Kultur Embio Lily2

7/25/2019 Kultur Embio Lily2

1/5

Stigma Volume XI I No.2, April Jun i 2004

ISSN 0853-3776 AKREDITASI DIKTI No. 52/DIKTI/KEP/1999 tgl. 12 Nopember 2002

209

PENGARUH KONSENTRASI NAA DAN BAP TERHADAP KULTUR

EMBRIO PINANG SIRIH (Areca catechuL.) SECARA IN VITRO.

(Effect of NAA and BAP concentration on embryo culture of Pinang sirih (Areca catechuL)by in vitro)

Tamsil Bustamam, Nalwida Rozen, danWawan Kurniawan *)

ABSTRACT

An experiment to study the effect of NAA and BAP con-

centration on embryo culture of Pinang sirih was conduct-

ed at Tissue Culture Laboratory, Faculty of Agriculture,

Andalas University from June to October 2002.The objec-

tive of the experiment was to get the best combination of

NAA and BAP concentration in forming good plantlet

through embryo culture. The experiment was a factorial

experiment with two factors, and it was arranged in Com-

pletely Randomized Design with three observations. The

first factor consisted of three levels of NAA concentration,

that is, 4, 6, and 8 ppm, and the second factor consisted of

three levels BAP concentration, namely, 0, 0.5, and 1.0

ppm. The result of this experiment showed that at 4 ppm

NAA gave very good formation of shootlet. The formation

of shootlet and rootlet were also very good at 0 ppm BAP.

Key wods : Areca catechu L., embryo culture, shootlet,

rootlet.

PENDAHULUAN

Pinang (Areca catechu L.) termasuk salah satu

komoditi ekspor yang diandalkan untuk menam-

bah devisa negara. Bagian yang digunakan untuk

ekspor adalah biji. Perkembangan ekspor biji

pinang Indonesia terus meningkat dari tahun ke

tahun, dengan negara tujuan utama adalah India

dan Pakistan, diikuti Singapura, Nepal, Bangla-

desh, Malaysia (Biro Pusat Statistik, 2000).

Pinang mempunyai nilai ekonomis yang cu-

kup baik dengan manfaat yang beragam dan dae-

rah penyebarannya cukup luas. Manfaat biji pi-

nang antara lain untuk bahan industri seperti da-

lam penyamakan kulit, industri tekstil, industri zat

pewarna, kosmetik, minuman dan farmasi, disam-

ping itu sebagai bahan makanan stimulansia dan

bumbu masak. Daun dari tanaman pinang juga

dapat digunakan sebagai obat gangguan saluran

pernafasan. Batang digunakan untuk bahan

bangunan, saluran air, dan sering dipakai sebagai

perlombaan panjat pinang dalam rangka mempe-

ringati hari-hari besar. Akar dimanfaatkan untuk

obat cacing dan gangguan pencernaan.

Budidaya tanaman pinang secara intensif telah

dilakukan di India, Bangladesh dan Srilangka,

sedangkan di Indonesia belum dilakukan secara

intensif. Pemeliharaan pinang selama ini hanya

seadanya tanpa dipelihara dengan baik. Tanaman

pinang yang tumbuh dengan baik diambil hasilnya

tanpa adanya langkah-langkah pembudidayaan.Apabila keadaan ini berlanjut terus-menerus,

dikhawatirkan akan terjadi pengurangan secara

signifikan karena sampai sekarang belum ada

peremajaan pinang apalagi budidaya secara

intensif seperti tanaman perkebunan lainnya.

Melihat keadaan yang demikian sudah seharusnya

kita pikirkan untuk pengembangan pinang agar

terhindar dari kelangkaan akibat eksploitasi

pinang yang berlebihan.

Dalam rangka mengupayakan pengembangan

tanaman pinang, penyediaan bibit merupakan sa-

lah satu faktor yang menentukan dalam peremaja-

an dan perluasan areal penanaman pinang. Selamaini perbanyakan pinang dilakukan secara konven-

sional yang sampai sekarang masih menghadapai

banyak kendala. Kendala tersebut antara lain

lamanya waktu yang diperlukan untuk perke-

cambahan dari benih dan rentannya bibit terhadap

kondisi lingkungan, serta serangan dari hama dan

penyakit.

