LAPORAN PRAKTIKUM MIKROTEKNIK HEWAN.docx

7/21/2019 LAPORAN PRAKTIKUM MIKROTEKNIK HEWAN.docx

1/24

1

Pembuatan Preparat Sayatan Melintang Intestinum Mussp.

dengan Metode Paraffin

TUJUAN

Tujuan dari praktikum ini yaitu untuk mengetahui teknik pembuatan sediaan sayatan

organ hewan.

TINJAUAN PUSTAKA

Organ merupakan gabungan dari beberapa jaringan yang berbeda-beda untuk

mendukung suatu fungsi tertentu. Berdasarkan letaknya organ dikelompokkan menjadi 2

yaitu organ bagian luar dan organ bagian dalam. Organ bagian luar meliputi tangan, kaki,

hidung, mulut, telinga, mata dan lain-lain. Sedangkan organ bagian dalam meliputi hati,

ginjal, paru-paru, jantung, dan lain sebagainya (Alvi, 1997).

Suatu organ yang bekerja sama dengan organ-organ lainnya dengan membentuk suatu

fungsi yang lebih kompleks yang biasanya disebut dengan sistem organ. Sebagai contoh

adalah organ-organ yang bekerja sama dengan usus halus dalam proses pencernaan makanan

yaitu mulut, lambung, hati, pankreas, kelenjar ludah, usus besar, dan lain sebagainya. Organ-

organ tersebut merupakan suatu kesatuan dan membentuk suatu sistem yang disebut sebagai

sistem pencernaan (Kimball, 1983).

Metode parafin merupakan metode untuk mengeraskan jaringan atau organ yang akan

dibuat sediaan dengan metode irisan. Ada 3 macam metode untuk mengeraskan jaringan atau

organ yang akan diiris yaitu metode beku, metode seloidin, metode parafin, dan metode

penanaman rangkap. Saat ini metode yang paling sering digunakan adalah metode parafin

karena hamper semua macam jaringan dapat dipotong atau diris dengan baik bila

menggunakan metode parafin (Mannus, 1960).

Menurut Sugiharto (1989), metode parafin termasuk metode irisan yang merupakan

metode rutin atau standar. Pengamatan secara mikrokopis dari sesuatu jaringan yang normal

sifatnya maupun yang mengidap sesuatu penyakit (patologis) akan lebih baik hasilnya bila

dilakukan dari preparat jaringan yang telah dipersiapkan secara baik, telah dilakukan

penyayatan yang cukup tipis, serta diberi pewarnaan yang sesuai, sehingga berbagai elemen

jaringan yang diteliti lebih mudah untuk diamati. Dengan demikian, tidak saja penelitiansecara mikroanatomi yang dapat dilakukan, tetapi juga memberi kemudahan dalam


2/24

2

membedakan berbagai perubahan yang terjadi pada sel-sel jaringan yang diteliti. Adakalanya

beberapa jenis jaringan memerlukan perlakuakan yang khusus untuk dapat menelitinya,

seperti dalam hal jenis pewaranaan yang harus digunakan untuk sesuatu jenis jaringan

tertentu.

Meskipun menjadi metode yang paling sering digunakan saat ini, metode paraffin

memiliki kelebihan dan kekurangan dibandingkan metode yang lain. Kelebihan metode

parafin antara lain adalah irisan yang dihasilkan lebih tipis dibandingkan dengan metode yang

lain. Irisan yang dihasilkan juga bersifat seri, mudah dipraktekkan, dan prosesnya lebih cepat

dibadingkan dengan metode seloidin (Suntoro, 1983).

Kekurangan metode parafin antara lain yaitu jaringan menjadi keras dan mudah patah,

tidak bisa digunakan untuk jaringan besar, dan sebagian enzim pada jaringan akan larut.

Pembuatan sediaan dengan metode parafin memerlukan langkah-langkah yang harus

dikerjakan dengan urut agar dihasilkan sediaan yang dapat diamati dan dipelajari sesuai

tujuan pembuatan sediaan (Suntoro, 1983). Urutan langkah kerja metode paraffin adalah

narkose, pengambilan organ, fiksasi, pencucian (washing), dehidrasi, penjernihan (clearing),

infiltrasi paraffin, embedding, penyayatan/pengirisan (sectioning), penempelan (affixing),

deparafinasi, pewarnaan (staining), penutupan (mounting), dan labeling.

METODE KERJA

Alat dan bahan

Alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah bak bedah untuk proses

pembedahan, kotak berisi kapas yang dibasahi dengan kloroform untuk proses euthanasi,

botol fial sebagai tempat penyimpanan organ basah, cover glass untuk menutup preparat yang

telah selesai diamati, beaker glass sebagai wadah paraffin cair, glass objek sebagai tempat

peletakkan organ yang telah di potong, holder sebagai , kertas dengan lapisan plastik sebagai

pencetak kotak paraffin, kuas untuk mengambil hasil potongan dari mikrotom, mikroskop

untuk mengamati preparat yang dikerjakan, mikrotom, oven sebagai pemanas, petri dish

sebagai tempat perendaman orgam dalam garam fisiologis, pinset untuk mengambil organ,

pisau scalpel untuk membuka kulit Mussp. sehingga membantu proses pengambilan organ,

silet, jarum pentul untuk menahan tubuh Mus sp. dalam bak bedah , dan kapas sebagai

penyerap darah.


3/24

3

Bahan-bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah alkohol 30%, 40%, 50%,

60%, 70%, 80%, 90%, 96% sebagai proses , aquades untuk membersihkan sisa bahan

pewarna, entellan untuk merekatkan hasil preparat pada glass objek, larutan Bouin sebagai

fiksatif, garam fisiologis NaCl 0,9 % sebagai pembersih organ basah, kloroform, organ

intestinumMussp., paraffin , pewarna eosin dan xylol.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil yang diperoleh pada sayatan organ hewanMussp. dapat dilihat pada gambar 1.

