krom KLT & Kertas

8/9/2019 krom KLT & Kertas

1/11

IDENTIFIKASI NILAI Rf PADA ANALISA WARNA

DENGAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DAN KROMATOGRAFI KERTAS

A. ACARA

Identifikasi nilai Rf pada analisa warna dengan kromatografi lapis tipis dan

kromatografi kertas.

B. PRINSIP

a. kromatografi lapis tipis : memisahkan komponen-komponen atas perbedaan adsorpsi

atau partisi oleh fasa diam yang berupa lapisan tipis dari silica gel dibawah gerakan

fasa gerak yaitu n-hexan.

b. kromatografi kertas : memisahkan komponen-komponen atas perbedaan adsorpsi atau

partisi oleh fasa diam yang berupa kertas dibawah gerakan fasa gerak yaitu n-hexan.

A. TUJUAN

Mengetahui nilai Rf dari masing-masing warna baik pada metode kromatografi

kertas maupun kromatografi lapis tipis.

B. DASAR TEORI

Kromatografi adalah suatu istilah umum yang digunakan untuk bermacam-macam

teknik pemisahan yang didasarkan atas partisi sampel diantara suatu fasa gerak yang bisa

berupa gas ataupun cair dan fasa diam yang juga bisa berupa cairan ataupun suatu

padatan. Kromatografi adalah suatu teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan

kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu.

Kromatografi berkembang menjadi teknik pemisahan untuk zat kimiawi dengan

sifat yang sangat mirip, dan dapat digunakan untuk identifikasi kualitatif dan penetapan

kuantitatif untuk zat-zat yang sudah dipisahkan. Keuntungan-keuntungan dari

Kromatografi diantaranya :

1. Kromatograf i merupakan metoda pemisahan yang cepat , mudah dan

menggunakan peralatan yang murah ser ta sederhana, kecuali untuk

kromatografi gas, hingga campuran yang kompleks dapat dipisahkan dengan

mudah.


2/11

2. Kromatografi hanya membutuhkan campuran cuplikan.yang sangat sedikit

sekali, bahkan tidak menggunakan jumlah yang besar, disamping itu

kromatografi pekerjaannya dapat diulang.

a. Kromatografi Kertas

Kromatografi kertas termasuk dalam kelompok kromatografi planar, dimana

pemisahannya menggunakan medium pemisah dalam bentuk bidang (umumnya

bidang datar) yaitu benuk kertas. Seluruh bentuk kromatografi memilikifase diam

(berupa padatan atau cairan yang didukung pada padatan) dan fase gerak(cairan atau

gas). Fase gerak mengalir melalui fase diam dan membawa komponen-komponen dari

campuran bersama-sama. Komponen-komponen yang berbeda akan bergerak pada laju

yang berbeda pula.

Dalam kromatografi kertas, fase diam adalah kertas serap yang sangat seragam. Fase

gerak adalah pelarut atau campuran pelarut yang sesuai.

Berbagai jenis pemisahan yang sederhana dengan Kromatografi kertas telah

dilakukan dimana proses dikenal sebagai "analisa Kapiler". Metoda-metoda ini

sangat sesuai dengan kromatografi serapan, dan sekarang kromatografi kertas

dipandang sebagai perkembangan dari sistem partisi. Salah satu zat padat dapat

digunakan untuk menyokong fasa tetap yaitu bubuk selulosa.

Pada kromatografi Kertas peralatan yang dipakai tidak perlu alat-alat yang teliti

atau mahal. Hasil-hasil yang baik dapat diperoleh dengan peralatan dan materi-

materi yang sangat sederhana. Senyawa-senyawa yang terpisahkan dapat

dideteksi pada kertas dan dapat segera diidentif ikasikan. Bahkan j ika

dikehendaki, komponen-komponen yang terpisahkan dapat diambil dari kertas

dengan jalan memotong-motongnya, kemudian dilarutkan secara terpisah.

b. Kromatografi Lapis Tipis (thin Layer Chromatography)

Teknik TLC/KLT fasa diam (terutama silika, alumina, dan selulosa) dilapiskan

di permukaan sbuah plat pendukung (umumnya dibuat dari bahan kaca atau


3/11

lembaran logam Al). Bila noda telah kering plat diletakkan secara vertikal dalam

bejana yang sesuai dengan tepi yang di bawah dicelupkan dalam fasa bergerak

yang terpilih, maka pemisahan kromatografi penaikan akan diperoleh. Pada akhir

perkembangan, pelarut dibiarkan menguap dari plat dan noda-noda yang terpisah

dilokalisir dan diidentifikasi dengan cara-cara fisika dan kimia seperti yang

digunakan dalam kromatografi kertas.

