מגישות: אבו סבית צפא, כצוב קרינה

1דו"ח מעבדה בביוכימיה מס'

מבוא

במקום ללחוץ על בועית יש ללחוץ על כפתור בראש הפיפטה; על ידישימוש במיקרופיפטות- סיבוב הכפתור ניתן לקבוע בדייקנות את כמות הנוזל שתישאב. לפיפטות הרגישות ביותר הפרדה

נאנוליטר(, אם כי רמת הדיוק בדרך כלל אינה נשמרת כשמדובר10 )מיקרוליטר 0.01רשמית של 1בכמויות כה מזעריות. הכמות המקסימלית שמסוגלת לשאוב המיקרופיפטה הגדולה ביותר היא

מיליליטר. לשם הנוחות והדיוק מיוצרות פיפטות בעלות טווחי ביניים, בדרך כלל בעלות שאיבה מק"ל.1,000 מק"ל ו-200 מק"ל, 100 מק"ל, 20 מק"ל, 10 מק"ל, 2מקסימלית של

קרינה האלקטרומגנטית בו החומר על ידי פוטונים של האנרגיה- היא ספיגת המדידת בליעת אור . בדרך כלל ספיגת האנרגיה, הבליעה, נעשית על ידיהחזרת אורפוגעת, התופעה ההפוכה מ

שבאלקטרונים המרכיבים את החומר. באמצעות הבליעה האנרגיה הקיימת באטומים קרינה לאלקטרומגנטית כלל בדרך אחרת, לאנרגיה מומרת תרמית בעלייתאנרגיה המתבטאת

שונים מאפשרת לזהות אתאורכי גלהטמפרטורה של החומר. מדידת כושר הבליעה של החומר ב החומר הנבדק. המדידה נעשית על ידי הארת החומר באור ומדידת סך כמות האור המוחזרת

. ספקטרוסקופיהממנו בכל הכיוונים, ומשמשת ל

גל של חומר נבדק באורכי אור את בליעת הלמדוד המאפשר מכשיר מדידהספקטרופוטומטר- , המפרקת את האור הלבן ומפרידה בין אורכימנסרהשונים. ממקור האור יוצאת אלומת אור אל

הגל השונים. על ידי סיבוב המנסרה אפשר להביא את קרן האור בעלת אורך הגל הרצוי אל מולסדק, דרכו עובר האור אל החומר הנבדק.

הנבלעת בחומר, כשהם פוגעים בו.קרינה אלקטרומגנטיתספקטרום בליעה- קבוצת תדרים של שלואלקטרונים יש ספקטרום בליעה המאפיין אותו, על פי רמות האנרגיה של היסוד כימילכל

וניתן להשתמש בספקטרום הבליעה כדי לאבחן חומר. ספקטרום הבליעה כולל תדרים בדידיםולא רצף של תדרים.

מטרה:

במעבדות המקובלת אור בליעת מדידת ובשיטת במיקרופיפטור העבודה שיטות את להכיר פיפטציה של של טכניקות וביצועית של להתנסות מעשית להביא בנוסף קלוניות, ביוכימיות

תמיסות ושימוש בספקטרופוטומטר.

מהלך העבודה:

השתמשנו בתמיסת חלבון )אלבומין מסרום( ביצענו מיהולים שונים של ראגנט זה ובדקנו דיוק פיפטציה ע"י מדידת הבליעה הנקראת גם צפיפות אופטית במכשיר ספקטרופוטומטר. בדקנולוודא שהבליעה של התמיסה נמדדת קודם כל את ספקטרום בליעה של התמיסה על מנת של התמיסות הבליעה למדידת בו זה שנשתמש הוא הגל המקסימלי אורך נכון. גל באורך

השונות.

תוצאות ודיון הבתוצאות:

BSABSA STOCKH2OO.D0010000

10059950.001200109900.071

400209800.5191000509500.721

0 5 01 51 02 52 03 530

1.0

2.0

3.0

4.0

5.0

6.0

7.0

8.0

ASB O.D ב ריכוז עקומת

BSA

O.D

גדל, O.D הBSA הגרף צריך להיות בעליה ככול שמוסיפים יותר ריכוז BSA של O.Dבבדיקת

עולה.BSA ככל שריכוזO.Dלפי הגרף שלנו ניתן לראות שיש עליה

חלק ב'- טיטרציה אלקטרומטרית של חומצות אמינו

מבוא:

אין.האלקטרומטר- או מטען יש אם אומר רק בסיסי אלקטרומטר חשמלי. מטען מד הוא אלקטרומטרים מתקדמים אומרים גם כמה מטען יש ואיזה - חיובי או שלילי.