Menurut Untu (1995) benih pinang akan ber-

kecambah setelah 2 - 3 bulan, dalam persemaian

dan selama persemaian terjadi kerusakan benih

akibat hama dan penyakit. Perbanyakan tanaman

pinang secara konvensional mempunyai beberapakendala, antara lain biji memiliki masa dormansi,

untuk berkecambah memerlukan waktu 54 hari

bahkan lebih. Untuk mendapatkan bibit pinang

yang siap ditanam di lapangan membutuhkan

waktu 18 - 30 bulan, bibit pada umur ini memiliki

5-7 helai daun (Bhat, 1978). Untuk itu perlu

dicarikan suatu metoda yang dapat mempercepat

perkecambahan dan aman dari gangguan hama

ataupun penyakit.

*)Fakultas Pertanian Universitas Andalas Padang


2/5



210

Pada berbagai jenis tanaman palem

(Arecaceae), diketahui teknik kultur in vitro

merupakan salah satu solusi yang cukup efektif

untuk mengatasi masalah dalam penyediaan bibit.

Pinang termasuk salah satu tanaman yang sulitberkecambah maka dengan teknik kultur in vitro

akan dapat mengatasi masalah tersebut, karena

kultur in vitro termasuk salah satu cara budidaya

untuk tanaman yang sulit berkecambah

(Wattimena, 1996).

Salah satu teknik kultur in vitro yang cukup

luas penggunaannya adalah kultur embrio, karena

kultur embrio merupakan studi awal untuk

mendapatkan atau menentukan media yang paling

cocok bagi suatu jenis tanaman, memiliki tingkat

keberhasilan yang tinggi dan dapat tumbuh lang-

sung membentuk tunas. Selanjutnya tunas terse-but dapat dijadikan eksplan yng bebas dari micro-

organisme sehingga tidak perlu disterilisasi lagi.

Menurut Monnier (1990) melalui kultur embrio

dapat dipelajari perkembangan embrio lebih dini.

Di bidang pemuliaan tanaman, kultur embrio da-

pat mempercepat siklus hibridisasi. Teixeira,

Sondahl, dan Kirby (1993) menyatakan bahwa

dipilihnya embrio sebagai eksplan karena terse-

dianya buah, memiliki keseragaman fisiologis yang

tinggi dan dapat dibawa dalam waktu dan jarak

yang cukup panjang.

Lestari (1999) menyatakan embrio enau

(Arenga pinnataWurmb. Merr.) yang berasal daribuah muda mempunyai kemampuan menghasilkan

kalus yang lebih tinggi dibanding embrio yang

berasal dari buah yang lebih tua. Hal ini disebab-

kan karena proses pematangan benih. Menurut

Heddy tahun 1996 cit Lestari (1999) pada saat

benih memasuki tahap matang fisiologis maka

jaringan-jaringan embrio mengering dan organela-

organela seluler menjadi tidak berfungsi.

Pertumbuhan dan morfogenesis tanaman se-

cara in vitro, dikendalikan oleh keseimbangan dan

interaksi dari zat pengatur tumbuh (ZPT) yang

berada dalam eksplan, baik ZPT endogen maupun

eksogen yang diserap dari media tumbuh. Hasil

penelitian Hendaryono dan Wijayani (1994) me-

nyatakan bahwa pembentukan kalus terbaik dari

embrio melinjo adalah dengan pemberian 4 ppm

NAA tanpa penambahan ZPT lain. Yuriko (2001)

menyatakan kultur embrio pinang dengan penam-

bahan 6 ppm NAA pada media MS dapat membe-

rikan pertumbuhan yang optimum.

Pengkajian mengenai kultur embrio pada

pinang belum banyak dilakukan. Berdasarkan hal

tersebut, maka perlu dilakukan penelitian dalam

rangka memperoleh bibit yang baik dan bermutu

serta bebas hama dan penyakit dalam jumlah yangrelatif banyak dan seragam.