Bila dibandingkan dengan kromatografi kertas, metoda Iapisan tipis mempunyai

keuntungan, yaitu membutuhkan waktu yang lebih cepat dan diperoleh

pemisahan yang lebih baik. Waktu rata-rata untuk kromatografi lapisan tipis

dengan panjang 10 cm pada silika gel adalah sekitar 20 - 30 menit (tergantung

dari sifat fasa bergerak), sedangkan pemisahan yang sama dengan memerlukan

waktu dua jam. Untuk pemisahan-pemisahan secara kualitatif pada plat yang

kecil memerlukan waktu sekitar 5 menit.

Hasil pemisahan yang baik ternyata bahwa penyerap dalam kromatografi lapisan

tipis mempunyai kapasitas yang lebih besar bila dibandingkan dengan kertas.

Keuntungan dari sistem serapan ialah dapat digunakan untuk memisahkan

senyawa-senyawa yang sifatnya hidrofobi, seperti lipida-lipida dan hidrokarbon,

di mana hal ini sukar dikerjakan dengan kertas. Sekarang pemisahan dengan

lapisan tipis banyak digunakan dalam kimia organik dan beberapa dalam kimia

anorganik. Lokasi dari senyawa-senyawa yang terpisah pada lapisan tipis

dikerjakan seperti pada kertas, tetapi pereaksi-pereaksi yang lebih reaktif seperti

asam sulfat dapat digunakan pada lapisan tipis, dengan catatan bahwa materi

lapisan tipis adalah senyawa yang tak bereaksi seperti silika gel atau alumina.

A. ALAT DAN BAHAN

Alat :

1. Kromatografi Kertas

kertas saring (fasa diam)

bejana


4/11

penggaris

beaker glass

penangas air

spatula

corong

batang pengaduk

mortar

1. Kromatografi Lapis Tipis

kaca preparat kecil

kaca preparat besar (20x20 cm)

beaker glass

neraca

spatula

kaca arloji

gelas ukur

pipet tetes

penyuntik sampel

penangas air

corong

batang pengaduk

mortar

Bahan :


n-Hexane (fasa gerak)

Kloroform

daun menir



5/11

n-Hexane (fasa gerak)

Kloroform

silica gel (bahan penyerap)

bunga bouganvile

A. PROSEDUR

a. Pembuatan lapisan tipis kecil

1. 2 gelas mikroskop yang dilekatkan satu sama lain dicelupkan dalam bubur silica

gel (bubur silica gel dibuat dengan mencampurkannya dengan kloroform yang

diaduk sampai homogen).

2. Setelah dicelupkan diangkat kembali, biarkan hingga kering di udara. Setelah

kering bagian sisi yang terletak di sebelah dalam dari masing-masing gelas

dibersihkan dengan kertas kering.

a. Pembuatan lapisan tipis besar

1. Timbang silika gel sebanyak 12 gram, tambah air sebanyak 27 ml diaduk sampai

homogen, air yang digunakan adalah aquadest.

2. Tuangkan pada gelas mikroskop besar, 20x20 cm dan usahakan mendapatkan

tebal permukaan yang serata mungkin dengan mengetep-ngetepnya diatas gabus.

3. Plat gelas yang telah dilapisi silika gel dikeringkan untuk diaktifkan dengan jalan

memanaskan dalam oven dengan suhu 100C selam 30 menit, makin lama makin

baik.

a. Pembuatan cuplikan

Dipakai zat dari tumbuhan, misalnya kunir, daun atau bunga-bungaan, dapat juga zat

organik yang tak berwarna.

