BAB IPENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Menurut bentuk dan struktur selnya makhluk hidup dibedakan menjadi dua yaitu makhluk hidup bersel banyak dan makhluk hidup bersel satu, makhluk ini tidak dapat terlihat dengan mata kita, karena panca indra manusia memiliki kemampuan daya pisah atau daya lihat yang sangat terbatas. Oleh karena itu banyak masalah mengenai benda atau organisme yang akan diamati dan pengamatan itu hanya bisa dilakukan dengan menggunakan alat bantu. Salah satu alat bantu yang sering digunakan dalam penelitian atau pengamatan tentang organisme yang tidak bisa dilihat dengan mata, terutama dalam bidang kedokteran dan biologi adalah mikroskop dalam (bahasa latin mikro diartikan kecil sedangkan scopium berarti penglihatan). Mikroskop sering digunakan untuk, meningkat kemampuan daya pisah atau lihat seseorang sehingga memungkinkan dapat mengamati obyek yang sangat halus dan tidak dapat terlihat oleh mata terbuka (Dwidjoseputro, 1984).

Morfologi suatu mikroba dapat diperiksa dalam keadaan hidup maupun mati.Pemeriksaan morfologi ini penting untuk mengenal nama bakteri, pengenalan sifat fisiologisnya yang kebanyakan merupakan faktor penentu dalam mengenal nama spesies. Bagian-bagian sel dapat dilihat dengan terlebih dahulu memberi warna dimana warna bisa bersifat asam, netral, maupun basa (Dwidjoseputro, 1984).Bakteri dapat digolongkan menjadi dua kelompok yaitu Gram positif dan Gram negatif didasarkan pada perbedaan struktur dinging sel. Pada umumnya bakteri gram negatif lebih tahan terhadap aktivitas antimikroba dibandingkan dengan bakteri gram positif. Perbedaan daya tahan ini disebabkan karena perbedaan komponen penyusun dinding sel (Rahayu, 2000). Bakteri Gram positif memiliki dinding sel yang terdiri dari 40 lapis rangka dasar murein, meliputi 30-70 % berat kering dinding sel bakteri. Murein adalah senyawa yang tersusun dari N-asetil glukosamin dan N-asetil asam muramat yang terikat oleh ikatan 1,4--glikosida. Senyawa lain penyusun dinding sel gram positif adalah polisakarida yang terikat secara kovalen, dan asam teikoat yang sangat spesifik. Sementara bakteri Gram negatif memiliki 1 lapis rangka dasar murein, dan hanya meliputi + 10% dari berat kering dinding sel. Murein hanya mengandung diaminopemelat, dan tidak mengandung lisin. Di luar rangka murein tersebut terdapat sejumlah besar lipoprotein, lipopolisakarida, dan lipida jenis lain. Senyawa-senyawa ini merupakan 80 % penyusun dinding sel. Asam teikoat tidak terdapat dalam dinding sel ini (Sumarsih, 2003).Kapang merupakan mikroba yang tergolong dalam fungi, organisme lainnya yang termasuk dalam fungi adalah khamir dan jamur (Lay, 1994). Menurut Pelczar (1958) bagian terbesar suatu kapang secara potensial mampu untuk tumbuh dan berkenbang biak. Inokulasi fragmen yang kecil sekali pada medium sudah cukup untuk memulai individu baru. Hal ini diperoleh dengan menanamkan inokulan pada agar dengan bantuan jamur transfer, suatu cara yang sama dilakukan untuk bakteri. Perbedaannya adalah jamur yang dipakai untuk kapang itu lebih kaku dengan ujung pipet agar dapat memotong amilum.Ukuran sel khamir (Yeast) lebih besar daripada kebanyakan bakteri, tetapi khamir yang terkecil tidak sebesar bakteri yang paling besar, khamir sangat beragam ukurannya yaitu berkisar antara 1-5 m dengan lebar dan panjang antara 5-30 m atau lebih. Diameter bagian bakteri yang terkenal kurang lebih 42 m. Ukuran bakteri prokariot sangat jarang yang mampu mencapai ukuran tersebut. Walaupun ukuran bakteri sangat kecil, namun dapat diukur dengan relatif mudah dan tepat. Untuk tujuan ini, mikroskop dilengkapi dengan mikrometer okuler. Suatu piringan yang di ukir dengan garis-garis berjarak sama. Jarak antara garis-garis tersebut ditentukan sebelumnya dengan berpedomankan mikrometer pentas, suatu alat yang berfungsi sebagai mistar pada kerja mikroskopik. Pemeriksaan bakteri melalui mikroskop okuler akan menampakan garis-garis yang sudah diketahui ukurannya di atas mikroorganisme yang diperiksa, sehingga panjang dan lebar sel dapat di tentukan dengan mudah (Pelczar and Chan, 1958).Pengukuran sel jasad renik tidak dapat dilakukan secara langsung seperti mengukur benda dengan meteran, tetapi harus menggunakan mikroskop yang dilengkapi dengan mikrometer. Pengukuran diameter, panjang dan lebar suatu jasad renik akan diperoleh volume atau berat sel (Suryawina, 1986)1. Rhizopus

