LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI FARMASI

PENENTUAN

MINIMUM INHIBITORY CONCENTRATION (MIC)

DARI SUATU SEDIAAN UJI

YANG BERPOTENSI SEBAGAI ANTIBIOTIK

Kamis , 9 Maret 2015

Kelompok IX

Kamis, Pukul 10.00 13.00 WIB

Nama NPM Tugas

Farianti Eko Nur K. 260110130024

Tujuan, prinsip ,

kesimpulan dan Editor

Irma Rahayu L. 260110130025 Pembahasan

Nunung Nurjanah 260110130027 Teori dasar, data

pengamatan, dan prosedur

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS PADJADJARAN

2015

Nilai TTD

(Sani Asmi ) (Casuarina)

PENENTUAN

MINIMUM INHIBITORY CONCENTRATION (MIC)

DARI SUATU SEDIAAN UJI

YANG BERPOTENSI SEBAGAI ANTIBIOTIK

I. Tujuan

- Menentukan Minimum Inhibitory Concentration (MIC) suatu

sediaan uji terhadap bakteri Gram positif maupun Gram negatif,

dengan menggunakan metoda MIC cair

II. Prinsip

2.1.MIC

Konsentrasi minimun penghambatan atau lebih dikenal dengan

MIC (Minimum Inhibitory Concentration) adalah konsentrasi terendah

dari antibiotika atau antimikrobial yang dapat menghambat pertumbuhan

mikroba tertentu.

2.2.Makrodilusi

Makrodilusi adalah suatu metode penentuan MIC antibiotic

menggunakan satu seri tabung reaksi yang diisi media cair dan bakteri

tertentu serta ditambahkan sejumlah antibiotic dengan konsentrasi yang

berbeda-beda tiap tabungnya dengan kekeruhan media sebagai penentu

dimana MICnya.

2.3.Pertumbuhan Bakteri

Adanya pertumbuhan bakteri atau tidaknya dilihat dari kekeruhan

pada media cair pada tabung reaksi.

2.4.Teknik Aseptis

Teknik aseptis adalah suatu metode atau teknik didalam

memindahkan atau mentransfer kultur bakteria dari satu tempat ke

tempat lain secara aseptis agar tidak terjadi kontaminasi oleh mikroba

lain dalam kultur

III. Teori Dasar

Antibiotik adalah zat kimia yang dihasilkan oleh mikroorganisme

yang mempunyai kemampuan dalam larutan encer, untuk menghambat

pertumbuhan dan membunuh mikroorganisme. Salah satu jenis antibiotik

adalah kloramfenikol. Kloramfenikol adalah antibiotik spektrum luas yang

efektif terhadap beberapa jenis bakteri dan kuman anaerob. (Dian, 2015)

Konsentrasi minimun penghambatan atau lebih dikenal dengan MIC

(Minimum Inhibitory Concentration) adalah konsentrasi terendah dari

antibiotika atau antimikrobial yang dapat menghambat pertumbuhan

mikroba tertentu. Nilai MIC adalah spesifik untuk tiap-tiap kombinasi dari

antibiotika dan mikroba. MIC dari sebuah antibiotika terhadap mikroba

digunakan untuk mengetahui sensitivitas dari mikroba terhadap antibiotika.

Nilai MIC berlawanan dengan sensitivitas mikroba yang diuji. Semakin

rendah nilai MIC dari sebuah antibiotika, sensitivitas dari bakteri akan

semakin besar. (Jawetz et al.,1996).

Penetapan MIC dapat dilakukan dengan menguji sederetan

konsentrasi yang dibuat dengan pengenceran, metode yang digunakan dapat

dengan cara turbidimetri (dengan melihat kekeruhan) ataupun cara difusi

agar. Konsentrasi terendah di mana pertumbuhan bakteri terhambat

dinyatakan sebagai konsentrasi minimum untuk inhibisi (MIC). (

Pelczar,1958 )

Escherichia coli merupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang

pendek yang memiliki panjang sekitar 2 m, diameter 0,7 m, lebar 0,4-

0,7m dan bersifat anaerob fakultatif. E. coli membentuk koloni yang

bundar, cembung, dan halus dengan tepi yang nyata (Smith-Keary, 1988 ;

Jawetz et al., 1995).

