Molekuláris genetikaMolekuláris genetika

Falus András

MIÉ

RT V

AG

YU

NK

KÜ

LÖ

NB

ÖZ

ŐEK

?

MIÉRT VAGYUNK BETEGEK?

TŰT A SZÉNAKAZALBAN!!

DE MEKKORA A SZÉNAKAZAL?

27

Genom méretek /bp/

pyknonok, fracto, miRNS?

GENETIKA

Mutáns fenotípus

Mutáns allél

DNS szekvencia

Protein szekvencia

REVERZ GENETIKA

Protein szekvencia

DNS szekvencia

Mutáns allél

Mutáns fenotípus

LEHETŐSÉGEK BETEGSÉGGÉNEK AZONOSÍTÁSÁRA

MÉG NEM AZONOSÍTOTT BETEGSÉGGÉN

A pathogenezis biokémiai mechanizmusa ismert

Ismert kromoszómán belüli pozíció

FUNKCIONÁLIS KLÓNOZÁS POZÍCIONÁLIS KLÓNOZÁS

Elképzelés a pathogenezis molekuláris mechanizmusáról vagy

rokon mechanizmusú állati vagy emberi betegség

KANDIDÁNS(JELÖLT) KLÓNOZÁS

Deléciós térképezés gének kromoszómális poziciójának meghatározására

  

Pozício-nális

Pozícionális jelölt

Jelölt

Funkcionális

A teljes genom %-ában 100

1985

1990

1995

1980

2000

2005

2003

Human GenomeProject kezdete

Az emberi gének 80%-a feltérképezve

A genom szek-vencia ismert

Szekvenciák: DNS RNS fehérje

• DNS szekvenálás „könnyű”• RNS és fehérje szekvenciák a DNS alapján komputerrel meghatározhatók• Fehérje 3D szerkezete?• Biológiai funkciója?• Hogyan működik az egész a többi fehérjével kölcsönhatásban?

Hatalmas szakadék volt az elméleti tudás (modellek)és a gyakorlati genetikai vizsgálatok között

Nem állt megfelelő módszer rendelkezésre

Áttörés—technológiai—

endonukleázok vektorok

Az elvi lehetőség létrejött:

ettől kezdve bármely gén, génszakaszklónozható volt

A REKOMBINÁNS DNS FELHASZNÁLÁSA

• szekvencia bankok• DNs próbák• expressziós vektorok• gén terápiás vektorok

DNS komplementaritás(bázis párosodás)

DNS DENATURÁLÁS ÉS HIBRIDIZÁLÁS

A PRÓBÁK:

• Egyszálú jelölt oligonukleotidok (genomiális vagy cDNS szekvenciák vagy RNS), amelyek a komplementaritás alapján hibridizálnak a DNS szállal• Segítségükkel egy keresett szekvencia vagy in situ (sejtben, kromoszómán) vagy gélben mutatható ki

Southern blot (DNS) I.

Southern blot (DNS) II.

RFLP ANALÍZIS

RFLP=restrikciós fragmenthossz-polimorfizmus

Restr

i kci ó

s t

érk

ép

készí

tése

DNA „ujjlenyomat”

VNTR alkalmazása (egyedi azonosítás)

Polimerázláncreakció

Automatizált DNS szekvenálás

AZ AUTOMATIZÁLT SZEKVENÁLÁS EREDMÉNYE

Elektroforézis iránya

Genom programok

•HGP•kórokozók•haszonállatok és növények•laboratóriumi modell állatok

….YOLHONTARKAHIMURETTORTARNYATNYUJTAMINARETBUSDONNABARNABALKONONMERENGABIBORALKONYONOLASZHONGONDORFELLEGEKSOTETEGLANYHULFULLETEGSZOKOKUTVIZEFOLBUZOGTORTMARVANYFARADTMIRTUSZOKGOROGHONSZIRTEKREGIROMKODOTPIPALOBUSOROMALEGSURUAFOLDKOPARNYAJPASZTOROKFENYOGYOPARSVAJCZERGEBERCEKSZEDULETSIKLOMAJORFELHOKFELETTSOTETZOLDVOLGYEKJÉGMEZOHARAPNIFRISSALEVEGONEMETHONVAROSREGIHAZEMELETESTETOFAVAZCEGEREKKANCSOKOKUTAKHIZOTTPOLGAROKSZUKUT…

A SZEKVENCIA MÉG NEM ELÉG!!

Babits Mihály: Messze..messze

A KIRÁLYNŐT MEGÖLNÖTÖK NEM KELL FÉLNETEK JÓ LESZ HA MÁS VELETEK ÉN NEM ELLENZEM

A KIRÁLYNŐT MEGÖLNÖTÖK NEM KELL FÉLNETEK, JÓ LESZ, HA MÁS VELETEK, ÉN NEM ELLENZEM.

A KIRÁLYNŐT MEGÖLNÖTÖK NEM KELL, FÉLNETEK JÓ LESZ, HA MÁS VELETEK, ÉN NEM, ELLENZEM.

FONTOS A KÖZPONTOZÁS ÉS A HANGSÚLY!!

METTŐL MEDDIG TERJED EGY GÉN, HOL VANNAK A SZABÁLYOZÓ RÉGIÓK,

ÉS HOGYAN MŰKÖDNEK??

Szekvenciák: DNS RNS fehérje

• DNS szekvenálás „könnyű”• RNS és fehérje szekvenciák a DNS-é alapján komputerrel meghatározhatók• Fehérje 3D szerkezete?• Biológiai funkciója?• Hogyan működik az egész a többi fehérjével kölcsönhatásban?

A P

UZ

ZLE N

ÉH

ÁN

Y D

AR

AB

KÁ

JA

MÉG

HIÁ

NY

ZIK

!