Rhizopus sering diebut kapangoti karena sering tumbuh dan menyebabkan kerusakan pada roti. Selain itu kapang ini jugatumbuh pada sayuran, dan buah-buahan. Spesies rhizopus yang umum ditemukan pada roti yaitu rhizopus stoloniferdan Rhizopus nigricans. Selain merusak makanan sebagian Rhizopus diguaka untuk beberapa makanan fermentasi tradisional seperti, Rhizopus oligosporus dan Rhzopus orizaeyang digunakan dalam pembuatan berbagai macam tempedan oncom hitam.Ciri-ciri Rhizopus adalah: (1) Hifa nonseptat, (2) mempunyai stolon dan rhizoid yang wananya gelap jik sudah tua, (3) Sporangiopora tumbuh pada noda dimana terbentuk juga rhizoid, (4) sporangia biasanya besar dan berwarna hitam, (5) kolumela agak bulat dan apofisisberbentuk seerti cangkir, (6) tidak mempunyai sporangiola, (7) pertumbuhannya cepat, membentuk miselium seperti kapas, (8) Pertumbuhannya seksual dengan membentuk Zigospora, (9) kapang bersifat heterotalik, dimana repoduksi seksual membutuhkan dua talus yang berbeda.2. Sacharomyces

Dari segi warna, yeast yang juga sangat berperan dalam proses fermentasi alkohol ini mempunyai warna putih kekuningan yang dapat dilihat diatas permukaan tumbuh koloni, sehingga tidak seperti khamir lainnya yang seringkali tidak terlihat dibawah miskroskop karena tidak kontras dengan mediumnya. Penampilan makroskopisnya yaitu bentuk koloni yang bulat, warna yang kuning muda-keputihan, permukaan berkilau, licin, tekstur lunak dan memiliki sel bulat dengan askopora 1-8 buah5. Dilihat dari dinding selnya,S.Cerevisiaememiliki dinding sel yang mengandung a-D-Glukan, kitin, dan manoprotein. Dinding selnya ini diketahui mempunyai 3 lapisan, yaitu lapisan dalamalkali in-soluble(30-35%), lapisan tengahalkali-soluble a glukan(20-22%), serta lapisan luar adalah glikoprotein(30%) yaitu suatu karbohidrat yang tersusun dari manan yang terfosforilasi.

1. Bakteri gram-positif Bakteri gram-positif memiliki dinding sel yang lebih sederhana, banyak mengandung peptidoglikan. Misalnya bakteri Micrococcus, Staphylococcus, Leuconostoc, Pediococcus dan Aerococcus. Bacillus sp