Gambar 1. Sayatan Organ IntestinumMussp. dengan perbesaran 4x10

Pembahasan

Pengerjaan yang dilakukan melalui proses irisan atau sayatan merupakan sebuah

proses yang di anggap sebagai suatu teknik rutin atau teknik baku bagi penyiapan spesimen

histologi atau histopatologi. Pengirisan atau penyayatan umumnya di lakukan dengan

menggunakan bantuan alat pemotong yang di kenal dengan mikrotom. Mikrotom merupakan

alat yang di gunakan untuk memotong atau mengiris agar mendapatkan hasil setipis mungkin.

Jaringan yang telah di persiapkan untuk sayatan ini dengan berbagai metode tertentu dan

diusahakan agar mempunyai kekerasan tertentu sehingga dapat di potong dengan

menggunakan pisau mikrotom. Oleh karena itu, biasanya di lakukan proses pembekuan dan

penanaman di dalam medium tertentu yang dikenal dengan embedding.

Embedding merupakan salah satu contoh metode pengerasan jaringan. Medium yang

umum digunakan pada metode penanaman adalah parafin. Metode parafin adalah metode


4/24

4

pembuatan preparat dengan melalukan penanaman jaringan di dalam blok parafin untuk

menghasilkan preparat jaringan hewan yang tipis. Pembuatan sediaan dengan cara

pemotongan jaringan menggunakan parafin dengan mikrotom sebagai alat pemotongnya.

Praktikum kali ini yaitu membuat preparat dengan mengguanakan organ dari hewan

Mus sp. atau tikus putih. Organ yang di ambil adalah intestinum. Tahapan awal dari

pembuatan organ hewan adalah pembiusan. Pembiusan merupakan proses yang bertujuan

khusus untuk preparat hewan yaitu untuk memudahkan pengambilan jaringan atau bagian

jaringan pada hewan. Pembiusan tidak perlu dilakukan jika yang akan diambil atau diamati

adalah jaringan yang menyangkut kelenjar-kelenjar (endokrinologi), karena mungkin akan

berpengaruh terhadap hormon-hormon yang terkandung di dalamnya. Setelah organ diambil,

dipotong menjadi beberapa bagian kemudian organ tersebut dicuci dengan menggunakan

garam fisiologis. Garam fisiologis berfungsi untuk membersihkan organ dari sisa-sisa darah

yang masih menempel pada organ tersebut. Fiksasi organ hewan di lakukan dengan

menggunakan larutan Bouin. Fiksasi ini berguna untuk mematikan serta menghentikan

proses-proses metabolisme jaringan dengan cepat sehingga keadaanya semaksimal mungkin

mendekati keadaan aslinya dan dapat pula mencegah proses autolysis yaitu keluarnya enzim-

enzim yang dapat merusak sel maupun jaringan. Selain itu fiksasi juga berfungsi untuk

menaikan daya pewarnaan karena adanya bahan-bahan keras yang merupakan komponencairan fiksatif. Pada praktikum ini menggunakan fiksatif berupa larutan Bouin dikarenakan

fiksatif ini merupakan fiksatif yang paling cocok dan paling baik untuk memfiksasi jaringan

hewan. Fiksasi dilakukan selama 24 jam.

Washing merupakan proses pencucian organ menggunakan air mengalir yang di

lakukan selama 30 menit. Washing ini bertujuan untuk menghilangkan larutan ataupun cairan

fiksatif yang terdapat pada organ. Penggunaan air tidak menyebabkan organ mengalami

krenasi atau pengkerutan yang mengakibatkan jaringan pada organ tersebut rusak, karena

adanya perbedaan larutan yang sifatnya ekstrim.

Dehidrasi dilakukan setelah proses washing yang bertujuan untuk mengeluarkan air

dari jaringan, dalam prosesnya air harus di keluarkan dari jaringan. Jika didalam preparat

masih terdapat air maka ketahanan preparat tidak begitu lama akibat serangan dari bakteri

maupun jamur tersebut. Selain itu, air juga dapat mengganggu keberlangsungan proses

selanjutnya. Salah satu proses yang dapat terkena dampak yaitu pada proses infiltrasi. Proses

infiltrasi merupakan proses memasukan parafin cair pada organ yang dilakukan secara


5/24

5

bertahap. Parafin merupakan senyawa yang dapat digolongkan sebagai lipid atau lemak yang

bersifat non polar. Sedangkan air merupakan larutan atau senyawa yang bersifat polar,

sehingga dalam proses ini keduanya tidak dapat bersatu karena perbedaan sifat tersebut.

Dehidrasi dilakukan dengan menggunakan alkohol bertingkat naik yaitu 70%, 80%,

90%, 96% dan 100% masing-masing dilakukan 15 menit. Dehidrasi ini dilakukan secara

bertingkat dari konsentrasi rendah ke konsentrasi tinggi dimaksudkan agar jaringan pada

organ tidak terkejut akibat perbedaan jenis dan konsentrasi yang mengakibatkan terjadinya

pengkerutan pada sel maupun jaringan yang mengakibatkan sel akan rusak. Clearing

dilakukan dengan menggunakan larutan xylol selama 24 jam. Clearing bertujuan untuk

membersihkan organ hewan yang akan di gunakan dari alkohol yang telah digunakan dalam

proses dehidrasi. Menurut Khairul (2001), clearing bertujuan untuk menarik dehidrasi dari

dalam jaringan yang nantinya dapat di gantikan oleh molekuk parafin. Lamanya jaringan ini

berada dalam medium tersebut tergantung pada ketebalan serta tingkat kepadatan jaringan

serta jenis bahan kimia yang di gunakan.

Proses infiltrasi adalah suatu tahapan dimana jaringan dimasukan kedalam media

penanaman secara bertahap. Infiltrasi ini dilakukan dengan cara merendam organ pada

parafin cair sebelum proses penanaman kedalam blok parafin. Infiltrasi dilakukan dengan

menggunakan parafin : xylol (1:1) selama 30 menit di dalam oven dengan suhu 60 C.

