Alga KLT Bioautografi

7/24/2019 Alga KLT Bioautografi

1/51

1

BAB I

PENDAHULUAN

A.Latar Belakang

Prevalensi penyakit infeksi belum menunjukkan kecenderungan

menurun dari tahun ketahun. Kenyataan menunjukkan bahwa di negara-negara

yang sedang berkembang seperti Indonesia, urutan penyakit-penyakit utama

nasional masih di tempati oleh berbagai penyakit infeksi (Nelwan, 2006).

Antibiotika telah menjadi dasar utama bagi pengobatan penyakit infeksi

sejak tahun 1940-an. Kemampuan antibiotika untuk menyembuhkan penyakit

infeksi menimbulkan penggunaan yang meluas dan sering tidak pada

tempatnya sehingga menimbulkan generasi kuman yang menjadi kebal atau

resisten terhadap antibiotika (Purwanto, 2008).

Gejala resistensi kuman merupakan informasi studi yang menuntut

diteruskannya usaha pencarian senyawa antibiotik baru. Indonesia sebagai

negara yang dua pertiga wilayahnya berupa lautan memiliki sumber bahan obat

alami yang potensial setelah daratan. Karena itu, selain di darat juga harus

diperhatikan laut yang juga mengandung biodiversity yang luar biasa

(Anonimous, 2009).

Alga laut merupakan salah satu biota laut yang sangat potensial untuk

dikembangkan. Indonesia memiliki banyak daerah penghasil alga laut, salah

satu diantaranya yaitu Kabupaten Bantaeng yang merupakan daerah sentral

pengembangan alga laut di daerah Sulawesi Selatan khususnya alga merah


2/51

2

(Rhodophyta), yang memiliki biodiversitas lebih tinggi dibandingkan dengan

alga coklat (Phaeophyta) dan alga hijau (Chlorophyta)(Puslit LIPI, 2006).

Alga menghasilkan biomassa berupa bahan aktif metabolit untuk

melindungi dirinya dari serangan berbagai penyakit dan predator, bahan aktif

itu disebut biogenik. Bahan aktif ini dipakai sebagai antibakteri, antijamur,

antilumut, dan antialga. Selain memiliki bahan biogenik, juga terdapat mikroba

di dalam jaringan hidup biota laut yang dikenal dengan mikroba endofit.

Beberapa studi yang telah dilakukan, memberikan indikasi bahwa mikroba

endofit sangat prospektif sebagai sumber metabolit sekunder baru seperti

enzim-enzim perombak, zat pengatur tumbuh tanaman, dan antibiotika yang

bermanfaat di bidang bioteknologi dan pertanian, maupun farmasi (Purwanto,

2008).

Beberapa penelitian telah dilakukan terhadap alga merah, diantaranya

yaitu uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol alga merah Eucheuma cottonii.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak alga merah memiliki aktivitas

antibakteri terhadap bakteri uji dengan konsentrasi hambat minimum (KHM)

terhadap bakteri Bacillus cereus adalah 0,1% dan terhadap Escherichia coli

adalah 0,5% (Iskandar dkk, 2007) dan isolasi mikroba endofit penghasil

antibiotik dari ganggang Turbinaria murayana, diperoleh supernatan yang

memberikan aktifitas terhadap Salmonella thyposa,Pseudomonas Aeroginosa,

dan Candida albicans (Rusli , 2009). Namun demikian, informasi tentang

karakterisasi senyawa antibiotika yang dihasilkan oleh mikroba endofit dari


3/51

3

alga merah Eucheuma cottonii asal Rappoa Kabupaten Bantaeng belum

dilaporkan.

Beberapa faktor yang mempengaruhi pertumbuhan alga laut antara lain

arus, cahaya, salinitas, suhu, dan pH perairan. Dengan demikian, meskipun

berasal dari jenis yang sama, senyawa aktif yang dihasilkan oleh alga laut di

suatu daerah kemungkinan berbeda dengan daerah yang lain.

Berdasarkan uraian diatas, telah dilakukan penelitian mengenai

karakterisasi senyawa antibiotika yang dihasilkan oleh mikroba endofit dari

alga merahEucheuma cottoniiasal Rappoa Kabupaten Bantaeng.

B.Rumusan Masalah

Berdasarkan uraian tersebut di atas maka permasalahan yang timbul

yaitu bagaimana karakteristik senyawa yang dihasilkan oleh mikroba endofit

yang ada di dalam alga merah Eucheuma cottoniiyang memiliki efek sebagai

antibiotika?

C.Tuj uan Peneli tian

Adapun tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui karakteristik

senyawa yang dihasilkan oleh mikroba endofit yang ada di dalam alga merah

Eucheuma cottoniiyang memiliki efek antibiotika.

D.Manfaat Peneli tian

1. Sebagai sumber rujukan untuk penelitian lanjutan dan peneliti lainnya

tentang karakteristik dari senyawa antibiotika yang dihasilkan oleh

mikroba endofit dari alga merah Eucheuma cottonii asal Rappoa

Kabupaten Bantaeng.


4/51

4

2. Sebagai data ilmiah kepada industri obat antibiotika bahwa di dalam alga

merah Eucheuma cottonii asal Rappoa Kabupaten Bantaeng terdapat

mikroba endofit penghasil senyawa antibiotika.


5/51

5

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A.Alga Laut

Istilah alga pertama kali diperkenalkan oleh Linnaeus pada tahun 1754.

Pada mulanya penjelasan dijalankan berdasarkan warna. Penjelasan alga

berdasarkan kepada ciri-ciri berikut :

1. Pigmen fotosintesis seperti klorofil dan karotenoid.

2. Komponen dinding sel

Bahan dinding sel terdiri dari polisakarida, lipid dan bahan protein.

Komponen khusus yang mencirikan dinding sel termasuk asam poliuronat,

asam alginat (Phaeophyta), asam fusinat (banyak terdapat pada Phaeophyta)

dan komponen mukopeptida (Cynophyta). Ciri khas yang terdapat pada

Chrysophytaialah mempunyai dinding sel yang bersilika.

3. Aspek struktur sel

Ketiadaan membran yang memisahkan nukleus, pembagian nukleus

tidak berlaku secara mitosis seperti yang berlaku pada eukariotik, adanya

dinding sel yang melindungi mukopeptida tertentu sebagai komponen yang

menguatkannya (Eri, 2007).

Alga laut atau ganggangpada daerah-daerah tertentu di Indonesia juga

sering disebut sebagai rumput laut, dan merupakan salah satu bahan pangan

yang telah banyak dikembangkan dalam hal pemanfaatannya. Para ahli

menggolongkan alga atau ganggang berdasarkan pigmen yang dikandungnya

terdiri dari lima kelas, yaitu Cyanophyta (alga biru), Chlorophyta(alga hijau),


6/51

6

Chrysophyta (alga keemasan), Phaeophyta (alga coklat), Rhodophyta (alga

merah). Dilihat dari ukurannya, ganggang terdiri dari mikroskopik dan

makroskopik (Junaedi, 2004).

Produksi alga laut di Indonesia dalam beberapa tahun terakhir

meningkat cukup tinggi, dimana sampai dengan tahun 2005 mencapai sekitar

189 ribu ton atau meningkat rata-rata sebesar 56,29 % pertahun dalam periode

lima tahun terakhir. Hal ini menempatkan Indonesia sebagai negara penghasil

rumput laut terbanyak ke-4 di dunia (Anonimous, 2009).

B.Morfologi A lga Laut

Alga laut atau yang biasa disebut dengan seaweed merupakan tanaman

makro alga yang hidup di laut yang tidak memiliki akar, batang, daun sejati

dan pada umummnya hidup di dasar perairan. Alga laut disebut tanaman

karena memiliki klorofil

(zat hijau daun) sehingga dapat berfotosintesis. Fungsi

dari akar, batang dan daun yang tidak dimiliki oleh alga laut digantikan oleh

thallus. Alga laut memperoleh atau menyerap makanannya melalui sel-sel yang

terdapat pada thallusnya (Junaedi, 2004).

Alga laut digolongkan ke dalam tumbuhan tingkat rendah (Thallophyta)

Karena tidak memiliki akar, batang dan daun seperti umumnya pada tanaman.

Bagianbagian alga laut secara umum terdiri dari holdfast yaitu bagian dasar

dari alga laut yang berfungsi untuk menempel pada substratdan thallus yaitu

bentuk-bentuk pertumbuhan alga laut yang menyerupai percabangan (Junaedi,

2004).


7/51

7

Pertumbuhan dan percabangan thallus alga laut antara jenis yang satu

dengan yang lainnya berbeda-beda. Bentukbentuk percabangan thallus alga

laut ada 10 macam, yaitu tidak bercabang, dichotomous (bercabang dua),

pinnate alternate (bercabang dua secara berselang-seling), pinnate distichous

(bercabang dua secara beraturan), tetratichous (tallus utama bercabang dua),

ferticllate (cabang tumbuh melingkari tallus ), polystichous (cabang thallus

tidak beraturan),pectinate(cabang tumbuh pada satu sisi thallus), monopodial

(cabang tumbuh satu-satu pada tiap thallus), dan sympodia(percabangan pada

thallus tumbuh searah dan bias lebih dari satu cabang pada masing-masing

thallus). Sedangkan bentuk holdfast dari alga laut antara lain sederhana,

rhizoid, uniseluler, kerucut, cakram dan stolon merambat dengan pelekat

(Junaedi, 2004).

Selama ini, yang umum dikenal dapat dimanfaatkan dan memiliki nilai

ekonomis ada 3 kelas, yaitu Rhodophyta (alga merah), Phaeophyta (alga

coklat) dan Chlorophyta (alga hijau). Ketiganya merupakan sumber potensial

senyawa bioaktif yang sangat bermanfaat bagi pengembangan industri farmasi,

seperti sebagai anti bakteri, anti tumor, anti kanker atau sebagai reversal agent.

Sedangkan pada industri agrokimia terutama untuk antifeedant, fungisidadan

herbisida(Bachtiar, 2007).