1. Kunir, daun atau bunga dipotong-potong dan dilumatkan sampai halus dengan

lumping porselen dan diekstrak dengan pelarut organik, contoh : kloroform atau

pelarut lain.

2. Ekstrak disaring ambil bagian yang terlarut dalam kloroform kemudian diuapkan

sehingga diperoleh larutan yang pekat.

a. Pembuatan kromatogram

1. Diatas lapisan tipis, teteskan zat yang akan dikromatografikan dengan pipa kapiler

pada jarak kira-kira 1 cm dari bagian bawah kaca. Untuk plat yang kecil noda


6/11

berupa titik, sedangkan untuk plat besar 20x20 cm berupa deretan titik-titik

sehingga membentuk garis, biarkan beberapa saat hingga kering.

2. Lapisan tipis yang mengandung cuplikan dimasukkan dalam satu bejana yang

berisi fasa gerak, untuk lapisan tipis yang kecil dapat ditempatkan dalam gelas

piala bagian yang mengandung cuplikan dicelupkan dalam fasa gerak, noda

jangan sampai tercelup dalam fasa gerak.

3. Setelah fasa gerak naik sampai hampir ujung atas lapisan, lapisan tipis diambil

dari bejana atau gelas piala. Untuk plat kecil batas fasa bergerak dan noda-noda

diberi tanda biarakan kering di udara.

4. Untuk mengetahui lokasi noda (bila tidak terlihat) maka setelah lapisan tipis kecil

kering dimasukkan dalam gelas piala yang di dalamnya diberi Kristal iod.

5. Tentukan harga Rf untuk lapisan tipis kecil.

6. Penanganan plat besar selanjutnya bila dikehendaki untuk mendapatkan hasil

pemisahan maka pita-pita yang merupakan komponen-komponen senyawa

masing-masing dikeruk dan dikumpulkan secara terpisah, tiap-tiap bagian dicuci

dengan kloroform yang kemudian perlu di uji lebih lanjut dengan menggunakan

lapisan tipis untuk mengetahui apakah masing-masing bagian marupakan

komponen tunggal atau masih merupakan campuran.

A. DATA HASIL PENGAMATAN


Jarak yang

ditempuh pelarut(cm)

Jarak yang ditempuh senyawa (cm)

Hijau (Klorofil) Kuning Orange

15 7,5 11,5 15,1

Nilai Rf = Jarak yang ditempuh senyawa : jarak yang ditempuh pelarut


7/11

hijau (klorofil)

Rf = 7,5 : 15

= 0,5 cm

Kuning

Rf = 11,5 : 15

= 0,76 cm

Orange

Rf = 15,1 : 15

= 1,0067 cm


Jarak yang ditempuh pelarut (cm) Jarak yang ditempuh senyawa (cm)

6,5 2,4

Nilai Rf = jarak yang ditempuh senyawa : jarak yang ditempuh pelarut

= 2,4 : 6,5

= 0,3692 cm

A. PEMBAHASAN

a. Kromatografi Lapis Tipis (Thin Layer Chromatography)

Sampel yang dipergunakan dalam analisa KLT adalah bunga bouganvile,

bunganya berwarna merah muda. bunga ini diekstrak dengan menggunakan

kloroform terlebih dahulu sebelum dipergunakan untuk analisa.

Penanganan sampel yang pertama adalah memisahkan bunga yang akan dieksrak

dengan daun dan ranting dari tanaman asalnya, saat praktikum jumlah dari bunga

yang akan diekstrak adalah secukupnya (sekitar segenggam tangan), setelah

dibersihkan bunga dipotong-potong dan kemudian dihaluskan secara manual dengan


8/11

menggunakan mortar. Setelah cukup halus, kemudian tambahkan kloroform untuk

mengekstrak zat-zat warna yang larut dengan pelarut organik yang terkandung dalam

sample.

Jumlah kloroform yang ditambahkan secukupnya atau sampai sampel terbenam

dengan pelarut, hal ini dimamaksudkan agar zat-zat warna yang terkandung dalam

sampel dapat terekstrak dengan maksimal. hasil ekstraksi dari bunga bouganvile ini

berwarna hijau muda transparan.

hasil ekstraksi kemudian dipanaskan untuk menguapkan pelarut organiknya,

karena plearut organic menguap pada suhu dibawah 100oC sehingga proses

pemanasan dilakukan diatas penangas air untuk memghindari kemungkinan

terjadinya pemansan yang terlalu tinggi hingga hasil ekstraksi yang dipanaskan

menjadi kering.