E. coli dapat dilihat pada gambar 1.

(Smith-Keary,1988)

Escherichia coli adalah bakteri gram negatif berbentuk batang

dalam sel tunggal atau berpasangan, merupakan anggota family

Enterobacteriacea dan flora normal intestinal yang mempunyai kontribusi

pada fungsi normal intestine dan nutrisi tetapi bakteri ini akan menjadi

pathogen bila mencapai jaringan di luar jaringan intestinal. Spesies E.coli

bersifat motil dengan flagel peritrik yang dimilikinya, tetapi beberapa ada

yang nonmotil. Manifestasi klinis dari infeksi E. coli ini tergantung pada

daerah infeksi dan tidak dapat dibedakan dari gejala yang disebabkan oleh

bakteri lainnya. (Noviana, 2014)

Antibiotik adalah zat kimia yang dihasilkan oleh suatu mikroba

yang mempunyai khasiat antimikroba. Mekanisme kerja antibiotik antara

lain adalah menghambat sintesis dinding sel, merusak permeabilitas

membran sel, menghambat sintesis RNA (proses transkripsi), menghambat

sintesis protein (proses translasi), menghambat replikasi DNA.

(Immanudin, 2010)

Antibiotik kloramfenikol akan melekat pada subunit 50s ribosom

bakteri sehingga menghalangi enzim Peptidil-tranferase. Enzim inilah

yang melaksanakan 3 langkah dengan membentuk ikatan peptida antara

asam amino baru yang masih melekat pada tRNA-nya, dan asam amino

terakhir peptida yang sedang berkembang. Hal ini menyebabkan sintesis

protein terhenti seketika. Bila tidak terjadi perubahan struktur purin oleh

bakteri maka sensitifitasnya tidak akan berkurang. Purin merupakan

tempat masuknya antibiotik agar antibiotik dapat bekerja pada dinding

sitenya. Struktur purin yang tetap pada dinding sel bakteri menyebabkan

bakteri. Escherichiacoli masih sensitif terhadap antibiotik kloramfenikol.

(Goodman, 2007)

Kloramfenikol Kloramfenikol diisolasi pertama kali dari

Streptomyces venezuelae Karena daya anti mikrobanya yang kuat, maka

penggunaannya meluas hingga tahun 1950, dan diketahui obat ini dapat

menimbulkan anemia aplastik yang fatal. Karena toksisitasnya,

penggunaan obat ini dibatasi hanya untuk mengobati infeksi yang

mengancam kehidupan dan tidak ada alternatif lain. (Hani,2012)

Mekanisme kerja Kloramfenikol bekerja dengan mengikat sub unit

50S ribosom bakteri dan menghambat sintesis protein kuman. Yang

dihambat ialah enzim peptidil trasferase yang merupakan katalisator untuk

pembentukan ikatan-ikatan peptida pada proses sintesis protein kuman.

Karena kemiripan ribosom mitokondria mamalia dengan bakteri, sintesis

protein pada organela ini dihambat dengan kadar klorafenikol tinggi yang

dapat menimbulkan toksisitas sumsum tulang. Efek toksiknya pada sel

mamalia terutama terlihat pada sistem hemopoetik dan diduga

berhubungan dengan mekanisme kerja obat ini (Volk, 1988).

Zat antimikrobial adalah zat yang dapat mengganggu pertumbuhan

dan metabolisme melalui mekanisme penghambatan pertumbuhan

mikroorganisme. Beberapa hal yang perlu dipertimbangkan dalam

memilih zat antimikrobial kimiawi adalah :

1. Jenis zat dan mikroorganisme : Zat antimikrobial yang akan digunakan

harus sesuai dengan jenis mikroorganismenya karena memiliki

kerentanan yang berbeda-beda.