Alga biru dan sebagian jenis alga hijau banyak hidup dan berkembang

di dalam air tawar, sedangkan alga merah dan alga coklat perairan laut,

merupakan habitatnya. Sebagian besar jenis alga coklat hidup di daerah sub-

tropis, sedangkan alga merah umumnya hidup di daerah tropis. Beberapa faktor


8/51

8

yang mempengaruhi pertumbuhan alga makro laut antara lain; substrat

salinitas, nutrisi baik yang berasal dari substrat maupun massa air, gelombang,

arus, kedalaman dan kejernihan dalam kaitannya dengan intesitas cahaya

(Waryono, 2008).

Alga makro laut banyak dijumpai tumbuh di daerah perairan yang agak

dangkal dengan kondisi dasar perairan berpasir, sedikit lumpur atau campuran

kedua-nya. Memiliki sifat benthic(melekat) dan sering disebut sebagai benthic

algae. Hidup sebagai fitobentos dengan melekatkan thallusnya pada substrat

pasir, lumpur berpasir, karang, fragmen karang mati, kulit kerang, batu atau

kayu. Kondisi perairan yang cocok pada umumnya adalah perairan yang jernih

dengan arus dan gelombang yang tidak begitu kuat. Perkembangbiakan alga

makro laut dapat terjadi melalui dua cara, yaitu secara vegetatif melalui thallus

dan secara generatif melalui thallus dipploid yang menghasilkan spora

(Waryono, 2008).

Kemampuan alga untuk memproduksi metabolit sekunder terhalogenasi

yang bersifat sebagai senyawa bioaktif dimungkinkan terjadi, karena kondisi

lingkungan hidup alga yang ekstrem seperti salinitas yang tinggi atau akan

digunakan untuk mempertahankan diri dari ancaman predator. Alga merah

merupakan kelompok alga yang jenis-jenisnya memiliki berbagai bentuk dan

variasi warna (Junaedi, 2004).

Indikasi dari segi pewarnaan bahwa itu adalah alga merah salah satunya

adalah terjadinya perubahan warna dari warna aslinya menjadi ungu atau

merah apabila alga tersebut terkena panas sinar matahari secara langsung. Alga


9/51

9

hijau pada umumnya berwarna hijau dengan bentuk thalli berupa lembaran,

batangan atau bulatan yang bersifat lunak maupun keras. Kelompok alga coklat

memiliki bentuk yang bervariasi tetapi hampir sebagian jenis-jenisnya

berwarna coklat atau pirang (Junaedi, 2004).

Keadaan warna tidak selalu dapat digunakan dalam menentukan

kelasnya. Perubahan warna sering terjadi hanya karena faktor lingkungan yang

berubah. Kejadian ini merupakan proses modifikasi yaitu perubahan bentuk

sifat luar (fenotip) yang tidak kekal sebagai akibat dari pengaruh lingkungan

antara lain iklim dan oseonografis yang relatif cukup besar. Pigmen yang

menentukan warna ini antara lain adalah klorofil, karoten, phycoerhythrindan

phycocyanin yang merupakan pigmen-pigmen lain. Phycoerythrin dan

phycocyanin hanya terdapat Rhodophyceae dan Cyanophyceae. Sedangkan

klorofil dan karoten dijumpai pada keempat kelas alga, hanya kadarnya yang

berbeda (Kanisius, 1991).

C.Kandungan dan Manfaat Alga Laut

Mikroalga dan makroalga telah digunakan oleh manusia beratus-ratus

tahun sebagai makanan, makanan hewan, dan pupuk. Alga laut mempunyai

kandungan nutrisi cukup lengkap. Secara kimia alga laut terdiri dari air

(27,8%), protein (5,4%), karbohidrat (33,3%), lemak (8,6%) serat kasar (3%)

dan abu (22,25%). Selain karbohidrat, protein, lemak dan serat, alga laut juga

mengandung enzim, asam nukleat, asam amino, vitamin (A,B,C,D, E dan K)

dan makro mineral seperti nitrogen, oksigen, kalsium dan selenium serta mikro

mineral seperti zat besi, magnesium dan natrium. Kandungan asam amino,


10/51

10

vitamin dan mineral rumput laut mencapai 10-20 kali lipat dibandingkan

dengan tanaman darat (Anonimous, 2009).

Mengkonsumsi alga laut diyakini dapat mencegah kanker. Salah satu

alasannya adalah kandungan serat, selenium dan seng yang tinggi pada rumput

laut dapat mereduksi estrogen. Disinyalir level estrogen yang terlalu tinggi

dapat mendorong timbulnya kanker. Penelitian yang dilakukan terhadap

penderita kanker di Amerika menunjukkan bahwa wanita yang melakukan diet

ketat dengan mengkonsumsi serat tinggi dan mengurangi asupan lemak dari

daging dan susu mempunyai level estrogen yang rendah. Hal ini didukung oleh

hasil penelitian Harvard School of Public HealthAmerika telah membuktikan

bahwa pola konsumsi wanita Jepang yang selalu menambahkan alga laut dalam

menu makannya, menyebabkan wanitapremenopause di Jepang mempunyai

peluang tiga kali lebih kecil terkena kanker payudara dibandingkan wanita

amerika (Anonimous, 2009).

Serat pada alga laut juga membantu memperlancar proses metabolisme

lemak sehingga akan mengurangi resiko obesitas, menurunkan kolesterol darah

dan gula darah. alga laut juga membantu pengobatan tukak lambung, radang

usus besar, susah buang air besar dan gangguan pencernaan lainnya

(Anonimous, 2009).

Vitamin, mineral, asam amino, dan enzim dalam alga laut sangat

potensial sebagai anti oksidan yang berperan dalam penyembuhan dan

peremajaan kulit. Vitamin A (beta carotene) dan vitamin C bekerja sama dalam

memelihara kolagen, sedangkan kandungan protein dari alga laut penting untuk


11/51

11

membentuk jaringan baru pada kulit. Dengan kata lain, alga laut dapat

membantu mencegah terjadinya penuaan dini dan menjaga kesehatan dan

kehalusan kulit. alga laut juga mengandung iodium yang sangat tinggi

khususnya dari jenis turbinaria dan sargasum, sehingga mengkonsumsi rumput

laut dapat mengatasi defisiensi yodium yang berdampak pada menurunnya

tingkat kecerdasan (Anonimous, 2009).

Kandungan klorofil dan vitamin C pada alga laut (ganggang hijau)

berfungsi sebagai anti oksidan sehingga dapat membantu membersihkan tubuh

dari reaksi radikal bebas yang sangat berbahaya sehingga dapat meningkatkan

sistem kekebalan tubuh. Sistem kekebalan tubuh yang kuat akan dapat

menguruangi gejala alergi. Alga laut mengandung kalsium sepuluh kali lebih

tinggi dibandingkan dengan susu, sehingga alga laut sangat tepat dikonsumsi

untuk mengurangi dan mencegah gejala osteoporosis (Anonimous, 2009).

Disamping sebagai bahan makanan bergizi, alga laut telah banyak

digunakan sebagai bahan pembuatan obat-obatan dan suplemen makanan serta

difortifikasi ke produk pangan untuk meningkatkan nilai jual produk tersebut.

Berbagai variasi struktur senyawa bioaktif yang sangat unik dari isolat alga

merah telah berhasil diisolasi. Namun pemanfaatan sumber bahan bioaktif dari

alga belum banyak dilakukan (Anonimous, 2009).

D.Uraian Alga Merah (Eucheuma cottonii )

Indonesia memiliki 54 spesies alga merah (Rhodophyceae) yang berasal

dari beberapa genus yaitu Acanthophora, Amphiora, Eucheuma, Galaxaura,
http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=1http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=18http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=18http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=1


12/51

12

Gelidium, Gracilaria, Halymenia, Hypnea, Kappaphycus, Laurencia,

Porphyra, danRhodymenia.

Eucheuma cottonii diketahui sebagai alga merah (Rhodophyceae) yang

ditemukan di bawah air surut rata-rata. Alga ini mempunyaithallusyang keras,

silindris dan berdaging. Sejak 2700 SM Eucheuma cottonii telah digunakan

oleh bangsa Cina sebagai bahan sayuran, obat-obatan dan kosmetik, sedangkan

di Indonesia digunakan sebagai bahan sayuran, kue, manisan dan obat-obatan.

Menurut penelitian Eucheuma cottonii memiliki kandungan kimia karagenan

dan senyawa fenol, terutama flavonoid, karagenan, senyawa polisakarida yang

dihasilkan dari beberapa jenis alga merah memiliki sifat antimikroba,

antiinflamasi, antipiretik, antikoagulan dan aktivitas biologis lainnya (Iskandar,

2007).

Eucheuma cottonii merupakan salah satu jenis rumput laut merah

(Rhodophyceae) dan berubah nama menjadi Kappaphycus alvarezii karena

karaginan yang dihasilkan termasuk fraksi kappa-karaginan. Maka jenis ini

secara taksonomi disebut Kappaphycus alvarezii. Nama daerah cottonii

umumnya lebih dikenal dan biasa dipakai dalam dunia perdagangan nasional

maupun internasional (Samsuari, 2009).

KlasifikasiEucheuma cottonii

Divisi : Rhodophyta

Anak divisi : Algae

Kelas : Rhodophyceae

Bangsa : Gigartinales
http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=25http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=29http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=36http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=42http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=45http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=52http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=56http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=56http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=56http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=52http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=45http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=42http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=36http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=29http://www.iptek.net.id/ind/pd_alga/index.php?mnu=2&alga=merah&id=25


13/51

13

Suku : Solieracea

Marga : Eucheuma

Jenis : Eucheuma alvarezii Doty

Kappaphycus alvarezii (doty) Doty

Ciri fisik Eucheuma cottonii adalah mempunyai thallus silindris,

permukaan licin, cartilogeneus. Keadaan warna tidak selalu tetap, kadang-

kadang berwarna hijau, hijau kuning, abu-abu atau merah. Perubahan warna

sering terjadi hanya karena faktor lingkungan. Kejadian ini merupakan suatu

proses adaptasi kromatik yaitu penyesuaian antara proporsi pigmen dengan

berbagai kualitas pencahayaan (Samsuari, 2009).