BAHAN DAN METODE

Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Kul-

tur Jaringan Tumbuhan Jurusan Budidaya Pertani-

an Fakultas Pertanian Universitas Andalas Pa-dang, dengan waktu dari bulan Juni sampai

Oktober 2002.

Bahan penelitian: embrio buah pinang yang

masih muda, zat kimia penyusun media MS,

Naphthalene Acetic Acid (NAA), Benzyl Amino

Purine (BAP), NaOH 1N, HCl 1N, alkohol 70%,

Bayclin, sukrosa, akuades, agar konsumsi, air

kelapa muda, deterjen, aluminum foil, dan plastic

wrap.

Alat yang digunakan : timbangan analitik,

autoclave, kompor listrik, pH meter, laminar air

flow cabinet (LAFC), lemari es, oven, hotplatedengan magnetic stirer, gelas piala, labu ukur, ca-

wan petri, erlenmeyer, pisau scalpel, pinset, karet

hisap, hand sprayer, botol kultur, lampu neon,

lampu spiritus, gunting buah, cutter, dan ruang

pemeliharaan yang dilengkapi dengan pengatur

suhu.

Percobaan disusun dalam bentuk faktorial

dalam Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 2

faktor dan masing-masing faktor terdiri dari 3

taraf. Faktor pertama adalah tingkat konsentrasi

NAA yang terdiri dari : 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, dan

faktor kedua adalah tingkat konsentrasi BAP yang

terdiri dari : 0 ppm, 0,5 ppm, dan 1 ppm, sehinggadidapatkan 9 kombinasi perlakuan.

Masing-masing perlakuan terdiri dari 5

ulangan dan setiap ulangan terdiri dari 5 botol

kultur, sehingga diperoleh 225 botol kultur yang

digunakan. Data yang diperoleh diuji secara sta-

tistika dengan uji F pada taraf nyata 5% dan disa-

jikan dalam bentuk tabel. Apabila berbeda nyata

dilanjutkan dengan uji lanjutan Duncans New

Multiple Range Test (DNMRT) pada taraf nyata

5 %.

Pelaksanaan percobaan

Sterilisasi alat

Alat-alat yang dipakai terlebih dulu disterilkan

dengan cara mencuci alat-alat tersebut dengan

deterjen dan dibilas hingga bersih, setelah itu di-

rendam dengan bayclin 5 ml/ l air selama satu

malam. Kemudian disterilisasi dengan mengguna-

kan autoclave pada tekanan 15 psi, suhu 121oC

selama 30 menit. Setelah itu diovenkan pada suhu

75o

C sampai saat dipergunakan.


3/5



211

Persiapan media

Dalam pembuatan media pertama sekali dibu-

at larutan stok dan diberi kode A, B, C, D, E, dan

F berdasarkan jenis garamnya. Larutan vitamin

ditempatkan dalam botol yang terpisah. Padalarutan stok ini, media dipekatkan sehingga pada

saat pembuatan media hanya dengan memipet

sejumlah volume tertentu sesuai dengan takaran

yang diperlukan. Kedalam larutan ditambahkan

BAP dan NAA sesuai dengan perlakuan dengan

cara memipet larutan stok yang sudah ada.

Kemudian ditambah arang aktif dan ditambah

sukrosa 3%. Kemudian diatur pH agar mencapai

5,8. Media selanjutnya ditambah agar sebanyak

8g/l dan dimasak sampai mendidih. Selanjutnya

media dimasukkan kedalam botol kultur sebanyak

10 ml tiap botol dan ditutup rapat dengan alumi-nium foil, kemudian disterilkan dalam autoclave

pada tekanan 15 psi pada suhu 121oC selama 20

menit setelah itu dipindahkan dan disimpan di

ruang inkubasi selama 1 minggu.

Persiapan eksplan

Buah pinang dicuci dengan deterjen sambil di-

sikat dengan sikat gigi untuk mengangkat kotoran

yang melekat. Kemudian dibilas bersih, setelah

bersih buah dipotong pada ujung dan pangkalnya

masing-masing 0,5 cm, kemudian langsung diren-

dam dalam alkohol 70%. Buah dibawa ke dalam

LAFC dan dibiarkan selama 30 menit.Embrio merupakan bagian tanaman yang ter-

tutup dan bebas mikroorganisme, karenanya tidak

dilakukan sterilisasi terhadap embrio itu sendiri.