2. Konsentrasi dan intensitas zat antimicrobial : Semakin tinggi

konsentrasi zat antimikrobial yang digunakan, maka semakin tinggi

pula daya kemampuannya dalam mengendalikan mikroorganisme

3. Jumlah organisme : Semakin banyak mikroorganisme yang dihambat

atau dibunuh, maka semakin lama waktu yang diperlukan untuk

mengendalikannya.

4. Suhu : Suhu yang optimal dapat menaikkan efektivitas zat

antimicrobial

5. Bahan organic : Bahan organik asing dapat menurunkan efektivitas zat

antimikrobial dengan cara menginaktifkan bahan tersebut atau

melindungi mikroorganisme. Hal tersebut karena penggabungan zat

dan bahan organik asing membentuk zat antimikrobial yang berupa

endapan sehingga zat antimikrobial tidak lagi mengikat

mikroorganisme. Akumulasi bahan organik terjadi pada permukaan sel

mikroorganisme sehingga menjadi pelindung yang mengganggu

kontak antara zat antimikrobial dengan mikroorganisme (Boyd, 1980).

IV. Alat dan Bahan

4.1.Alat

a. Inkubator

b. Labu ukur 100 ml

c. Mikropipet

d. Mortir dan stamper

e. Pembakar spiritus

f. Tabung reaksi + rak tabung

g. Volum pipet 1 ml

h. Volum pipet 10 ml

4.2.Bahan

a. Antibiotik Kloramfenikol

b. Aquades steril

c. Media cair NB (Nutrient Broth) double strength

d. Media cair NB (Nutrient Broth)

e. NaCl fisiologis steril

f. Suspensi bakteri Eschericia coli

4.3.Gambar alat

Inkubator

Labu ukur 100 ml

Mikropipet

Mortir dan stamper

Pembakar spiritus

Tabung reaksi + rak

tabung

Volum pipet 1 ml

Volum pipet 10 ml

V. Prosedur

Sediaan uji dimasukan ke dalam labu ukur, dilarutkan dengan sedikit

pelarutnya. Kemudian air suling steril ditambahkan sampai tanda batas. Jika

sediaan uji berbentuk padat, sediaan digerus dahulu dalam mortir, sebelum

dimasukkan ke dalam labu ukur. Pengenceran direncanakan dan konsentrasi

campuran dihitung pada masing-masing tabung besar dan tabung-tabung

kecil. Pengenceran bertingkat larutan sediaan uji dibuat dengan air suling

steril dalam tabung-tabung reaksi besar. Tabung reaksi kecil pertama diisi

dengan 1 mL NB double strength, sedangkan tabung-tabung reaksi

selanjutnya dengan 1 mL NB biasa. 1 mL hasil pengenceran terakhir dipipet

ke dalam tabung 1 berisi NB double strength, kocok sampai homogen. 1 mL

campuran diipet dari tabung 1 ke tabung 2, lalu dikocok sampai homogen.

Langkah tersebut diulangi sampai tabung terakhir. 1 mL campuran dibuang

dari tabung terakhir. 1 ose bakteri Eschericia coli ditambahkan ke dalam

masing-masing tabung kecil, kocok sampai homogen., namun sebelumnya

suspensi bakteri tersebut diencerkan terlebih dahulu, dengan cara 100g

suspensi bakteri dimasukan kedalam tabung reaksi dengan menggunakan

mikropipet kemudian tambahan dengan 9.9 ml larutan NaCl fisiologi steril.

Kontrol positif dan 1 kontrol negatif dibuat. Kontrol positif terdiri dari 1 mL

NB dan 1 ose bakteri. Kontrol negatif hanya berisi 1 mL NB. Semua tabung

kecil diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Kekeruhan yang terjadi

diamati lalu dibandingkan dengan kontrol positif dan negatif. MIC nya

ditentukan. MIC terletak pada tabung bening terakhir, atau sebelum tabung

keruh pertama.