Bentuk selnya batang, diameter koloni berkisar 0,5-2 m. koloni muncul di atas permukaan media NA. warna koloni kuning. Termasuk ke dalam gram positif. Motil, katalase negatif, dapat tumbuh pada media yang diberi 5 % NaCL, tidak dapat tumbuh pada 500C, sitrat negatif, glukosa positif. Suhu optimum untuk pertumbuhannya 26-280C. dapat tumbuh pada kondisi aerobik dan anaerobik.2. Bakteri gram-negatif Bakteri gram-negatif memiliki dinding sel yang lebih kompleks, kandungan peptidoglikan lebih sedikit. Misalnya bakteri Escherichia, Citrobacter, Salmonella, Shigella, Enterobacter, Vibrio, Aeromonas, Photobacterium, Chromabacterium, Flavobacterium. Escherichia coli

Bentuk sel batang. Diameter koloni 1,1-1,5 x 2-6 m. koloni muncul di atas permukaan media NA. koloni bakteri berwarna putih susu. Termasuk ke dalam bakteri gram negatif. Temasuk ke dalam anaerob fakultatif. Suhu optimal pertumbuhan adalah 370C. oksidasi negatif, katalase positif, motil.

PEWARNAAN GRAM : Pada saat pemberian larutan cat kristal violet, bakteri gram positif dan negatif sama-sama berwarna ungu. Saat ditetesi iodin, pada gram positif terbentuk kompleks iodin kristal violet sehingga sel berwarna biru, demikian juga gram negatif. Namun setelah pencucian dengan etanol warna ungu yang diikat oleh bakteri gram NEGATIF luntur, sedangkan pada bakteri gram POSITIF tidak.

PEWARNAAN GRAM : Pada gram negatif lemak terekstraksi dari dinding sel sehingga pori membesar dan kompleks violet kristal- iodin keluar sel, sedangkan pada gram positif dinding sel dehidrasi, pori berkerut dan permeabilitas rendah sehingga kompleks violet kristal-iodin terperangkap antara dinding sel dan membran sitoplasm sehingga sel tetap biru/ungu. Saat penambahan safranin, bakteri gram negatif mengikatnya sedangkan gram positif melewatkannya.

2.1 Maksud dan TujuanDengan adanya praktikum ini, diharapkan mahasiswa mampu :1. Mengetahui dan memahamai tentang mikroorganisme.2. Memahami karakteristik dari kapang dan pengaruhnya terhadap kehidupan manusia dalam keseharian.3. Memahami karakteristik dari khamir dan pengaruhnya terhadap kehidupan manusia dalam keseharian.4. Memahami karakteristik dari bakteri dan pengaruhnya terhadap kehidupan manusia dalam keseharian.

1.1 Waktu dan TempatPraktikum pengaruh Faktor lingkunagan terhadap pertumbuhan mikroorganisme berlangsung pada hari senin tanggal 03 November 2014 dari jam 14.30 - 16.00 di laboratorium Mikrobiologi Pangan AkademiGizi Surabaya.

BAB IIMETODELOGI

2.1 Pendinginan dan pembekuanAlat dan FungsiNoNama AlatJumlahFungsi

1Mikroskop cahaya1untuk mengamati morfologi kapang, khamir, dan bakteri

2Pipet tetes2untuk memindahkan cairan tertentu.

3Gelas objek dan kaca penutup3Untuk meletakkan kapang, khamir, dan bakteri yang akan diamati pada mikroskop.

4Jarum ose3Untuk mengambil sampel

Bahan dan FungsiNoNama BahanJumlahFungsi

1Biakan kapang (Rhizopus)khamir (saccharomyces)bakteri (Bacilus dan E. Coli)Biakkan dalam 1 tabung reaksiSampel

2Alkohol 70%10 mlUntuk sterilisasi alat

3Larutan lactofenol2 tetesMencegah penguapan dan pengerutan sel sehingga mudah diamati

4Metilen blue2 tetesSebagai pewarna sel sehingga mudah diamati

5Larutan A (Kristal violet)2 tetesMemberikan warna sehingga sama-sama berwarna ungu

6Air steril10 mlUntuk mencuci bakteri saat pengecatan gram

7Larutan B (Iodine)2 tetesPewrna mordan untuk memperkuat pengikatan warna oleh bakteri

8Larutan C (Alkohol aseton)2 tetesMembilas atau melunturkan kelebihan zat warna pada sel bakteri

9Larutan D (Safranin red)2 tetesMewarnai kembali sel-sel yang telah kehilangan pewarna utama setelah perlakuan dengan alcohol

10Kertas hisapsckpnyaUntuk mengeringkan pada saat pencucian pengecatan gram.