Embrio dipisahkan dari buah dengan menggu-

nakan pisau scalpel dan diambil dengan pinset.

Embrio yang telah dipisahkan tersebut langsung

ditanam di dalam botol kultur, tanpa melalui

proses sterilisasi.

Penanaman eksplan

Penanaman eksplan dilakukan di dalam

LAFC. Embrio yang sudah dipisahkan dari buah-

nya tadi ditanam dalam botol kultur yang telah

berisi media, masing-masing satu embrio untuk

setiap botol kultur, kemudian ditutup dengan

aluminimum foil dan dibalut dengan plastik wrap.

Penggelapan

Untuk menghindari terjadinya browning, ma-

ka dilakukan penggelapan. Botol kultur ditempat-

kan di ruangan gelap pada suhu 25 - 27 oC selama

14 hari.

Pemeliharaan kultur eksplan

Botol-botol kultur dipindahlan ke ruangan te-rang setelah 14 hari dalam ruangan gelap. dan di-

susun pada rak-rak kultur dalam ruangan pe-

meliharaan dengan suhu ruangan tetap 25 - 27 oC,

cahaya lampu rata-rata 2000 luks dan setiap hari

disemprot dengan alkohol 70%.

Pengamatan

Variabel yang diamati pada penelitian ini me-

liputi : persentase eksplan yang hidup (%), per-

sentase eksplan yang mengalami pencoklatan (%),

persentase eksplan membentuk kalus (%), per-

sentase eksplan yang membentuk shootlet,, per-

sentase eksplan yang membentuk rootlet, dan

perubahan warna eksplan.

HASIL DAN PEMBAHASAN

1. Persentase eksplan yang hidup

Pemberian NAA dan BAPmemberikan penga-

ruh yang tidak nyata terhadap persentase eksplan

yang hidup, tetapi persentasenya cukup tinggi

bervariasi antara 71,0 88,7 % seperti tertera

pada tabel berikut ini.

Tabel 1. Persentase eksplan embrio muda pinang sirih

yang hidup dengan pemberian berbagai

konsentrasi NAA dan BAP umur 14 minggu

setelah tanam

Konsentrasi NAA

(ppm)

Konsentrasi BAP (ppm)

0,0 0,5 1,0

4 83,7 76,0 81,1

6 88,7 88,7 78,6

8 88,7 71,0 73,5

KK = 16,7%

Angka-angka pada baris dan kolom yang sama berbeda

tidak nyata menurut uji F pada

taraf nyata 5 %.

Data di atas menunjukkan bahwa kemampuan

hidup eksplan cukup tinggi, hal ini disebabkan

karena NAA dan BAP yang diberikan sudah

mampu mendorong eksplan untuk hidup, disam-

ping itu jenis media yang digunakan juga telahsesuai bagi pertumbuhan eksplan. Sesuai dengan

pendapat Hendaryono dan Wijayani (1994) bahwa

media tumbuh kultur in vitrosangat besar penga-

ruhnya terhadap pertumbuhan dan perkembangan

eksplan serta bibit yang dihasilkannya.

2. Persentase eksplan yang mengalami

pencoklatan

Persentase eksplan yang mengalami penco-

klatan cukup rendah pada setiap kombinasi perla-

kuan, bervariasi antara 0,711,47% dan berbeda

tidak nyata sesamanya (Tabel 2 ).


4/5



212


yang mengalami pencoklatan dengan pemberian

berbagai konsentrasi NAA dan BAP umur 14minggu setelah tanam

Konsentrasi

NAA (ppm)


0,0 0,5 1,0

4 1,47 1,47 0,71

6 0,71 0,71 1,47

8 0,71 1,47 0,71


tidak nyata menurut uji F pada taraf nyata 5 %.

Pemberian auksin dan sitokinin menyebabkan

pencoklatan yang rendah terhadap eksplan.