Penampakan thalli bervariasi mulai dari bentuk sederhana sampai

kompleks. Duri-duri pada thallus runcing memanjang, agak jarang-jarang dan

tidak bersusun melingkari thallus. Percabangan ke berbagai arah dengan

batang-batang utama keluar saling berdekatan ke daerah basal (pangkal).

Tumbuh melekat ke substrat dengan alat perekat berupa cakram. Cabang-

cabang pertama dan kedua tumbuh dengan membentuk rumpun yang rimbun

dengan ciri khusus mengarah ke arah datangnya sinar matahari (Samsuari,

2009).

Umumnya Eucheuma cottonii tumbuh dengan baik di daerah pantai

terumbu (reef). Habitat khasnya adalah daerah yang memperoleh aliran air laut

yang tetap, variasi suhu harian yang kecil dan substrat batu karang mati.

Beberapa jenis Eucheuma mempunyai peranan penting dalam dunia


14/51

14

perdagangan internasional sebagai penghasil ekstrak karaginan (Samsuari,

2009).

Kadar karaginan dalam setiap spesiesEucheumaberkisar antara 5473

% tergantung pada jenis dan lokasi tempat tumbuhnya. Jenis ini asal mulanya

didapat dari perairan Sabah (Malaysia) dan Kepulauan Sulu (Filipina).

Selanjutnya dikembangkan ke berbagai negara sebagai tanaman budidaya.

Lokasi budidaya rumput laut jenis ini di Indonesia antara lain Lombok, Sumba,

Sulawesi Tenggara, Sulawesi Selatan, Sulawesi Tengah, Lampung, Kepulauan

Seribu, dan Perairan Pelabuhan Ratu (Samsuari, 2009).

E.Mikroba Endofit

Mikroba endofit pertama kali dilaporkan oleh Darnel dkk; pada tahun

1904. Sejak itu, definisi mikroba endofit telah disepakati sebagai mikroba yang

hidup didalam jaringan internal tumbuhan hidup tanpa menyebabkan efek

negatif langsung yang nyata (Puslit LIPI, 2006).

Mikroorganisme yang hidup di alam ini tersebar luas, baik yang hidup

dengan melakukan kontak langsung dengan lingkungan maupun yang hidup di

dalam jaringan hidup manusia, hewan, dan tanaman. Salah satu kelompok

mikroorganisme yang hidup bersimbiosis mutualisme dengan tanaman adalah

mikroorganisme endofit. Mikroba memperoleh makanan dari inang, dan

berperan melindungi tanaman inang. Mikroba memproduksi enzim yang dapat

mendegradasi atau memecah peptin dan polygalacturonic yang berperan untuk

mendegradasi lapisan tengah dinding sel selama penetrasi dan kolonisasi pada

jaringan inang oleh simbion-simbion(Purwanto, 2008).


15/51

15

Ketahanan patogen terhadap beberapa antimikroba telah memicu suatu

usaha untuk menemukan antimikroba baru yang efektif. Usaha untuk mencari

antibiotik yang dihasilkan oleh mikroorganisme endofit yang terdapat di dalam

jaringan tanaman dilakukan dengan tujuan untuk mendapatkan antibiotik yang

bersifat memiliki aktifitas tinggi terhadap mikroba patogen; toksisitas rendah

terhadap hewan, manusia maupun tumbuhan; spektrum luas; stabilitas baik;

dan karakteristik farmakokinetik memuaskan (Purwanto, 2008).

Mendapatkan senyawa antibiotik dapat dilakukan dengan proses

fermentasi. Mikrorganisme endofit akan menghasilkan suatu metabolit

sekunder yang merupakan senyawa antibiotik itu sendiri. Metabolit sekunder

merupakan senyawa yang disintesis oleh suatu mikroba, tidak untuk memenuhi

kebutuhan primernya (tumbuh dan berkembang) melainkan untuk

mempertahankan eksistensinya dalam berinteraksi dengan lingkungannya

(Purwanto, 2008).

Metabolit sekunder yang dihasilkan oleh mikroorganisme endofit

merupakan senyawa antibiotik yang mampu melindungi tanaman dari serangan

hama insekta, mikroba patogen, atau hewan pemangsanya, sehingga dapat

dimanfaatkan sebagai agen biokontrol (Sumaryono, 1999).

F.Fermentasi

Fermentasi merupakan proses oksidasi biologi dalam keadaan

anaerobik dimana yang bertindak sebagai sebagai substrat adalah karbohidrat,

pembawa hidrogen atau elektron biasanya NAD atau FAD, sedangkan aseptor

hidrogen atau elektron adalah bahan organik yaitu asam piruvat (Djide, 2006).


16/51

16

Fermentasi biasanya menggunakan satu macam mikroorganisme yang

telah terseleksi. Namun pada fermentasi dual atau multiple digunakan lebih

dari satu mikroorganisme. Organisme ini dapat diinokulasikan ke dalam

substrat secara simultan. Fermentasi dapat dilakukan dengan cara batch per

batch atau secara kontinyu.

Fermentasi antibiotika dapat dilakukan dengan berbagai cara antara lain:

a. Pada media padat

Penelitian mikroorganisme penghasil antibiotik biasanya

membutuhkan media padat untuk pertumbuhannya. Misalnya pada waktu

skrining, suspensi mikroorganisme terpilih ditumbuhkan pada media

padat, setelah inkubasi dalam waktu cukup, aktivitas antibiotik yang

dihasilkan dapat diuji terhadap berbagai bakteri indikator. Dalam hal

fermentasi antibiotik pada media padat, temperatur dan komposisi media

merupakan faktor yang sangat penting dan menentukan keberhasilan

produksi antibiotika. Untuk mengontrol temperatur supaya konstan dan

sesuai dengan yang dikehendaki, dapat menggunakan inkubator atau alat

lain.

b. Pada media cair denganshaker

Fermentasi antibiotik biasanya menggunakan fermentor untuk

pertumbuhan biakan submerged. Namun jika fermentor tidak tersedia,

teknik shake flask dapat dipakai untuk menggantikannya, setelah

organisme diperoleh sebagai biakan murni, maka perlu memeriksa

karakteristik biokimia atau morfologi mereka dengan menumbuhkannya


17/51

17

pada kondisi biakan submerged. Untuk tujuan tersebut teknik shake flask

dapat digunakan karena sederhana dan dapat memberikan informasi yang

berguna.

c. Pada media cair dengan fermentor

Fermentor berfungsi menyediakan lingkungan bagi pertumbuhan

organisme atau sel di bawah kondisi terkontrol. Dalam industri fermentasi,

fermentor harus memungkinkan pertumbuhan dan biosintesis paling baik

bagi biakan mikroba (yang bermanfaat bagi industri) dan memberikan

kemudahan untuk manipulasi semua operasi yang berhubungan dengan

penggunaan fermentor (Suwandi, 2009).

Fermentasi biasanya memerlukan waktu lama. Operasinya dapat

berlangsung beberapa hari, bahkan pada fermentasi kontinu dapat

berlangsung beberapa minggu. Fermentasi berlangsung pada kondisi

aseptik, jadi fermentor harus menjamin sterilitas kandungannya dan

terpeliharanya kondisi aseptik sehingga mencegah terjadinya kontaminasi

mikroba yang tak dikehendaki (Suwandi, 2009).

G.Antibiotika

Antibiotika adalah zat-zat kimia yang dihasilkan oleh fungi dan bakteri,

yang memiliki khasiat yang mematikan atau menghambat pertumbuhan

kuman, sedangkan toksisitasnya bagi manusia relatif kecil. Turunan zat

tersebut, yang dibuat secara semi-sintesis, termasuk kelompok ini; begitu pula

senyawa sintetik dengan khasiat antibakteri lazimnya disebut antibiotika.

(Tjay, 2002).


18/51

18

Antibiotika merupakan senyawa kimia yang dimurnikan dari berbagai

macam mikroorganisme sehingga mampu menekan pertumbuhan

mikroorganisme lain. Senyawa dengan kemampuan sama namun diperoleh

dari proses sintesis disebut sebagai antimikroba. Berdasarkan jenis

mikroorganisme target, antibakteri, antifungi, antiparasit, atau antiviral.

Istilah antibiotik kini meluas hingga istilah antimikroba tercakup juga di

dalamnya (Agustina, 2000).

Secara garis besar, jenis-jenis antibiotika yang ada mencakup sebagai

berikut : (Tjay, 2002)

1. Golongan penisilin

Golongan penisilin bersifat bakterisid dan bekerja dengan

mengganggu sintesis dinding sel yaitu menghambat sinteis peptidoglikan.

Antibiotika penisilin mempunyai ciri khas secara kimiawi adanya

nukleus asam amino-penisilinat, yang terdiri dari cincin tiazolidin dan

cincin betalaktam. Contohnya benzilpenisilin, amoksisilin, kloksasilin,

ampisilin, asam klavulanat, dan fenoksimetilpenisilin.

2. Golongan sefalosporin

Sefalosporin termasuk antibiotika beta-laktam dengan struktur,

khasiat dan sifat yang banyak mirip penisilin. Bekerja dengan

menghambat sintesis peptidoglikan serta mengaktifkan enzim autolisis

pada dinding sel bakteri. Contohnya : sefaleksin, sefamandol, sefotaksim,

seftazidim, sefuroksim.


19/51

19

3. Golongan tetrasiklin

Merupakan antibiotika spektrum luas bersifat bakteriostatik untuk

kuman Gram positif dan Gram negatif.

Bekerja dengan menghambat sintesis protein dari bakteri. Contohnya :

tetrasiklin, doksisiklin, minosiklin.

4. Golongan aminoglikosida

Merupakan golongan antibiotika yang bersifat bakterisid dan

terutama aktif untuk kuman Gram negatif. Beberapa mungkin aktif

terhadap Gram positif. Streptomisin dan kanamisin juga aktif terhadap

kuman TBC. Contohnya adalah amikasin, gentamisin, kanamisin,

streptomisin, neomisin, metilmisin dan tobramisin. Antibiotika ini punya

sifat khas toksisitas berupa nefrotoksik, ototoksik, dan neurotoksik.