Tujuan perbandingan ini agar parafin dapat masuk atau mengalami penetrasi lebih mudah

karena adanya xylol. Hal ini terjadi karena pada proses sebelumnya organ telah kontak

dengan larutan xylol pada proses clearing. Proses infiltrasi dilakukan secara bertahap

menggunakan parafin 1, II, dan III yang masing-masing dilakukan selama 50 menit didalam

oven dengan suhu 60C. Penggunaan oven ini di karenakan parafin merupakan senyawa yang

memiliki melting point atau titik leleh pada suhu 56C. Jadi tujuannya untuk mencegah agar

parafin tersebut tidak beku. Fungsi infiltrasi ini yaitu untuk mengisi ruang-ruang inter

maupun intra seluler dengan parafin cair sehingga kedudukan dehidrasi dapat digantikan oleh

parafin.

Dalam proses infiltrasi parafin, sebaiknya jangan dimasukan langsung dari zat

penjernih kedalam parafin murni, tetapi sebaiknya sebelum parafin murni, jaringan

dimasukan terlebih dahulu kedalam campuran antara parafin dan penjernih (parafin : xylol)

dengan volume perbandingan yang sama. Hal ini dimaksudkan agar menghindari perubahan


6/24

6

lingkungan yang sangat mendadak terhadap jaringan tersebut sehingga jaringan dapat

mengkerut karena tertarik secara maksimal.

Proses yang dilakukan selanjutnya adalah embedding atau penanaman yang

merupakan proses memasukan organ kedalam blok-blok parafin (cetakan) yang terbuat dari

kertas sehingga memudahkan di dalam penyayatan dengan alat bantu mikrotom. Keuntungan

menggunakan kotak kertas yaitu dapat membuat sayatan dan menandai jaringan. Pada

praktikum ini diinginkan organ yang nantinya dapat dipotong secara melintang sehingga

organ tersebut diletakkan dalam posisi berdiri. Parafin yang telah membeku ini dapat segera

dipotong menggunakan alat mikrotom. Pengirisan organ dilakukan dengan mikrotom agar

didapat hasil irisan yang sangat tipis. Namun terlebih dahulu blok parafin dipahat sedemikian

rupa sehingga membentuk suatu persegi dengan organ berada ditengah-tengahnya dan

kemudian blok parafin ditempel pada holder yang sesuai dengan ukuran blok parafin. Proses

section menghasilkan pita-pita sayatan yang nantinya akan disortir kembali untuk memilih

pita dengan sayatan organ yang baik dan tidak rusak.

Proses dilanjutkan dengan affixing yaitu penempelan sayatan organ pada glass objek

dengan gliserol. Gliserol yang berfungsi untuk merekatkan irisan jaringan pada glass objek.

Gliserol dioleskan pada objek glass dengan rata. Ketika memberikan gliserol pada objek glass

tidak boleh terlalu banyak, karena gliserol yang terlalu banyak akan mengakibatkan gliserol

tersebut ikut terwarnai yang nantinya menyebabkan objek glass menjadi kotor. Setelah

pemberian albumin, objek glass ditetesi dengan air. Hal ini bertujuan agar irisan mudah

direntangkan dan tidak menggulung, karena ketika proses peletakan sayatan organ diatas hot

plate, akuades yang terdapat pada sayatan tersebuat akan menguap dan pita-pita sayatan akan

merentang dengan sendirinya. Air yang diberikan tidak boleh terlalu banyak, karena jika

kandungan air terlalu banyak dapat menyebabkan sayatan terlepas ketika proses staining..

Tahapan setelah affixing yaitu proses staining atau pewarnaan. Proses diawali dengan

proses deparafinisasi yang bertujuan untuk menghilangkan parafin yang terdapat dalam

jaringan. Proses deparafinisasi menggunakan xylol deparafinase yang di lakukan selama 15

menit. Proses dilanjutkan dengan dialkoholisasi yaitu proses penarikan alkohol dengan

menggunakan alkohol bertingkat turun dari konsentrasi 96% - 30% masing-masing dilakukan

selama 3 menit. Dilanjutkan dengan akuades selama 2 menit. Pewarnaan bertujuan agar

mempertajam atau memperjelas berbagai elemen sayatan jaringan terutama sel-selnya

sehingga dapat dibedakan dan ditelaah dengan menggunakan mikroskop.


7/24

7

Seharusnya, pewarnaan yang digunakan pada sayatan organ hewan ini yaitu

pewarnaan ganda yang terdiri dari hematoxylin-eosin. Tetapi, terjadi kesalahan dari praktikan

yaitu, praktikan tidak melakukan perwarnaan hematoxylin terlebih dahulu sehingga

pewarnaan hanya dengan pewarnaan eosin. Sedangkan eosin yaitu pewarnaan yang di berikan

selama 20 menit setelah proses dehidrasi menggunakan alkohol bertingkat turun dari

konsentrasi 70% - 30% yang masing-masing di lakukan selama 2 menit. Eosin digunakan

dalam praktikum ini karena eosin merupakan pewarna yang bersifat asam dan akan mewarnai

sitoplasma yang bersifat cenderung asam.

Proses setelah pemberian warna eosin di lanjutkan dengan proses washing dengan

bebarapa tahapan yaitu alkohol 70% bekas selama 4 menit dan alkohol 70% baru selama 2

menit dan di lakukan proses dehidrasi dengan menggunakan alkohol bertingkat naik dari 70%

hingga 100% masing-masing selama 2 menit. Ketika proses perpindahan preparat dari larutan

satu dan yang lainya terutama larutan yang berupa xylol, preparat sayatan tersebut harus

menerima proses lipatan tissue untuk mehilangkan larutan. Karena jika larutan xylol terkena

air, maka xylol akan rusak. Proses akhir sebelum mounting yaitu pemberian atau di rendam

kedalam larutan xylol selama 2 menit yang berfungsi untuk menjernihkan preparat agar

terlihat lebih transparan antar bagian-bagiannya.