,כימיה. בחלבונים המהוות את יחידות המבנה הבסיסיות של תרכובות אורגניותהן חומצות אמינו- ( והן קבוצהאמין הכוללת הן קבוצה בסיסית אחת לפחות )מולקולותחומצת אמינו היא קבוצת

(. בכל אחד מהקשרים הכימיים הקושרים את האמין לקרבוקסילקרבוקסילחומצית אחת לפחות )מולקולת במיםנוצרת אחת. )ביוכימיה אלפה-אמינית לחומצה הכוונה אמינו בחומצת ,H2NCHRCOOHה בה )רדיקל( R ממקור מגיע כ-אורגני( כלשהו.קיימות אמינו20 חומצות כ- ועוד בעלות חשיבות פחותה.חומצת אמינו מורכבת מ80עיקריות חומצות אמינו הקבוצות

.R(, ומשייר פחממני שמסומן באות 2NH )אמין( וCOOH )קרבוקסיל הפונקציונלית

- חומצה אמינית פשוטה, חסרת שיירים חומציים או בסיסיים.חומצה אמינית גליצין

מטרת המעבדה:

. בסיס חומצה כמו להתנהג להם המאפשרת צוויטריון של יחודית צורה אמינו לחומצות במעבדה זאת אנחנו נטטר את חומצה האמינית האמצעות הוספת בסיס וחומצה חזקים,תהילךשלה. ינון מצב ולשינוי האמינית מהחומצה פרוטונים של לקיחה או להוספה יגרום זה

אוHClבמעבדה זו בצענו טיטרציה של חומצה האמינית גליצין, הטטרציה תתבצע באמצעות NaOH לגליצין ומדידת PH במקביל להוספת מים בנפחים שבהם נקבל ערכי PH.זהים

מהלך העבודה:

מ"ל תמיסת גליצין50 לפי לפי תמיסת בופר סטנדרטית, הכנו כוס זכוכית עם PHכיילנו את ה- M0.025-עם בוחש מגנטי, הכנסנו את האלקטרודות לכוס הזכוכית, ערבבנו ומדדנו ה ,PHאחרי .

PH, תוך ערבוב,לאחר כל הוספה רשום ערך הNaOH 0.1 מ"ל 1זה טיטרנו ע"י הוספת מנות של מ"ל מים, אולם הפעם50. חזרנו על אותה טטרציה עם PH 11שהתקבל, עד אשר מגיעים ל-

שהתקבלו בטיטרציה הגליצין באותוPH, וניסינו להגיע לאותם ערכי NaOH 0.1 מ"ל 0.2מוספים .2.0 מגיע לPH עד אשר ה-HCl 0.1אופן טטרנו גליצין ומים עם

תוצאות הניסוי:

א.גליצין

NaOHנפח שהתקבלPH שהוסHClנפח מס'שהוס

PHשהתקבל

00706.977.83 מ"ל3.121 מ"ל117.80 מ"ל2.752.5 מ"ל228.03 מ"ל2.393.5 מ"ל338.85 מ"ל2.814.5 מ"ל448.91 מ"ל2.405.5 מ"ל558.99 מ"ל 2.056.5 מ"ל669.27 מ"ל1.977.5 מ"ל 779.36 מ"ל1.948.5 מ"ל889.41 מ"ל1.809.5 מ"ל99

9.62 מ"ל1.6310.5 מ"ל10109.79 מ"ל1.5211.5 מ"ל1111

ב. במים

NaOHנפח שהתקבלPH שהוסHClנפח מס'שהוס

PHשהתקבל

005.1407.1810.24.370.28.9220.43.270.49.6230.62.940.69.6940.82.270.89.87511.780.1010.3261.31.770.1210.4471.51.850.1410.6481.71.900.1610.5291.91.970.1810.66

102.11.470.2010.84

דיון בתוצאות:

HClגליצין עם א.

0 2 4 6 8 01 210

1

2

3

4

5

6

7

8

lCH עם גלוצין עקומת

HClנפח

pH

חומצי יותר לכן הכל הגרף הוא בסדר יורדPH עם גליצין נוצר HClכלל שמוסיפים יותר תמיסת היה נטרלי. לפי התוצאות שלנו ניתןPH הHClעם ערכים בסדר עוקב. כשמדדנו את גליצין ללא

הגרף יורד.HClלראות שככל שמוסיפים יותר

NaOHגליצין עם ב.

0 2 4 6 8 01 21 410

2

4

6

8

01

21

HOaN עם גליצין עקומת

NaOHנפח

PH

NaOHהוא יותר בסיסי לכן כשמוסיפים אותו עם גליצין, המתרחשת תגובה בסיסית והגרף עולה התמיסהNaOHבסדר הערכים גדל. לפי הנתונים שיצאו לנו ניתן לראות שככל שמוסיפים יותר

ניהית יותר בסיסית ולפי הגרף ניתן ראות שיש עליה.

HClטיטור מים עם ג.

0 5.0 1 5.1 2 5.20

1

2

3

4

5

6

lCH על גליצין עקומת

HCI נפח

PHבלקתהש

HClיותר לכן הגרף צריך הוא חומצה ולכן שמוסיפים אותו למים הם הופכים להיות לחומצי התמיסה הופכת ליותר חומצית בדיוקHClלרדת, לפי הנתונים שיצאו לנו במעבדה כשהוספנו

מה שקיבלנו בתוצאות.

NaOHטיטור מים עם ד.

0 5.0 1 5.1 2 5.202468

0121

HOaN עם מים טיטור עקומת

NaOHנפח

PHבלקתהש

NaOHהוא יותר בסיסי לכן כשמוסיפים אותו למים, המתרחשת תגובה בסיסית והגרף עולה התמיסהNaOHבסדר הערכים גדל. לפי הנתונים שיצאו לנו ניתן לראות שככל שמוסיפים יותר

ניהית יותר בסיסית ולפי הגרף ניתן ראות שיש עליה.