Bekerja dengan menghambat sintesis protein dari bakteri.

5. Golongan makrolida

Golongan makrolida hampir sama dengan penisilin dalam hal

spektrum antikuman, sehingga merupakan alternatif untuk pasien-pasien

yang alergi penisilin. Bekerja dengan menghambat sintesis protein

kuman. Aktif secara in vitro terhadap kuman-kuman Gram positif, Gram

negatif, mikoplasma, klamidia, riketsia dan aktinomisetes. Selain sebagai

alternatif penisilin, eritromisin juga merupakan pilihan utama untuk

infeksi pneumonia atipik (disebabkan olehMycoplasma pneumoniae) dan

penyakit Legionnaires (disebabkan Legionella pneumophilla) termasuk


20/51

20

dalam golongan makrolida selain eritromisin juga roksitromisin, spiramisin,

josamisin, rosaramisin, oleandomisin, dan trioleandomisin.

6. Golongan linkosamid

Termasuk di sini adalah linkomisin dan klindamisin, aktif terhadap

kuman Gram positif termasuk stafilokokus yang resisten terhadap

penisilin. Juga aktif terhadap kuman anaerob, misalnya bakteroides.

Sering dipakai sebagai alternatif penisilin antistafilokokus pada infeksi

tulang dan sendi serta infeksi-infeksi abdominal. Bekerja dengan

menghambat sintesis protein dari bakteri.

7. Golongan polipeptida

Antibiotika golongan ini meliputi polimiksin B, polimiksin E

(kolistin), basitrasin, dan gramisidin. Bercirikan struktur polipeptida

siklis dengan gugusan amino bebas. Merupakan bakterisid berdasarkan

aktivitas permukaannya dan kemampuannya untuk melekatkan diri pada

membran sel bakteri, sehingga permeabilitas sel meningkat dan akhirnya

meletus. Polimiksin hanya aktif terhadap kuman Gram negatif termasuk

Pseudomonas, sedangkan basitrasin dan gramisidin terutama terhadap

kuman Gram positif.

8. Golongan lain-lain

Masih banyak jenis-jenis antibiotika yang tidak tercakup dalam

kelompok yang disebutkan di atas. Misalnya saja vankomisin,

kloramfenikol, asam fusidat, mupirosin, dan spektinomisin.


21/51

21

H. KLT Bioautografi

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) adalah metode pemisahan

fisikokimia. Lapisan yang memisahkan, yang terdiri atas bahan berbutir-butir

(fase diam), ditempatkan pada penyangga berupa pelat gelas, logam, atau

lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah, berupa larutan, ditotolkan

berupa bercak atau pita (awal). Pelat diletakkan di dalam bejana tertutup rapat

yang berisi larutan pengembang yang cocok (fase gerak), pemisahan terjadi

selama perambatan kapiler (pengembangan). Selanjutnya senyawa tidak

berwarna harus ditampakkan (dideteksi) (Stahl, 1985).

Campuran yang tidak diketahui, lapisan pemisah (sifat penjerap) dan

sistem larutan pengembang harus dipilih dengan tepat karena keduanya

bekerja sama untuk mencapai pemisahan. Penjerap (fase diam) yang umum

digunakan adalah silika gel, aluminium oksida, kieselgur, selulosa dan

turunannya, poliamida dan lain-lain (Stahl, 1985).

Silika gel merupakan jenis yang umum digunakan dan menghasilkan

perbedaaan dalam efek pemisahan yang tergantung kepada cara

pembuatannya. Sedangkan fase gerak merupakan medium angkut dan terdiri

atas satu atau beberapa pelarut. Ia bergerak di dalam fase diam, yaitu suatu

lapisan berpori, karena ada gaya kapiler (Stahl, 1985).

Metode Bioautografi adalah metode pendeteksian untuk menemukan

suatu senyawa antimikroba yang belum teridentifikasi dengan cara

melokalisir aktivitas antimikroba tersebut pada suatu kromatogram. Metode

ini memanfaatkan pengerjaan Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Pada


22/51

22

bioautografi ini didasarkan atas efek biologi berupa antibakteri, anti protozoa,

antitumor dan lain-lain dari substansi yang diteliti (Djide, 2008).

Bioautografi dapat dipertimbangkan karena paling efisien untuk

mendeteksi komponen antimikroba, sebab dapat melokalisir aktivitas

meskipun dalam senyawa aktif tersebut terdapat dalam bentuk senyawa

kompleks dan dapat pula diisolasi langsung dari komponen yang aktif.

Bioautografi dapat dibagi atas tiga kelompok yaitu :

1. Bioautografi langsung, yaitu dimana mikroorganismenya tumbuh secara

langsung di atas lempeng Kromatografi Lapis Tipis (KLT).

2. Bioautografi kontak, dimana senyawa antimikroba dipindahkan dari

lempeng KLT ke medium agar yang telah diinokulasikan bakteri uji yang

peka secara merata dan melakukan kontak langsung.

3. Bioautografi pencelupan, dimana medium agar telah diinokulasikan

dengan suspensi bakteri dituang di atas lempeng Kromatografi Lapis

Tipis (KLT) (Djide, 2008).

I. Metode Isolasi

1. Isolasi secara kromatografi kolom (Gritter, 1991)

Pada kromatografi kolom, campuran akan dipisahkan diletakkan

berupa pita pada bagian atas kolom penjerap yang berada dalam tabung

kaca, tabung logam atau bahkan tabung plastik. Pelarut (fase gerak)

dibiarkan mengalir melalui kolom karena aliran yang disebabkan oleh

gaya berat atau didorong dengan tekanan. Pita senyawa linarut bergerak

melalui kolom karena aliran yang disebabkan oleh gaya berat atau


23/51

23

didorong dengan tekanan. Pita senyawa linarut bergerak melalui kolom

dengan laju yang berbeda, memisah, dan dikumpulkan berupa fraksi ketika

keluar dari alas kolom (Gritter, 1991).

Pemilihan penjerap tidak begitu penting, sebab sebagian besar

senyawa dapat dipisahkan memakai alumina atau silika gel. Sedangkan

pemilihan pelarut sungguh merupakan hal yang sangat penting.

Kromatografi kolom memerlukan waktu yang lama dan bahan yang cukup

banyak, dan perlu dipastikan pelarut atau campuran pelarut mana yang

dapat menghasilkan pemisahan yang diinginkan (Gritter, 1991).

2. Isolasi secara kromatografi KLT preparatif

KLT preparatif adalah cara yang ideal untuk memandu kondisi

untuk kromatografi kolom atau KCKT. Pada KLT preparatif, cuplikan

yang dipisahkan ditotolkan berupa garis pada salah satu sisi pelat lapisan

besar paling baik lapisan besar niaga) dan dikembangkan secara tegak

lurus pada garis cuplikan sehingga campuran akan terpisah menjadi

beberapa pita. Pita ditampakkan dengan cara yang tidak merusak jika

senyawa itu tanwarna, dan penjerap yang mengandung pita dikerok dari

plat kaca. Kemudian cuplikan dielusi dari penjerap dengan pelarut polar.

Cara ini berguna untuk memisahkan campuran reaksi sehingga diperoleh

senyawa murni untuk telaah pendahuluan, untuk menyiapkan cuplikan

analisis, untuk meneliti bahan alam yang berjumlah kecil dan

campurannya rumit (Gritter, 1991).


24/51

24

Prinsip kerjanya sama dengan kromatografi lapis tipis biasa yaitu

adsorbsi dan partisi. Perbedaan yang nyata adalah pada KLT preparatif

menggunakan lempeng yang besar (ukuran 20 x 20 cm) dengan ketebalan

0,5-1 mm.

KLT preparatif harus dilakukan secepat mungkin, mulai dari

penotolan hingga elusi akhir karena hampir semua senyawa organik

mengurai jika dibiarkan berada dalam lapisan penjerap di udara dan

tersinari untuk waktu tertentu.

J. Karakteri sasi senyawa

1.Penampak bercak

Dapat dilakukan dengan menggunakan beberapa macam zat seperti

H2SO4 dan sebagainya. Memberikan penampakan yang lebih jelas pada

noda yang akan diamati. Penggunaan alat penyemprot harus diperhatikan

agar memberikan hasil semprotan yang merata (Stahl, 1985, 14).

2. Spektroskopi Ultraviolet (UV)

Spektrofotometri UV terdiri dari sumber radiasi, monokromator

yang berfungsi untuk mendapatkan radiasi polikromatis, kuvet atau sel

merupakan wadah sampel yang dianalisa, dan detektor yang berfungsi

untuk mengubah signal yang diterima menjadi signal elektronik

(Sostroamidjojo, 1985).

Sumber sinar yang dapat digunakan yaitu lampu deuterium.

Deuterium disebut juga heavy hidrogen, merupakan isotop hidrogen yang


25/51

25

stabil yang terdapat berlimpah di laut dan daratan. Inti atom deuterium

mempunyai satu proton dan satu neutron, sementara hidrogen hanya

memiliki satu proton dan tidak memiliki neutron. Sinar UV tidak dapat

dideteksi oleh mata, maka senyawa yang dapat menyerap sinar ini

terkadang merupakan senyawa yang tidak memiliki warna, bening dan

transparan (Riyadi,2009).

Sampel tidak berwarna tidak perlu dibuat berwarna dengan

penambahan pereaksi tertentu. Sampel dapat langsung dianalisa meskipun

tanpa preparasi. Sedangkan sampel keruh tetap harus dibuat jernih dengan

filtrasi atau sentrifugasi. Prinsip dasar pada spektrofotometri adalah

sampel jernih, larut sempurna dan tidak ada partikel koloid apalagi

suspensi (Riyadi, 2009).

