Obtención de un Extracto Amilolítico a partir de Hongos de Tortilla

Marzo, 2010

Integrantes:Meneses Arroyo Héctor EnriqueOrtega Calderón José LuisPalacios Carranza Joel Andrés

Asesores:Q.A. Joel Castillo CastilloB. Norma Angélica Camacho

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Planteamiento del problema La tortilla es un alimento importante en nuestros hogares,

es adquirida a diario y el producto que queda del día anterior es almacenado; observándose que la mayoría de estos sobrantes termina en la basura, debido a que le crecen hongos en la superficie.

Este hecho motivo nuestro interés, pues sabemos que ocurre a diario en millones de hogares mexicanos. Se decidió investigar sobre la utilidad que podría darse a dichos desperdicios, decidiendo utilizar este sustrato para extraer una enzima con actividad amilolítica, ya que las amilasas son utilizadas en la industria alimenticia.

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ObjetivosGeneral:• Obtener un extracto enzimático con propiedades

amilolíticas a partir de hongos superficiales de la tortilla.

Particulares:• Desarrollar la flora microbiana que crece de forma

natural en la superficie de la tortilla en agar PDA.• Aislar las colonias que presenten morfología

microscópica identificada como productoras de enzimas amilolíticas.

• Obtener el extracto enzimático utilizando las colonias aisladas en agar PDA.

• Comprobar la actividad enzimática del extracto obtenido.

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Introducción• En México la tortilla forma parte de la dieta de todos

los estratos sociales, el consumo de tortillas en México es de 12 millones de toneladas al año (INEGI, 2000).

• En los hogares mexicanos se produce una cantidad considerable de desperdicio de tortilla, el mal tratamiento que se le da es propicio para el crecimiento del hongo Aspergillus níger

• Se decidió investigar la utilidad de Aspergillus níger en el desperdicio de tortilla como alternativa para el reciclaje de ésta.

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• Se encontró que Aspergillus níger es un productor de enzimas amilolíticas capaces de degradar azucares sencillos.

• Las enzimas son proteínas altamente específicas que aceleran o disminuyen la velocidad de una reacción química en su sustrato.

• Las amilasas tienen una gran importancia en la industria de los alimentos.

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Desarrollo experimental

• Identificación microscópica

• Aislamiento de colonias identificadas

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• Desarrollo de la actividad amilolítica

• Comprobación de actividad amilolítica.- Prueba de azúcares reductores (Prueba de

Fehling).

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- Identificación de almidón.- Detección de actividad amilolítica en geles

de agar.

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ResultadosCrecimiento en PDA

Colonias Detectadas

Características Macroscópicas

CaracterísticasMicroscópicas

Caja Petri 1Color verde con esporulación blanca, de superficie plana, micelio algodonoso

Presenta hifas septadas uninucleada y cuerpo fructífero conidióforo.

Caja Petri 2 Color rosa con esporulación blanca de superficie plana

Presenta hifas septadas uninucleada y cuerpo fructífero zoosporangio.

Caja Petri 3Color blanco superficie plana p. de micelio aterciopelado

Presento hifas cenocíticas con un cuerpo fructífero oidióforo.

Caja Petri 4Color negro esporulación blanca superficie relieve elevado p. de micelio terroso

Presento hifas septadas uninucleada con un cuerpo fructífero conidióforo.

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Obtención del extracto enzimático

Matraces Características macroscópicas

Matraz 1Se observó hongo de color verde en la superficie y una pequeña decoloración en el caldo de tortilla.

Matraz 2Se observó hongo de color rosa en la superficie y hubo una decoloración significativa en el caldo de tortilla, el cual quedo casi transparente.

Matraz 3Se observó hongo de color negro en la superficie y el color del caldo de tortilla quedo casi intacto.

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Tubos con almidón 1% Lugol

Blanco Se tiñó de color moradoTubo de ensayo 1 NegativoTubo de ensayo 2 NegativoTubo de ensayo 3 Negativo

Pruebas cualitativas de actividad amilolítica

Determinación en geles de agar

Tubo de ensayo Azucares Reductores (Fehling)Blanco NegativoTubo con 1 mL PositivoTubo con 3 mL PositivoTubo con 6 mL PositivoTubo con 9 mL Positivo

Diámetro del halo de Actividad

Amilasa Comercial15 mm16 mm

Promedio 15.5 mm

Muestra de Amilasa12 mm12 mm

Promedio 12 mm

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Análisis de resultados Desarrollo de la flora presente en la superficie de la tortilla

• Se recolectaron tortillas de maíz de lugares húmedos-cálidos y con luz, donde se presentó el crecimiento de microorganismos. A partir de estas muestras, se sembraron colonias que crecieron en la superficie de las tortillas en el medio nutritivo y medio PDA.

• Agar nutritivo: Medio general donde crecieron principalmente bacterias, no se encontraron colonias de hongos. Se omiten los datos por no resultar relevantes.

• Agar PDA: Medio selectivo para hongos en donde se desarrollaron varias colonias de hongos con características coloniales y microscópicas diferentes.

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Análisis de resultados Aislamiento de las colonias con características

microscópicas reportadas en la literatura

• Se aislaron colonias con las características del hongo Aspergillus níger: hifas bien desarrolladas, profusamente ramificadas, hialinas y septada, células multinucleadas, conidióforos en abundancia hialinos o pigmentados, largos, erectos, cada uno terminado en una cabeza bulbosa llamada vesícula.

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Análisis de resultadosObtención del extracto enzimático

• Se empleó una infusión de tortilla al 2%, en donde fueron inoculadas esporas de hongos con características coloniales y/o microscópicas similares a las de Aspergillus níger.

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Conclusiones• Una vez presentado el crecimiento fúngico puede reutilizarse

la tortilla para obtener otros productos biotecnológicos con utilidad industrial.

• En este trabajo se aislaron algunos hongos que crecen en la superficie de la tortilla capaces de producir enzimas amilolíticas.

• Se obtuvo un extracto enzimático capaz de degradar el almidón, lo cual fue comprobado mediante pruebas cualitativas como la identificación de azúcares reductores y la identificación de almidón.

• Las siguientes etapas del proyecto incluyen la determinación: 1) Cuantitativa de los azúcares reductores y,

2) Del tiempo de actividad del extracto enzimático.