Laporan Uji Sensivitar Mikroorganisme Terhadap Antibiotika

1Uji Sensivitas Antibiotika

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Mikroorganisme adalah makhluk yang sangat kecil

dan hanya dapat dilihat dibawah mikroskop.Salah satu

jenis mikroorganisme adalah bakteri. Bakteri merupakan

organisme uniselular yang tumbuh dengan cara

pembelahan biner yaitu satu sel membelah secara

simetris. Untuk mempermudah penghitungan koloni

diperlukan pengetahuan mengenai morfologi bakteri

tersebut sehingga media pertumbuhan yang akan

digunakan sesuai dengan sifat bakteri tersebut.

Antibakteri adalah zat yang dapat mengganggu

pertumbuhan atau bahkan mematikan bakteri dengan cara

mengganggu metabolisme mikroba yang merugikan.

Mikroorganisme dapat menyebabkan bahaya karena

kemampuan menginfeksi dan menimbulkan penyakit serta

merusak bahan pangan. Antibakteri termasuk kedalam

antimikroba yang digunakan untuk menghambat

pertumbuhan bakteri.

Antibiotik ialah zat yang dihasilkan oleh suatu

mikroba, terutama fungi, yang dapat menghambat atau

Ismar Wulan Nur Af’idah Anas O1A1 14 017

http://id.wikipedia.org/wiki/Bakteri

http://id.wikipedia.org/wiki/Penyakit

http://id.wikipedia.org/wiki/Mikroba

http://id.wikipedia.org/wiki/Metabolisme

http://id.wikipedia.org/wiki/Bakteri


dapat membasmi mikroba jenis lain. Banyak antibiotik

dewasa ini dibuat secara semisintetik atau sintetik penuh.

Namun dalam praktek sehari-hari AM (Anti Mikroba)

sintetik yang tidak diturunkan dari produk mikroba

(misalnya sulfonamida dan kuinolon) juga sering

digolongkan sebagai antibiotik.

B. Maksud Percobaan

Maksud dari percobaan ini adalah untuk mengetahui

hasil dari uji sensitivitas antimikroba terhadap kadar

hambat pada obat antibiotik yang memiliki potensi sebagai

antimikroba.

C. Tujuan Percobaan

Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mengetahui

uji sensitivitas antimikroba melalui uji kadar hambat

antimikroba.

D. Prinsip Percobaan

Prinsip dari percobaan ini adalah melakukan uji

sensitivitas dan uji kadar hambat terhadap bakteri dengan

menggunakan obat antibiotik yang berpotensi sebagai

antimikroba.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA



A. Teori Umum

Antibiotik merupakan golongan obat yang paling

banyak digunakan di dunia terkait dengan banyaknya

kejadian infeksi bakteri. Di negara berkembang 30-80%

penderita yang dirawat di rumah sakit mendapat antibiotik.

Dari persentase tersebut 20-65% penggunaannya

dianggap tidak tepat. Penggunaan antibiotik yang tidak

tepat dapat menimbulkan masalah resistensi dan efek obat

yang tidak dikehendaki (Wijawa dkk., 2013).

Secara garis besar antimikroba dibagi menjadi dua

jenis yaitu yang membunuh kuman (bakterisid) dan yang

hanya menghambat pertumbuhan kuman (bakteriostatik).

Antibiotik yang termasuk golongan bakterisid antara lain

penisilin, sefalosporin, aminoglikosida (dosis besar),

kotrimoksazol, rifampisin, isoniazid dan lain-lain.

Sedangkan antibiotik yang memiliki sifat bakteriostatik,

dimana penggunaanya tergantung status imunologi pasien,

antara lain sulfonamida, tetrasiklin, kloramfenikol,

eritromisin, trimetropim, linkomisin, klindamisin, asam

paraaminosalisilat, dan lain-lain (Rahayu, 2012).

Terjadinya resistensi kuman terhadap antibiotik,

karena kuman sering terpapar oleh antibiotik yang

nantinya akan menyebabkan kuman akan mempunyai



kemampuan untuk mencegah pengaruh antibiotik dengan

jalan membentuk selaput sel yang dapat menghambat

masuknya antibiotik ke dalam sel kuman. Oleh karena itu

agar pengobatan dapat berhasil perlu dilakukan pemilihan

antibiotika yang tepat. Pemilihan antibiotika yang tepat

harus dilakukan pemeriksaan uji kepekaan kuman

terhadap antibiotik yang akan digunakan (Bagus dkk.,

2012).