Pada analisis kualitatif dengan metode spektroskopi UV-Vis yang

dapat ditentukan yaitu pemeriksaan kemurnian spektrum UV-Vis,

penentuan panjang gelombang maksimum. Pada penentuan panjang

gelombang maksimum didasarkan atas perhitungan pergeseran panjang

gelombang maksimum karena adanya penambahan gugus pada sistem

kromofor induk. Kaidah Woodward dan fiesher membahas secara terinvi

tentang pergeseran panjang gelombang maksimum yang disebabkan

subtitusi berbagai gugus ke dalam diena terkonjugasi, aromatik karbonil,

keton tak jenuh dan poliena. Kemungkinan perbedaan harga panjang

gelombang maksimum antara hasil perhitungan dengan tabel Woodward

dan fiesher dengan hasil pengamatan biasanya bergeser antara (0 - 4) nm


26/51

26

( Mulja, 1995 ).

3. Spektroskopi Inframerah (IR)

Spektrofotometer inframerah merupakan alat rutin yang digunakan

untuk mendeteksi gugus fungsional, mengidentifikasi senyawa, dan

menganalisis campuran. Infra Red atau Infra Merah merupakan suatu

metode yang mengamati interaksi molekul denganradiasi elektromagnetik

yang berada pada daerah panjang gelombang 0,75 1.000 m atau pada

Bilangan Gelombang 13.00010 cm-1(Giwangkara, 2007).

Radiasi elektromagnetik dikemukakan pertama kali oleh James

Clark Maxwell, yang menyatakan bahwa cahaya secara fisis merupakan

gelombang elektromagnetik, artinya mempunyai vektor listrik dan vektor

magnetik yang keduanya saling tegak lurus dengan arah rambatan

(Giwangkara, 2007).

Instrumentasi yang digunakan dalam radiasi inframerah pada

dasarnya menggunakan dasar-dasar optik yang sama seperti yang terdapat

dalam spektrofotometer ultraviolet dan tampak, perbedaannya sampel

berhadapan langsung dengan sumber radiasi.

Spektrofotometer yang modern terdapat tiga komponen pokok,

yaitu :

1.Sumber radiasi inframerah, yang memancarkan sinar yang mengenai

cuplikan yang akan dianalisis.
http://www.chem-is-try.org/materi_kimia/instrumen_analisis/spektrum_serapan_ultraviolet-tampak__uv-vis_/radiasi_elektromagnetik/http://www.chem-is-try.org/materi_kimia/instrumen_analisis/spektrum_serapan_ultraviolet-tampak__uv-vis_/radiasi_elektromagnetik/


27/51

27

2.Monokromator yang mendispersikan energi sinar awal menjadi banyak

frekuensi dan kemudian setelah melalui serangkaian celah yang

menyeleksi frekuensi tertentu yang akan dideteksi oleh detektor.

3.Detektor mengubah energi dari frekuensi serapan menjadi sinyal listrik

yang kemudian diperkuat hingga cukup untuk dicatat.

( Sastrohamidjojo, 1992).

Cuplikan atau sampel yang dianalisa dapat berupa cairan, padatan

ataupun gas. Karena energi vibrasi IR tidak terlalu besar sampel dapat

diletakan langsung berhadapan dengan sumber radiasi IR. Karena gelas

kuarsa atau mortir dari batu porselen memberikan kontaminasi yang

menyerap radiasi IR, preparasi cuplikan harus memakai mortir dari batu

agate dan pengempaan dipakai logam monel (Mulja, 1995).

Sampel cairan yang mengandung air hendaklah disiapkan dengan

tablet sel AgCl yang dijaga tidak boleh terkena radiasi matahari,

sedangkan sampel cairan yang tidak mengandung air dapat disiapkan

dengan sel NaCl. Keburaman tablet NaCl ini dapat digosok dengan

alkohol absolut dan dijaga kelembabannya pada 4050% (Mulja, 1995).

Sampel padat dapat disiapkan dengan beberapa cara antara lain

dengan cara:

1. Melarutkan terlebih dahulu dengan pelarut organik mutlak bebas air

seperti karbon disulfida (CS2) untuk penentuan 1330625 cm-1

, karbon

tetraklorida (CCl4) untuk penentuan 4000 1330 cm-1. Pelarut polar

juga dapat dipakai seperti kloroform, dioksan, dan formamida.


28/51

28

2. Disuspensikan dengan nujol p.a. sampai halus dengan partikel

diperkirakan tidak lebih besar dari panjang gelombang radiasi IR (untuk

mencegah terjadinya radiasi percikan). Selanjutnya suspensi yang telah

jadi dijepit di antara dua tablet NaCl.

3. Dibuat tablet kempa dengan KBr untuk IR zat padat. KBr untuk

keperluan spektroskopi IR masing masing dipanaskan sampai 1100C

selama 1-2 jam untuk menghilangkan spora molekul H2O. Campuran

zat padat yang akan dianalisis (0,5 -1 %b/b) dengan KBr dalam mortir

agate, selanjutnya dibuat tablet tipis dengan pengempaan memakai

hampa udara dengan tekanan tinggi. Sampel gas dimasukan ke dalam

tempat khusus yang dapat mengatur terjadi pengamatan bentuk gas atau

cair melalui proses penguapan dan penyubliman (Mulja, 1995).

Sampel gas dimasukkan ke dalam tempat yang khusus yang dapat

mengatur masuk dan keluarnya gas sampel melalui dua buah katup. Dalam

ruang sampel gas ini akan dapat diatur terjadinya pengamatan bentuk gas

atau cair meleui proses penguapan atau penyubliman (Mulja, 1995).

Atom-atom di dalam molekul tidak dalam keadaan diam, tetapi

biasanya terjadi peristiwa vibrasi. Hal ini bergantung pada atom-atom dan

kekuatan ikatan yang menghubungkannya. Vibrasi molekul sangat khas

untuk suatu molekul tertentu dan biasanya disebut vibrasi finger print.

Vibrasi molekul dapat digolongkan atas dua golongan besar, yaitu vibrasi

regangan (stretching), vibrasi bengkokan (bending) (Giwangkara, 2007).


29/51

29

Vibrasi yang digunakan untuk identifikasi adalah vibrasi

bengkokan, khususnya goyangan (rocking), yaitu yang berada di daerah

bilangan gelombang 2000 400 cm-1. Karena di daerah antara 4000

2000 cm-1merupakan daerah yang khusus yang berguna untuk identifkasi

gugus fungsional. Daerah ini menunjukkan absorbsi yang disebabkan oleh

vibrasi regangan. Sedangkan daerah antara 2000 400 cm-1

seringkali

sangat rumit, karena vibrasi regangan maupun bengkokan mengakibatkan

absorbsi pada daerah tersebut (Giwangkara, 2007).

Dalam daerah 2000 400 cm-1 tiap senyawa organik mempunyai

absorbsi yang unik, sehingga daerah tersebut sering juga disebut sebagai

daerah sidik jari (fingerprint region). Meskipun pada daerah 4000 2000

cm-1menunjukkan absorbsi yang sama, pada daerah 2000 400 cm-1juga

harus menunjukkan pola yang sama sehingga dapat disimpulkan bahwa

dua senyawa adalah sama (Giwangkara, 2007).

Dalam usaha untuk menganalisa spektrum dari suatu zat yang

belum dikenal, sebaiknya mengutamakan untuk mengetahui keberadaan

(atau tidaknya) dari beberapa gugus fungsi. C = O, O-H, N-H, C-O,C=C,

C=C, C=N,dan NO2 merupakan puncak yang paling sering memberikan

informasi yang singkat tentang struktur senyawa jika terdapat gugus-gugus

tersebut (Harmita, 2007).


30/51

30

K. Uraian Bakteri Uj i

1. Bacil lus subti li s (Garrity, 2004)

a. Klasifikasi

Domain : Bacteria

Filum : Firmicutes

Kelas : Bacilli

Bangsa : Bacillales

Suku : Bacillaceae

Marga : Bacillus

Jenis :Bacillus subtilis

b. Sifat dan morfologi.

Bacillus subtilismemiliki sel berbentuk batang 0,3-2,2 m x 1,27-

7,0 m, sebagian besar motil; flagelum khas lateral. Membentuk

endospora; tidak lebih satu sel sporangium. Termasuk bakteri Gram

positif, bersifat kemoorganotrof. Metabolisme dengan respirasi sejati,

fermentasi sejati, atau kedua-duanya, yaitu respirasi dan fermentasi.

Aerobik sejati atau anerobik fakultatif (Pelczar, 2008).

2. Candida albicans(Kill ,1995)

a. Klasifikasi

Filum : Thallophyta

Anak divisi : Deuteromycota

Kelas : Deuteromycetes

Suku : Cryptococaceae


31/51

31

Marga : Candida

Jenis : Candida albicans

b. Sifat dan morfologi

Candida albicans mempunyai bentuk sel bermacam-macam.

Menghasilkan banyak pseudomiselum, dapat dijumpai pada posisi yang

khas menurut pengucapan multilateral. Disimilasi mungkin okidatif, tetapi

pada banyak spesies juga sangat fermentatif. Di dalam medium cair dapat

berbentuk endapan, cincin dan pelikel (Pelczar, 2008).

3. Escheri chia coli (Garrity, 2004)

a. Klasifikasi

Domain : Bacteria

Filum : Proteobacteria

Kelas : Gammaproteobacteria

Bangsa : Enterobacteriales

Suku : Enterobacteriaceae

Marga : Escherichia

Jenis :Escherichia coli


Escherichia colimerupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang

lurus, 1, 1-1, 5 m x 2, 0-6,0 m, motil dengan flagelum peritrikus atau

non motil. Tumbuh dengan mudah pada medium nutrien sederhana.

Laktosa difermentasi oleh sebagian besar galur dengan produksi asam

dan gas (Pelczar, 2008).


