7/23/2019 Metodo de Bradford Fundamento
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Los mtodos para la cuantifcacin de protenas se basan en:
Propiedad intrnseca de las protenas para absorber luz en el UV
Para la ormacin de derivados qumicos
Capacidad de protenas de unir ciertos colorantes
Las protenas muestran un uerte grado de absorcin a !" nm en
UVdebido a los residuos de triptano # la tirosina de las protenas
$por presenciaen sus anillos de grupos uncionales organicos% $mtodo
de absorcin en uv%
&dicion de un colorante anionico $acido sulonico ' naran(a
acido )' naran(a *'negro amido )"+% su principio es unir un
amino,cido b,sico como -istidina sugrupo imidazol' guanidina de
arginina etc.
/0n que se basa el mtodo de +radord1Unin de un colorante
&zul brillante comassie *23" a las protenas.0ste colorante
e4iste en una solucin ,cida en dos ormas $azul # otra
naran(a%. Las protenas se unen a la orma azul # ormar un
comple(o protena2colorante con un coefciente de e4tincin ma#or al
del colorante libre.5ensible para protenas con residuos $arg' trp'
t#r ' -is # P-e.%6todo sensible $)2)3 microgramos de protena%' las
7nicas sustancias quepuede intererir son detergentes # soluciones
b,sicas.
0l cambio en la absorbancia a 383 nm es proporcional a la
concentracin de laprotena en la muestra. 9 se monitorea midiendo el
incremento deabsorbancia.
Principio: 0l color ro(o pasa a azul cuando se une a la protena.
La ormacindel comple(o colorante protena toma apro4imadamente
minutos #
permanece estable por ) -ora' este comple(o tiene un alto
coefciente dee4tincion molar lo que -ace al ensa#o muc-o mas
sensible.Coefciente de e4tincin molar mide que tanto una substancia
absorbe laradiacin a una longitud de onda determinada. 0l valor de
la absortividad variacon la longitud de onda # depende de la
estructura.
7/23/2019 Metodo de Bradford Fundamento
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0l coefciente de e4tincin paraalbumina bovina es de ; !
62)cm2)Venta(aso e4isten intererencias de cationescomo ?' >a #
6g>o interfere sulato de amonio 'polienoles ni carbo-idratos
comosacarosa6ide protenas # pptidos con masamolculas de """
dalton
@esventa(as0l comple(o protena colorante puedeunirse a celdas de
cuarzoColor varia con distintos tipos de protenas
Antererencia de detergentes
Utiliza como protena seroalbumina bovina0l blanco contiene
+radord mas agua
