Meios de cultura · 2010. 7. 16. · 3 Meios de cultura •Meio de cultura estéril –Não deve conter organismos vivos antes da inoculação –Após crescimento somente conterá

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Professor: Gabriel Nogueira

1o semestre / 2010

Meios de cultura

Curso Superior de Tecnologia em Alimentos

Disciplina de Microbiologia de Alimentos

Tópicos da Aula:

� Definição de meios de cultura

� Classificação de meios de cultura

• Meios seletivos

� Técnicas especiais de cultivo

• Meios redutores

• Meios diferenciais

Curso Superior de Tecnologia em Alimentos

Disciplina de Microbiologia de Alimentos

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Meios de cultura

• Meio de cultura

– Material nutriente preparado no laboratório para o crescimento

de micro-organismos

– Bactérias que são capazes de crescer em qualquer meio de

cultura

– Bactérias que necessitam de meios especiais

– Bactérias que não são capazes de crescer em nenhum meio já

desenvolvido

Meios de cultura

• Inóculo

– Quando os micro-organismos são colocados em um meio de

cultura para iniciar o crescimento

• Condições de cultivo

– Meio de cultura adequado e incubação em condições ambientais

igualmente adequadas

• Nutrientes adequados

• Quantidade de água necessária

• pH ajustado

• Quantidade específica de oxigênio ou sua ausência

• Temperatura

• Taxa de metabolismo e Tempo de geração

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Meios de cultura

• Meio de cultura estéril

– Não deve conter organismos vivos antes da inoculação

– Após crescimento somente conterá os micro-organismos que

foram adicionados ao meio

• Classificação dos meio de cultura

– Quanto ao estado físico

– Quanto à complexidade

– Quanto à finalidade microbiológica

Classificação quanto ao estado físico

• Meio líquido × Meio semi-sólido × Meio sólido

– Ágar: polissacarídeo obtido a partir de algas marinhas, serve

como um agente solidificante do meio de cultura

• Poucos micro-organismos podem degradar o ágar

• Pode ser incubado a uma temperatura de até 100°C sem perder

suas características

Líquidos (caldo nutriente) Sólidos (ágar nutriente)

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Classificação quanto ao estado físico

• Meio líquido

– Meio em que os nutrientes estão dissolvidos em uma solução aquosa –

Ex.: Tioglicolato, Infusão de Cérebro e Coração (BHI)

• Meio semi-sólido

– Meio que possui na sua composição, além dos nutrientes, ágar em uma

pequena porcentagem – Ex.: Meio sulfeto-indol-motilidade (SIM)

• Meio sólido

– Meio que possui em sua composição nutrientes e em torno de 15g de

ágar / 1.000mL de água destilada – Ex.: Ágar Sangue (AS), Ágar Sal-

Manitol (MAS)

Classificação quanto à complexidade

• Meio quimicamente definido × Meio complexo

– Quimicamente definido: composição química exata do meio é

conhecida

– Organismos fastidiosos: necessitam de muitos fatores de

crescimento (nutricionalmente muito exigentes)

– Meio complexo: composição química pode conter pequenas

variações

– Fonte de nutrientes: extratos de carne ou leveduras

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Classificação quanto à

finalidade microbiológica

• Finalidade microbiológica:

– Meio de enriquecimento

– Meios redutores

– Meios seletivos

– Meios diferenciais

– Ensaios microbiológicos

� Contém todos os nutrientes necessários para o crescimento do micro-organismo de interesse, mas não inibe o crescimento de outros

� Bactéria presente em baixos números ou de crescimento lento



Meio de prMeio de préé--enriquecimentoenriquecimento

Meio de enriquecimentoMeio de enriquecimento

• Permitem a dessensibilização de micro-organismos injuriados

– água peptonada

– caldo lactosado

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• Cultivo de bactérias anaeróbias (micro-organismos que não usam o O2 livre)

• Adição de agentes redutores de O2

– Tioglicolato de sódio: é capaz de combinar com o O2

dissolvido, eliminando-o do meio de cultura

Meios RedutoresMeios Redutores



• Jarras de anaerobiose

– Sistema contendo bicarbonato de sódio e catalisador

– Reações químicas produzem CO2

e H2

– O H2 é combinado ao O2, produzindo água

– Eliminação rápida do O2




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• Câmara anaeróbica

– Câmara transparente totalmente selada contendo gás inerte em seu interior




• Jarra contendo vela

– A vela consome o O2

– Concentração de O2 diminui, mas ainda é suficiente para o crescimento de micro-organismos aeróbios (microaerófilos)

– Altas concentrações de CO2




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� Favorecem o crescimento da bactéria de interesse e impedem o

crescimento de outras bactérias

� Permitem selecionar qual o micro-organismo que crescerá na

cultura



Meios SeletivosMeios Seletivos

• Ágar verde brilhante: inibe o crescimento de bactérias gram-

positivas – utilizado no isolamento seletivo da Salmonella (gram-

negativas)

• Ágar Sabouraud dextrose (pH 5,6): utilizado no crescimento de

fungos, favorecidos pelo baixo pH

• Ágar feniletanol: inibe gram-negativas e favorece crescimento de

estafilococos e estreptococos gram-positivos



Meios SeletivosMeios Seletivos

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• Permitem a fácil identificação da colônia da bactéria de interesse

quando existem outras bactérias crescendo no mesmo meio de

cultura

• Baseado nas propriedades bioquímicas dos micro-organismos



Meios DiferenciaisMeios Diferenciais

• Ágar sangue (AS): identificação de bactérias que são capazes de

destruir células sanguíneas – hemólise (Streptococcus pyogenes)




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• Ágar Sal-Manitol (MAS): diferenciação de Staphylococcus aureus

(fermentam o manitol – meio amarelo)







• Ágar MacConkey (MC): meio seletivo e diferencial

– Impede o crescimento de bactérias gram-positivas

– Permite a diferenciação de enterobactérias

• Bactérias fermentadoras de lactose: colônias rosas

– Escherichia, Enterobacter, Klebsiella

• Bactérias não fermentadoras: colônias incolores

– Salmonella, Shigella

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� Antibiograma: permite testar a resistência do micro-organismo a determinados antibióticos

� Também utilizado como

componente de meios seletivos



Ensaios microbiolEnsaios microbiolóógicosgicos

� Amostras coletadas apresentam uma grande variedade de bactérias

� Várias colônias podem se desenvolver

� Método do esgotamento: utilizado para obtenção de colônias isoladas

Obtenção de culturas puras

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� Água peptonada

– Peptona ..................................... 1 g

– Água destilada ........................... 1.000 mL

� Meio PCA (contagem padrão em placas)

– Triptona ..................................... 5,0 g

– Extrato de levedura ................... 2,5 g

– Glicose ....................................... 1,0 g

– Ágar ........................................... 15,0 g

– Água destilada ........................... 1.000 mL

Preparação de meios de cultura

� Utilizado na contagem de bactérias aeróbias ou facultativas e

mesófilas

� PCA: eficiente como indicador da qualidade higiênica dos alimentos,

fornecendo também a idéia sobre seu tempo útil de conservação

� A presença de micro-organismos pode indicar:

– Matérias-primas contaminadas

– Limpeza e desinfecção de superfícies inadequadas

– Higiene inadequada na produção

– Condições inadequadas de tempo/temperatura durante a

produção ou conservação do alimento

Meio PCA (contagem padrão em placas)

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