32/51

32

4. Pseudomonas aerugi nosa (Garrity, 2004)

a. Klasifikasi

Domain : Bacteria



Bangsa : Pseudomonadales

Suku : Pseudomonadaceae

Marga : Pseudomonas

Spesies :Pseudomonas aeruginosa


Pseudomonas aeruginosamerupakan bakteri Gram negatif dengan

bentuk sel tunggal, batang lurus atau melengkung, namun tidak

berbentuk heliks. Pada umumnya berukuran 0,5-1, 0 m. Motil dengan

flagelum polar, monotrikus atau multitrikus. Tidak menghasilkan

selongsong prosteka. Metabolisme dengan respirasi, beberapa merupakan

kemolitotrof fakultatif, dapat menggunakan H2atau CO2sebagai sumber

energi. Oksigen molekuler merupakan penerima elektron unifersal, dapat

melakukan denitrifikasi dengan menggunakan nitrat sebagai penerima

pilihan (Pelczar, 2008).

5. Staphylococcus aureus(Garrity, 2004)

a. Klasifikasi

Domain : Bacteria

Filum : Firimicutes


33/51

33

Kelas : Bocilli

Bangsa : Bacillales

Suku : Staphylococcaceae

Marga : Staphylococcus

Jenis : Staphylococcus aureus

b. Sifat dan morfologi

Staphylococcus aureus adalah bakteri Gram positif, sel-sel

berbentuk bola, berdia meter 0,5-1,5 m, terdapat tunggal dan

berpasangan, dan secara khas membelah diri lebih dari satu bidang

sehingga membentuk grombol yang tidak teratur. Dinding sel mengandung

dua komponen utama; peptidoglikan dan asam teikoat. Metabolisme

secara respiratif dan fermentatif. Tumbuh lebih cepat dan lebih banyak

dalam keadaan aerob. Suhu optimum 35-400C. Terutama berasosiasi

dengan kulit, dan selaput lendir hewan berdarah panas. Kisaran inangnya

luas, dan banyak galur merupakan patogen potensial (Pelczar, 2008).

6. Staphylococcus epidermidis (Garrity, 2004)

a. Klasifikasi

Domain : Bacteria

Filum : Firmicutes

Kelas : Bacilli

Bangsa : Bacillales

Suku : Staphylococcaceae

Marga : Staphylococcus


34/51

34

Jenis : Staphylococcus epidermidis


Staphylococcus epidermidissel-selnya berbentuk bola, berdiameter

0,5 m-1,5 m, terdapat tunggal atau brpasangan dan secara khas

membelah diri pada lebih dari satu bidang, sehingga membentuk gerombol

yang tidak teratur. Merupakan bakteri Gram positif, tidak ditemukan

adanya protein A, sedangkan ribitol digantikan oleh gliseril (Pelczar,

2008).

7. Salmonella typhi(Garrity, 2004)

a. Klasifikasi

Domain : Bacteria



Bangsa : Enterobacteriales

Suku : Enterobacteriaceae

Marga : Salmonella

Jenis : Salmonella typhi(Garrity, 2004).


Salmonella typhi adalah bakteri Gram negatif berbentuk batang

lurus dengan ukuran 0,7-1,5 m, biasanya tunggal dan kadang-kadang

membentuk rantai pendek, jenis yang bergerak berflagela peritrik, hidup

secara aerobik fakultatif, meragikan glukosa dengan menghasilkan asam

kadang-kadang gas. Tumbuh optimal pada suhu 370C dan berkembang


35/51

35

baik pada suhu kamar, bakteri ini dapat ditemukan di saluran pencernaan

manusia dan hewan. Bakteri ini merupakan penyebab demam tifoid karena

adanya infeksi akut pada usus halus manusia dan hewan (Pelczar, 1958).

8. Vibrio sp (Garrity, 2004)

a. Klasifikasi

Domain : Bacteria



Bangsa : Vibrionales

Suku : Vibrionaceae

Marga : Vibrio

Jenis : Vibrio sp


Vibrio sp adalah bakteri Gram negatif berbentuk batang pendek,

tidak membentuk spora, sumbunya melengkung atau lurus 0,5 m,

terdapat tunggal atau kadang-kadang bersatu dalam bentuk S atau spiral.

Motil dengan satu flagelum polar atau pada beberapa spesies dengan dua

atau lebih flgelum dalam satu berkas polar. Mempunyai sferoplas,

biasanya dibentuk dalam keadaan lingkungan yang kurang

menguntungkan, tidak tahan asam, dan tidak membentuk kapsul. Tumbuh

baik dan cepat pada medium nutrien baku metabolisme dengan respirasi

dan fermentasi. Suhu optimum berkisar dari 18 sampai 370C (Pelczar,

2008).


36/51

36

L. Tinjauan Islam Mengenai Algae dan Manfaatnya

Sesuai dengan manfaat turunnya Al-quraan sebagai petunjuk umat

manusia hingga akhir zaman, selayaknya sebagai khalifah di muka bumi

manusia selalu berpengang teguh pada kitab suci Al-quraan di kehidupan

sehari-hari agar terhindar dari kesesatan. Al-quraan telah menjelaskan

segalanya, untuk itu umat manusia harus terus melakukan pengkajian

kandungan Al-quraan agar memperoleh petunjuk-petunjuk yang telah

dituliskan oleh Allah SWT tentang bumi dan seluruh isinya. Terdapat dalam

Q.S Ali-Imran (3) : 191 :

Terjemahnya :

(yaitu) orang-orang yang mengingat Allah sambil berdiri atau duduk

atau dalam keadaan berbaring dan mereka memikirkan tentang

penciptaan langit dan bumi (seraya berkata): "Ya Tuhan kami, tiadalah

Engkau menciptakan ini dengan sia-sia. Maha Suci Engkau, maka

peliharalah kami dari siksa neraka.

Menurut pendapat M.Quraish Shihab tentang ayat ini yaitu mereka

adalah orang-orang, baik lelaki maupun perempuan, yang terus-menerus

mengingat Allah, dengan ucapan dan atau hati dalam seluruh situasi dan

kondisi saat bekerja atau istirahat, sambil berdiri atau duduk atau dalam

keadaan berbaring, atau bagaimanapun dan mereka memikirkan tentang

penciptaan, yakni kejadian dan sistem kerja langit dan bumi dan setelah itu

berkata sebagai kesimpulan Tuhan kami, tiadalah engkau menciptakkan alam

raya dan segala isinya ini dengan sia-sia, tanpa tujuan yang hak. Apa yang


37/51

37

kami alami atau lihat, atau dengar dari keburukan atau kekurangan ( Shihab,

M. Quraish, 2009).

Ayat diatas menerangkan bahwa segala sesuatu yang ada diciptakan

oleh Allah di muka bumi ini tidak ada yang sia-sia, semua pasti ada

manfaatnya. Untuk itu, manusia perlu memperhatikan dan mengkaji lebih jauh

semua apa yang ada di bumi untuk mengetahui manfaatnya bagi kehidupan

manusia dan makhluk hidup lainnya, seperti halnya alga merah Eucheuma

cottonii yang dapat dimanfaatkan sebagai bahan pengobatan infeksi karena

dapat menghasilkan senyawa antibiotika yang diperoleh dari mikroba endofit

yang hidup di dalam jaringan hidup alga merah.

Kelompok tumbuh-tumbuhan merupakan salah satu ciptaan Allah yang

banyak sekali manfaatnya dalam kehidupan manusia, diantaranya dalam

bidang pangan, perindustrian, serta dalam bidang kesehatan. Salah satunya

yaitu kelompok algae yang potensial untuk dikembangkan diberbagai sektor.

Dalam Q.S Al- Nazir (79): 31-33 :

Terjemahnya:

Ia memancarkan daripadanya mata airnya, dan (menumbuhkan) tumbuh-tumbuhannya. Dan gunung-gunung dipancangkan-Nya dengan teguh,.

(semua itu) untuk kesenanganmu dan untuk binatang-binatang ternakmu.

Menurut pendapat M.Quraish Shihab, ayat diatas menerangkan tentang

kuasa Allah dan menggambarkan betapa besar nikmat-Nya kepada manusia.

Kata (maraha)pada mulanya berarti tempat pengembalaan tetapi, ia juga dapat

berarti rerumputan dan makanan binatang. Agaknya kata itu dipilih walau yang


38/51

38

dimaksud ayat diatas adalah tumbuhan secara umum baik yang dimakan

manusia maupun binatang karena konteks ayat ini berbicara tentang mereka

yang kafir lagi menolak keniscayaan hari kiamat. Thahir ibn Asyur

memperoleh kesan dari penyebutan kata yang hanya khusus digunakan untuk

binatang ternak itu bahwa ini menunjukkan rahmat Allah yang demikian luas

kepada makhluknya karena kepada binatang saja dia telah menyiapkan bahan

pangannya apalagi kepada manusia kekurangan ( Shihab, M. Quraish, 2009).

Ayat diatas menunjukkan betapa besarnya kasih sayang Allah SWT

kepada makhluknya dengan menciptakan dan menyediakan segala kebutuhan

seluruh makhluk ciptaannya tanpa terkecuali, dimana Allah telah menciptakan

alga merah Eucheuma cottonii yang dapat dimanfaatkan oleh manusia tidak

hanya sebagai bahan makanan, tetapi juga sebagai bahan pengobatan.

Seiring perkembangan ilmu pengetahuan dibidang kesehatan khususnya

dibidang kefarmasian, maka semakin banyak pula rahasia-rahasia dari ayat-

ayat Al-quran dan hadis-hadis nabi yang selama ini masih menjadi misteri,

akhirnya dapat dibuktikan makna dan kebenarnnya. Dalam dunia kesehatan,

kelompok algae dapat digunakan dalam pengobatan penyakit infeksi karena

mampu menghasilkan senyawa antibiotik. Infeksi merupakan penyakit yang

disebabkan oleh adanya gangguan dari mikroorganisme.

Allah swt telah memberikan manfaat yang besar terhadap ciptaanNya.