Dalam KLT, fasa diam yang dipergunakan adalah terutama silica gel, alumina dan

selulosa. Menurut teori jika fasa diam yang dipergunakan adalah silica gel, maka

pelarut yang dipergunakan adalah aquadest, akan tetapi saat praktikum, pelarut yang

dipergunakan untuk melarutkan silica gel adalah pelarut organic yaitu kloroform.

dibandingkan dengan aquadest kloroform merupakan pelarut yang mudah menguap

sehingga plat yang sudah dilapisi dengan bubur silica gel, tidak perlu mengalami

proses pengaktifan cukup dibiarkan di udara terbuka sampai kering.

Plat gelas yang dipergunakan pada saat praktikum berukuran kecil (gelas preparat/

mikroskop slide), sebelum dipergunakan plat tersebut terlebih dahulu dibersihkan

dengan menggunakan tisu yang dibasahi dengan alcohol 70%. Setelah dibersihkan

plat tersebut kemudian dikeringkan.

Proses pelapisan plat dengan bubur silica gel dilakukan diatas plat gelas kaca

berukuran besar (20 x 20 cm) Karena permukaannnya rata. plat kecil yang dilapisi

dengan bubur silica gel diletakan berdampingan dan bagian pinggirnya saling

menempel sehingga permukaannya saling berhadapan ke atas.

Dalam 1 kali proses pelapisan, plat yang dilapisi ada 2. bagian pinggir luar plat

ditahan dengan menggunakan gelas preparat yang lain sebanyak 2 tumpuk,.

Kemudian bubur silica gel ditungkan diatas permukaan plat dan bagian atasnya

didorong dengan kaca preparat yang lain, karena terdapat penahan sebanyak 2

tumpuk maka hal ini akan membuat tinggi lapisan bubur silica gel menjadi rata saat


9/11

didorong dengan kaca preparat, hal ini dilakukan untuk menghindari kemungkinan

terjadinya permukaan plat yang dilapisi tidak rata dan bergelombang sehingga akan

mempengaruhi pemisahan padat saat pengambangan gerakan fasa gerak tidak

sempurna atau alirannya terganggu. proses ini harus dilakukan secepat mungkin,

karena silica gel yang dilarutkan dengan kloroform cepat sekali mengering.

setelah plat sudah dilapisi selanjutnya dibiarkan kering, proses pengeringannya

cukup cepat karena pelarut yang dipergunakan untuk menglarutkan silica gel adalah

kloroform, jika menggunakan pelarut aquadest, silica gel diatas plat membutuhkan

waktu yang lebih lama untuk kering sehingga harus dikeringkan didalam oven

terlebih dahulu untuk mempercepat proses pengeringannya.

silica gel yang sudah kering diatas plat tersebut kemudian ditetesi dengan sampel,

proses penetesan sampel ini sulit sekali dilakukan, selain jumlah sampel yang harus

diteteskan sedikit sekali, juga karena silica gel kering diatas plat tersebut tidak dapat

menyerap sampel. setelah sampel diteteskan dengan menggunakan alat suntik,

selanjutnya plat dimasukan kedalam beaker glass yang berisi fasa gerak dan ditutup

dengan platik wrap, fasa gerak yang dipergunakan saat praktikum adalah n-hexane.

plat dimasukan kedalam beaker glass dengan posisi berdiri, sehingga jumlah fasa

gerak didalam beaker glass tidak boleh melebihi tinggi sampel yang diteteskan diatas

plat. kemudian ditutup kembali, saat praktikum noda sampel yang berhasil diteteskan

dengan baik diatas plat hanya 1, dan nodanya berwarna hijau yang diperkirakan

klorofil.