VI. Data Pengamatan Dan Hasil Perhitungan

1. Pengenceran antibiotic 250mg / 100 ml

250 mg / 100 ml x 1000 = 2500 mikrogram

a) Tabung besar 1 pengenceran 1 (M2 = 250g)

V1. M1 = V2. M2

1ml. 2500g/ml = V2 . 250g

V2 = 10 ml

b) Tabung 2 pengenceran 2 ( M2 = 50g )

V1. M1 = V2. M2

1 ml. 250g/ml = V2 . 50g

V2 = 5 ml

c) Tabung kecil 1

V1. M1 = V2. M2

1 ml . 50 g = V2 . 25 g

V2 = 2 ml

(konsentrasi dari tabung kecil 1 sampai 5 yaitu 25 ; 12,5 ; 6,25 ;

3,125 ; 1,5625 ; 0,78125. Dari ke enam konsentrasi tersebut V2 = 2

ml untuk setiap tabumg kecil)

2. Pengenceran suspensi bakteri

V1. M1 = V2. M2

V1 . 1 x 108 Cfu/ml = 10 ml. 1 x 10

6 Cfu/ml

V1 = 0,1 mg (100 g)

3. Tabel Pengamatan

No Gambar Keterangan

1.

Hasil uji MIC antibiotic

kloramfenikol pada bakteri

E.coli setalah dinkubasi selam

18 jam.

Semua tidak ada pertumbuhan

(bening).

2.

Pada konsentrasi antibiotic

sebesar 25 g/ml tidak terjadi

pertumbuhan.

3.

Pada konsentrasi antibiotic

sebesar 12,5 g/ml tidak

terjadi pertumbuhan.

4.

Pada konsentrasi antibiotic

sebesar 6,25 g/ml tidak

terjadi pertumbuhan

5.

Pada konsentrasi antibiotic

sebesar 3,125 g/ml tidak

terjadi pertumbuhan

6.

Pada konsentrasi antibiotic

sebesar 1.5625g/ml tidak

terjadi pertumbuhan

7.

Pada konsentrasi antibiotic

sebesar 0,78125 g/ml tidak

terjadi pertumbuhan.

8.

Control negative keruh (ada

pertumbuhan

mikroorganisme).

9.

Kontrol positif bening atau

tidak ada pertumbuhan.

No Konsemtrasi per

tabung

Hasil

1 25 -

2 12,5 -

3 6.25 -

4 3,125 -

5 1,5625 -

6 0,78125 -

No Kontrol Hasil

1 Kontrol positif -

2 Kontrol negatif +

VII. Pembahasan

Menurut Kusnadi (2003), bakteri merupakan organisme bersel tunggal

yang bereproduksi dengan cara sederhana, yaitu dengan pembelahan biner.

Setiap macam bakteri dianggap suatu spesies, yang dibentuk dari kumpulan

strain yang memberikan beberapa gambaran sangat berbeda dari strain lain.

Suatu strain merupakan progeni atau subkultur dari isolat koloni tunggal

dalam kultur murni. Dinding selnya merupakan struktur yang kaku

berfungsi membungkus dan melindungi protoplasma dari kerusakan akibat

faktor fisik dan kimia seperti menjaga keseimbangan antara kondisi intrasel

dengan ekstrasel.

Pada praktikum kali ini bertujuan untuk menentukan Minimum

Inhibitory Concentration (MIC) suatu bakteri gram negative yaitu E. Coli

dengan menggunakan metode MIC cair.

Nilai MIC (Minimum inhibitory concentration) diperoleh dengan

menentukan konsentrasi minimum senyawa obat yang mampu menghambat

aktivitas protease bakteri lebih dari 99%. (Nurhayati, 2010).

Dosis efektif antimikroba merupakan fungsi dari kadar hambat

minimal (minimum inhibitory concentration/MIC), kemampuan pertahanan

tubuh individu, lokasi infeksi, dan profil farmakokinetika antimikroba.

(Dwiprahasto, 2005).

MIC dari sebuah antibiotika terhadap mikroba digunakan untuk

mengetahui sensitivitas dari mikroba terhadap antibiotika. Nilai MIC

berlawanan dengan sensitivitas mikroba yang diuji. Semakin rendah nilai

MIC dari sebuah antibiotika, sensitivitas dari bakteri akan semakin besar.