Pemberian antibiotik yang tidak memenuhi dosis

regimen dapat meningkatkan resistensi antibiotik. Jika

resistensi antibiotik tidak terdeteksi dan tetap bersifat

patogen maka akan terjadi penyakit yang merupakan

ulangan dan menjadi sulit disembuhkan (Nugroho dkk.,

2011).

Pemberian antibiotik yang berlebihan merupakan

faktor resiko yang akan membuat bakteri mengalami

mutasi dan menjadi resisten (Methicillin Resistant

Staphylococcus Aureus). Menurut Peleg dan Hooper (2010)

terdapat beberapa mekanisme resistensi antibiotika dari

bakteri Gram negatif yang digunakan sebagai perlawanan

terhadap antibiotik. Mekanisme tersebut adalah resistensi

melalui penutupan celah atau pori (loss of porins) pada

dinding sel bakteri sehingga menunjukkan jumlah obat



yang melintasi membaran sel, peningkatan produksi

betalaktamase dalam periplasmik sehingga merusak

struktur betalaktam, peningkatan aktivasi pompa keluaran

(efflus pump) dalam trans membrane, sehingga bakteri

akan membawa obat keluar sebelum memberikan efek,

modifikasi enzim-enzim, sehingga antibiotika tidak dapat

berinteraksi dengan tempat target, mutasi tempat target

sehingga menghambat bergabungnya antibiotik dengan

tempat aksi, modifikasi atau mutasi ribosomal sehingga

mencegah bergabungnya antibiotik yang menghambat

sintesis protein bakteri, mekanisme langsung terhadap

metabolik (metabolic bypass mechanism), yang

merupakan enzim alternative untuk melintasi efek

penghambatan antibiotik (Fauziah, 2012).

Dimana penggunaan antibiotik yang berlebih atau

tidak terkendali menyebabkan efek samping yang

berbahaya bagi manusia itu sendiri, yang menyebabkan

bakteri-bakteri tertentu resisten terhadap antibiotik

(Anggraini dkk., 2013).

Staphylococcus aureus ditemukan paling banyak

resisten terhadap ampicillin (24,5%) clan cefotaxime

(25,5%). Hal ini disebabkan oleh kemampuan

Staphylococcus aureus untuk membentuk enzim



penisilinase yang resisten terhadap ampicillin clan

cefotaxime. Ampicillin merupakan golongan penisilin yang

cenderung resisten terhadap kuman Staphylococcus

aurous (Kahuripan dkk., 2009).

B. Uraian Bahan

1. Agar (Ditjen POM, 1995 : Hal. 69)

Nama resmi : Agar

Nama lain : Agar-agar

Pemerian : Tidak berbau atau bau lemah, berasa

musilago pada lidah.

Kelarutan : Tidak larut dalam air dingin, dan larut

dalam air mendidih.

Kegunaan : Sebagai bahan pemadat medium.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik.

2. Alkohol (Ditjen POM, 1979 : Hal. 65)

Nama resmi : Aethanolum

Nama lain : Etanol, Alkohol

RM : C2H6O

Pemerian : Cairan tak berwarna, jernih, mudah

menguap dan mudah bergerak; bau khas;

rasa panas. Mudah terbakar dengan

memberikan nyala biru yang tidak

berasap.



Kelarutan : sangat mudag larut dalam air, dalam

kloroform P dan dalam eter P.

Kegunaan : Antiseptikum

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat, terlindung

dari cahaya; di tempat sejuk, jauh dari

nyala api.

3. Beef Extract (Ditjen POM Edisi IV,1995: Hal 1152).

Nama resmi : beef extract

Nama lain : kaldu nabati, kaldu hewani, ekstrak daging

Pemerian : berbau dan berasa pada lidah. Kaldu

daging sapi konsentrat diperoleh dengan

mengekstraksi daging sapi segar tanpa

lemak, dengn cara merebus dalam air dan

menguapkan kaldu pada suhu rendah

dalam hampa udara sampai terbentuk

residu kental berbentuk pasta. Massa

berbentuk pasta, berwarna coklat

kekuningan sampai coklat tua, bau dan

rasa seperti daging, sedikit asam.

Kelarutan : larut dalam air dingin

Kegunaan : sumber protein untuk pertumbuhan

mikroorganisme



Penyimpanan : simpan dalam wadah tertutup rapat, tidak

tembus cahaya.