Mounting adalah proses finishing pada tahapan ini dengan menetapkan sayatan pada

proses penutupan objek glass dengan menggunakan perekat berupa entellan. Dilanjutkan

dengan proses labelling dan pengamatan tentang bagian yang di hasilkan pada suatu sayatan

organ.

SIMPULAN

Berdasarkan hasil percobaan yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa,

pembuatan sediaan sayatan organ hewan dengan metode parafin melalui beberapa tahapan,

diantaranya adalah fiksasi, pencucian, dehidrasi, penjernihan, infiltrasi, embedding,

pengirisan, penempelan, pewarnaan dan penutupan. Dalam pembuatannya menggunakan

parafin sebagai media embedding dikarenakan hasil pemotongan yang lebih tipis dibanding

media dan metode lain.


8/24

8

DAFTAR PUSTAKA

Alvi, R. 1997. Anatomi Fisiologi Manusia. Universitas Sebelas Maret Surakarta Press

Burkitt, H.G., B. Young dan J.W.Heath. (1993). Histologi Fungsional.Edisi 3. Diterjemahkan

oleh Jan Tambajong. Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.

Kimball. 1983. Biologi. Addison Wesley Publishing Company

Khairul, M.D. 2001. Mikroteknik. University of Indonesia Press. Jakarta

Mannus, J. F. A. dan Robert W. Mowry, 1960. Staining Method Histologic and

Histochemical. Paul B. Hoeler Inc Medical Divition of Harper and Brothers. New

York

Suntoro, S. H, 1983, Metode Pewarnaan Histologi dan Histokimia. Bhratara Karya Aksara.

Jakarta.

Sugiharto. 1989. Mikroteknik. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan Direktorat Jendral

Pendidikan Tinggi Pusat Antar Universitas Ilmu Hayati. Bogor


9/24

9

Pembuatan Preparat Rentang dengan Jaringan Subkutan Mussp.

TUJUAN

Tujuan dari praktikum ini yaitu untuk mengetahui teknik pembuatan preparat jaringan

subkutan padaMussp.

DASAR TEORI

Epitel adalah jaringan yang terdiri atas sel-sel yang sangat rapat tanpa adanya zat

antar sel. Epitel tidak mempunyai pembuluh darah, namun semua epitel tumbuh pada

jaringan ikat yang mempunyai pembuluh darah. Epitel dipisahkan dengan jaringan ikat

melalui membrana basalis.

Epitel membungkus dan membatasi semua permukaan tubuh, termasuk luar dan

dalam. Epitel mempunyai fungsi bermacam-macam yaitu, pada permukaan luar tubuh, epitel

memberi perlindungan terhadap kerusakan mekanis, perlindungan terhadap masuknya

mikroorganisme dan mencegah penguapan air. Lebih lanjut, epitel penting sebagai reseptor

sensoris, karena pada sel-sel epitel terdapat ujung-ujung saraf penghantar rasa sakit. Pada

permukaan dalam, fungsi epitel yaitu sebagai absorpsi atau sekresi. Epitel mempunyai

struktur yang berbeda-beda tergantung pada fungsinya. Jaringan epithelium dapat dibedakanberdasarkan bentuk sel yaitu epitel pipih, epitel kubus, dan epitel silindris. Untuk sebaran sel

epithelium dalam tubuh manusia antara lain sel epitel di mulut.

Metode supravital adalah suatu metode untuk mendapatkan sediaan dari sel atau

jaringan yang hidup. Sel-sel yang hidup juga dapat menyerap warna. Zat warna yang biasa

dipakai untuk pewarnaan supravital adalah janus green, neutral red, atau methylene blue

dengan kosentrasi tertentu. Preparat supravital merupakan preparat yang bersifat sementara

sehingga harus segera diamati setelah pembuatan. Pengamatan terhadap epithelium ini akan

nampak inti dari sel-sel yang teramati.

METODE

Alat

Ujung pisau skalpel yang telah di sterilkan dengan alkohol 70% untuk mengambil

jaringan mukosa pada mulut bagian samping atas, kaca preparat dan kaca penutup untuk

meletakkan organ yang digunakan.


10/24

10

Bahan

Jaringan mukosa pada mulut bagian atas, pewarna janus green yang telah diencerkan

dengan aquades dengan perbandingan 1:1 dan pewarna Neutral Red yang telah diencerkan

dengan aquades dengan perbandingan 1:1, entellan sebagai zat perekat gelas objek dengan

gelas penutup serta untuk menaikkan indeks bias sehingga memudahkan pengamatan di

bawah mikroskop.


Berikut adalah hasil dari pembuatan preparat yang didapat dalam pengamatan melalui

mikroskop cahaya dengan perbesaran 4x10

Gambar 1. Jaringan subkutanMussp. dengan pewarnaan Mallory-Acid Fuchsin

Pada praktikum mikroteknik kali ini kita membuat preparat rentang dari jaringan

subkutan yang didapat dari lapisan mengkilat bawah kulit ayam. Lapisan ini terletak tepat di

bawah lapisan epidermis.

Metode rentang (spread) adalah suatu metode sediaan dengan cara merentangkan

suatu jaringan pada gelas benda sedemikian rupa sehingga dapat diamati di bawah

mikroskop. Pada umumnya jaringan-jaringan yang dapat dibuat preparat rentang adalah

jaringan-jaringan yang tipis, misalnya mesenterium.

Menurut M. C. Manus (1969), jaringan-jaringan yang tipis tersebut dapat diamati

secara langsung di bawah mikroskop tanpa menggunakan pewarnaan dan juga tanpa fiksasi

terlebih dahulu. Akan tetapi, pembuatan preparat rentang yang demikian tidak akan bertahan

lama karena jaringan tidak difiksasi terlebih dahulu. Selain itu, jaringan juga akan mudah


11/24

11

rusak. Zat warna yang dapat digunakan dalam membuat preparat ini antara lain hematoxilin,

eosin, dan methylen blue (Handari, 1983).