MIC dari sebuah antibiotika terhadap spesies mikroba adalah rata-rata MIC

terhadap seluruh strain dari spesies tersebut. Strain dari beberapa spesies

mikroba adalah sangat berbeda dalam hal sensitivitasnya (Greenwood,

1995).

Antibiotik adalah zat kimia yang dihasilkan oleh mikroorganisme

yang mempunyai kemampuan dalam larutan encer, untuk menghambat

pertumbuhan dan membunuh mikroorganisme. Antibiotik yang relatif non-

toksik terhadap penjamunya digunakan sebagai agen kemoterapeutik dalam

pengobatan penyakit infeksi pada manusia. Salah satu jenis antibiotik adalah

kloramfenikol. Kloramfenikol adalah antibiotik spektrum luas yang efektif

terhadap beberapa jenis bakteri dan kuman anaerob. (Dian, dkk., 2015).

Mula-mula disiapkan alat dan bahan yang steril. Alat dan bahan harus

disterilisasikan karena dibutuhkan teknik aseptis pada perhitungan MIC ini

agar didapatkan hasil MIC yang tepat dan tidak terjadi kontaminan.

Steril artinya tidak didapatkan mikroba yang tidak diharapkan

kehadirannya, baik yang mengganggu atau merusak media maupun

mengganggu kehidupan dan proses yang sedang dikerjakan. Semua proses

baik fisika, kimia, dan mekanik yang membunuh semua bentuk kehidupan,

terutama mikroorganisme disebut dengan sterilisasi (Waluyo 2007).

Antibiotik yang sudah berada di dalam labu ukur berukuran 100ml,

diencerkan ke dalam tabung reaksi besar yang sudah berisi 9 ml air.

Antibiotik yang digunakan pada penentuan MIC ini adalah Kloramfenikol.

Kloramfenikol adalah salah satu jenis antibiotika turunan amfenikol

yang secara alami diproduksi oleh Streptomy-ces venezuelae (Reynolds,

1982). Melalui pengembangan teknologi fermentasi, kloramfenikol dapat

diisolasi, disemisintesis menjadi antibitoka turunannya, antara lain

tiamfenikol dan turunan lain melalui berbagai reaksi kimia dan enzimatis.

(Susanti et al, 2009).

Mekanisme kerja kloramfenikol sebagai anti bakteri bersifat

stereospesifik, karena hanya satu ste- reoisomer yang memiliki aktivitas anti

bakteri, yaitu D(-) treo-isomer. Kloramfenikol bekerja pada spektrum luas,

efektif baik terhadap Gram positif maupun Gram negatif. Mekanisme kerja

kloram- fenikol melalui penghambatan terhadap biosintesis protein pada

siklus pemanjangan rantai asam ami- no, yaitu dengan menghambat

pembentukan ikatan peptida. Antibiotika ini mampu mengikat subunit

ribosom 50-S sel mikroba target secara terpulihkan, akibatnya terjadi

hambatan pembentukan ikatan peptida dan biosintesis protein.

Kloramfenikol umumnya bersifat bakteriostatik, namun pada konsentrasi

tinggi dapat bersifat bakterisid terhadap bakteri-bakteri tertentu. (Susanti et

al, 2009).

Selanjutnya dilakukan pengenceran antibiotic kloramfenikol. Prinsip

metode pengenceran adalah senyawa antibakteri diencerkan hingga

diperoleh beberapa macam konsentrasi, kemudian masing-masing

konsentrasi ditambahkan suspensi bakteri uji dalam media cair. Perlakuan

tersebut akan diinkubasi dan diamati ada atau tidaknya pertumbuhan bakteri,

yang ditandai dengan terjadinya kekeruhan. Larutan uji senyawa

antibakteri pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa adanya

pertumbuhan bakteri uji, ditetapkan sebagai Kadar Hambat Minimal (KHM)

atau Minimal Inhibitory Concentration (MIC). Larutan yang ditetapkan

sebagai KHM tersebut selanjutnya dikultur ulang pada media cair tanpa

penambahan bakteri uji ataupun senyawa antibakteri, dan diinkubasi selama

18-24 jam. Media cair yang tetap terlihat jernih setelah inkubasi ditetapkan

sebagai Kadar Bunuh Minimal (KBM) atau Minimal Bactericidal

Concentration (MBC). (Pratiwi, 2008).