Menurut Zaid cit. Subardianto (2001) diduga

NAA sebagai auksin memperkecil pengaruh sito-

kinin yang bersifat merangsang sintesis senyawa

fenol yang menyebabkan pencoklatan.

3. Persentase eksplan yang membentuk kalus

Pembentukan kalus tertinggi yaitu 19,0%

diberikan oleh kombinasi 8 ppm NAA dengan 0

ppm BAP, tetapi pemberian NAA dan BAP seca-

ra umum belum memperlihatkan pengaruh yang

nyata terhadap persentase eksplan yang memben-

tuk kalus. Hal ini diduga bahwa zat pengatur

tumbuh endogen telah mampu menunjang pertum-

buhan eksplan ke arah pembentukan kalus.Menurut Wiendi et al (1991) di dalam kultur in

vitro pertumbuhan dan morfogenesis tanaman

dikendalikan oleh keseimbangan dan interaksi dari

zat pengatur tumbuh yang berada dalam eksplan.

Pada tanaman monokotil pembentukan kalus

hanya membutuhkan auksin yang tinggi tanpa

sitokinin. Ternyata dari hasil memang terlihat

bahwa dengan pemberian auksin memperlihatkan

kalus yang terbentuk semakin banyak tanpa

pemberian sitokinin.


yang membentuk kalus dengan pemberianberbagai konsentrasi NAA dan BAP umur 14

minggu setelah tanam

Konsentrasi NAA

(ppm)


0,0 0,5 1,0

4 6,3 6,3 1,3

6 6,3 1,3 6,3

8 19,0 1,3 1,3


tidak nyata menurut uji F pada taraf nyata 5 %.

4. Persentase eksplan yang membentuk

hootlet.

Pemberian NAA dan BAP secara bersamaan

dengan berbagai konsentrasi ternyata tidak

memberikan interaksi yang nyata, tetapiNAA dan

BAP secara tunggal masing-masing menunjukan

pengaruh yang nyata seperti terlihat pada Tabel 4berikut.


yang membentuk shootlet dengan pemberian

berbagai konsentrasi NAA dan BAP umur 14


Konsentrasi

NAA (ppm)

Konsentrasi BAP (ppm) Rata-

rata0,0 0,5 1,0

4 63,7 34,0 43,8 47,1 A

6 41,5 21,3 31,6 31,5 B

8 38,8 13,9 11,4 21,4 B

Rata-rata 48,0 a 23,1 b 29,0 bKK = 51,2%

Angka-angka pada baris yang sama diikuti huruf kecil

yang sama dan angka-angka pada kolom yang sama dii-

kuti huruf besar yang sama berbeda tidak nyata menurut

uji DNMRT pada taraf nyata 5 %.

Pada Tabel 4 terlihat bahwa semakin tinggi

konsentrasi NAA ataupun BAP menurunkan per-

sentase eksplan yang membentuk shootlet sehing-

ga persentase tertinggi didapatkan pada kombinasi

4 ppm NAA dengan 0 ppm BAP yaitu 63,7 %.

Menurut Wiendi et al (1991) dan Nasir (2002)

bahwa keseimbangan dan interaksi dari zat

pengatur tumbuh yang berada dalam eksplan akan

memepengaruhi pertumbuhan dan morfogenesis

tanaman dalam kultur in vitro.

5. Persentase eksplan yang membentuk rootlet


yang membentuk rootlet dengan pemberian

berbagai konsentrasi NAA dan BAP umur 14


Konsentrasi

NAA (ppm)

Konsentrasi BAP (ppm) Rata-

rata0,0 0,5 1,0

4 44,4 31,7 82,3 52,8

6 94,9 31,7 44,4 57,0

8 94,4 6,4 6,4 52,4

Rata-rata 94,6 a 23,3 b 44,3 b

KK =

Angka-angka pada baris yang sama diikuti huruf kecil

yang sama berbeda tidak nyata menurut uji DNMRT

pada taraf nyata 5 %.

Dari hasil analisis (Tabel 5) ternyata pembe-

rian NAA berpengaruh tidak nyata sedangkan

pemberian BAP memperlihatkan pengaruh yang


5/5



213

nyata. terhadap eksplan yang membetnuk rootlet.