Namun pada praktikum, kita hanya menggunakan pewarnaan eosin dan hematoxilin

saja. Pewarna hematoxilin dengan pelarut aquades sangat baik digunakan untuk mewarnai

inti yang akan berwarna biru. Pewarna eosin dengan pelarut alcohol 70% sangat baik untuk

mewarnai sitoplasma dengan warna merah (Handari, 1983).

Berdasarkan hasil preparat yang telah dibuat yaitu preparat rentang jaringan subkutan

tikus (Mus sp.)dengan menggunakan metode rentang (Spread) menggunakan pewarnaan

ganda yaitu hematoxilin dan eosin, dapat diketahui bahwa preparat terlihat cukup jelas. Dari

foto preparat yang telah didapat, dapat diketahui bahwa pada jaringan subkutan ini kita dapat

mengamati 2 hal yaitu serabut kolagen dan serabut elastis. Serabut kolagen adalah serabut

yang terbentuk dari protein kolagen dan merupakan jenis protein yang paling banyak terdapat

ditubuh. Sabut kolagen tersebut tidak tampak jelas karena sangat tipis dan index biasnya

sama dengan bahan dasar. Sedangkan untuk serabut elastis merupakan suatu serabut yang

sabut-sabut elastisnya kelihatan jelas dan lebih tebal. Bahan yang menyusun serabut elastis

adalah protein elastin yang bersifat sangat tahan terhadap pengaruh kimia.

Serabut kolagen terbentuk dari protein kolagen yang merupakan jenis protein paling

banyak terdapat dalam tubuh. Diameternya antara 1 m 12 m dengan rata-rata sebesar

eritrosit (7,7 m). Serabut kolagen terdiri dari gabungan serabut-serabut yang lebih halus

berdiameter 0,3 m 0,5 m yang disebut fibril. Dalam keadaan segar serabut kolagen

berwarna putih, oleh karena itu dinamakan pula sebagai serabut putih. Serabut kolagen tahan

terhadap tekanan ataupun tarikan, tetapi tidak bersifat lentur. Dengan pewarnaan HE akan

terwarna merah muda atau merah.

Serabut elastis tersusun oleh protein elastin yang bersifat sangat tahan terhadap

pengaruh kimia. Dalam keadaan segar serabut ini berwarna kuning. Serabut elastis bersifat

kenyal dan elastik. Dengan pewarnaan HE tampak lebih merah jika dibandingkan dengan

serabut kolagen. Serabutnya tipis dan panjang dengan ketebalan kurang dari 1 m sampai

beberapa mikron.

Preparat jaringan subkutan ini memiliki komposisi yang tepat dikarenakan pewarnaan

terlihat jelas dan tidak terlalu pekat. Hal ini dipengaruhi oleh tebal tipisnya jaringan yang

direntangkan dan juga pada proses perentangan yang membutuhkan ketrampilan dan

kesabaran.


12/24

12

SIMPULAN

Hal-hal yang mempengaruhi baik buruknya hasil preparat rentang pada jaringan subkutan

ini yaitu tebal tipisnya jaringan yang direntangkan dan juga pada proses perentangan yang

membutuhkan ketrampilan dan kesabaran.

DAFTAR PUSTAKA

Suntoro, S. H, 1983,Metode Pewarnaan Histologi dan Histokimia. Bhratara Karya Aksara.

Jakarta.

Sugiharto. 1989.Mikroteknik. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan Direktorat Jendral

Pendidikan Tinggi Pusat Antar Universitas Ilmu Hayati. Bogor.

Mannus, J. F. A. dan Robert W. Mowry, 1960. Staining Method Histologic and

Histochemical. Paul B. Hoeler Inc Medical Divition of Harper and Brothers. New

York


13/24

13

Pewarnaan Supravital

TUJUAN

Tujuan dari praktikum ini yaitu untuk mengetahui teknik pembuatan preparat jaringan

subkutan padaMussp.

DASAR TEORI

Epitel adalah jaringan yang terdiri atas sel-sel yang sangat rapat tanpa adanya zat

antar sel. Epitel tidak mempunyai pembuluh darah, namun semua epitel tumbuh pada

jaringan ikat yang mempunyai pembuluh darah. Epitel dipisahkan dengan jaringan ikat

melalui membrana basalis.

Epitel membungkus dan membatasi semua permukaan tubuh, termasuk luar dan

dalam. Epitel mempunyai fungsi bermacam-macam yaitu, pada permukaan luar tubuh, epitel

memberi perlindungan terhadap kerusakan mekanis, perlindungan terhadap masuknya

mikroorganisme dan mencegah penguapan air. Lebih lanjut, epitel penting sebagai reseptor

sensoris, karena pada sel-sel epitel terdapat ujung-ujung saraf penghantar rasa sakit. Pada

permukaan dalam, fungsi epitel yaitu sebagai absorpsi atau sekresi. Epitel mempunyai

struktur yang berbeda-beda tergantung pada fungsinya. Jaringan epithelium dapat dibedakanberdasarkan bentuk sel yaitu epitel pipih, epitel kubus, dan epitel silindris. Untuk sebaran sel

epithelium dalam tubuh manusia antara lain sel epitel di mulut.