Teknik dilusi sangat penting dalam analisa mikrobiologi. Karena

hampir semua metode penelitian dari penghitungan jumlah sel mikroba

menggunakan teknik ini. (Herdyastuti, 2009).

Konsentrasi antibiotik yang tadinya sebesar 2500 g/ml, setelah

diencerkan menjadi 250 g/ml dan larutan dikocok sampai homogen.

Kemudian diencerkan lagi menjadi 50 g/ml dengan cara 1 ml pengenceran

1 ditambah 4 ml aquades steril. Lalu, dari tabung reaksi besar, larutan

antibitok dilakukan pengenceran bertingkat ke sejumlah 6 tabung reaksi

kecil. Tabung 1 berisi 1 ml NB double strength. NB double strength ini

adalah cairan NB yang konsentrasinya dua kali dari biasanya. Double

strength ini dimaksudkan untuk agar pada saat pengenceran ke tabung

kedua, konsentrasi antibiotik berasal dari konsentrasi yang sebanding

dengan konsentrasi yang tadinya berada dalam labu ukur ke tabung reaksi

besar. Untuk tabung-tabung selanjutnya diisi dengan 1 ml NB biasa.

Konsentrasi mulai dari tabung 1 sampai tabung 6 secara berturut-turut

adalah, 25 g/ml; 12,5 g/ml; 6,25g/ml; 3,125 g/ml; 1,5625 g/ml; dan

0.78125g/ml.

Sebanyak 1 ml hasil pengenceran pada tabung reaksi besar dipipet ke

dalam tabung 1 berisi NB double strength dan dikocok hingga homogen

agar konsentrasi yang terambilnya tetap sama seperti konsentrasi dalam

tabung. Lalu, 1 ml campuran dari tabung 1 ke tabung 2 dipipet dan dikocok

hingga homogen, begitu seterusnya sampai tabung ke-6. Untuk 1 ml sisa

dari tabung terakhir, dibuang saja.

Penyiapan media pertumbuhan mikroorganisme harus mengandung

nutrisi yang dibutuhkan bakteri supaya dapat tumbuh membentuk koloni

dan harus steril sehingga tidak ada kontaminan dari lingkungan.

(Kenneth,2008).

Setelah itu, ke dalam masing-masing tabung yang sudah berisi media

pertumbuhan bakteri dan antibiotik, dimasukkan 1 ml suspensi bakteri

Escherichia coli dengan menggunakan mikro pipet agar hasilnya akurat.

Pekerjaan ini harus selalu dilakukan secara aseptis agar tidak ada bakteri

lain yang masuk ke dalam wadah percobaan dan agar mendapatkan hasil

yang diinginkan. Bekerja secara aseptis dapat dilakukan dengan cara selalu

mendekatkan alat-alat yang digunakan dengan api yang menyala dan

praktikan tidak boleh banyak berbicara.

E. coli merupakan bakteri gram negatif, berbentuk batang pendek,

motil aktif dan tidak membentuk spora. Pembiakkan E. coli bersifat aerob

atau fakultatif anaerob, pertumbuhan optimum pada suhu 37C. E.

colimempunyai beberapa antigen, yaitu antigen O (polisakarida), antigen K

(kapsular), antigen H (flagella). Antigen O merupakan antigen somatik

berada dibagian terluar dinding sel lipopolisakarida dan terdiri dari unit

berulang polisakarida. Antibodi terhadap antigen O adalah IgM. Antigen K

adalah antigen polisakarida yang terletak di kapsul (Juliantina dkk., 2008).