Laut dan segala isinya merupakan salah satu bagian dari bumi yang Allah

ciptakan untuk kita manfaatkan. Al-quran telah menempatkan lautan sebagai

pembahasan yang sangat penting. Topik tentang lautan terdapat pada 42 ayat di


39/51

39

dalam Al-quran. Baik sebagai topik utama maupun sub-topik. Sebagian besar

menjelaskan betapa lautan itu menyimpan berjuta-juta karunia dari Allah s.w.t

yang bisa diambil manfaatnya oleh umat manusia. Salah satu ayat yang

berbicara tentang lautan yaitu dalam Q.S Al-rahman(55) :19-20 :

Terjemahnya :

Dia membiarkan dua lautan mengalir yang keduanya kemudian

bertemu. Antara keduanya ada batas yang tidak di lampaui oleh masing-masing.

Beberapa ulama berpendapat bahwa kata (

) pada mulanya berarti

melepas. Kata ini antara lain digunakan untuk menggambarkan binatang yang

melepas untuk mencari sendiri makanannya. Melepas laut dalam arti

membiarkannya mengalir secara bebas. Dari sini, ia dipahami juga dalam arti

pulang pergi dan bolak-balik. Kata ini dapat juga dipahami dalam arti

bercampur secara tidak teratur sehingga menimbulkan keterombang-ambingan

dan kegelisahan. Kata (

) disepakati ulama dalam arti laut dan sungai.

)

) atau pemisah yang dimaksud adalah penampungan air yang terdapat

dibumi itu dan saluran-saluran bumi yang menghalangi air laut bercampur

dengan air sungai sehingga tidak mengakibatkan nya menjadi asin.

Ulama Sayyid Quthub, menyatakan bahwa penghalang yang dijadikan

Allah itu, adalah posisi aliran sungai yang biasanya lebih tinggi daripada

permukaan laut. Karena air sungai itulah yang mengalir kelaut bukan

sebaliknya, kecuali amat sangat jarang dan dengan pengaturan yang sangat

teliti ini, air laut walaupun banyak, tidak mengasinkan air sungai yang

merupakan sumber air minum manusia, binatang, tumbuh-tubuhan. Sementara


40/51

40

pakar yang tekun dalam bidang kemukzizatan al-quran menjadikan ayat ini

sebagai salah satu mukjizat ilmiah alquran. Mereka tidak memahami pada

pemisah itu dalam pengertian penciptaan posisi sungai lebih tinggi dari lautan

Tetapi, lebih dari itu. Pendapat mereka dikemukakan setelah kemajuan-

kemajuan yang dicapai manusia dalam bidang ilmu kelautan (Shihab, M.

Quraish, 2009).

Selain itu juga terdapat pada Q.S. Al Jaatsiyah (45) : 12, yaitu :

Terjemahnya :

Allah yang telah menundukkan lautan untuk umat manusia, agarsupaya kapal-kapal dapat mengarunginya atas kehendak-Nya, dan

supaya manusia dapat memanfaatkan keistimewaan-keistimewaan yang

ada di dalamnya dan mudah-mudahan umat manusia bersyukur.

Menurut Pendapat M.Quraish Shihab, ayat diatas menyebutkan

kekuasaan Allah menundukkan laut dimana angin banyak berhembus guna

menghantar berlayar menuju tujuannya. Allah berfirman : Allah tidak ada

selainnya yang telah menundukkan lautan untuk kemashalatan kamu, wahai

manusia yang mukmin maupun yang kafir supaya bahtera dapat berlayar

padanya membawa kamu dan barang-barang kamu ke tempat yang kamu tuju,

kendati muatannya sangat berat. Itu terjadi dengan seizin dan kuasanya dan

dia yang maha kuasa itu juga menundukkan laut supaya kamu dapat mencari

sebagian karunianya yang berupa hasil laut, seperti ikan dan mutiara dan juga

agar kamu bersyukur dengan menggunakan nikmat-nikmat sesuai dengan

tujuan Allah menganugerahkannya dan dengan memurnikan sikap beragama

kepada-Nya. Dan hanya Dia yang Maha Esa dan Kuasa itu juga yang telah


41/51

41

menundukkan untuk kemashalatan kamu apa yang ada di langit dan bumi

sebagai rahmat yang semata-mata bersumber dari Nya lautan untuk keperluan

manusia sendiri. Dalam ayat ini juga dijelaskan bahwa Allah memberikan

keistimewaan-keistimewaan dalam lautan untuk dimanfaatkan manusia

sebaik-baiknya. Penundukan langit dan bumi dipahami dalam arti semua

bagian-bagian alam yang terjangkau dan berjalan atas dasar satu sistem yang

pasti kait- berkait dan dalam bentuk konsisten. Allah menetapkan hal tersebut

dan dari saat ke saat mengilhami manusia tentang pengetahuan fenomena

alam yang dapat mereka manfaatkan untuk kemashalatan dan kenyamanan

hidup manusia. Allah menundukkan semua untuk manusia agar dia tunduk

kepada yang ditundukkan itu, tetapi hanya kepada yang menundukkan

( Shihab, M. Quraish, 2009).

Dalam ayat yang lain diterangkan bahwa Allah swt. menjadikan langit,

bumi dan laut serta semua isinya untuk dimanfaatkan manusia baik sebagai

sarana transportasi atau untuk kebutuhan kehidupan manusia. Hal ini

berkaitan dengan penelitian yang kami lakukan, dimana salah satu

keistimewaan yang ada di dalam lautan yaitu alga merah yang didalamnya

mengandung mikroba endofit yang mampu mengahasilkan senyawa

antibiotika dan dimanfaatkan sebagai alternatif sumber penghasil antibiotika

yang baru.

Sebagian ayat-ayat Alquran menjelaskan akan pentingnya lautan bagi

kehidupan itu sama halnya dengan daratan. Karena itu kata Al Bahri

disebutkan dalam Alquran sebanyak 33 kali dan beberapa kali dirangkai


42/51

42

bersama dengan kata Al Barri.Ayat ini seakan-akan mendorong manusia

berusaha dan berpikir semaksimal mungkin, di mana laut dan segala isinya itu

dapat dimanfaatkan untuk keperluannya, demikian pula alam semesta ini.

Dalam Q.S Al-Maidah (5) : 96, Allah swt berfirman :

Terjemahnya:

Dihalalkan bagimu binatang buruan laut dan makanan (yang berasal)

dari laut sebagai makanan yang lezat bagimu, dan bagi orang-orang

yang dalam perjalanan; dan diharamkan atasmu (menangkap) binatang

buruan darat, selama kamu dalam ihram. dan bertakwalah kepada Allah

yang kepada-Nyalah kamu akan dikumpulkan.

Menurut pendapat M.Quraish Shihab tentang ayat diatas yaitu karena

redaksi ayat berbicara tentang perburuan secara umum, tanpa menjelaskan

apakah ia menyangkut binatang darat atau laut, maka dari ayat diatas

dinyatakan bahwa dihalalkan bagi kamu berburu binatang buruan laut juga

sungai, danau atau tambak dan makanannya yang berasal dari laut seperti

ikan, udang atau apapun yang hidup disana dan tidak dapat hidup didarat

walaupun telah mati dan mengapung, adalah makanan lezat bagi kamu. Ayat

tersebut menegaskan larangan berburu binatang darat dalam keadaan berihram

atau ketika berada dia tanah haram. Bahwa tidak ada larangan berburu

binatang laut dan sungai, bukan saja karena sangat melimpah tetapi juga

karena di Mekkah dan sekitar daerah tanah haram tidak terdapat laut atau

sungai( Shihab, M. Quraish, 2009).


43/51

43

Algae Eucheuma cottonii telah lama dimanfaatkan oleh masyarakat

sebagai bahan makanan dan sayuran. Kandungan Algae yang kaya akan

nutrisi merupakan salah satu bukti kekuasaan Allah swt terhadap ciptaannya.

Algae juga ternyata memiliki potensi yang besar sebagai bahan baku obat

obatan. Tingkat kebutuhan akan obat-obatan di era sekarang ini sangat besar

seiring dengan munculnya berbagai macam penyakit di kalangan masyarakat.

Oleh karena itu penelitian-penelitian yang bertujuan untuk menemukan

senyawa obat baru akan terus dilakukan. Hal ini didasari oleh sebuah hadits

yang diriwayatkan oleh Muslim dari Jabir r.a bahwa Rasulullah bersabda :

()

Artinya :

Setiap penyakit ada obatnya. Dan jika suatu obat mengenai tepat

pada penyakitnya, ia akan sembuh dengan izin Allah Ta`alaa.

(HR. Muslim).

Hadis diatas menjelaskan bahwa setiap penyakit yang diturunkan oleh

Allah swt ada obatnya, dan jika obat tepat mengenai penyakitnya maka ia akan

sembuh dengan izin Allah. Dalam dunia kesehatan ayat ini dapat diartikan

bahwa obat akan memberikan efek ketika obat telah berikatan dengan reseptor

obat tersebut. Setiap penyakit terjadi akibat dari berbagai macam faktor, salah

satunya adalah infeksi yang diakibatkan oleh mikroorganisme. Alga merah

mampu menghasilkan senyawa antibiotika yang sangat bermanfaat dalam

menyembuhan penyakit infeksi.


44/51

44

Infeksi yang tidak ditangani dengan benar, dapat berakibat fatal pada

kesehatan manusia. Infeksi dapat disembuhkan dengan penggunaan zat zat

antibiotika. Akan tetapi penggunaan antibiotika yang telah begitu luas dan

cendrung tidak tepat dapat memicu terjadinya resistensi. Untuk itu pemberian

antibiotika harus sesuai dengan aturan pakai yang telah ditetapkan oleh para

ahli farmasi. Rasulullah saw telah memberikan kita petunjuk untuk

dikembangkan dan Allah swt yang menentukan segala manfaatnya.

Seiring dengan perkembangan ilmu pengetahuan, jenis dan klasifikasi

penyakit akan semakin banyak ditemukan dan penemuan obat baru juga akan

semakin bertambah. Allah swt yang menurunkan penyakit, dan Allah swt

pula yang menurunkan obatnya.