Metode supravital adalah suatu metode untuk mendapatkan sediaan dari sel atau

jaringan yang hidup. Sel-sel yang hidup juga dapat menyerap warna. Zat warna yang biasa

dipakai untuk pewarnaan supravital adalah janus green, neutral red, atau methylene blue

dengan kosentrasi tertentu. Preparat supravital merupakan preparat yang bersifat sementara

sehingga harus segera diamati setelah pembuatan. Pengamatan terhadap epithelium ini akan

nampak inti dari sel-sel yang teramati. (Suntoro, 1983)

Selain jenis-jenis metoda yang dimanfaatkan materi yang mengalami narkose dan

fiksasi. Untuk pengamatan sel-sel epitel yang masih hidup umumnya digunakan zat warna

vital seperti Janus green atau Neutral red, karena sel epitel mempunyai kemampuan untuk

menghisap zat warna pada konsentrasi yang sesuai. Bila kedua zat warna tersebut dipakai

secara bersama-sama maka memungkinkan kita untuk mengamati mitokondria. Hanya saja


14/24

14

akan terjadi perubahan yang sangat cepat pada sel, karena sel dapat mati oleh kedua warna

tadi secara bersamaan. (Lesson C et al., 2002)

METODE

Alat

Ujung pisau skalpel yang telah di sterilkan dengan alkohol 70% untuk mengambil

jaringan mukosa pada mulut bagian samping atas, kaca preparat dan kaca penutup untuk

meletakkan organ yang digunakan.

Bahan

Jaringan mukosa pada mulut bagian atas, pewarna janus green yang telah diencerkandengan aquades dengan perbandingan 1:1 dan pewarna Neutral Red yang telah diencerkan

dengan aquades dengan perbandingan 1:1, entellan sebagai zat perekat gelas objek dengan

gelas penutup serta untuk menaikkan indeks bias sehingga memudahkan pengamatan di

bawah mikroskop.


Berikut adalah hasil dari pembuatan preparat yang didapat dalam pengamatan melalui

mikroskop dengan perbesaran 4x10.

Gambar 1. Preparat supravital dengan Gambar 2. Preparat supravital dengan

Pewarnaan Neutral Red Pewarnaan Janus Green


15/24

15

Prosedur pembuatan preparat supravital epithelium mukosa mulut ini sangat

sederhana. Secara singkat, langkah-langkah dalam pembuatan preparat supravital epithelium

mukosa mulut yaitu: pewarnaan dan penutupan. Setelah proses pengambilan jaringan,

epithelium mukosa mulut langsung diwarnai menggunakan zat warna supravital Janus Green

dan Neutral Red. Proses pewarnaan tidak diawali dengan proses fiksasi terlebih dahulu.

Pewarnaan ini merupakan pewarnaan tunggal, yaitu pewarnaan yang hanya menggunakan

satu macam zat warna saja. Setelah proses pewarnaan dan penutupan dengan gelas penutup,

preparat langsung diamati dengan menggunakan mikroskop. Setelah pengamatan, gelas

benda langsung dibersihkan.

Berdasarkan foto dan hasil pengamatan preparat sementara sel mukosa dengan

metode supravital dan pewarnaan Janus Green dapat diketahui bahwa ketika diamati dibawah

mikroskop sel-sel epitel terwarna biru dengan kontras. Nukleus sel epitel terwarna lebih kuat

menjadi lebih biru karena nukleus lebih mudah untuk menyerap warna. Sel jika di bawah

mikroskop ada yang memisah sendiri dan berkelompok serta ada yang bertumpuk. Hal ini

terjadi karena saat mengoleskan sediaan dari ujung skalpel tidak merata dan kemungkinan

pemberian zat warna yang terlalu berlebih juga mempengaruhi letak sel dalam preparat

sediaan ini. Sel epitel yang terlihat berbentuk pipih. Inti sel tidek terlihat jelas karena ketika

mengamati perbesaran yang digunakan 4x10. Sebenarnya sel epitel mukosa mulut berbentukpipih berlapis, tetapi pada preparat tidak terlihat. Pada preparat hanya terlihat sel pipih saja.

KESIMPULAN

Preparat supravital epithelium mukosa mulut merupakan preparat sementara. Secara

singkat, langkah-langkah dalam pembuatan preparat supravital epithelium mukosa mulut

yaitu: afiksing, pewarnaan, dan penutupan.

DAFTAR PUSTAKA

Suntoro, S. H, 1983,Metode Pewarnaan Histologi dan Histokimia. Bhratara Karya Aksara.

Jakarta.

Lesson C, et al. 1990.Mempersiapkan Jaringan dalam Buku Ajar Histologi. Edisi V. EGC.

Jakarta.

Khairul, M.D. 2001.Mikroteknik. University of Indonesia Press. Jakarta.


16/24

16

Pembuatan Preparat Apus Darah dengan Pewarnaan Giemsa, May Grunwald dan

Pappenheim

TUJUAN

Membuat preparat apus darah manusia dengan metode apus dan pewarnaan metode

Romanowski (Giemsa), May Grunwald, dan campuran.

LANDASAN TEORI

Darah merupakan suatu suspensi sel dan fragmen sitoplasma yang dapat dianggap

sebagai jaringan pengikat dalam arti luas, karena pada dasarnya terdiri atas unsur-unsur sel

dan substansi interseluler yang berbentuk plasma. Fungsi utama dari darah adalah

mengangkut oksigen yang diperlukan oleh sel-sel diseluruh tubuh. Darah juga menyuplai

jaringan tubuh dengan nutrisi, mengangkut zat-zat sisa metabolisme, dan mengandung

berbagai bahan penyusun sistem imun yang bertujuanmempertahankan tubuh dari berbagai

penyakit.

Sel darah pada umumnya dikenal ada tiga tipe yaitu: eritrosit, lekosit dan trombosit.

Eritrosit manusia dalam keadaan normal berbentuk cakram bulat bikonkaf dengan diameter

7,2 m tanpa inti, lebih dari separoh komposisi eritrosit terdiri dari air (60%) dan sisanya

berbentuk substansi koloidal padat. Sel ni bersifat elastis dan lunak. Leukosit (sel darah

putih) terdapat pada bagian pinggir sel darah, lekosit ini dibagi menjadi dua yaitu granulosit

dan agranulosit.

Untuk melihat struktur sel-sel darah dengan mikroskop cahaya pada umumnya dibuat

sediaan apus darah. Sediaan apus darah ini tidak hanya digunakan untuk mempelajari sel

darah tapi juga digunakan untuk menghitung perbandingan jumlah masing-masing sel darah.

