Upload
ziarre
View
177
Download
0
Embed Size (px)
DESCRIPTION
KLINIČKA VAŽNOST DNA FRAGMENTACIJE SPERMIJA - naša iskustva. Marijan Tandara Ana Bajić, Martina Šunj. KBC Split. Povijesni pregled analize sjemena. 1860 Prisutnost spermija/pokretni spermiji 1929 Prvi objavljeni rad o analizi sjemena u NEJM (Macomber) - PowerPoint PPT Presentation
Citation preview
Marijan TandaraAna Bajić, Martina Šunj
KLINIČKA VAŽNOST DNA FRAGMENTACIJE SPERMIJA
- naša iskustva
KBC Split
1860 Prisutnost spermija/pokretni spermiji
1929 Prvi objavljeni rad o analizi sjemena u NEJM (Macomber)
1940-tih Sjemeni parametri (MacLead and Gold)
1944 Sistematska analiza sjemena (Hotchkiss)
1980 Morfologija spermija (Kruger and Menkveld)
1986 Objektivni biokemijski markeri sazrijevanja spermija i potencijala plodnosti (Huszar Lab)
Povijesni pregled analize sjemena
1992. Palermo
Uvođenjem ICSI-a izazvao revoluciju u rješavanju muškog faktora neplodnosti !
Parametri reproduktivnog uspjeha
Jajna stanica
80%
Spermij 10%
Uterus 10%
Modificirano - Danny Sakkas
50%
50%
2000.Integritet kromatina spermija
Ispitivanje DNA fragmentacije ?
Varikocela (Saleh, 2003; Fischer, 2003; Zini, 2000)
Kemoterapija i radioterapija (Chatterjee, 2000; Deane, 2004;
Kobayashi, 2001)
Pušenje cigareta (Mak, 2000; Kunzle, 2003; Potts, 1999, Sun, 1993)
Leukocitospermija (de Laminrande, 1993; Zini, 1995, Twigg, 1998; Iwasaki,
1992;
Zini, 1993)
Povećana tjelesna težina (Kort 2006)
Testikularna hipertermija (Sailer J 1997,Banks Reproduction 2005)
Potencijalni uzroci DNA fragmentacije
Intratestikularno Posttestikularno
Etiologija oštećenja DNA spermija
Nedostatak protamina (nađen kod 5-15% neplodnih muškaraca) De Yebra et al, J Biol Chem 1993; Bianchi et al, Biol Reprod 1993; Kramer et al, Genet Test 1997, Cho, 2003
Poremećaj topoizomeraze II i tranzicijskih proteina Balhorn, J Cell Biol 1982; Kierzenbaum, Mol Reprod Dev 2001; Bissoneault, FEBS Lett 2002
Apoptoza Sakkas et al, Exp Cell Res 1999, Sakkas et al. Reprod Biomed Online 2003
Intratestikularno
Posttestikularno
PUŠENJE
ZAGAĐENJE
KARCINOM
VARIKOKELA
Produženo zadržavanje spermija
u epididimisu
LIJEKOVI
INFEKCIJA prostate sjemenih vezikula epididimisa
NEZRELI/ABNORMALNI SPERMIJI
NEPLODNOST
Oštećenjespermija
Aitken et al, Biol Reprod 1998;
Irvine et al, J Androl 2000
Lipidnaperoksidacija
DNAoštećenje
Apoptoza
Oksidativnistres
DIREKTNI TUNEL ( terminal deoxynucleotydil transferase-mediated deoxyuridin triphosphatenick-end labeling assay ) ( sdSB ) ISNT ( in situ-nick translation ) Comet Assay ( neutral pH – sdSB )
INDIREKTNI ( zahtjeva denaturaciju DNA ) SCSA ( sperm chromatin structure assay ) Comet Assay ( acidic oder basischem pH ) ( sdSB ) SCD ( sperm chromatin dispersion test )
Određivanje integriteta DNA spermija u ispitivanju muške neplodnosti
Parametri Normalni spermiogram Lošim spermiogramom
DFI (%)>30%
24%
DFI (%)<30%
29%
Tandara M. i sur. 2012
DFI%
Koncentracija Morfologija Pokretljivost Vitalnost
* Spearman´s Rho r=-0,18 r=-0,32 r=-0,41 r=-0,36
p value p=0,069 p=0,001 p<0,001 p<0,001
Tandara M. i sur.
Korelacija između DNA fragmentacije i sjemenih parametara
Reference PARAMETRI
koncentracija pokretljivost morfologija
Kodama i sur (1997) 0,49
Shen i sur (1999) 0,24 0,38 0,42
Irvine i sur (2000) 0,37 0,37 0,54
Chan i sur (2001) 0,38 0,38 0,66
Tomlinson i sur (2001) 0,24 0,20
Saleh i sur (2003) 0,31 0,04 0,47
Larson-Cook i sur (2003) 0,08 0,18 0,25
A. Agarwal i sur; Human Reprod 2003
Korelacija između DNA fragmentacije i sjemenih parametara
Variables Cijela grupa(n=206)
Groupa1 (n=108) DFI<30%
Groupa 2 (n=98) DFI30%
DFI (%) 28 (24-32) 25 (22-28) 34 (30-44)
Koncentracija(×106/ml)
27,1±14,3 28,2±12,3 25,7±16,6 p=0,374
Morfologija(%) 40,7±16,7 44,6±14,9 35,5±17,7 p=0,006
Pokretljivost(%) 28,7±18,0 35,2±17,0 20,0±15,7 p<0,0001
Vitalnost (%) 68,1±14,6 72,0±11,6 63,0±16,4(n=57)
p=0,002
Tandara M. i sur.
Deskriptivna statistika
?
??
?
?
?
?
?
Granična vrijednost DNA fragmentacije
DNA fragmentacijaGranična vrijednosti Trudnoće(%)
< 4% 22.7%> 4% 21.4%
< 15% 22.8%>15% 15.4%< 18% 23.2%>18% 10.0%< 20% 23.8%> 20% 0.0%
M. Benchaib i sur. Human Reprod 2003
Uspješnost trudnoće s obzirom na % DNA fragmentacije
Da li visoka razina oštećenja DNA spermija pogađa fertilizaciju i razvoj embrija?
DNA fragmentacija
Ebner et al.
DFI (%) Pearsonov koeficijent korelacije (r)
p vrijednost
ES (IVF/ICSI) - 0,3865 0,0199*
*statistički značajno p< 0,05
Tandara M i sur. 2012.
Korelacija kvalitete zametaka s DNA fragmentacijom
Tandara M i sur. 2012
2 pronukleusa
2 st embrio 4 st embrio 8 st embrio
blastocista
Integritet DNA spermija postaje
važan – ekspresija
genoma embria
….je preporučljiva
Za pacijente sa više od 3 uzastopna IVF neuspjeha U slučajevima kad je primijećen zastoj razvoja embrija U slučaju ponavljanih pobačaja U slučajevima neobjašnjene neplodnosti
Analiza DNA fragmentacije….
IMSI
PICSI
H V A L A !