Penelitianpenelitian yang bertujuan untuk menemukan senyawa obat

baru akan terus dilakukan dilakukan oleh para ahli farmasi, begitu pula

dengan kegunaan algae yang semakin banyak ditemukan. Hal ini dibuktikan

dari hasil penelitian yang menunjukkan adanya mikroba endofit pada algae

Eucheuma cottonii yang berpotensi untuk dimanfaatkan sebagai sumber

antibiotika baru, oleh karena itu perlu adanya penetuan karakterisasi dari

senyawa yang dihasilakan oleh algaeEucheuma cottonii.


45/51

45

BAB. III

METODE PENELITIAN

A. Waktu dan Tempat Peneli tian

Penelitian ini dilakukan pada bulan januari 2010 sampai selesai.

Dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi UIN Alauddin Makassar dan

Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi Universitas Muslim Indonesia

Makassar.

B. Alat dan Bahan

1. Alat-alat yang digunakan

Alat-alat gelas, autoklaf (Smic model YX-280 B), enkas, inkubator

(Memmert), Laminar Air Flow (LAF), ose, oven (Fisher), pipa kapiler

(Camag),sentrifuge, spektrofotometer IR (Shimadzu), spektrofotometer

UV (Shimadzu), dan timbangan analitik (AND).

2. Bahan-bahan yang digunakan

Biakan murni (Bacillus subtilis, Candida albicans, Escherichia coli,

Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhosa, Staphylococcus aureus,

Staphylococcus epidermidis, danVibrio sp), etanol 70%, isolat mikroba

endofit ( IJ2, IJ3, IJ5, IB2, dan IB5 ), lempeng silika gel 60 F254(Merck),

medium Maltose Yeast Broth (MYB), medium Glukosa Nutrient Agar

(GNA), pelarut aseton, etil asetat, n-heksan, kloroform, dan n-butanol.


46/51

46

C. Prosedur Kerja

1.

Penyiapan sampel

Sampel yang digunakan adalah isolat mikroba penghasil

antibiotika, yaitu isolat IJ2, IJ3, IJ5, IB2 dan IB5 yang merupakan koleksi

dari laboratorium mikrobiologi UIN Alauddin Makassar.

2. Sterilisasi alat

Alat-alat yang akan digunakan dicuci dengan deterjen, wadah

mulut lebar dibersihkan dan direndam dengan larutan deterjen panas

selama 15-30 menit diikuti dengan pembilasan pertama dengan HCl 0,1%

dan terakhir dengan air suling. Alat-alat dikeringkan dengan posisi

terbalik di udara terbuka setelah kering dibungkus dengan kertas. Tabung

reaksi dan gelas erlemeyer terlebih dahulu disumbat dengan kapas bersih.

Alat-alat dari kaca disterilkan di oven pada suhu 1800

C selama 2 jam.

Alat-alat suntik dan alat-alat plastik lainnya (tidak tahan pemanasan

tinggi) disterilkan dalam otoklaf pada suhu 1210C selama 15 menit

dengan tekanan 2 atm. Jarum ose disterilkan dengan pemanasan langsung

hingga memijar.

3. Produksi antibiotika

Disiapkan lima (5) isolat mikroba penghasil antibiotika, yaitu

isolat IJ2, IJ3, dan IJ5 untuk jamur, dan isolat IB2dan IB5 untuk bakteri.

Dimasukkan masing-masing 1 ose ke dalam tabung reaksi yang

sebelumnya telah diisi dengan 10 ml medium Maltose Yeast Broth

(MYB). Diinkubasi selama 1x24 jam. Setelah itu hasil inkubasi

dimasukkan ke dalam gelas erlenmeyer yang berisi masing-masing 200 ml


47/51

47

medium Maltose Yeast Broth (MYB). Dishaker selama 7x24 jam.

Diperoleh filtrat dan miselia yang kemudian disentrifuge. Hasilnya

kemudian diuapkan.

4. Skr in ing Pelarut

Diambil ekstrak kering dari filtrat dan miselia, kemudian

dilakukan skrining pelarut dengan menggunakan beberapa pelarut yaitu

aseton, etil asetat, n-heksan, kloroform, dan n-butanol dengan melihat

profil kromatogram pada lempeng KLT.

5. Parti si PadatCair

Dari hasil skrining pelarut dengan diperoleh pelarut yang sesuai,

selanjutnya dilakukan pemisahan senyawa yang terdapat pada filtrat dan

misellia, fermentat yang telah dikeringkan kemudian dipartisi dengan

menggunakan metode partisi padat-cair. Hasil yang diperoleh dipisahkan

ke dalam vial.

6. I denti fi kasi dengan Kromatograf i Lapis Tipis

Lempeng KLT yang akan digunakan terlebih dahulu diaktifkan

dengan pemanasan dalam oven pada suhu 1100C selama 10 menit

sebelum digunakan. Ditotolkan fraksi larut, tidak larut, dan fraksi miselia

pada lempeng KLT ukuran 7 x 1 cm menggunakan pipa kapiler.

Kemudian dielusi dengan cairan pengelusi yang sesuai di dalam

chamber. Lempeng dikeluarkan dari chamber dan diangin-anginkan

hingga cairan pengelusinya menguap. Kemudian kromatogram yang


48/51

48

dihasilkan diamati nodanya di bawah sinar UV pada panjang gelombang

254 nm dan 366 nm, serta penampak bercak H2SO410 %.

7. Uj i KLT-Bi oautografi

Hasil identifikasi KLT dengan profil kromatogram yang terbaik

dilanjutkan dengan uji KLT-Bioautografi metode kontak, dimana 10 ml

media GNA steril dimasukkan ke dalam vial dan diinokulasikan satu ose

mikroba uji dihomogenkan, kemudian dituang kedalam cawan petri

steril. Lempeng yang telah dielusi dengan eluen yang sesuai diletakkan di

atas permukaan medium agar yang telah diinokulasikan mikroba uji dan

dibiarkan selama 60 menit setelah itu lempeng tersebut diangkat dan

dikeluarkan. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 370C selama 1X24 jam

untuk bakteri dan pada 270C selama 3 X 24 jam untuk jamur.

Kemudian diamati bercak yang memberikan aktivitas penghambatan

terhadap pertumbuhan mikroba uji.

8. I solasi

Dari hasil uji aktivitas antimikroba terhadap beberapa mikroba uji

secara KLT-bioaotografi terdapat bercak tertentu yang memberikan

aktivitas antimikroba, maka bercak tersebut diisolasi dengan

menggunakan Kromatografi Lapis Tipis Preparatif.

Fraksi yang memberikan aktivitas antimikroba ditotolkan pada garis

penotolan lempeng Kromatografi Lapis Tipis Preparatif, dikeringkan

kemudian dielusi dengan menggunakan eluen yang sesuai. Pita-pita yang

diperoleh ditandai dan dikeruk.


49/51

49

9. Pemurnian dan Pengujian Pemurnian

Fraksi yang menunjukkan adanya aktivitas antimikroba pada

mikroba tertentu masih mengandung zat-zat pengotor dan golongan

komponen kimia yang lain sehingga perlu dilakukan pemurnian untuk

mendapatkan isolat yang murni. Pemurnian dilakukan dengan pencucian

isolat menggunakan metanol absolut sehingga golongan komponen kimia

yang lain dan zat-zat pengotor dapat larut dalam metanol. Hal ini

dilakukan beberapa kali sehingga isolat yang diperoleh benar-benar

murni, dengan pengujian kromatografi lapis tipis dua dimensi dan elusi

dengan sistem multi eluen.

a. Kromatografi Lapis Tipis Dua Dimensi

Isolat murni yang telah diperoleh kemudian ditotolkan pada

lempeng KLT dengan ukuran 20 x 20 cm. Lalu dielusi dengan

menggunakan dua cairan pengelusi, untuk proses elusi yang pertama

dilakukan dengan cara menotolkan filtrat yang telah dilarutkan dengan

pelarut yang cocok pada lempeng kemudian dielusi. Proses elusi yang

kedua dengan cara memutar lempeng berlawanan arah jarum jam

sehingga hasil elusi yang pertama menjadi titik awal pengelusian

untuk yang kedua. Setelah proses elusi yang kedua selesai lalu

diamati. Apabila pada dua kali proses elusi ini hanya menunjukkan

satu bercak tunggal maka dapat dikatakan bahwa yang didapatkan

adalah komponen kimia yang tunggal.


50/51

50

b. Elusi Sistem Multi Eluen

Uji kemurnian isolat juga dapat dilakukan dengan

menggunakan beberapa variasi eluen. Penampakan bercak tunggal

menandakan bahwa golongan senyawa dari isolat yang didapat

merupakan golongan komponen kimia yang tunggal.

10.Karakteri sasi Senyawa Antibiotika

a. Identifikasi Spektrofotometri Ultra Violet (UV)

Isolat murni yang diperoleh kemudian diidentifikasi dengan

spektrofotometer ultra violet. Senyawa dilarutkan dalam kloroform

kemudian cuplikan ditempatkan di antara monokromator dan

detektor. Spektrum yang dihasilkan direkam pada alat pencatat.

b. Identifikasi Spektrofotometri Infra Merah (IR)

Isolat murni yang diperoleh dilanjutkan dengan identifikasi

spektrofotometri infra merah dengan cara menempatkan cuplikan

sebagai film yang tipis diantara dua lapisan natrium klorida yang

transparan, kemudian ditempatkan pada celah sinar infra merah antara

monokromator dengan detektor, selanjutnya direkam pada alat

pencatat.

11.Uj i KLT-Bi oautografi

Isolat murni yang diperoleh dari hasil isolasi Kromatografi Lapis

Tipis Preparatif, dielusi dengan eluen yang sesuai lalu dilanjutkan dengan

Uji KLT-Bioautografi kontak dengan cara media GNA steril sebanyak 10

ml dituang ke dalam cawan petri steril, lempeng KLT yang telah dielusi


51/51

51

dengan eluen yang cocok diletakkan di atas permukaan medium agar

yang telah diinokulasi dengan mikroba tertentu, dibiarkan selama 60

menit setelah itu lempeng tersebut diangkat dan dikeluarkan. Selanjutnya

media diinkubasi pada suhu 37o C selama 24 jam.

Documents

Alga KLT Bioautografi