Setelah itu, membuat kontrol positif. Hal ini dilakukan agar pada saat

pengamatan hasil percobaan bisa dibandingkan dengan kontrol positif

tersebut. Kontrol positif dibuat dari 1 ml NB yang ditempatkan di dalam

tabung reaksi. Dalam melakukan prosedur ini, juga harus dilakukan secara

hati-hati (dalam arti aseptis) agar bisa menjadi pembanding yang baik pada

saat pengamatan hasil percobaan. Setelah semua selesai, tabung-tabung

reaksi tadi dimasukkan ke dalam inkubator yang suhunya telah disesuaikan

agar bakteri bisa tumbuh. Sampel percobaan diinkubasi selama 18-24 jam

pada suhu 37oC.

Selanjutnya adalah penentuan MIC. MIC ditentukan dengan

membandingkan OD setelah perlakuan inkubasi dikurangi OD sebelum

perlakuan. Apabila terdapat konsentrasi terendah yang menghambat

pertumbuhan bakteri, ditunjukkan dengan tidak adanya kekeruhan (OD

bakteri adalah 0), maka didapatkan Konsentrasi Hambat Minimal (KHM)

atau Minimal Inhibitory Concentration (MIC). Nilai OD yang positif

menunjukkan adanya peningkatan nilai absorbansi yang berarti masih

terdapat pertumbuhan bakteri. Masih adanya pertumbuhan bakteri

menunjukkan bahwa pada konsentrasi ekstrak tersebut belum dapat

menghambat pertumbuhan bakteri. (Dewi, 2010).

Hasil yang didapatkan pada penentuan MIC dari antibiotic

kloramfenikol terhadap bakteri Escherichia coli adalah pada kesuluruhan

konsentrasi terlihat jernih atau bening hal ini membuktikan bahwa bakteri

yang terdapat dalam tabung reaksi tersebut telah mati. Seharusnya, terdapat

konsentrasi yang berwarna keruh yang menunjukkan bakteri dalam

konsentrasi tersebut positif masih terdapat bakteri yang tumbuh atau hidup.

Hal tersebut dapat dikarenakan beberapa faktor. Faktor yang pertama

adalah penentuan konsentrasi antibiotik yang digunakan terlalu besar

konsentrasi yang digunakannya. Karena pada farmakope Indonesia, dosis

tengah dari tetrasiklin adalah 2.5 g. Dosis tengah untuk uji aktivitas

kloramfenikol dengan bakteri E. coli sesuai Farmakope Indonesia Edisi IV

adalah 2.5 g. (Susanti et al, 2009). Faktor yang kedua adalah ketidak

homogenan suspensi bakteri saat pengambilan bakteri karena seharusnya

sebelum digunakan, suspensi tersebut harus dikocok-kocok terlebih dahulu

agar homogen sehingga bakteri dapat terambil. Factor yang ketiga adalah,

kesalahan praktikan dikarenakan keliru (tertukar) dalam mengambil

antibiotic dan NaCl fisiologis, sehingga tidak ada pertumbuhan bakteri.

VIII. Kesimpulan

- Penentuan MIC atau minimum inhibitory concentration untuk antibiotic

kloramfenikol dengan bakteri E. coli tidak diketahui dikarenakan hasil

inkubasi pada media cair Nurient Broth negative semua atau tidak ada

pertumbuhan bakteri dari keenam tabung yang diujikan.

Daftar Pustaka

Boyd, Robert F., 1988. General Microbiology. Second Edition. Times

Mirror/Mosby College Publishing.

Dewi, Fajar Kusuma. 2010. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Mengkudu

(Morinda Citrifolia, Linnaeus) Terhadap Bakteri Pembusuk Daging

Segar. Sripsi Biologi Fmipa. Surakarta: Universitas Sebelas Maret.

Dian, Fatimawali, Budiarso. 2015. Uji Resistensi Bakteri Escherichiacoli Yang

Diisolasi Dari Plak Gigi Terhadap Merkuri Danantibiotik Kloramfenikol.