2.1 Diagram Alir Cara KerjaA. Morfologi kapangGelas objek + kaca penutup

di bersihkan dengan alcohol 70 %

di tetesi larutan lactofenol 2 tetes

diambil bahan dengan jarum ose

di letakkan diatas tetesan lactofenol (ratakan)

di tutup dengan kaca penutup (tidak ada gelembung udara)

diamati dengan mikroskop pembesaran 100x, 400x

diamati dan catat hasil

B. KhamirGelas objek + kaca penutup

di bersihkan dengan alcohol 70 %

di tetesi larutan metilen blue 2 tetes

diambil bahan dengan jarum ose

di letakkan diatas tetesan lactofenol (ratakan)

di tutup dengan kaca penutup (tidak ada gelembung udara)

diamati dengan mikroskop pembesaran 100x, 400x

diamati dan catat hasil

B. Pengecatan sederhanapreparat

diolesi bakteri

di tetesi larutan A (Kristal violet) 2 tetes

diamkan selama 1 menit

di cuci dengan air steril

di keringkan dengan kertas hisap

di tetesi larutan B (Iodine) 2 tetes

diamkan selama 1 menit

di cuci dengan air steril

di keringkan dengan kertas hisap

di tetesi larutan C (Alkohol aseton) 2 tetes

diamkan selama 1 menit

di cuci dengan air steril

di keringkan dengan kertas hisap

di tetesi larutan D (Safranin red) 2 tetes

diamkan selama 1 menit

di cuci dengan air steril

di keringkan dengan kertas hisap

diamati dengan mikroskop pembesaran 1000x

diamati dan catat hasil

BAB IIIPEMBAHASAN

3.1 Analisa ProsedurMorfologi Kapang dan Khamira. Gelas objek kaca penutup di bersihkan dengan alcohol 70 % untuk mensterilkan sehingga tidak ada mikroorganisme lain.b. Di tetesi 2 tetes larutan lactofenol untuk kapang agar tidak terjadi penguapan dan pengerutan sel saat diamati. Di tetesi 2 tetes larutan metilen blue untuk khamir untuk pemberi warna sehingga sel mudah diamati.c. Pengambilan bahan dengan jarum ose agar tidak terkontaminasi dengan lingkungand. di letakkan diatas tetesan lactofenol (kapang) dan metilen blue (khamir) dan di tutup dengan kaca penutup (tidak ada gelembung udara, kemudian diamati dengan mikroskop pembesaran 100x, 400x untuk mendapatkan hasil morfologi kapang dan khamir.

Pengecatan sederhanaa. Preparat yang steril diolesi bakteri.b. Di tetesi larutan A (Kristal violet) 2 tetes untuk memberikan warna mikroorganisme target.c. Diamkan selama 1 menit agar cat melekat sempurna pada dinding bakteri.d. Di cuci dengan air steril dan di keringkan dengan kertas hisapuntuk membuang kelebihan zat warna.e. Di tetesi larutan B (Iodine) 2 tetes untuk memperkuat pengikatan warna oleh bakteri.f. Diamkan selama 1 menit agar pengikatan warna oleh bakteri lebihh kuat.g. Di cuci dengan air steril dan di keringkan dengan kertas hisapuntuk membuang kelebihan zat warna.h. Di tetesi larutan C (Alkohol aseton) 2 tetes untuk membilas atau melunturkan kelebihan zat warna pada sel bakteri sehingga di dapat 2 kemungkinan : bakteri akan tetap berwarna ungu atau bakteri menjadi tidak berwarna.i. Diamkan selama 1 menit agar zat warna dapat luntur secara sempurna dan tidak ada yang tersisa.j. Di cuci dengan air steril dan di keringkan dengan kertas hisapuntuk membuang kelebihan zat warna.k. Di tetesi larutan D (Safranin red) 2 tetes untuk mewarnai kembali sel-sel yang telah kehilangan pewarna utama setelah perlakuan dengan alcohol (member warna pada mikroorganisme non target).l. Di cuci dengan air steril dan di keringkan dengan kertas hisapuntuk membuang kelebihan zat warna.m. Diamati dengan mikroskop pembesaran 1000x untuk mengamati morfologi bakteri baik gram positif maupun negative.

n.