4. Natrium klorida(Ditjen POM Edisi IV,1995:Hal 584).

Nama Resmi : natrii chloridum

Nama Lain : natrium klorida

RM/BM : NaCl/58,44

Pemerian : hablur putih, berbentuk kubus atau

berbentuk prisma, tidak berbau, rasa asin,

mantap diudara

Kelarutan : sangat mudah larut dalam air

Penyimpanan : dalam wadah tertutup rapat

Kegunaan : sebagai sampel

5. Yeast Extract(Ditjen POM Edisi III,1995:Hal 1153).

Nama resmi : yeast extract

Sinonim : sari ragi, ekstrak ragi

Pemerian : serbuk; kuning kemerahan sampai coklat,

bau khas tidak busuk

Kelarutan : larut dalam air, membentuk larutan kuning

sampai coklat, bereaksi asam lemah.

Penyimpanan : Dalam wadah tertrutup baik

6. Aquadest (Ditjen POM Edisi IV, 1995 : Hal. 1125).

Nama resmi : aqua destillata

Nama lain : air suling



RM / BM : H2O / 18,02

Pemerian : cairan jernih, tidak berwarna, tidak berbau,

tidak berasa

Kegunaan : sebagai sumber nutrien mikroba dan

pelarut medium

Penyimpanan : dalam wadah tertutup baik.

7. Pepton (Ditjen POM Edisi IV, 1995 : Hal 1191).

Nama resmi : pepton

Nama lain : pepton

Pemerian : serbuk, kuning kemerahan sampai coklat,

bau kha tidak busuk.

Kelarutan : larut dalam air, memberikan larutan

berwarna coklat kekuningan yang bereaksi

asam

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik.

Kegunaan : Sebagai komponen pembuat medium PDA

C. Uraian Mikroba

1. Pseudomonas aeruginosa

a. Klasifikasi

Kingdom : Bacteria

Filum : Proteobacteria

Kelas : Gamma Proteobacteria

Ordo : Pseudomonadales



Famili: Pseudomonadaceae

Genus : Pseudomonas

Spesie : Pseudomonas aeruginosa

b. Morfologi

Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri

gram negatif aerob obligat, berkapsul, mempunyai

flagella polar sehingga bakteri ini bersifat motil,

berukuran sekitar 0,5-1,0 µm. Bakteri aerob ini

mensekresikan beberapa jenis pigmen, di antaranya

pyocyanin (hijau-biru), fluorescein (kuning-hijau) dan

pyorubin (merah-cokelat). Bakteri ini dapat tumbuh

tanpa oksigen jika tersedia NO3 sebagai akseptor

elektron. Pseudomonas aeruginosa mampu tumbuh

di lingkungan yang mengandung oli dan bahan bakar

minyak lainnya. Suhu optimum untuk pertumbuhan

Pseudomonas aeruginosa adalah 42oC. Pseudomonas

aeruginosa mudah tumbuh pada berbagai media

pembiakan karena kebutuhan nutrisinya sangat

sederhana

2. Staphylococcus aureus

a. Klasifikasi

Kingdom : Monera

Divisio : Firmicutes



Class : Bacilli

Order : Bacillales

Family : Staphylococcaceae

Genus : Staphilococcus

Species : Staphilococcus aureus

b. Morfologi

Staphylococcus aureus merupakan bakteri

Gram Positif, tidak bergerak, tidak berspora dan

mampu membentuk kapsul. Berbentuk kokus dan

tersusun seperti buah anggur . Ukuran

Staphylococcus berbeda-beda tergantung pada

media pertumbuhannya. Apabila ditumbuhkan pada

media agar, Staphylococcus memiliki diameter 0,5-

1,0 mm dengan koloni berwarna kuning. Dinding

selnya mengandung asam teikoat, yaitu sekitar 40%

dari berat kering dinding selnya. Asam teikoat adalah

beberapa kelompok antigen dari Staphylococcus.

Asam teikoat mengandung aglutinogen dan N-

asetilglukosamin.



BAB III

METODE PERCOBAAN

A. Alat dan Bahan

1. Alat

Alat yang digunakan dalam praktikum

Perhitungan Kuantitas Mikroorganisme ini adalah :

a. Bunsen



b. Cawan petri

c. Inkubator

d. Mikro pipet

e. Pinset

f. Pipet tetes

g. Timbangan analitik

2. Bahan

Bahan yang digunakan dalam praktikum

Perhitungan Kuantitas Mikrooganisme ini adalah :

