FAKTOR-FAKTOR YANG MEMPENGARUHI HARGA Rf1. Kualitas adsorben Mis : Ukuran partikel (makin kecil Rf makin besar).2. Ketebelan lapisan Makin tebal, Rf makin kecil.3. Kejenuhan ruang Kromatografi.4. Teknik pengembangan.5. Suhu.6. Kualitas pelarut.

PERBANDINGAN ANTARA KLT DENGAN K. KERTAS

1. Pemisahan dengan KLT lebih tajam.2. KLT lebih cepat (10 - 20 menit).3. KLT hanya memerlukan sedikit zat.4. Untuk mewarnai noda-noda pada KLT dapat diguna- kan asam-asam. 5. Noda-noda lebih tajam.6. Pelat KLT dapt dipanaskan sampai suhu yang cukup tinggi.7. Dalam KLT banyak pilihan adsorben.

PERBANDINGAN ANTARA KLT DENGAN K. KERTAS

7. Dalam KLT banyak pilihan adsorben.8. Kapasitas lapisan tipis adsorben lebih tinggi.9. Lapisan tipis adsorben dapat diimpregnasi dengan reagens korosif.

PENYEBAB ADSORPSI@ Gaya dispersi (London).@ Gaya dipole (Orientasi, induksi).@ Ikatan Hidrogen.@ Ikatan Kovalen lemah (interaksi asam-basa, pemben- tukan kompleks). Kovalen kuat Chemosorption.

KOEFISIEN DISTRIBUSI (K) TERGANTUNG PADA @ Adsorben.@ Pelarut( eluen). @ Struktur molekul sampel. @ Suhu.K suatu zat tergantung pada adsorben@ Komposisi Kimia permukaannya.@ Kandungan air.@ Luas permukaan.@ Susunan geometri atom/gugus permukaan.

@ Polietilenimine selulose. @ Selulose fosfat. @ DEAE selulose.TLC PENUKAR ION@ Selulose. @ Kieselguhr (tanah diatomi). @ Hidroksiapatite. @ Asam silikat (silika gel). TLC PARTISI

@ Minyak parafin (pada silika gel/kieselhur). @ Silikon (idem). @ n-Tetradekan (idem).@ Selulose terasetillasi.TLC FASA TERBALIK@ Sephadex G-25, superfine.@ Sephadex G-50, superfine.@ Sephadex G-75, superfine.@ Sephadex G-100, superfine.

TLC DENGAN GEL DEXTRAN

Ide pertama: D.T.Davy (1897)(dalam membedakan komposisi minyak bumi)Definisi: Perkolasi suatu cairan/larutan melalui suatu kolom bahan yang terbagi halus (serbuk). Serbuk tersebut secara selektif menghambat komponen- komponen yang ada dalam larutan.KROMATOGRAFI KOLOM CAIRAN(KONVENSIONAL)

Mekanisme: Salah satu dari (utama)1. Adsorpsi (kolom adsorben).2. Partisi (kolom cairan dilapisikan pada pendukung).3. Pertukaran ion (kolom penukar ion).4. Saringan gel (kolom gel).5. Reaksi biospesifik (kolom afinitas).KROMATOGRAFI KOLOM CAIRAN(KONVENSIONAL)

Cara Kerja:KROMATOGRAFI KOLOM CAIRAN(KONVENSIONAL)

Cara Kerja:1. Bahan pengisi kolom dikemas ke dalam kolom gelas.2. Larutan sampel ditaruh (diaplisasikan) diatas kolom bahan tsb.3. Pelarut dialirkan ke dalam kolom.4. Terjadi pemisahan komponen-komponen.5. Fraksi-fraksi ditampung secara terpisah.

KROMATOGRAFI KOLOM CAIRAN(KONVENSIONAL)

KROMATOGRAFI KOLOM CAIR-PADAT( METODE ADSORPSI )MEKANISME PEMISAHAN Berdasarkan perbedaan daya adsorpsi dari adsorben terhadap komponen-komponen sampel.Dengan adsorben silika gel adsorpsi terjadi karena adanya ikatan hidrogen antara sampel yang polar dengan gugus silanol pada silika (interaksi pola-polar).

KROMATOGRAFI KOLOM CAIR-PADAT( METODE ADSORPSI )Struktur silika gel dengan berbagai jenis ikatan dan gugus silanol.

KROMATOGRAFI KOLOM CAIR-PADAT( METODE ADSORPSI )@ Molekul solute (x) pada fasa gerak (s) bersaing untuk menempel tempat pada adsorben.Xm + n Sads ====== Xads + n SmKet :Xm= Molekul solute dalam fasa gerak.Xads= Molekul solute dalam keadaan diad- sorpsi.Sads= Molekul fasa gerak pada permukaan adsorben.Sm= Molekul fasa gerak bebas.n= Jumlah molekul pelarut yang diadsorpsi, yang kemudian diusir karena diadsorpsi- nya satu molekul solute.

KROMATOGRAFI KOLOM CAIR-PADAT( METODE ADSORPSI )@ Makin kuat adsorpsi fasa gerak akan menurunkan adsorpsi solute.@ Pelarut diklasifikasikan berdasarkan kekuatan adsor- psinya (deret eluotropik).

ADSORBENSYARAT-SYARAT :1. Tidak bereaksi dengan zat yang akan dipisahkan.2. Tidak mengkatalisis peruraian zat-zat.3. Berupa padatan yang tidak larut dalam pelarut yang digunakan.4. Sedapat mungkin tidak berwarna.5. Sifat-sifat adsorben tetap selama proses.6. Ukuran partikel rata.7. Sifat fisiknya memungkinkan pelarut lewat pada -

ADSORBENSYARAT-SYARAT :7. Sifat fisiknya memungkinkan pelarut lewat pada kolom adsorben pada kecepatan yang cukup (ter- gantung pada ukuran partikel dan luas permukaan).8. Memberikan hasil yang reprodusibel.

ADSORBENJENIS-JENIS ADSORBEN :1. Adsorben lemah. Sukrosa, kanji, ZnO2. Adsorben sedang. CaCO3, Ca-fosfat, magnesia3. Adsorben kuat. Silika gel, alumina, arang

URUTAN ADSORBEN MENURUT KEKUATAN ADSORPSI(Menaik)SukrosaSelulosaKanjiInulinMg-sitratNa2CO3CaCO3CaSO4MgCO3 CaO Asam silikatMg-silikatArangMgOAl2O3

KAPASITAS ADSORBEN @ Sebanding dengan luas permukaan (tergantung pada keporusan dan diameter partikel). @ Berbanding terbalik dengan ukuran partikel.