Bacterias sin pared y Bacterias sin pared y Bacterias intracelulares obligadasBacterias intracelulares obligadas

Cátedra de Microbiología General – FACENA – UNNE 2012Cátedra de Microbiología General – FACENA – UNNE 2012

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Bacterias sin pared y Bacterias sin pared y Bacterias intracelulares obligadasBacterias intracelulares obligadas

ObjetivoObjetivo

Conocer las principales características biológicas de los Mycoplasmas,

Chlamydias y Rickettsias, su capacidad para producir infecciones, las

posibilidades diagnósticas y las medidas profilácticas

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ClaseMollicutes

Familia Mycoplasmataceae

GénerosMycoplasmaUreaplasma

Especies M. pneumoniae

M. hominis

U. urealyticum

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Mycoplasmas - TaxonomíaTaxonomía

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Mycoplasmas - Características generales

• No poseen pared celular (Bacterias carentes de pared celular)

• Poseen esteroles en su membrana celular

• Requerimiento de lípidos complejos preformados (colesterol)

• Anaerobios facultativos y algunos anaerobios estrictos

• Son pleomórficos (esféricos hasta filamentosos)

• Pueden desplazarse por movimiento ameboide en medios líquidos

• Pueden existir como saprófitos o producir enfermedades

• Genoma pequeño

• Resistencia natural a los beta lactámicos

FACTORES DE VIRULENCIACapacidad de adherirse a los epitelios

mediante glicoproteinas:• Proteína P1 (Mycoplasma pneumoniae)• P50 y P100 (Mycoplasma hominis)Glicopéptido sulfatadoFosfolipasa (Ureaplasma urealyticum)Disminución de la actividad macrofágicaNucleasasNo se conoce la producción de toxinasNo son invasivos

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Mycoplasma pneumoniae

• El determinante de patogenicidad es la producción de peróxido

de hidrógeno que produce la muerte de las células epiteliales por

mecanismos desconocidos.

• Coloniza las vías respiratorias superiores

• Se adhiere a las células de la mucosa respiratoria inferior.

• Produce neumonía atípica primaria

• Se propaga por contacto directo de hombre a hombre

• Afecta a todas las edades y suelen producirse brotes familiares

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M. pneumoniae - Diagnóstico

• Cultivo a partir de secreciones respiratorias: no es muy utilizado

pues se necesitan medios especiales, muy enriquecidos y con

inhibidores para otras bacterias.

• Detección de anticuerpos en el suero del paciente: puede

hacerse por ELISA, aglutinación de látex o inmunofluorescencia

indirecta

• Los síntomas y los datos epidemiológicos contribuyen mucho al

diagnóstico etiológico

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M. hominis y U. urealyticum

• Son flora habitual del aparato génitourinario.

• Su determinante de patogenicidad es la producción de

amoníaco a partir de la urea (U. urealyticum) y de la arginina

(M. hominis)

• Pueden producir inflamación oportunista tanto en el hombre

como en la mujer.

• Las manifestaciones son uretritis en el hombre y vaginosis en

la mujer por asociación con otras bacterias.

• Pueden producir complicaciones en el hombre, la mujer y en

el recién nacido.

DIFICULTADES DIAGNÓSTICASNo se colorea al Gram

Necesitan medios especiales (ricos,

antibióticos, suero equino)

Método comercial costoso

Medio de cultivo artesanal

- Obtención del suero equinoLimitaciones presupuestarias

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Mycoplasmas urogenitales - Diagnóstico

• Cultivo a partir de secreciones genitales: no es muy utilizado

pues se necesitan medios especiales, muy enriquecidos y con

inhibidores para otras bacterias.

• Detección de anticuerpos en el suero del paciente: puede

hacerse por ELISA o inmunofluorescencia indirecta.

• Los síntomas y los datos epidemiológicos contribuyen mucho al

diagnóstico etiológico

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Familia

Chlamydiaceae

Géneros

Chlamydia

Especies

C. psittaci

C. pneumoniae

C. trachomatis

Biovar LGV (linfogranuloma venéreo)

Biovar TRIC (Tracoma-conjuntivitis de inclusión)

Otros (enfermedades genitourinarias)

Chlamydias - Chlamydias - TaxonomíaTaxonomía

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• Parásitos intracelulares obligados• Son incapaces de sintetizar ATP• Por mucho tiempo se los consideró virus• Estructura de pared de gramnegativas• Son cocoides e inmóviles• No observables con Gram por su pequeño tamaño• Poseen dos formas biológicas:

– Cuerpo elemental (CE): infectivo y no replicante– Cuerpo reticulado (CR): no infectivo y replicante

Chlamydias - Chlamydias - Características generalesCaracterísticas generales

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Chlamydias - Chlamydias - Ciclo vitalCiclo vital

Lisosomas

Núcleo

Cuerpo elemental infectante

Ingreso por endocitosis

EndososomaLisosomas

Eliminación de la progenie Transformación en cuerpo reticulado

Formación del cuerpo de inclusión Multiplicación del CR

Determinantes antigénicosLPS: Específico de géneroMOMP (proteína mayor de la membrana

externa): Contiene epítopes específicos de género, especie, subgrupo y serovariedad.