a. Ampisilin

b. Cefadroxil

c. Ciprofloxacin

d. Eritromicyn

e. Kloramfenikol

f. Medium NA

g. Medium NB

h. Ofloxacin

B. Cara Kerja

1. Suspensi Bakteri S. Aureus

a. Disiapkan alat dan bahan

b. Dinyalakan lampu spiritus



c. Diambil 1-2 ose bakteri S. Aureus dalam tabung

reaksi

d. Dihomogenkan dengan Vorteks

e. Ditaruh didalam kuvet

f. Diulangi langkah diatas pada bakteri P. A

2. NaCl Fisiologi

a. Diambil secukupnya

b. Dimasukkan kultur bakteri SA kedalam tabung

reaksi

c. Dihomogenkan dengan vortels

d. Dimasukkan kedalam kuvet suspensi bakteri

secukupnya

e. Diukur tingkat kekeruhan SA dengan

menggunakan spektro-nik 20G

f. Diulangi langkah diatas menggunakan kultur

bakteri PA

3. Pengujian Sensivitas Antibiotika

a. Diambil 2 cawan petri steril

b. Dibagi menjadi 6 bagian untuk cawan petri

c. Diberi keterangan pada tutup cawan petri untuk

setiap jenis antibiotik



d. Dimasukkan medium NA sebanyak 10 mL dan

suspensi bakteri sebanyak 20 µL

e. Dihomogenkan

f. Didiamkan sampai memadat

g. Dimasukkan kertas saring yang telah direndam

dalam larutan antibiotik

h. Diinkubasi pada inkubator selama 1 x 24 jam pada

suhu 370C

i. Diamati



BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Pengamatan

1. Gambar pengamatan

Kelompok 1


LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASIFAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS HALU OLEO

MEDIUM : Nutrient Agar

BAKTERI : Pseudomonas aereginosa

ANTIBIOTIK : Amoxcilin, Cefadroxil, Eritromicin,

Ciprofloxacin, Chloramphenicol,

Ofloxacin

Nutrient Agar

Paper disc

Zona Hambat




BAKTERI : Staphilococcus aureus

ANTIBIOTIK : Amoxcilin, Cefadroxil,

Eritromicin, Ciprofloxacin,

Chloramphenicol, Ofloxacin

Nutrient Agar

Zona Hambat

Paper disc


Kelompok 2





BAKTERI : Pseduomonas aeruginosa


Ciprofloxaein, Chloramphenicol,

Ofloxacin

Nutrient Agar

Zona Hambat

Paper disc.






Eritromicin, Ciprofloxaein,

Chloramphenicol

Nutrient Agar

Paper disc.

Zona Hambat


Kelompok 3



B. Pembahasan

Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan tentang

pengujian antibiotik, maka dapat diketahui bahwa

antibiotik adalah bahan yang dihasilkan oleh





BAKTERI : Pseduomonas aeruginosa


Ciprofloxaein, Chloramphenicol,

Ofloxacin

Paper disc.

Zona Hambat

Nutrient Agar






Eritromicin, Ciprofloxaein,

Chloramphenicol, Ofloxacin

Nutrient Agar

Paper disc.

Zona Hambat


mikroorganisme atau sintetis yang dalam jumlah kecil

mampu menekan menghambat atau membunuh

mikroorganisme lainnya. Antibiotik memiliki spektrum

aktivitas antibiosis yang beragam.

Prosedur difusi-kertas cakram-agar yang

distandardisasikan (metode Kirby-Bauer) merupakan cara

untuk menentukan sensitivitas antibiotik untuk bakteri.

Sensitivitas suatu bakteri terhadap antibiotik ditentukan

oleh diameter zona hambat yang terbentuk. Semakin besar

diameternya maka semakin terhambat pertumbuhannya,

sehingga diperlukan standar acuan untuk menentukan

apakah bakteri itu resisten atau peka terhadap suatu

antibiotik.

Pada pengujian yang telah dilakukan, terbentuk zona

bening disekitar piper disk. Ini menunjukan bahwa

antibiotik yang digunakan berpotensi menghambat

pertumbuhan Streptococus Aureus.

Bakteri Gram positif meliputi bakteri koken

(streptokokus, stafilokokus), basilus (saprofit), spiral

(treponema dan leptospira), batang (korinebakteria) dan

lain-lain. Untuk bakteri Gram positif ini, antibiotika pilihan

utama adalah penisilin spektrum sempit (asalkan tidak ada

resistensi karena produksi enzim penilisinase). Penisilin



spektrum luas, eritromisin, sefalosporin, mempunyai

aktifitas anti bakteri terhadap golongan Gram positif ,

tetapi tidak sekuat penisilin spektrum sempit di atas.