Pembuatan preparat apus darah ini menggunakan suatu metode yang disebut metode oles

(metode smear) yang merupakan suatu sediaan dengan jalan mengoles atau membuat selaput

(film) dan substansi yang berupa cairan atau bukan cairan di atas gelas benda yang bersih dan

bebas lemak untuk kemudian difiksasi, diwarnai dan ditutup dengan gelas penutup (Suntoro,

1983).

Apus darah (sediaan oles) dapat diwarnai dengan berbagai macam metode termasuk

larutan-larutan yang sederhana antara lain: pewarnaan Giemsa, pewarnaan acid fast,

pewarnaan garam, pewarnaan wright, dan lain-lain. Pewarnaan Giemsa disebut juga

pewarnaan Romanowski. Metode pewarnaan ini banyak digunakan untuk mempelajari


17/24

17

morfologi sel-sel darah, sel-sel lien, sel-sel sumsum dan juga untuk mengidentifikasi parasit-

parasit darah misal Tripanosoma, Plasmodia dan lain-lain dari golongan protozoa.


Berikut adalah hasil pengamatan preparat apus darah dibawah mikroskop dengan

perbesaran 4x10.

Gambar 1. Apus darah menggunakan pewarna Gambar 2. Apus darah menggunakan

campuran pewarna Giemsa

Gambar 3. Apus darah dengan pewarna May Grunwald


18/24

18

PEMBAHASAN

Teknik yang digunakan dalam pembuatan preparat apus darah adalah teknik ulas.

Teknik ini memerlukan dua kaca preparat.teteskan darah pada salah satu kaca preparat dekat

bagian ujungnya, ujung kaca preparat lainnya menyentuh tetesan darah untuk kemudian

ditarik atau didorong dengan posisi 45 hingga darah tersebut rata pada permukaan kaca

preparat.penarikan atau pendorongan cukup sekali saja,untuk kemudiaan diwarnai, teknik

ulasan yang baik akan menghasilkan selapis selsel darah hingga memudahkan pengamatan.

Tahap persiapan pembuatan preparat apus darah yaitu, gelas benda A dibersihkan

dengan menggunakan alkohol yang diteteskan pada tissue. Tangan kiri dikibas-kibaskan

dengan telapak posisi telapak tangan kiri sejajar perut selama 20 detik, lalu ujung jari tengah

tangan kiri diurut selama 5 detik kemudian disterilkan dengan kapas yang dibasahi alkohol.

Blood lanset steril ditusukan pada ujung jari tengah tangan kiri tadi, tetes darah pertama

diusapkan pada kapas, tetes darah kedua ditempelkan pada sisi kanan jarak 1 cm gelas benda

A yang telah bebas lemak. Pengapusan darah dengan gelas benda B ditempelkan pada tetes

darah di gelas benda A sudutmya 45o, ditarik ke sisi kanan, lalu didorong ke sisi kiri cepat

dan konstan. Apusan darah dikeringkan diatas rak pewarnaan (10 menit).

Tahapan persiapan selesai jika apusan darah manusia sudah kering. Apusan darah

difiksasi dalam staining jar berisi metil alcohol dalam 1 celupan selama 3 detik. Apusan

darah dikeringkan pada rak pewarnaan datar dengan kipas angin sampai kering. Setelah

kering apusan darah diwarnai pada larutan dalam staining jar berisi zat warna Giemsa dalam

metil alkohol selama 3 detik dalam satu celupan. Apusan darah dikeringkan pada rak

pewarnaan dengan kipas angin. Apusan darah dicuci dengan air mengalir dalam botol leher

angsa yang telah dididihkan dan didinginkan kembali. Preparat apus darah manusia ditiriskan

pada rak miring dan dikeringkan. Dilabeli dengan kertas label sesuai identitas preparat pada

ujung gelas benda dengan posisi memanjang. Preparat apus darah diamati menggunakan

mikroskop pada perbesaran 4x10, difoto dan dianalisis hasilnya.

SIMPULAN

Dari hasil pengamatan dengan menggunakan metode apus pada darah manusia

menghasilkan preparat yang sudah bagus atau bisa juga dikatakan berhasil, hal tersebut dapat

dilihat dari hasil yang didapatkan bahwa terlihat sel darah merah karena hasil pewarnaannya

terlihat jelas sehingga dapat diamati dan dibedakan berdasarkan jenis pewarnanya.

DAFTAR PUSTAKA


19/24

19

Burkitt, H.G., B. Young dan J.W.Heath. (1993).Histologi Fungsional. Edisi 3.

Diterjemahkan oleh Jan Tambajong. Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.

Kimball. 1983.Biologi. Addison Wesley Publishing Company

Khairul, M.D. 2001.Mikroteknik. University of Indonesia Press. Jakarta


20/24


21/24

21


Berikut adalah hasil yang didapat dari pengamatan melalui mikroskop dengan

perbesaran 10x40

Gambar 1. Gambar 2.

Gambar 3.

Keterangan :

Gambar 1. Perwarnaan preparat dengan Hematoxylin

Gambar 2. Pewarnaan preparat dengan Eosin

Gambar 3. Pewarnaan preparat dengan pewarna campuran


22/24

22

Pada tahap ini terlebih dahulu ditentukan umur embrio ayam yang diinginkan yang

sebaiknya berumur 24 jam, 33 jam, dan 48 jam karena pada usia tersebut, embrio masih

cenderung mudah untuk diamati. Objek yang digunakan untuk sediaan, dalam hal ini embrio

ayam terlebih dahulu diinkubasi di dalam dalam inkubator pada suhu 39oC atau 103oF. Umur

embrio ditentukan mulai jam ke-0 setelah telur dikeluarkan oleh induk.

Larutan fiksatif yang digunakan berfungsi untuk mematikan sel-sel dalam jaringan

tanpa merusak bentuk dan struktur jaringan tersebut, melindungi jaringan dari larutan yang

diberikan selanjutnya, menunjukkan perubahan yang disebabkan oleh diferensiasi optik

karena pergantian indeks bias dan membuat sel-sel dalam jaringan keras.