3.2 Analisa HasilHasil percobaanJENISGAMBARKARAKTERISTIK

A. KAPANG Rhizopus oryzaebentuk koloni yang agak bulat, warna yang gelap

B. KHAMIR Saccharomyces cerevisiae

bentuk koloni yang bulat, warna yang biru, permukaan berkilau dan memiliki sel bulat

C. BAKTERI Escherichia coli

bentuk koloni yang seperti batang, warna yang ungu, permukaan berkilau

Bacillus subtilisbentuk koloni yang batang, warna yang kuning muda-keputihan, permukaan berkilau

Pembahasan :1. Kapang (Rhizopus oryzae)Berdasarkan hasil pengamatan mikroskop dengan pembesaran 100x dan 400x di dapatkan hasil karakteristik kapang yakni, bentuk koloni yang agak bulat dan warna yang gelap. Ciri-ciri Rhizopus adalah: (1) Hifa nonseptat, (2) mempunyai stolon dan rhizoid yang wananya gelap jik sudah tua, (3) Sporangiopora tumbuh pada noda dimana terbentuk juga rhizoid, (4) sporangia biasanya besar dan berwarna hitam, (5) kolumela agak bulat dan apofisisberbentuk seerti cangkir, (6) tidak mempunyai sporangiola, (7) pertumbuhannya cepat, membentuk miselium seperti kapas, (8) Pertumbuhannya seksual dengan membentuk Zigospora, (9) kapang bersifat heterotalik, dimana repoduksi seksual membutuhkan dua talus yang berbeda.Pada pengamatan tidak terlihat serabut-serabut Hifa, hal dapat disebabkan karena pada saat proses pengambilan dan peletakkan sampel (kapang) dalam keadaan yang menggumpal atau tidak rata, sehingga sampel masih dalam keadaan yang berkoloni besar.2. Khamir (Saccharomyces cerevisiae)Berdasarkan hasil pengamatan mikroskop dengan pembesaran 100x dan 400x di dapatkan hasil karakteristik khamir yakni, bentuk koloni yang bulat, warna yang biru cerah, permukaan berkilau dan memiliki sel bulat. Dari segi warna, yeast ini mempunyai warna putih kekuningan yang dapat dilihat diatas permukaan tumbuh koloni, sehingga tidak seperti khamir lainnya yang seringkali tidak terlihat dibawah miskroskop karena tidak kontras dengan mediumnya. Penampilan makroskopisnya yaitu bentuk koloni yang bulat, warna yang kuning muda-keputihan, permukaan berkilau, licin, tekstur lunak dan memiliki sel bulat dengan askopora 1-8 buah5.Pada pengamatan di dapatkan hasil warna biru, hal ini dapat disebabkan karena pada saat proses pengamatan sebelumnya gelas objek telah diberi larutan metilen blue yang berfungsi untuk member warna agar lebih mudah diamati.3. Pengecatan gramA. Bakteri gram positif (Bacillus subtilis)Berdasarkan hasil pengamatan mikroskop dengan pembesaran 1000x di dapatkan hasil karakteristik bacillus yakni, bentuk koloni yang batang, warna yang kuning muda-keputihan. Karakteristik, bentuk selnya batang, diameter koloni berkisar 0,5-2 m. koloni muncul di atas permukaan media NA. warna koloni kuning.Pada saat pemberian larutan cat kristal violet, bakteri gram positif dan negatif sama-sama berwarna ungu. Saat ditetesi iodin, pada gram positif terbentuk kompleks iodin kristal violet sehingga sel berwarna biru, demikian juga gram negatif. Namun setelah pencucian dengan etanol warna ungu yang diikat oleh bakteri gram POSITIF tidak luntur. Pada gram positif dinding sel dehidrasi, pori berkerut dan permeabilitas rendah sehingga kompleks violet kristal-iodin terperangkap antara dinding sel dan membran sitoplasm sehingga sel tetap biru/ungu. Saat penambahan safranin gram positif melewatkannya.

