attimena, &.. 1999. pplication of biotechnolog" in hor-

ticultural crops production. +n )roceeding of 8eminar on

iotechnolog"< pplication of iotechnolog" in %orti-

cultural )roduction. ogor gricultural Eni$ersit"-

ritish ?ouncil, ogor, 14 pril 1999.

:instead and . elman. 192. noculation techniLues for

e$aluating resistance toPseudomonas solanacearum. )h"to-

patholog" 42< *2/-*4.

Documents

jurnal biotek 2