Untuk pewarnaan embrio ayam digunakan hematoxylin. Larutan ini merupakan

larutan yang kuat dan harus diencerkan dengan aquadest dengan perbandingan 1:1 atau 1:2.

Pewarnaan ini menghasilkan warna biru setelah dicuci dengan air kran.

Setelah kita mendapatkan telur ayam dengan berbagai usia yang kita inginkan dan kita

rawat di dalam kondisi yang sesuai di dalam inkubator, maka langkah selanjutnya adalah

mendapatkan embrio ayam serta memberikan beberapa perlakuan untuk mendapatkan

sediaan embrio ayam yang bagus. Langkah awal yaitu menerawang telur dengan kotak lampu

untuk melihat apakah telur sudah memiliki embrio yang cukup besar untuk dijadikan preparat

whole mount, langkah selanjutnya adalah menghisap udara yang berada dalam telur dengan

cara melubangi bagian samping telur yang memiliki udara dan kemudian dihisap dengan alat

penghisap. Hal ini bertujuan untuk memisahkan massa telur dari dinding cangkang sehingga

memudahkan proses pemecahan cangkang telur. memecah telur ayam dengan hati-hati dan

memisahkan embrio ayam tersebut dari massa telur lainnya. Untuk memecah telur tersebut

digunakan gunting yang mata pisaunya bengkok dan dengan hati- hati memecah telur

tersebut. Kemudian meletakkan seluruh isi telur pada wadah yang berisi larutan fisiologis

(NaCl 0,9%) yaitu sampai sebagian massa telur dapat terendam pada suhu yang hangat untuk

proses pembersihan. Larutan fisiologis ini berfungsi untuk menjaga keadaan sel embrio agar

tetap hidup selama kita membersihkan embrio dari masa sel lain dan selaput- selaput yang

melindungi embrio. Sedangkan hangat garam fisiologis tersebut memberikan kondisi yang

sesuai untuk kehidupan embrio dan sama dengan suhu selama inkubasi. Dengan larutan

fisiologis tersebut, embrio akan terletak di bagian atas pada larutan, karena larutan garam

fisiologis menyerap masa sel lain seperti albumin dan kuning telur dan memudahkan kita

untuk memisahkan embrio dari masa telur tersebut.

Setelah embrio ayam cukup bersih dari masa telur yang lain kemudian dilanjutkan

dengan proses fiksasi dengan menggunakan larutan fiksatif pada embrio selama kurang lebih


23/24

23

20 menit. Fiksasi merupakan tahap permulaan yang penting dalam pembuatan sediaan.

Adapun tujuan fiksasi adalah untuk mematikan sel- sel dalam jaringan tanpa merusak bentuk

dan struktur- strukturnya, melindungi kehancuran dari larutan-larutan berikutnya dan

menunjukkan perubahan yang disebabkan oleh diferensiasi optik karena pengantian indeks

bisa serta membuat sel- sel dalam jaringan menjadi keras. Dengan adanya proses fiksatif ini

akan menudahkan kita untuk melakukan pewarnaan dan perlakuan lebih lanjut karena organ

tidak lunak lagi.

Setelah proses fiksasi embrio, selanjutnya embrio ayam tersebut dibersihkan dari sisa-

sisa selaput yang kemungkinan masih menempel pada embrio, seperti selaput vitellin dan

kuning telur yang masih tertinggal dengan dari pengguntingan dalam larutan aquades.

Kemudian merentangkan embrio ayam agar tidak ada bagian yang berkerut. Kemudian

membuat lubang pada kertas saring berukuran lebih besar dari embrio ayam kemudian

meletakkan kertas saring tersebut di atas embrio sehingga bagian kiri dan kanan serta sekitar

embrio menempel pada kertas saring. Proses selanjutnya dilanjutkan dengan fiksasi dengan

pikro-sulfat atau larutan Bouin selama 6 sampai 24 jam. Selanjutnya larutan fiksatif tersebut

dihilangkan dengan air mengalir hingga warna larutan fiksatif hilang.

Sebelum dilakukan pewarnaan terhadap embrio, sebelumnya dilakukan perendaman

terlebih dahulu dengan mennggunakan larutan alkohol 50%, 30% masing- masing 0,5 jam,

kemudian dilanjutkan dengan perendaman dengan larutan aquades selama 0,5 jam.

Perendaman ini bertujuan untuk proses rehidrasi sel-sel embrio ayam. Pewarnaan terhadap

embrio ayam menggunakan hematoxylin selama 1 malam. Dengan zat warna ini, maka

embrio akan terwarnai. Selanjutnya setelah pewarnaan makan dilanjutkan dengan

differensiasi untuk menampakkan anatomi tubuh embrio lebih jelas. Dalam pembuatan

sediaan embrio ayam ini, proses dehidrasi dilakukan dengan mennggunakan alkohol 70%.

Setelah ini warna pewarna dilunturkan dengan dengan pencucian menggunakan air kran

hingga warna menjadi biru.

Setelah pencucian, proses selanjutnya yaitu dehidrasi. Dehidrasi berarti pengambilan

air dari dalam jaringan. Tahap ini merupakan tahap yang penting setelah jaringan atau objek

mengalami fiksasi atau pencucian, karena larutan fiksatif dan larutan untuk pencucian banyak

mengandung air. Pengambilan air ini perlu, karena masih adanya air dalam jaringan

merupakan suatu penghalang bagi proses- proses selanjutnya. Untuk keperluan dehidrasi

pada umumnya dipergunakan alkohol dengan kadar bertingkat dari konsentrasi yang lebih

rendah berturut turut ke konsentrasi yang lebih tinggi. Dalam pembuatan sediaan embrio

ayam menggunakan 9 tingkatan konsentrasi yaitu 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%


24/24

Documents

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROTEKNIK HEWAN.docx