B. Bakteri gram negatif (Escherichia coli)Berdasarkan hasil pengamatan mikroskop dengan pembesaran 1000x di dapatkan hasil karakteristik yakni, bentuk koloni yang batang, warna yang keunguan. Karakteristik, bentuk sel batang. Diameter koloni 1,1-1,5 x 2-6 m. koloni muncul di atas permukaan media NA. koloni bakteri berwarna putih susu.Pada saat pemberian larutan cat kristal violet, bakteri gram positif dan negatif sama-sama berwarna ungu. Saat ditetesi iodin, pada gram positif terbentuk kompleks iodin kristal violet sehingga sel berwarna biru, demikian juga gram negatif. Namun setelah pencucian dengan etanol warna ungu yang diikat oleh bakteri gram NEGATIF luntur. Pada gram negatif lemak terekstraksi dari dinding sel sehingga pori membesar dan kompleks violet kristal- iodin keluar sel. Saat penambahan safranin, bakteri gram negatif sehingga terdapat warna ungu pada saat pengamatan.

BAB IVPENUTUP

4.1 Kesimpulan1. Kapang (Rhizopus oryzae)Karakteristik kapang yakni, bentuk koloni yang agak bulat dan warna yang gelap.

2. Khamir (Saccharomyces cerevisiae)karakteristik khamir yakni, bentuk koloni yang bulat, warna yangbiru cerah, permukaan berkilau dan memiliki sel bulat.

3. Pengecatan gramA. Bakteri gram positif (Bacillus subtilis)Berdasarkan hasil pengamatan mikroskop dengan pembesaran 1000x di dapatkan hasil karakteristik bacillus yakni, bentuk koloni yang batang, warna yang kuning muda-keputihan. Pada akhir proses pengecatan gram menghasilkan warna tetap kekuningan.B. Bakteri gram negatif (Escherichia coli)Berdasarkan hasil pengamatan mikroskop dengan pembesaran 1000x di dapatkan hasil karakteristik yakni, bentuk koloni yang batang, warna yang keunguan. Pada akhir proses pengecatan gram menghasilkan warna menjadi keunguan.

4.2 SaranPengamatan morfologi kapang diperlukan larutan lactofenol agar sel tidak menguap dan mengerut sehingga mudah diamati, Sedangkan untuk pengamatan morfologi khamir diperlukan larutan metilen blue untuk member warna pada sel sehingga mudah diamati. Pada proses pengecatan gram dilakukan dengan hati-hati sehingga meminimalisir kesalahan akibat zat warna.

Supardi, imam. 1999. Mikrobiologi Dalam Pengolahan Dan Keamanan Pangan. Bandung: Alumni.BambangHariyono, dkk. 2014. ModulPraktikumMikrobiologiPangan. Surabaya: AkademiGizi Surabaya.Sri, hastuti. 2012. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi. Malang: UMM Press.http://www.oseanografi.lipi.go.id/sites/default/files/oseana_xxv(1)31-41.pdfhttp://repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/21773/1/Appendix.pdfhttps://www.academia.edu/5030128/Mikrobiologi_Umum_-_Perbedaan_Kapang_dan_Khamir

https://www.academia.edu/attachments/34549971/download_file?st=MTQxNDY3NTA0MiwxMTIuMjE1LjYzLjIwMiw5ODIxNDcz&s=work_strip&ct=MTQxNDY3NTA0MiwxNDE0Njc1MDQ1LDk4MjE0NzM=

https://apikdewefppundip2011.wordpress.com/2012/06/29/makalah-mikrobiologi-mikroorganisme-dalam-makanan/

http://www.slideshare.net/titissari/7-perbedaan-gram-positif-dan-gram-negatif

20