Jurnal E-Biomedik (Ebm), Volume 3, Nomor 1, Januari-April 2015.

Dian, Fatimawali, Dkk. Uji Resistensi Bakteri Escherichia Coli Yang Diisolasi

Dari Plak Gigi Terhadap Merkuri Dan Antibiotik Kloramfenikol. Jurnal e-

Biomedik (eBm), Volume 3, Nomor 1, Januari-April 2015. [diakses 16 april

2015]

Dwiprahasto, Iwan. 2005. Kebijakan untuk Meminimalkan Risiko Terjadinya

Resistensi Bakteri di Unit Perawatan Intensif Rumah Sakit. JMPK Vol.

08/No.04/Desember/2005.

Goodman and Gilman, 2007, Dasar Farmakologi Terapi, Edisi 10, diterjemahkan

oleh Amalia, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.

Greenwood. 1995. Antibiotics Susceptibility (Sensitivity) Test,. Antimicrobial and

Chemoteraphy. USA: Mc Graw Hill. Company.

Hani,2012.Inhibisiantibiotic.Tersediadi:http://www.academia.edu/7423598/ANTI

BIOTICTHAI HIBITSPROT.SYNTESIS. [diakses 17 april 2015]

Herdyastuti N, Raharjo, JT, Mudasir & Matsjeh S. 2009. Kitinase dan

mikroorganisme kitinolitik: isolasi, karakterisasi dan manfaatnya. Indo.

J. Chem. Vol 9(1): 37-38.

Immanudin H. Pola Pertumbuhan Dan Toksisitas Bakteri Resisten Hgcl2. Jurnal

Ekosains. 2010;2(1).

Jawetz E., J. L. Melnick, E. A. Adelberg, G. F. Brooks, J. S. Butel, L. N. Ornston,

1995, Mikrobiologi Kedokteran, ed. 20, University of California, San

Francisco.

Jawetz et. al. 1996. Mikrobiologi Kedokteran. Edisi 20. EGC:Jakarta.

Juliantina, F. R., Ayu, D. C. M, dan Nirwani, B. 2008. Manfaat Sirih Merah

(Piper crocatum) sebagai Agen Antibakterial Terhadap Bakteri Gram

Positif dan Gram Negatif. Jurnal Kedokteran dan Kesehatan Indonesia.

Kenneth, Todar. 2008. Available online at http://www.textbookofbacteria.com.//

[diakses tanggal 17 April 2015].

Kusnadi. 2003. Mikrobiologi. Bandung: JICA IMSTEP.

Noviana, hera. Pola kepekaan antibiotika Escherichia coli yang diisolasi dari

berbagai spesimen klinis. J Kedokter Trisakti Oktober-Desember 2004, Vol.

23 No. 4. [diakses 16 april 2015]

Nurhayati, Tati dkk. 2010. Aktivitas Inhibitor Protease dari Ekstrak Karang

Lunak, Asal Perairan Pulau Panggang Kepulauan Seribu. Ilmu Kelautan

Juni 2010. vol. 15 (2) 59-65.

Pelczar, M. J. Jr., R. G. Reid. 1958. Microbiology. Mc Graw-Hill Book Company,

Inc. London.

Pelczar, Michael, J., dan E.C.S. Chan. 1986. Dasar-dasar Mikrobiologi I.

UI Press, Jakarta.

Pratiwi, Sylvia. T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Penerbit Erlangga, Jakarta.

Reynolds, T.D. 1982. Unit Operation and Process in Environmental Engineering.

Boston: Brooks/Cole Engineering Division.

Susanti, Et Al./ 2009. Validasi Metode Bioautografi Untuk Determinasi

Kloramfenikol. Jurnal Kedokteran Indonesia, Vol. 1/No. 1/Januari/2009

Volk dan Wheeler. 1988. Mikrobiologi Dasar. Edisi Kelima. Jilid I. Penerbit

Erlangga. Jakarta.

Waluyo, Lud. 2007. Mikrobiologi Umum. Malang: UPT. Penerbit Universitas

Malang.