dari hasil praktikum tersebut maka jarak yang ditempuh pelarut n-hexane dalam

KLT adalah 6,5 cm, dan jarak yang ditempuh senyawa yang terbawa oleh pelarut

adalah 2,4 cm. dari data tersebut maka harga Rf-nya adalah 0,3692 cm.

b. Kromatografi kertas

sampel yang dipergunakan berbeda dengan sampel pada KLT, pada kromatografi

kertas sampel yang dipergunakan yaitu daun menir yang berwana dominan hijau

dengan bintik merah dan kuning.

proses preparasi sampel pada kromatografi kertas sama dengan preparasi sampel

pada KLT, yaitu sampel dihaluskan dengan menggunakan mortar, ditambahkan


10/11

pelarut kloroform kemudian dipanaskan diatas penangas air sampai sampel

mengental.

pada kromatografi kertas, fasa diam yang dipergunakan adalah kertas yang sangat

beragam dan saat praktikum dipergunakan kertas saring yang dipotong persegi

panjang, dengan fasa gerak pelarut organic n-hexane. tidak seperti pada KLT, pada

kromatografi kertas prosesnya cukup cepat, selain proses penetesan sampel tidak

terlalu rumit, kromatografi kertas juga tidak perlu menunggu fasa diam kering untuk

meneteskan sampel.

sebelum noda sampel diteteskan, terlebih dahulu kertas saring diberi garis dengan

menggunakan pensil untuk membuat jarak antara noda dengan pelarut dibawahnya,

dan yang kedua adalah membuat tanda untuk meneteskan sampel yang berjarak 2

cm. pada saat praktikum penetesan sampel dilakukan menggunakan tusuk gigi, saat

penetesan noda sampel, fasa diam berada dalam posisi mendatar dan noda dibiarkan

mengering terlebih dahulu sebelum dimasukan kedalam bejana yang berisi fasa gerak.

penetesan noda yang terlalu banyak harus dihindari, karena kelebihan setiap

komponen akan menyebabkan tidak akan tercapainya kesetimbangan partisi selama

ia bergerak, hingga ia akan mengakibatkan terjadinya kedudukan atau lokasi yang

kabur.

setelah noda sampel mengering, kertas dimasukan kedalam bejana sudah jenuh

dengan fasa gerak yaitu n-hexane, kertas saring berisi noda yang sudah kering

tersebut diposisikan tegak berdiri dan bagian bawahnya terbenam dalam fasa gerak.

metoda yang dipakai dalam kromatografi kertas ini adalah metoda penaikan, yaitu

kertas dicelupkan hingga ujung di mana aliran mulai bergerak terletak sedikit di

atas permukaan dari pelarut dan pelarut naik melalui serat-serat dari kertas oleh

gaya kapiler. kertas sebagai serat-serat selulosa dengan lapisan yang sangat tipis dari

molekul-molekul air yang berikatan pada permukaan. Interaksi ini dengan air

merupakan efek yang sangat penting selama pengerjaan kromatografi kertas.

noda-noda yang naik dari sampel daun menir ini terdiri dari 3 warna, yaitu hijau,

kuning dan orange. jarak yang ditempuh dari masing-masing warna adalah hijau 7,5

cm; warna kuning 11,5 cm; dan warna orange 15,1. sedangkan jarak yang ditempuh

pelarut adalah 15 cm. dari data tersebut maka harga Rf untuk masing-masing warna

adalah, warna hijau 0,5 cm; warna kuning0,76 cm; dan warna orange 1,0067 cm.


11/11

harga Rf dari kromatografi kertas ini cukup tinggi, salah satu penyebabnya adalah

penggunaan n-hexane sebagai fasa gerak, molekul-molekul polar akan memiliki

atraksi yang tinggi untuk molekul-molekul air dan kurang untuk pelarut yang non

polar. Molekul-molekul polar dalam campuran sampel memiliki sedikit atraksi antara

molekul-molekul air dan molekul-molekul yang melekat pada selulosa, dan karena

akan menghabiskan banyak waktunya untuk larut dalam pelarut yang bergerak.

Molekul-molekul seperti ini akan bergerak sepanjang kertas diangkut oleh pelarut. hal

inilah yang menyebabkan nilai Rf menjadi tinggi.

Documents

krom KLT & Kertas