Pemberian 0 ppm BAP memperlihatkan hasil yang

tinggi dibanding perlakuan lainnya. Hal ini

disebabkan karena BAP dalam pembentukan root-

let kurang dibutuhkan. Sesuai dengan pendapatWiendi et al (1991) bahwa pembentukan akar

pada kultur in vitromembutuhkan sitokinin dalam

konsentrasi yang rendah sekali. Hal ini berarti

bahwa pada konsentrasi 4 ppm NAA dan 0 ppm

BAP keseimbangan zat pengatur tumbuh eksogen

dengan endogen sudah tercapai dalam pemben-

tukan rootlet.

6. Perubahan warna eksplan

Perubahan warna eksplan tidak dianalisis se-

cara statistika, hanya diamati secara visual saja.

Eksplan yang membetuk kalus dan rootlet bewar-

na kuning muda, sedangkan yang membentuk

shootlet bewarna hijau. Menurut Wiendi et al

(1991) bahwa dengan terbentuknya warna hijau

pada eksplan merupakan awal terjadinya morfo-

genesis.

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil percobaanan ini dapat di-

simpulkan bahwa pemberian 4 ppm NAA dapat

mendorong pertumbuhan shootlet dan pemberian

0 ppm BAP mendorong pertumbuhan shootlet

dan rootlet.

DAFTAR PUSTAKA

Bhat, K.S. 1978. Agronomic research in arecanut a review.

Journal of planttation Crops volome 6 no. 2 Institut

Regional Station. India. Pp 67-80.

Biro Pusat Statistik. 2000. Statistik perdagangan luar negeri

Indonesia : ekspor 1999 jilid 1. Biro Pusat Statistik. Ja-

karta. Hal. 32.Hendaryono, D.P.S. dan A.Wijayani. 1994. Teknik kultur

jaringan. Peberbit Kanisius. Yokjakarta. 139 hal.

Lestari, M. 1999. Kultur embrio tanaman enau (Arenga

pinnata(Wurmb) Merr) secara invitrodengan berbagai

tingkat kematangan buah. Skripsi Fakultas Pertanian

Universitas Andalas Padang. 147 hal.

Monnier, M. 1990. Zygotic embryo culture. S.S.Bhojwani

(editor). Development ini crop science 19 plant tissue

culture (applications and limitations). Elsevier Science

Publishers B.V. Amsterdam, Netherlands. Pp. 336-390.

Nasir, M. 2002. Bioteknologi potensi dan keberhasilannya

dalam bidang pertanian. PT Grafindo Persada. Jakarta.

286 hal.

Subardianto. 2001. Pengaruh konsentrasi NAA dan kinetin

terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan tunaskenanga (Canangium odorata Baill) secara in vitro.

Skripsi Fakultas Pertanian Universitas Andalas Padang.

44 hal.

Teixeira, J.B, M.R.Sondahl, and E.G.Kirby. 1993. Somatic

embryogenesis from immature zygotic embryos of palm

oil. Plant Cell, Tissue and Organ Culture no.34. Kluwer

Academic Pulishers. Netherlands. Pp 227-233.

Untu, Z. 1995. Penggunaan zat pengatur tumbuh pada pembi-

bitan pinang. Buletin Balitka no.24. Balai Penelitian

Tanaman Kelapa. Menado. Hal. 60-65.

Wattimena,G.A. 1996. Zat pengatur tumbuh tanaman.

Laboratorium Kultur Jaringan Tanaman. PAU

Bioteknologi. IPB Bogor. 247 hal.

Wiendi, N.A, G.A.Wattimena, dan L.W.Gunawan. 1991.

Perbanyakan tanaman dalam bioteknologi tanaman. PAU

Bioteknologi. IPB Bogor. 507 hal.

Yuriko, H. 2001. Kultur embrio pinang sirih (Areca catechu

L.) secara in vitro pada beberapa tingkat kematangan

buah. Skripsi Fakultas Pertanian Universitas Andalas

Padang. 48 hal.

------------------------------oo0oo------------------------------

Documents

Kultur Embio Lily2