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PatogeniaC. trachomatis sintetiza proteínas “de stress”

que se expresan en la membrana de la célula huésped. La reacción inflamatoria y cicatrizal desencadenada contra estas proteínas explica la obstrucción tubaria en infecciones genitales, y la ceguera en el tracoma.

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Chlamydias - Chlamydias - PatologíasPatologías

Especie Patología Transmisión

C. trachomatisBiovar LGV

Linfogranulomavenéreo

Sexual

C. trachomatisBiovar TRIC

TracomaConjuntivitis

Infecciones genitales

Contacto directoSexual

Durante el nacim.

C. pneumoniae Neumonía atípica Respiratoria

C. psittaci Psitacosis Aves al hombre

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Chlamydias - Chlamydias - DiagnósticoDiagnóstico

• MÉTODOS DIRECTOS– Cultivo en líneas celulares

– Observación con Lugol y Giemsa (Cuerpos de inclusión)

– Detección por Inmunofluorescencia directa o ELISA

– Detección por PCR

• MÉTODOS INDIRECTOS– Detección de anticuerpos por IFI o ELISA

InmunofluorescenciaInmunofluorescencia La sensibilidad y especificidad de

la IF con el uso de anticuerpo monoclonales para el MOMP

(Mayor Outer Membrane Protein) de

C. trachomatis es del 80-90% y 98-99 % respectivamente.

La IF tiene mayor sensibilidad que la EIA ya que permite detectar de 10 a 100 cuerpos elementales.

Ventajas:

Se independiza del transporteSe puede utilizar para una

gran variedad de muestrasTiene alta especificidadSe puede utilizar como método

confirmatorio de otros métodos cuando existen discrepancias.

Desventajas

Necesita de un microscopio de fluorescencia de gran resolución

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PCRPCRLas técnicas moleculares

(PCR)tienen hasta un 96% de

sensibilidad.Detectan en forma directa el

ADN bacteriano. Permite detectar 1 cuerpo

elemental presente en la muestra

Ventajas

Se independiza del transporte

Se pueden utilizar muestras no invasivas (Ej. Orina)

Muy alta sensibilidad y especificidad.

Desventajas

Se pueden tener falsos negativos por presencia de

inhibidores Alto costo

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Familias

Rickettsiaceae Coxiellaceae

GénerosRickettsia Coxiella

Ehrlichia

Especies

R. rickettsii C. burnetii

R. prowasekii

R. typhi

E. chaffeensis

Rickettsias y Coxiellas - Rickettsias y Coxiellas - TaxonomíaTaxonomía

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• Parásitos intracelulares obligados

• Son incapaces de sintetizar ATP

• Estructura de pared de gramnegativas

• Pueden ser cocoides, bacilares o pleomórficas

• No observables con Gram por su pequeño tamaño

• Habitan en artrópodos hematófagos que actúan como vectores o huéspedes primarios.

Rickettsiales - Rickettsiales - Características generalesCaracterísticas generales

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Rickettsia y Coxiella - Patogenicidad

• Estas bacterias infectan eritrocitos, células retículoendoteliales y

epitelio vascular.• Penetran a la célula huésped induciendo la endocitosis• Rickettsia abandona el endosoma y se reproduce en el citoplasma

mientras que Coxiella se reproduce en el endolisosoma luego de la

fusión del endosoma con el lisosoma.• Finalmente la célula del huésped estalla, liberando organismos

nuevos.• Además de los efectos de la lisis celular el huésped padece los

efectos de la toxicidad de la pared.• Los síntomas aparecerán en función del tejido afectado (epitelio

pulmonar, endotelio vascular o monocitos circulantes)

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Epidemiología

Agente Vector Reservorio Transmisión Patología Manifestación

R. rickettsii Garrapatas Roedores,perros,zorros

Picadura delartrópodo

Fienremanchada

VasculitisFiebre

R. prowazekii Piojos Hombre Heces delartópodo

Tifusepidémico

VasculitisFiebre

R. typhi Pulgas Roedores Heces delartópodo

Tifusendémico

VasculitisFiebre

E. chaffeensis Garrapatas Animalessalvajes

Picadura delartrópodo

Erliquiosis Enfermedadfebril

inespecífica

C. burnetii Garrapatas(sólo en losanimales)

Animalessalvajes y

domésticos

Inhalación depolvo

contaminado

Fiebre Q Neumoníaatípica

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DiagnósticoDiagnóstico

• MÉTODOS DIRECTOS– Cultivo en líneas celulares

– Observación con Giemsa (Excepto para Coxiella)

– Detección por Inmunofluorescencia directa en las muestras

– Detección por PCR

• MÉTODOS INDIRECTOS– Detección de anticuerpos por IFI

• IgG > 1/128 e IgM > 1/32