Bakteri gram negatif termasuk koken (N.

gonorrhoeae, N. meningitidis atau pnemokokus), kuman-

kuman enterik (E.coli, klebsiela dan enterobakter),

salmonela, sigela, vibrio, pseudomonas, hemofilus dan lain-

lain. Untuk bakteri-bakteri kelompok ini, pilihan antibiotik

dapat berupa penisilin spektrum luas, tetrasiklin,

kloramfenikol, sefalosporin dan lain-lain. Sebagai contoh,

antibiotik pilihan untuk kuman vibrio adalah tetrasiklin,

untuk salmonela adalah kloramfenikol, untuk hemofilus

adalah kloramfenikol.

BAB V

PENUTUP

A. Kesimpulan

Berdasarkan pada percobaan yang telah dilakukan,

dapat disimpulkan bahwa:



1. Uji sensitivitas antibiotik dapat dilakukan menggunakan

metode difusi agar dengan menggunakan media kertas

cakram (paper disc).

B. Saran

Saran yang dapat diberikan yaitu agar praktikan

lebih berhati-hati dalam penggunaan alat dan bahan

selama praktikum untuk meminimalisir kesalahan serta

lebih serius dalam pengerjaan agar memperoleh hasil yang

lebih baik.

DAFTAR PUSTAKA

Anggraini R., Marniati Salim, dan Elida Mardiah. 2013. Uji bakteri Escherichia coli yang resistan Terhadap antibiotik pada

ikan kapas-kapas di Sungai Batang Arau Padang. Jurnal Kimia Unand Vol. 2, No. 2.

Bagus Made Bhaskara I., Ketut Budiasa dan Ketut Tono Pg. 2012. Uji Kepekaan Escherichia coli sebagai Penyebab Kolibasilosis pada Babi Muda terhadap Antibiotika Oksitetrasiklin, Streptomisin, Kanamisin dan Gentamisin. Indonesia Medicus Veterinus Vol. 1, No. 2

Fauziah Noer S. 2012. Pola bakteri dan resistensinya terhadap Antibiotik yang ditemukan pada air dan udara ruang



Instalasi rawat khusus RSUP dr. Wahidin sudirohusodo Makassar. Majalah Farmasi dan Farmakologi, Vol. 16, No.2.

Kahuripan A., Retnosari Andrajati dan Tetty Syafridani. 2009. Analisis pemberian antibiotik Berdasarkan hasil uji sensitivitas Terhadap pencapaian Clinical outcome pasien Infeksi ulkus diabetik di rsud Dr. H. Abdul moeloek lampung. Majalah Ilmu Kefarmasian, Vol. VI, No. 2.

Nugroho F., Pri Iswati Utami dan Ika Yuniastuti. 2011. Evaluasi penggunaan Antibiotik pada penyakit Pneumonia di Rumah

SakitUmum daerah Purbalingga. Pharmacy, Vol.08 No. 01

Rahayu U. E. 2012. Antibiotika, Resistensi, dan Rasionalitas Terapi. Sainstis. Vol. 1, No. 1.

Wijaya Febrianto A., Alwiyah Mukaddas dan Inggrid Faustine. 2013.

Rasionalitas Penggunaan Antibiotik pada Pasien Infeksi Saluran Kemih (ISK) di Instalasi Rawat Inap RSUD Undata Palu Tahun 2012. Online Jurnal of Natural Science Vo.2(3)



LAMPIRAN

I. Skema Kerja

a. Uji Sensitivitas Antibiotik

1. Pembuatan Suspensi Bakteri (Staphylococcus aureus

dan Pseudomonas aureginosa)


Secukupnya 1 Ose

Larutan NaCl Biakan Mikroba

Dihomogenkan

Diinkubasikan pada Suhu 37 OCSelama 1x24 jam

Bakteri+ NA


2. Antibiotik Terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa

Suspensi biakan bakteri Medium NA

Dipadatkan

Cawan Petri Steril

Ciprofloxacin

Ofloxacin Kloramfenikol

Diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 1 x 24 jam

Di amati

Diukur zona hambatannya


Sampel+ NASampel+ NA


3. Antibiotik Terhadap Sampel Staphylococcus aureus

Suspensi Sampel nanah Medium NA

Dipadatkan

Cawan Petri Steril

Ciprofloxacin

Ofloxacin Kloramfenikol

Diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 1 x 24 jam

Di amati

Diukur zona hambatannya



II. Komposisi Medium

1. Medium NA (Nutrient Agar), yaitu:

Peptic digest of animal tissue 5,00 gr

Sodium chloride 5,00 gr

Beef extract 1,500 gr

Yeast extract 1,500 gr

Agar 15,00 gr

Aquades 1000 ml


Documents

Laporan Uji Sensivitar Mikroorganisme Terhadap Antibiotika